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    血清miR-182-5p、CFB和ADAM12在孕早期產(chǎn)前篩查唐氏綜合征中的應(yīng)用價(jià)值

    2024-09-22 00:00:00衛(wèi)仙洪何霞李玲李佳
    中國(guó)婦幼健康研究 2024年9期
    關(guān)鍵詞:唐氏孕早期補(bǔ)體

    [摘 要]目的 探討孕早期血清微小核糖核酸(miR)-182-5p、補(bǔ)體因子B(CFB)和解整合素金屬蛋白酶12(ADAM12)水平在產(chǎn)前唐氏綜合征(DS)篩查中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2015年1月至2022年1月雅安市人民醫(yī)院收治的150例DS胎兒孕婦為DS組,另選取同期87名健康胎兒孕婦為對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)孕早期血清miR-182-5p水平,酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)CFB、ADAM12水平。通過(guò)多因素Logistic回歸分析DS的影響因素,受試者工作特征(ROC)曲線分析孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平對(duì)DS的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果 DS組年齡大于對(duì)照組,吸煙比例和CFB水平高于對(duì)照組,miR-182-5p、ADAM12水平低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2/t/Z值介于3.141~8.793之間,P<0.05);多因素Logistic回歸分析顯示,年齡增加、吸煙、CFB升高為DS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,miR-182-5p、ADAM12升高為獨(dú)立保護(hù)因素,其OR值及95%CI分別為1.122(1.012~1.243)、4.290(1.216~15.131)、1.460(1.268~1.681)、0.656(0.563~0.765)、0.996(0.994~0.998),P<0.05;ROC曲線分析顯示,孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平聯(lián)合預(yù)測(cè)DS的曲線下面積(AUC)為0.913,大于各指標(biāo)單獨(dú)預(yù)測(cè)(Z值分別為5.233、4.414、4.809,P<0.05)。結(jié)論 孕婦血清miR-182-5p、CFB和ADAM12在孕早期產(chǎn)前篩查唐氏綜合征中具有潛在應(yīng)用價(jià)值,三者聯(lián)合有利于在孕早期篩查唐氏綜合征。

    [關(guān)鍵詞]孕早期;唐氏綜合征;微小核糖核酸-182-5p;補(bǔ)體因子B;解整合素金屬蛋白酶12;產(chǎn)前篩查

    Doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2024.09.012

    [中圖分類號(hào)]R173""" [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

    [文章編號(hào)]1673-5293(2024)09-0076-06

    Application value of serum miR-182-5p,CFB and ADAM12 detection in prenatal

    screening for Down's syndrome in early pregnancy

    [Abstract] Objective To investigate application value of detection for serum levels of micro ribonucleic acid (miR)-182-5p,complement factor B (CFB) and a disintegrin and metalloprotease 12 (ADAM12) in early pregnancy in prenatal Downs syndrome (DS) screening. Methods 150 pregnant women with DS fetuses who admitted to Ya′an Municipal People's Hospital from January 2015 to January 2022 were selected as the DS group,and another 87 pregnant women with healthy fetuses in the same period were selected as the control group.Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (qPCR) was used to detect serum miR-182-5p level,and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect serum CFB and ADAM12 levels.Multifactorial Logistic regression was used to analyze influencing factors of DS and receiver operating characteristic (ROC) curves was used to analyze predictive values of serum miR-182-5p,CFB and ADAM12 levels in early pregnancy for DS. Results The pregnant women in the DS group were older than those pregnant women in the control group,their proportion of smoking and serum CFB level were higher than those in the control group,while the serum levels of miR-182-5p and ADAM12 were lower than those in the control group,and the differences were statistically significant (χ2/t/Z values ranged from 3.141 to 8.793,all Plt;0.05).Multifactorial Logistic regression analysis showed that increase in age,smoking and elevated serum CFB level were independent risk factors for DS,while elevated serum miR-182-5p and ADAM12 levels were independent protective factors for DS,and their ORs (95%CIs) were 1.122 (1.012-1.243),4.290 (1.216-15.131),1.460 (1.268-1.681),0.656 (0.563-0.765) and 0.996 (0.994-0.998) respectively,all Plt;0.05.Receiver operating characteristic (ROC) curve analysis showed that the AUC of the combined prediction of serum miR-182-5p,CFB and ADAM12 levels in early pregnancy for DS was 0.913,which was greater than those predicted by each index alone (Z=5.233,4.414 and 4.809 respectively,all Plt;0.05). Conclusion Detection of maternal serum miR-182-5p,CFB and ADAM12 levels has potential application values in prenatal screening for DS in early pregnancy,and the combination of all three is beneficial in screening for DS in early pregnancy.

