功能性消化不良病證結(jié)合動物模型研究進(jìn)展

鄧 嫻，譚瑾軒，陳映西，潘 娜，劉付杰義，黃曉燕

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530022）

功能性消化不良（functional dyspepsia， FD）是 常見的功能性胃腸病，以上腹部脹悶不適、飽脹感、飯后不適等癥狀為主要臨床表現(xiàn)的功能性胃腸病。在亞洲國家FD 的發(fā)病率為5%～30%［1］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為FD 與胃腸功能紊亂、胃排空延遲、幽門螺桿菌感染、內(nèi)臟高敏感性等相關(guān)［2］。FD 可歸屬為祖國醫(yī)學(xué)“胃脘痛”“胃痞”范疇，脾虛氣滯、胃失和降是主要病機［3］。中醫(yī)特有的辨證論治體系治療FD 有一定優(yōu)勢。構(gòu)建符合FD 的病證結(jié)合模型有助于更好發(fā)揮中醫(yī)藥治療FD 的優(yōu)勢。

FD 的中醫(yī)證型動物模型基于中醫(yī)發(fā)病機理造模方法各異?，F(xiàn)有文獻(xiàn)多從造模方法及原理方面進(jìn)行整理論述，忽略了對具體造模方法的整合和對比。本文對現(xiàn)有常見FD 證型脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證動物模型造模方法及評價指標(biāo)進(jìn)行整理分析，旨在為中醫(yī)辨證論治FD 的相關(guān)動物研究提供造模參考。

1 病證結(jié)合造模方法

1.1 脾虛證

脾主運化，喜燥惡濕?，F(xiàn)代人不健康的生活習(xí)慣，如三餐飲食不節(jié)律、恣意食用生冷油膩食品，加之社會生活節(jié)奏變快、作息不規(guī)律等原因均可損傷脾胃，脾胃虛弱，脾胃功能失司，氣機升降失調(diào)引起痞滿、腹脹、納食欠佳等FD 癥狀，如《名醫(yī)雜注》言：“惟飲食不節(jié)，起居不時，損傷脾胃，..，脾胃俱損，納化皆難，無氣斯弱，百邪易侵，而飽悶、痞積等癥作矣。”基于此，可采取飲食不節(jié)法、勞倦過度法構(gòu)建脾虛動物模型。飲食不節(jié)法多采取隔日禁食的方式，其優(yōu)點在于操作方便，缺點是不能很好模擬現(xiàn)代人的飲食和生活習(xí)慣。勞倦過度常用的方式有游泳法［4］和小平臺站立法［5］，游泳法可模擬人類受到的身體和精神應(yīng)激，相對更符合臨床實際，但由于需要使動物間斷游泳，在造模中可能會出現(xiàn)較多動物死亡。小平臺站立法則克服了這一問題，將實驗動物放置于狹窄平臺上使其站立，平臺放置于裝滿水的水箱中，局限其活動使其處于一種驚恐的狀態(tài)中，該方式更符合FD 的發(fā)病機理，且可降低動物因游泳過程嗆水或溺水導(dǎo)致的死亡。FD 脾虛證動物造模方式亦多參考于此。

左旋精氨酸（L-Arg）可通過影響胃腸組織中NO 濃度導(dǎo)致胃腸功能障礙［6］，L-Arg 疊加飲食不節(jié)法可用于制備FD 脾虛動物模型［7］，能引起胃排空率及小腸推進(jìn)率明顯降低的胃動力障礙的表現(xiàn)，并引起與脾虛相關(guān)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)因子IREI 和TRAF2 蛋白表達(dá)的明顯上升［8］。碘乙酰胺（Iodoacetamide，IA）可減慢大鼠胃排空并造成胃慢波頻率紊亂［9］，實驗研究表明［10］，單純應(yīng)用IA 灌胃即可引起胃感覺和運動功能明顯障礙，且無明顯組織病理學(xué)變化，但單純應(yīng)用IA 灌胃或可存在造模時間短不能模擬FD 慢性發(fā)病的問題，且其是否能建構(gòu)FD脾虛證模型尚需進(jìn)一步探討。應(yīng)用IA 灌胃制備FD脾虛模型多疊加勞倦過度或飲食不節(jié)的方式，比如采取“IA 灌胃+勞倦過度”的方式造模，該方法制備的動物模型可影響Ca2+/CaM-MLCK-MLC 信號通路進(jìn)而影響平滑肌收縮功能［11］，CRF-UCN2 失衡可進(jìn)一步抑制胃排空［12］，影響EGC-NGF 通路誘發(fā)并維持內(nèi)臟高敏感性［13］，并引起腦腸肽的異常［14］。在具體造模方式的選擇上，有學(xué)者對IA 灌胃結(jié)合小平臺站立和IA 灌胃結(jié)合游泳法做比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)合小平臺站立制備的動物模型脾虛癥狀如毛發(fā)不澤、神疲乏力更嚴(yán)重，胃腸激素相關(guān)指標(biāo)如尿D-木糖排泄率、血清胃動素、胃泌素含量等降低更明顯，表明IA 灌胃+小平臺站立成模效果更佳［15］。在“IA 灌胃+勞倦過度”基礎(chǔ)上疊加飲食不節(jié)法或更貼合現(xiàn)代人生活方式所致FD 的發(fā)病過程，實驗研究表明，該 方 法 可 通 過 影 響CaM-MLACK 信 號 通 路［16］、mTOR/ghrelin/GHSR - 1a 信 號 通 路［17］、CaM/MLCK/MLC20 信號通路［18］、AMPK/TSC2/mTOR信號通路［19］從而抑制胃竇平滑肌的收縮出現(xiàn)胃動力障礙。相比于應(yīng)用L-Arg 疊加飲食不節(jié)造模，IA灌胃疊加勞倦過度或飲食不節(jié)的FD 脾虛動物造模相關(guān)研究更多，原因可能在于單純應(yīng)用IA 灌胃就可制備相對貼合FD 的模型，其模型更具穩(wěn)定性。具體造模方法詳見表1。

