1株六堡茶根際溶磷菌的鑒定、培養(yǎng)優(yōu)化及促生與磷活化能力分析

馬蕊 覃愛穎 劉迪

摘要：自六堡茶根際分離得到1株高效溶磷菌菌株Lb-1，通過菌落形態(tài)及16S rRNA基因系統(tǒng)發(fā)育分析菌株的分類地位，并對其溶磷培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，利用盆栽試驗研究其在土壤中的溶磷效果及對茶樹的促生能力，以期為提高茶園土壤磷利用及開發(fā)微生物菌肥提供依據(jù)。結(jié)果表明，菌株Lb-1為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis），該菌株溶磷最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為胰蛋白胨，最佳初始pH值為6.0，最佳接種量為1%，最佳微量元素為Fe，最佳發(fā)酵溫度為30 ℃，優(yōu)化培養(yǎng)條件下溶磷量可達(dá)857.91 mg/L，且可顯著提高菌株的檸檬酸、琥珀酸、丙二酸分泌量。盆栽試驗表明，接菌處理下六堡茶鮮重、干重、株高、根系總長度、根系表面積、根系體積及磷含量分別顯著提高59.09%、69.77%、38.75%、37.94%、44.82%、52.94%及108.35%，鋁結(jié)合磷、閉蓄態(tài)磷含量顯著降低，有效磷含量顯著提高。綜上，溶磷菌株Bacillus velezensis Lb-1可有效活化根際難溶磷、提高六堡茶樹對磷的吸收及促進植株生長發(fā)育，或可作為開發(fā)磷高效菌肥的潛在資源。

關(guān)鍵詞：芽孢桿菌；培養(yǎng)優(yōu)化；六堡茶；磷活化；促生作用；溶磷菌

中圖分類號：S182；S571.106? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2024）08-0226-07

收稿日期：2023-11-29

基金項目：2020年廣西高等學(xué)校高水平創(chuàng)新團隊及卓越學(xué)者計劃（編號：桂教人才〔2020〕6號）；2023年度廣西高校中青年教師科研基礎(chǔ)能力提升項目（編號：桂教科研〔2023〕2號2023KY1030、桂教科研〔2023〕2號2023KY1019）；廣西高等學(xué)校千名中青年骨干教師培育計劃（編號：桂教教師［2022］60號）。

作者簡介：馬 蕊（1987—），女，黑龍江黑河人，碩士，副教授，從事茶葉生產(chǎn)加工及植物功能成分化學(xué)研究與教學(xué)工作。E-mail：313444924@qq.com。

磷（P）是植物生存和繁殖必需的大量營養(yǎng)素，同時也是核酸、膜磷脂以及許多能量代謝過程的重要組成部分［1］。許多土壤中，磷總含量范圍為0.02%～0.50%［2］，磷以多種形態(tài)存在，但植物僅能吸收同化無機二磷酸氫鹽（Pi）和一磷酸氫鹽，因此不足磷總量的0.1%可被植物吸收［3］。此外，Pi易與陽離子形成不溶性絡(luò)合物，并且土壤磷的溶解度低、遷移性差，目前可利用性磷缺乏已成為全球農(nóng)林業(yè)土壤中普遍存在的問題之一［4］。外源施用磷肥是現(xiàn)今人類補充農(nóng)林業(yè)土壤有效磷含量的常規(guī)措施，然而施用到土壤中的Pi易被土壤礦物質(zhì)和有機質(zhì)固持，導(dǎo)致游離性磷減少［5］，而土壤有效磷易隨水體流動轉(zhuǎn)移最終會導(dǎo)致富營養(yǎng)化［6］。因此，探索降低土壤固持磷以增加有效磷含量、提高植物磷利用，對農(nóng)業(yè)可持續(xù)化發(fā)展至關(guān)重要。