    [Key words] early pregnancy;Downs syndrome;micro ribonucleic acid-182-5p;complement factor B;a disintegrin and metalloprotease 12;prenatal screening

    唐氏綜合征(Downs syndrome,DS)是異常增多一條21號(hào)染色體所致的染色體疾病。近年來(lái)隨著我國(guó)全面三胎政策的開(kāi)放,高齡產(chǎn)婦數(shù)量增加,新生兒出生缺陷中DS發(fā)病率也越來(lái)越高[1-2]。目前DS尚無(wú)有效治療和預(yù)防方法,無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測(cè)雖然具有無(wú)創(chuàng)取樣、無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)和準(zhǔn)確度高等特點(diǎn),但對(duì)雙胎或多胎、高齡妊娠、肥胖、胎兒染色體異常等情況準(zhǔn)確度較低,且費(fèi)用較高不適合廣大孕婦人群。血清指標(biāo)具有取材簡(jiǎn)便和價(jià)廉的優(yōu)勢(shì)。解整合素金屬蛋白酶12(a disintegrin and metalloprotease 12,ADAM12)是我國(guó)開(kāi)展的孕早期DS產(chǎn)前篩查常見(jiàn)指標(biāo),但其在孕早期產(chǎn)前篩查中仍存在敏感度較低的缺點(diǎn)[3]。因此有必要尋找其他更有效的產(chǎn)前篩查指標(biāo)。研究表明,微小RNA(microRNA,miR)和補(bǔ)體缺陷參與DS等染色體疾病發(fā)生[4-5]。miR-182-5p是miR家族新近成員,近期一項(xiàng)基于全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),miR-182-5p在DS胎盤中表達(dá)下調(diào)[6]。補(bǔ)體因子B(complement factor B,CFB)是補(bǔ)體旁路活化的重要成分,既往一項(xiàng)蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn),CFB在攜帶DS胎兒母親血清中表達(dá)上調(diào)[7]。本研究通過(guò)檢測(cè)孕早期孕婦血清中miR-182-5p、CFB和ADAM12水平,探討三者聯(lián)合在產(chǎn)前DS篩查中的應(yīng)用價(jià)值,旨在為提高孕早期DS產(chǎn)前篩查提供參考依據(jù)。

    1資料與方法

    1.1研究對(duì)象

    選取2015年1月至2022年1月雅安市人民醫(yī)院收治的150例DS胎兒孕婦為DS組,另選取同期87名健康胎兒孕婦為對(duì)照組(經(jīng)羊水穿刺檢查正常)。納入標(biāo)準(zhǔn):①于11周至13+6周檢測(cè)血清中miR-182-5p、CFB和ADAM12水平的孕婦;②孕16周至20周行羊水穿刺染色體核型分析或行絨毛細(xì)胞染色體核型分析確診為DS胎兒和檢查正常者;③單胎;④臨床資料完整;⑤具備羊水穿刺或絨毛細(xì)胞檢查指征。排除標(biāo)準(zhǔn):①妊娠期合并癥;②既往DS患兒生育史;③輔助生殖技術(shù)受孕;④惡性腫瘤;⑤合并心腦血管疾病。本研究受檢者及其家屬均知情并簽署同意書(shū),且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批號(hào):2014116)。