挖掘溶磷菌（PSB）資源、探索PSB磷利用效率及其促生效果是提高土壤磷有效性的最佳策略［7］。目前，溶磷菌分離株已從多種環(huán)境中獲得，包括植物體內(nèi)、根際土壤、葉際及污水污泥等，其中假單胞菌屬（Pseudomonas）、芽孢桿菌屬（Bacillus）及泛菌屬（Pantoea）是最具代表性的根際促生菌類群［8］。PSB在土壤中增溶磷的機制涉及將礦物溶解化合物（如有機酸陰離子和胞外酶）釋放到土壤環(huán)境中，以及通過底物降解直接釋放磷［9］。其中，分泌有機酸是PSB溶磷作用的核心機制，PSB可通過降低土壤pH值，增強與磷結(jié)合性陽離子的螯合，競爭土壤的磷吸附位點以及與不溶性磷相關(guān)的金屬離子形成復(fù)合物等，從而提高土壤磷的有效性［10］。此外，PSB能夠產(chǎn)生具有生理活性的吲哚-3-乙酸（IAA）、赤霉酸和鐵載體等，從而多重影響植物的生長發(fā)育［11］。

六堡茶［Camellia sinensis （L.） Liubao］是我國名茶之一，因原產(chǎn)于廣西壯族自治區(qū)蒼梧縣六堡鎮(zhèn)而得名，是當(dāng)?shù)馗晦r(nóng)的特色產(chǎn)業(yè)和鄉(xiāng)村振興的支柱產(chǎn)業(yè)，也是廣西大力發(fā)展的特色經(jīng)濟作物之一［12-13］。然而，由于茶樹喜酸與長期化肥施用導(dǎo)致土壤酸化，從而使得土壤中的磷易被固持［14］，磷缺乏一直是茶園生產(chǎn)面臨的主要問題之一。采用生物策略以提高土壤固持磷的溶解度已成為茶葉田間生產(chǎn)的最佳選擇。然而，在茶園弱酸乃至中酸性環(huán)境中，外源PSB可能因為環(huán)境惡劣以及與土著菌群競爭等因素而無法定殖［9，15］。有研究表明，來自同種類宿主的PSB往往能更好地定殖于相關(guān)植物的根際［16］。目前關(guān)于生長探索低磷土壤中茶樹根際的潛在PSB資源的研究較少。本研究從茶樹根際篩選得到的一株高效溶磷菌Lb-1，以其為對象，探索該菌株的培養(yǎng)條件，采用盆栽試驗設(shè)計分析其對六堡茶生長及根際溶磷效果的影響，以期為茶樹溶磷菌資源的培養(yǎng)優(yōu)化及資源利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 土壤來源與菌株的分離

帶菌株的六堡茶根際土壤為筆者所在課題組2021年8月采集自廣西蒼梧縣六堡茶茶園（23°39′48″N，111°35′27″E）。使用消毒的鏟子和剪刀收集，將緊貼側(cè)根的約50 g土壤樣品收集在消毒塑料袋中，置于4 ℃冰箱中帶回實驗室，保存于 -80 ℃ 冰箱，根系外圍包裹土壤用于后續(xù)盆栽基質(zhì)用土。

稱取約10.0 g根際土壤至無菌錐形瓶中，采用0.85%無菌生理鹽水進行系列梯度（10-2、10-4、10-6）稀釋［17］，將梯度稀釋的100 μL懸浮液等分試樣涂在胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基平板上。將培養(yǎng)物在28 ℃下培養(yǎng)7 d，隨后根據(jù)透明光暈的外觀從平板中選擇暈圈較清晰、較大的細(xì)菌菌落進行純化培養(yǎng)，多次純化培養(yǎng)后備注命名為Lb-1，儲存在-20 ℃的甘油儲備液中。

1.2 溶磷菌Lb-1的分子鑒定

采用細(xì)菌DNA試劑盒［DP302，天根生化科技（北京）有限公司］提取基因組DNA，使用引物 27F-5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和1492 R-5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′對Lb-1菌株的基因進行PCR擴增。PCR反應(yīng)體系、PCR熱循環(huán)參數(shù)參照陳海念等所述［18］，Lb-1菌株的16S rRNA采用國家生物技術(shù)信息中心（NCBI）GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進行比較，基于鄰接法采用MEGA 7.0系統(tǒng)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。分子鑒定工作委托生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.3 溶磷菌Lb-1的溶磷條件優(yōu)化

在溶磷條件優(yōu)化試驗中分別采用不同碳源（葡萄糖、麥芽糖、山梨糖、果糖、蔗糖），不同氮源（尿素、草酸銨、硝酸鉀、酵母粉、胰蛋白胨）替代常規(guī)NBRIP培養(yǎng)基中的碳、氮源；同時基于常規(guī)NBRIP培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH值（4.0、5.0、6.0、7.0、8.0）、培養(yǎng)溫度（25、28、30、32、35 ℃）、微量元素含量（Mg、Mn、B、Fe、Mo）以及菌株懸濁液的接種量（1%、2%、3%、4%、5%），其中微量元素用量皆為 1 g/L；上清液的有效磷含量、pH值分別采用鉬銻抗比色法、電位法測定［19］。

1.4 基于溶磷條件優(yōu)化下的溶磷效果及有機酸含量測定

分別取已活化的Lb-1菌柄至最優(yōu)碳源、氮源、pH值、培養(yǎng)溫度、微量元素組合的NBRIP液體培養(yǎng)基中，采用110 r/min、25 ℃搖床培養(yǎng)后，于 800 r/min 離心機離心后取上清液。上清液的磷含量用鉬銻抗比色法測定；采用超高效液相色譜儀（UltiMate3000，美國賽默飛世爾科技公司）測定有機酸的種類及含量，相關(guān)液相色譜條件、流動相、儀器柱溫及進樣設(shè)置參考Zhang等所述［20］。

1.5 溶磷菌Lb-1對六堡茶幼苗促生與解磷效果試驗

1.5.1 盆栽試驗

盆栽試驗于2022年4—7月在廣西職業(yè)技術(shù)學(xué)院進行。采用無菌蛭石將六堡茶幼苗培養(yǎng)至3葉期。設(shè)置不接種（CK）、接菌處理（LB），各處理重復(fù)8次，共16盆。

將幼苗移植到裝有1 kg不滅菌土壤的塑料盆中，該土壤為六堡茶根系包裹土壤，其理化特征如下：pH值為5.57，有效磷含量為8.86 mg/kg。接菌處理按最優(yōu)接種量接種15 mL Lb-1菌株懸濁液，未接菌處理施入15 mL無菌培養(yǎng)液。試驗期間，室內(nèi)光暗周期為14 h/10 h，溫度為28 ℃/22 ℃，空氣濕度為75%～90%，光照時間中光照度為3 600 lx，盆栽周期為36 d。

1.5.2 指標(biāo)測定

收獲全部盆栽中的植物，將茶樹全部取出，小心清洗根系，茶樹幼苗的株高采用卷尺測量，采用EPSON V700 Photo掃描儀對根系進行掃描測量根系總根長，采用WIRHizo Basic 2013C軟件（Regent Instruments Inc.，加拿大）進行測定分析；將茶樹在105 ℃殺青30 min，70 ℃烘干記錄干重。茶樹總磷含量采用釩鉬黃比色法測定［19］。

盆栽收獲后收集茶樹根際土，根際溶磷菌數(shù)采用平板稀釋計數(shù)法進行測定。根際土鋁磷（Al-P）及閉蓄態(tài)磷（O-P）含量的測定參考《土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法》中酸性土壤無機磷形態(tài)的分級測定［21］。土壤有效磷含量采用碳酸氫鈉浸提-鉬銻抗比色法測定。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

采用SPSS 22.0軟件進行方差分析，采用鄧肯氏多重比較進行試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，相關(guān)圖形采用Origin 10.0繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 溶磷菌Lb-1的形態(tài)、溶磷能力及分子生物學(xué)鑒定

由圖1-a可知，在TSA培養(yǎng)基上進行30 ℃環(huán)境培養(yǎng)24 h后，可見菌株Lb-1菌落呈橢圓桿狀、光滑、黏液狀、隆起形狀，邊緣清晰，說明菌株Lb-1可在室內(nèi)進行分離培養(yǎng)。在NBRIP培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下，接種Lb-1的4個位置中，對Ca3（PO4）2均具有較佳的溶解效果（圖1-b）。

由圖1-c可知，采用16S rRNA基因測序，測序結(jié)果通過NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST比對，其識別號為MWE73N01；采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，選取相似度較高的序列及成團泛菌（Pantoea agglomerans）等相似度較低的菌株序列為外群，結(jié)果顯示菌株Lb-1與貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis SH207，序列號：KY007189.1）在同一分支上，BLAST比對相似性高達(dá)99.57%，確定菌株 Lb-1 為貝萊斯芽孢桿菌（B. velezensis）。