    1.2研究方法

    1.2.1資料收集

    通過(guò)病歷收集所有研究對(duì)象年齡、體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)、吸煙、孕周、孕次和產(chǎn)次。

    1.2.2血清miR-182-5p、CFB、ADAM12水平檢測(cè)

    收集兩組孕婦體檢時(shí)兩管空腹靜脈血(每管3mL),3 000 r/min離心15min(半徑10cm),取上層血清,通過(guò)Trizol法提取血清總核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海赫果生物科技有限公司,編號(hào):11142ES10)合成互補(bǔ)DNA。以cDNA為模板,按照SYBR Premix Ex TaqTM劑盒(北京智杰方遠(yuǎn)科技有限公司,編號(hào):RR420A)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。miR-182-5p正向引物:5′-TAACCGCAGAGGTCACACTCAG-3′,反向引物:5′-CTCAGAAACTGTGGCATCCCGA-3′,內(nèi)參U6正向引物:5′-ACTTTCACGCCGCTCATCCAGT-3′,反向引物:5′-TCTCAGGACTG GTTCACAGCGT-3′。反應(yīng)條件:95℃ 90s、95℃ 30s、63℃ 30s、72℃ 15s,循環(huán)40次后收集Ct值,2-ΔΔCT法計(jì)算血清miR-182-5p相對(duì)表達(dá)量。另一管采用上海嶸崴達(dá)實(shí)業(yè)有限公司與上海酶研生物科技有限公司提供的酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒檢測(cè)ADAM12(編號(hào):DAD120)、CFB(編號(hào):EK-H10458)水平。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    選用SPSS 28.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(n)和百分比(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料正態(tài)與偏態(tài)分布分別以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)、中位數(shù)及四分位間距M(Q1~Q3)表示,分別采用t檢驗(yàn)與U檢驗(yàn);DS的影響因素采用多因素Logistic回歸分析;孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平對(duì)DS的預(yù)測(cè)價(jià)值采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線分析,曲線下面積(area under the curve,AUC)比較采用DeLong檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1 DS組與對(duì)照組一般資料和血清miR-182-5p、CFB、ADAM12水平比較

    DS組年齡大于對(duì)照組,吸煙比例和CFB水平高于對(duì)照組,miR-182-5p、ADAM12水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2/t/Z值介于3.141~8.793之間,P<0.05),見(jiàn)表1。

    2.2影響DS發(fā)生的多因素Logistic回歸分析

    以年齡、吸煙(是為“1”;否為“0”)、miR-182-5p、CFB、ADAM12為自變量,是否發(fā)生DS(是為“1”;否為“0”)為因變量,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示,年齡增加、吸煙、CFB升高為DS獨(dú)立危險(xiǎn)因素,miR-182-5p、ADAM12升高為獨(dú)立保護(hù)因素,其OR值及95%CI分別為1.122(1.012~1.243)、4.290(1.216~15.131)、1.460(1.268~1.681)、0.656(0.563~0.765)、0.996(0.994~0.998),P<0.05,見(jiàn)表2。

    2.3孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平對(duì)DS的預(yù)測(cè)價(jià)值

    ROC曲線分析顯示,孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平聯(lián)合預(yù)測(cè)DS的AUC為0.913,大于各指標(biāo)單獨(dú)預(yù)測(cè)(Z值分別為5.233、4.414、4.809,P<0.001),見(jiàn)表3及圖1。

    3討論

    DS又稱21三體綜合征、伸舌樣癡呆、先天愚型,是新生兒最常見(jiàn)的染色體異常,主要臨床表現(xiàn)為兩眼外角上斜、眼距寬、短頭畸形、肌張力低下、鼻梁低平、舌體寬厚等,且絕大多數(shù)患兒還患有阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征、聽(tīng)力損失、中耳炎、眼部疾病、先天性心臟缺損、神經(jīng)功能障礙等疾病,嚴(yán)重影響患兒成長(zhǎng)[8],及時(shí)發(fā)現(xiàn)胎兒異常對(duì)產(chǎn)前終止妊娠具有重要意義。