2.2 溶磷菌Lb-1溶磷條件的優(yōu)化與結(jié)果

由圖2-a可知，菌株B. velezensis Lb-1對不同碳源條件下的溶磷量表現(xiàn)為麥芽糖＜山梨糖＜果糖＜蔗糖＜葡萄糖，其中以葡萄糖為碳源時菌株Lb-1的溶磷量最高，為798.51 mg/L，與葡萄糖相比，麥芽糖、果糖、蔗糖及山梨糖處理的溶磷量分別顯著（P<0.05）降低92.80%、70.47%、21.17%、89.92%。因此葡萄糖為菌株Lb-1發(fā)揮溶磷效果的最佳碳源。由圖2-b可知，菌株Lb-1在5種氮源（尿素、草酸銨、硝酸鉀、酵母粉、胰蛋白胨）中的溶磷量從大到小依次為硝酸鉀＜尿素＜草酸銨＜酵母粉＜胰蛋白胨，兩兩氮源類型間差異顯著，其中以胰蛋白胨為氮源時溶磷量最高，為824.46 mg/L，表明胰蛋白胨是菌株Lb-1的最佳溶磷氮源。由圖 2-c 可知，在不同初始pH值下，菌株Lb-1的溶磷量為515.35～830.45 mg/L，其中pH值為6.0、7.0時溶磷量較高，二者pH值間差異不顯著。其中，pH值為6.0更趨近于Lb-1的原始生長環(huán)境（pH值=5.57），pH值為6.0時溶磷量為830.45 mg/L，其他初始pH值較其降低0.99%～37.94%。由圖2-d可知，在25～35 ℃菌株Lb-1溶磷量高低表現(xiàn)為35 ℃＜32 ℃＜25 ℃＜28 ℃＜30 ℃，培養(yǎng)溫度為 30 ℃ 時溶磷量達(dá)754.03 mg/L，此時pH值為3.86；而當(dāng)培養(yǎng)溫度分別為32、35 ℃時，溶磷量較低，分別為202.57、197.44 mg/L，二者溫度條件差異不大，且兩者溶磷量顯著低于較低培養(yǎng)溫度（25、28、30 ℃）。由圖2-e可知，添加的5種微量元素（Mg、Mn、B、Fe、Mo）中， 溶磷效果順序依次為Mo＜B＜Mn＜Mg＜Fe，以Fe為微量元素時，其溶磷量為786.54 mg/L，Mg、Mn、B、Mo較其分別顯著降低19.33%、20.57%、39.45%、42.83%。因此，選擇Fe為最佳微量元素。 由圖2-f可知，在1%～5%

接種量中，隨著接種量的增加，菌株Lb-1的溶磷量隨之逐漸降低，但1%、2%、3%接種量間差異不顯著；當(dāng)接種量大于3%時，溶磷量顯著降低，尤其表現(xiàn)在5%接種量。接種量為1%時，溶磷量最高（756.11 mg/L），此時pH值為3.91。因此，菌株 Lb-1 溶磷的最佳接種量為1%。

2.3 培養(yǎng)優(yōu)化條件下溶磷菌Lb-1的有機酸分泌水平

由圖3-a可知，基于常規(guī)NBRIP培養(yǎng)基、優(yōu)化NBRIP培養(yǎng)基條件下，B. velezensis Lb-1對 Ca3（PO4）2 的溶解效果具有顯著差異，溶磷量分別為655.91、857.91 mg/L，與常規(guī)NBRIP培養(yǎng)基相比，菌株Lb-1在優(yōu)化處理的NBRIP培養(yǎng)基中溶磷量顯著提高30.89%。采用高效液相色譜法對二者的有機酸種類及含量進行測定，結(jié)果顯示Lb-1在2種培養(yǎng)基中的有機酸種類完全一致，即均由草酸、檸檬酸、琥珀酸、丙二酸組成，但不同有機酸含量存在一定差異；其中與常規(guī)NBRIP培養(yǎng)基相比，優(yōu)化NBRIP培養(yǎng)基草酸、檸檬酸、琥珀酸、丙二酸分別提高3.59%、70.65%、80.67%、131.36%，其中Lb-1在優(yōu)化NBRIP培養(yǎng)基中的檸檬酸、琥珀酸、丙二酸含量顯著高于常規(guī)NBRIP培養(yǎng)基。

2.4 溶磷菌Lb-1的盆栽定殖及溶磷效果

由圖4-a可知，在盆栽0～16 d，菌株 B. velezensis Lb-1在六堡茶根際的數(shù)量整體呈增加趨勢，同時在盆栽16 d菌落數(shù)量最高，為6.49×107 CFU/g；此后其菌落數(shù)量開始下降，且在16～36 d 期間，菌落數(shù)量較為穩(wěn)定。由圖4-b可知，在閉蓄態(tài)磷（Obs-P）含量中，隨著盆栽周期延長，CK處理的Obs-P含量呈先降低后增加趨勢，而LB處理則表現(xiàn)為逐漸降低趨勢；同一盆栽培養(yǎng)時間中，除0 d外，16、36 d中與CK處理相比，LB分別顯著降低35.09%、44.48%。不同培養(yǎng)階段CK、LB處理的鋁結(jié)合磷（Al-P）含量規(guī)律與Obs-P含量基本一致（圖4-c）。由圖4-d可知，隨著培養(yǎng)周期的延長，CK處理的土壤有效磷（AP）含量隨之顯著降低，而LB處理呈先增加后降低趨勢；此外，在16、36 d時，均以LB的AP含量顯著大于CK處理的AP含量。

2.5 溶磷菌Lb-1的促生效果

由表1可知，B. velezensis Lb-1在酸性土壤中具有良好的促生長作用，可以顯著促進六堡茶幼苗的生長發(fā)育與磷吸收處理。36 d菌株Lb-1處理六堡茶的鮮重、干重、株高、根系總長度、根系表面積、根系體積分別為5.95 g/株、1.46 g/株、28.18 cm、105.19 cm、16.77 cm2、0.52 cm3，較CK處理分別顯著提高59.09%、69.77%、38.75%、37.94%、44.82%、52.94%。此外，LB處理植株全磷含量為28.46 mg/株，較CK顯著提高108.35%。綜上，菌株B. velezensis Lb-1對六堡茶植株具有較好的促生作用。

3 結(jié)論與討論

芽孢桿菌屬是植物根際重要的微生物組成部分，大量研究表明，芽孢桿菌具有解鉀、螯合鐵及分泌促生物質(zhì)等功能；此外，芽孢桿菌是主要溶磷微生物菌群之一，其可有效溶解難溶性磷轉(zhuǎn)化為可溶性磷酸鹽［22］。張文韜等研究表明，從野生大豆根瘤內(nèi)分離出的高地芽孢桿菌（Bacillus altitudinis）菌株Y1對有機、無機磷的溶磷量分別為71.48、152.36 mg/L［23］；初旭等研究表明，來自杉木根際的蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis CX-7）對磷酸鈣、鐵結(jié)合磷和鋁結(jié)合磷具有較強的溶解能力，且在pH值為5～6和溫度為20～30 ℃ 培養(yǎng)條件下，該菌株的溶磷能力最為穩(wěn)定［24］。本研究中，采用NBRIP培養(yǎng)基培養(yǎng)顯示，從六堡茶根際得到的菌株Lb-1可產(chǎn)生明顯的溶菌圈（圖 1-b），說明菌株Lb-1具有優(yōu)良的溶磷功能。采用16S rRNA基因測序、BLAST比對顯示，菌株Lb-1與貝萊斯芽孢桿菌SH207高度相似，確定菌株Lb-1為貝萊斯芽孢桿菌。

碳、氮及微量元素是微生物完成生長史的主要營養(yǎng)物質(zhì)，充足而適宜的養(yǎng)分供應(yīng)可顯著影響微生物的生長繁殖、發(fā)育代謝及功能發(fā)揮［25］。李思思等研究發(fā)現(xiàn)，假單胞菌（Pseudomonas sp.）的最佳碳源為葡萄糖、最佳氮源為硫酸銨、最佳初始pH值為7.0、最佳發(fā)酵溫度為28 ℃，溶磷量最高可達(dá) 827.12 mg/L［26］。本研究結(jié)果表明，菌株Bacillus velezensis Lb-1以葡萄糖為碳源時，具有較高的溶磷量；在氮源利用方面，菌株對酵母粉、胰蛋白胨的利用效果較好，即該菌株更傾向于有機氮源。這與鄭喜清等的研究結(jié)果存在差異：來自玉米根際的巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）PB3在無機氮源，尤其是硝酸鈉為氮源條件下溶磷效果最為顯著［27］；芽孢桿菌屬的2株菌株對氮源喜好差異的原因可能是由于原生環(huán)境差異所致，本研究土壤取自茶樹根際，茶園補充氮肥較少，因此微生物多以利用有機氮源為主［28］。本研究試驗結(jié)果表明，以葡萄糖為碳源、胰蛋白胨為氮源、初始pH值為6.0、接種量為1%、微量元素為Fe、發(fā)酵溫度為30 ℃時，最有利于提高菌株B. velezensis Lb-1的溶磷能力。