    3.1 ADAM12與DS的關(guān)系

    ADAM是一類以膜結(jié)合的形式表達(dá)于多種細(xì)胞表面的跨膜蛋白酶,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附、蛋白水解和信號(hào)傳導(dǎo)等功能。ADAM12在人類胎盤滋養(yǎng)層中表達(dá),通過(guò)細(xì)胞間相互作用、細(xì)胞遷移、基質(zhì)降解等調(diào)節(jié)胎盤滋養(yǎng)層功能,進(jìn)而影響胚胎發(fā)育進(jìn)程[9]。ADAM12具有較好的妊娠特異性,于妊娠早期顯著升高,但DS胎兒能影響胎盤功能,抑制ADAM12合成分泌,因此目前血清ADAM12已被作為孕早期DS產(chǎn)前篩查的重要指標(biāo),但DS發(fā)生機(jī)制復(fù)雜,單獨(dú)使用ADAM12篩查DS的敏感度較低[10]。本研究結(jié)果顯示,孕早期血清ADAM12預(yù)測(cè)DS的靈敏度和特異度分別為57.33%與89.66%,提示ADAM12也可作為產(chǎn)前篩查DS的輔助指標(biāo),但敏感度不高,有必要聯(lián)合其他指標(biāo)提升產(chǎn)前篩查價(jià)值。

    3.2 miR-182-5p與DS的關(guān)系

    表觀遺傳學(xué)改變?cè)贒S等遺傳學(xué)疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[11]。miRNA是一類新興表觀遺傳調(diào)控分子,通過(guò)引發(fā)信使RNA降解或轉(zhuǎn)錄后基因沉默,進(jìn)而參與DS發(fā)生[4]。如丁凱澤等[12]通過(guò)芯片技術(shù)分析DS胎兒羊水外泌體miR表達(dá)發(fā)現(xiàn),有15種差異表達(dá)miRNA,能靶向調(diào)控17種DS相關(guān)基因,其富集功能與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)。miR-182-5p定位于7號(hào)染色體前臂32.2,近年研究發(fā)現(xiàn),miR-182-5p能靶向胎盤生長(zhǎng)因子、Rho家族GTP酶3等基因調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,這項(xiàng)研究提示miR-182-5p與胎盤功能密切相關(guān)[13-14]。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn),miR-182-5p是神經(jīng)前體細(xì)胞增殖和分化、神經(jīng)突觸形成、軸突和樹(shù)突生長(zhǎng)等神經(jīng)發(fā)育所必需miRNA之一[15-16]。但關(guān)于miR-182-5p與DS的關(guān)系尚未可知。本研究結(jié)果顯示,DS組血清miR-182-5p水平顯著下調(diào),這符合何建萍等[6]報(bào)道DS胎盤中miR-182-5p表達(dá)下調(diào)結(jié)果。另外,本研究結(jié)果還顯示,miR-182-5p升高是DS發(fā)生的獨(dú)立保護(hù)因素,提示miR-182-5p升高能抑制DS發(fā)生,分析與miR-182-5p升高有助于維持胎盤滋養(yǎng)層功能完整性和神經(jīng)發(fā)育有關(guān)。研究表明,幾乎所有的DS胎兒胎盤和神經(jīng)發(fā)育不全,滋養(yǎng)層功能和神經(jīng)系統(tǒng)功能降低[17-18]。