溶磷菌增溶礦物磷的主要機制與分泌低分子量有機酸陰離子有關(guān)，這些陰離子可通過其羥基和羧基螯合磷酸鹽結(jié)合陽離子以可溶形式釋放磷［2，29］。不同溶磷菌分泌的有機酸種類往往存在差異，且不同培養(yǎng)條件所產(chǎn)生的有機酸種類和含量也可能不盡相同［30］。本研究中，基于葡萄糖為碳源、胰蛋白胨為氮源、初始pH值為6.0、接種量為1%、微量元素為Fe、發(fā)酵溫度為30 ℃的最佳優(yōu)化培養(yǎng)條件下，菌株Lb-1的溶磷效果顯著提高30.89%，達(dá)857.91 mg/L。此外，有機酸種類及含量的試驗表明，優(yōu)化培養(yǎng)條件可影響菌株Lb-1的有機酸含量，其中檸檬酸、琥珀酸、丙二酸含量顯著增加。

溶磷菌良好的室內(nèi)效果是反映其能否成為潛在菌肥資源的重要前提，而實際的田間存活效率及功能作用是決定其最終應(yīng)用潛力的參考［15，31］。本研究結(jié)果表明，菌株B. velezensis Lb-1在六堡茶根際數(shù)量在前中期持續(xù)增加，此后其菌落數(shù)量下降，菌落數(shù)量仍較高，表明該菌株均有良好的環(huán)境適應(yīng)能力。在溶磷微生物的篩選研究中，菌株的實際促生、解磷效果是決定其是否由實驗室走向田間的重要參考［32］。本研究結(jié)果表明，施加B. velezensis Lb-1 處理組的六堡茶鮮重、干重、株高、根系總長度、根系表面積、根系體積及磷含量分別顯著提高59.09%、69.77%、38.75%、37.94%、44.82%、52.94%及108.35%。且培養(yǎng)過程中鋁結(jié)合磷、閉蓄態(tài)磷含量顯著降低、有效磷含量顯著提高。說明該菌株可有效活化根際難溶磷、提高六堡茶樹對磷的吸收及促進植株生長發(fā)育。

參考文獻(xiàn)：

［1］孫 艷，洪婉婷，韓 陽，等. 植物內(nèi)部磷循環(huán)利用提高磷效率的研究進展［J］. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報，2021，27（12）：2216-2228.

［2］Cho H，Bouain N，Zheng L Q，et al. Plant resilience to phosphate limitation：current knowledge and future challenges［J］. Critical Reviews in Biotechnology，2021，41（1）：63-71.

［3］劉 瑾，楊建軍. 近三十年農(nóng)田土壤磷分子形態(tài)的研究進展［J］. 土壤學(xué)報，2021，58（3）：558-567.

［4］何 敏，許秋月，夏 允，等. 植物磷獲取機制及其對全球變化的響應(yīng)［J］. 植物生態(tài)學(xué)報，2023，47（3）：291-305.

［5］王經(jīng)緯，王艷玲，姚 怡，等. 長期施肥對旱地紅壤團聚體磷素固持與釋放能力的影響［J］. 土壤學(xué)報，2017，54（5）：1240-1250.

［6］韋高玲，卓慕寧，廖義善，等. 不同施肥水平下菜地耕層土壤中氮磷淋溶損失特征［J］. 生態(tài)環(huán)境學(xué)報，2016，25（6）：1023-1031.

［7］呂 俊，王曉婭. 溶磷微生物及其對植物促生作用的研究進展［J］. 中國土壤與肥料，2023（1）：231-239.

［8］溫佳旭，陳雪麗，肖 洋，等. 土壤中主要溶磷菌種類及其作用機制［J］. 北方園藝，2023（14）：139-145.

［9］陶冬雪，高英志. 土壤解磷微生物促進植物磷素吸收策略研究進展［J］. 生態(tài)學(xué)報，2023，43（11）：4390-4399.

［10］師仁增，鄧 霞，田 琳，等. 植物根系分泌物對解磷微生物的影響研究進展［J］. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，55（8）：174-180.

［11］吳玉洪，冷超凡，陳瑩瑩，等. 貝萊斯芽孢桿菌BMF03對黃瓜幼苗促生長作用及其生物學(xué)功能研究［J］. 東北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，48（3）：106-111.

［12］彭學(xué)銳，周思裕，陳 翔，等. 廣西梧州六堡茶主產(chǎn)區(qū)茶葉-土壤重金屬污染現(xiàn)狀及源解析［J］. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2023，42（10）：2231-2243.

［13］馬 蕊，林 勇，馬婷婷. 叢枝菌根真菌對六堡茶茶葉品質(zhì)及其相關(guān)基因表達(dá)的影響［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，50（17）：157-163.

［14］顏 鵬，韓文炎，李 鑫，等. 中國茶園土壤酸化現(xiàn)狀與分析［J］. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，53（4）：795-813.

［15］池景良，郝 敏，王志學(xué)，等. 解磷微生物研究及應(yīng)用進展［J］. 微生物學(xué)雜志，2021，41（1）：1-7.

［16］薛應(yīng)鈺，葉 巍，楊 樹，等. 一株溶磷菌的分離鑒定及溶磷促生作用［J］. 干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究，2019，37（4）：253-262.

［17］王 君，范延輝，尚 帥，等. 一株根際解磷菌的篩選鑒定及溶磷促生作用［J］. 中國土壤與肥料，2022（6）：195-203.

［18］陳海念，馮 蓉，楊勝竹，等. 1株生防菌的鑒定及其發(fā)酵條件優(yōu)化［J］. 浙江大學(xué)學(xué)報（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2020，46（2）：177-188.

［19］鮑士旦. ?土壤農(nóng)化分析［M］. 2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000.

［20］Zhang H，Chen Q F，Shang N，et al. The enhanced mechanisms of Hansschlegelia zhihuaiae S113 degrading bensulfuron-methyl in maize rhizosphere by three organic acids in root exudates［J］. Ecotoxicology and Environmental Safety，2021，223：112622.

［21］魯如坤. 土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法［M］. 2版.北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2000：63-67.

［22］Zhang N，Wang Z Q，Shao J H，et al. Biocontrol mechanisms of Bacillus：improving the efficiency of green agriculture［J］. Microbial Biotechnology，2023，16（12）：2250-2263.

［23］張文韜，楊 皓，毛國豪，等. 一株高地芽孢桿菌的鑒定與促生能力研究［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，50（5）：225-229.

［24］初 旭，胡 霞，劉 靜，等. 杉木根際溶磷菌的篩選鑒定及溶磷能力分析［J］. 西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)），2021，41（2）：85-92.

［25］武若楠，周 莉，劉守德，等. 解淀粉芽孢桿菌BSK532的發(fā)酵條件優(yōu)化及抑菌活性研究［J］. 化學(xué)與生物工程，2023，40（3）：36-43.

［26］李思思，符運會，羅 宇，等. 一株高效溶磷菌的條件優(yōu)化及其促生特性研究［J］. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，51（11）：73-81.

［27］鄭喜清，邸 娜，張志超，等. 解磷細(xì)菌的分離篩選及培養(yǎng)條件優(yōu)化［J］. 天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，26（3）：44-48.

［28］陳玉真，王 峰，吳志丹，等. 林地轉(zhuǎn)變?yōu)椴鑸@對土壤固氮菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性的影響［J］. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報，2020，26（5）：1096-1106.

［29］Ma Q H，He S W，Wang X，et al. Isolation and characterization of phosphate-solubilizing bacterium Pantoea rhizosphaerae sp. nov. from Acer truncatum rhizosphere soil and its effect on Acer truncatum growth［J］. Frontiers in Plant Science，2023，14：1218445.

［30］尚曉靜，侯 瑞，徐芳玲，等. 2株藍(lán)莓溶磷內(nèi)生真菌的篩選、鑒定及溶磷效果評價［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，50（20）：246-252.

［31］董 璐，王立新. 生物炭與不同芽孢桿菌配施對萬壽菊基質(zhì)性質(zhì)及微生物群落組成的影響［J］. 北方園藝，2023（17）：61-69.

［32］陳容彬，左振宇，黃博慧，等. 一株伯克霍爾德菌的篩選鑒定及溶磷性能優(yōu)化［J］. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，2022，33（6）：1669-1678.