    3.3 CFB與DS的關(guān)系

    補(bǔ)體是機(jī)體重要的免疫效應(yīng)系統(tǒng),參與發(fā)揮調(diào)節(jié)吞噬、裂解細(xì)胞、免疫調(diào)節(jié)、炎癥、中和病毒等多種生物學(xué)效應(yīng),與人體諸多疾病密切相關(guān)[19]。近年有研究指出,補(bǔ)體系統(tǒng)參與調(diào)節(jié)胎盤修復(fù),與胎盤功能密切相關(guān)[20]。同時(shí)研究指出,補(bǔ)體系統(tǒng)激活不當(dāng)可導(dǎo)致神經(jīng)功能損傷[21]。補(bǔ)體C3是補(bǔ)體激活途徑中最重要的環(huán)節(jié),CFB作為補(bǔ)體C3激活劑前體,能越過(guò)其他補(bǔ)體成分直接激活補(bǔ)體C3促進(jìn)補(bǔ)體系統(tǒng)激活,參與補(bǔ)體相關(guān)過(guò)程[22]。但關(guān)于CFB與DS的關(guān)系鮮有報(bào)道。本研究結(jié)果顯示,DS組血清CFB水平顯著上調(diào),這符合蔣春艷等[7]報(bào)道結(jié)果。結(jié)果還顯示,CFB升高是DS發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,提示CFB升高能促進(jìn)DS發(fā)生。分析原因可能為CFB作為補(bǔ)體C3激活劑前體,能通過(guò)激活補(bǔ)體C3激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)途徑,觸發(fā)胎盤局部炎癥過(guò)程,導(dǎo)致胎盤功能損害[23];同時(shí)補(bǔ)體級(jí)聯(lián)途徑激活也能通過(guò)神經(jīng)炎癥、突觸功能障礙等途徑損害神經(jīng)發(fā)育,最終增加DS風(fēng)險(xiǎn)[21]。

    3.4血清miR-182-5p、CFB和ADAM12在孕早期DS中的篩查價(jià)值

    本研究通過(guò)繪制ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平聯(lián)合預(yù)測(cè)DS的AUC為0.913,較各指標(biāo)單一預(yù)測(cè)的AUC顯著增加,靈敏度和特異度分別為85.33%、85.06%,說(shuō)明在常規(guī)ADAM12的基礎(chǔ)上,加入miR-182-5p、CFB能提升孕早期DS的預(yù)測(cè)價(jià)值。本研究中miR-182-5p、CFB和ADAM12聯(lián)合預(yù)測(cè)DS的AUC,大于國(guó)內(nèi)學(xué)者韓毓等[3]報(bào)道使用血清中妊娠相關(guān)血漿蛋白A、胎盤生長(zhǎng)因子聯(lián)合ADAM12預(yù)測(cè)的0.892;且大于邵菊等[24]報(bào)道使用胎兒頸部半透明層厚度超聲聯(lián)合血清PAPP-A、ADAM12預(yù)測(cè)的0.905。這說(shuō)明孕婦血清miR-182-5p、CFB和ADAM12在孕早期產(chǎn)前篩查DS中具有較高的潛在應(yīng)用價(jià)值,三者聯(lián)合可能有利于在孕早期篩查DS。本研究結(jié)果還顯示,年齡增加和吸煙也會(huì)增加DS風(fēng)險(xiǎn),這與國(guó)內(nèi)外報(bào)道結(jié)果一致[25-26]。高齡和吸煙易使受精卵和生殖細(xì)胞發(fā)生染色體畸變或不分離,導(dǎo)致染胎兒色體異常,增加DS風(fēng)險(xiǎn)。

    綜上所述,DS胎兒孕婦血清miR-182-5p、ADAM12水平下調(diào),CFB水平上調(diào),可作為孕早期DS的輔助產(chǎn)前篩查指標(biāo),且miR-182-5p、CFB和ADAM12聯(lián)合篩查孕早期DS的價(jià)值更高。但本研究仍存在一定的不足之處,本研究未能對(duì)不同孕期miR-182-5p、CFB和ADAM12指標(biāo)的變化進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)及分析,而三指標(biāo)在孕中期及孕晚期的動(dòng)態(tài)變化可能對(duì)DS患兒的檢出具有更大的臨床意義,有待今后設(shè)計(jì)嚴(yán)格的臨床實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究。

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