表1 FD 脾虛證動物造模方法Tab 1 Methods of animal modeling of FD spleen deficiency syndrome

1.2 肝郁證

經(jīng)典的FD 肝郁動物模型造模方法是郭海軍基于“怒傷肝”提出的夾尾激怒法［20］。該方法模擬了受到刺激時產(chǎn)生的焦慮、抑郁的病理狀態(tài)，出現(xiàn)體質(zhì)量明顯下降、進(jìn)食減少、無器質(zhì)性病變的FD 特性，具有操作簡便，便于控制的特點。其缺點在于制備的肝郁FD 動物模型具有不穩(wěn)定性，研究表明，在造模停止后短期內(nèi)大鼠會自行恢復(fù)正常，如需進(jìn)一步的用藥研究，仍需持續(xù)予動物夾尾刺激［21］。在夾尾刺激法基礎(chǔ)上疊加飲食不節(jié)法或更利于模型穩(wěn)定，研究表明，延長夾尾時間并結(jié)合飲食不節(jié)制備FD 動物模型可出現(xiàn)毛發(fā)枯黃、食欲不振、扎堆、聚集、焦慮抑郁、大便稀軟等表現(xiàn)，糖水偏好實驗、曠場實驗表明其制備的動物模型符合FD 肝郁模型，并通過影響SCF/c-Kit 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)引起胃腸動力障礙［22］。具體造模方法詳見表2。

表2 FD 肝郁證動物造模方法Tab 2 Methods of animal modeling of FD liver depression syndrome

1.3 肝郁脾虛證

基于五行學(xué)說，肝屬木，脾屬土，二者相互制約相互依賴。肝郁脾虛證反應(yīng)了肝脾關(guān)系的失調(diào)，基于FD 反復(fù)發(fā)作、病情遷延的特點，臨床多見FD 肝郁脾虛證型。該證型的FD 動物模型研究亦較多，制備方法各異。多因素疊加刺激的造模方法能更好的模擬FD 復(fù)雜的發(fā)病過程，5-羥色胺（5-HT）被證實與胃腸道過敏及中樞神經(jīng)活動相關(guān)［23，24］。研究表明，“改良夾尾刺激+飲食不節(jié)法”可影響5-HT的濃度及相應(yīng)蛋白表達(dá)水平［25］，并引起腦腸肽的改變［26］，符合FD 肝郁脾虛證的發(fā)病機制?！案牧紛A尾刺激+飲食不節(jié)+苦寒瀉下法” 制備的模型可出現(xiàn)精神萎靡、神志不安的表現(xiàn)，并引起胃腸激素紊亂及胃排空減慢［27］?！案牧紛A尾刺激+飲食不節(jié)+過度勞倦法”，可出現(xiàn)明顯的肝郁脾虛表現(xiàn)，且出現(xiàn)胃動力障礙的結(jié)果，運用曠場實驗進(jìn)一步表明該法可制 備 成 功 的FD 肝 郁 脾 虛 模 型［28-32］?！案?良 夾 尾 刺激+飲食不節(jié)+冰生理鹽水灌胃” 可使造模動物出現(xiàn)明顯胃腸動力障礙及十二指腸黏膜機械屏障異常［33-35］。慢性束縛法是通過束縛大鼠于狹小空間或固定其肢體限制活動，致使其情志郁怒而肝氣郁滯［36］。研究表明，“慢性束縛+飲食不節(jié)+勞倦過度”制備的動物模型可引起腦腸肽變化，符合肝郁脾虛FD 的特征［37，38］?？蛇x擇在此基礎(chǔ)上疊加夾尾刺激法制備FD 肝郁脾虛模型，可出現(xiàn)食少、精神萎靡、胃動力障礙、胃組織5-HT 含量減少［39］?！奥允`+飲食不節(jié)+勞倦過度+苦寒瀉下”可引起胃腸蠕動功能減慢及肝郁脾虛證的表現(xiàn)。刺激方式更多或更利于模型的穩(wěn)定，且能更好的模擬FD 復(fù)雜的發(fā)病機理，但多種刺激方式的應(yīng)用過程較繁瑣，造模成本高，操作具有一定難度，研究者可根據(jù)具體 實 驗 需 要 選 用 適 宜 的 造 模 方 式［40，41］?！癐A 灌 胃+改良夾尾刺激法”是基于FD 脾虛證及肝郁證病證結(jié)合模型研究提出的造模方法，實驗研究表明，其制備的動物模型出現(xiàn)胃黏膜炎癥反應(yīng)［42］。具體造模方法詳見表3。

表3 FD 肝郁脾虛證動物造模方法Tab 3 Methods of animal modeling of FD liver depression and spleen deficiency syndrome

2 討論

2.1 FD 病證結(jié)合動物模型的關(guān)鍵問題

本文對FD 病證結(jié)合動物模型進(jìn)行了文獻(xiàn)分析，多因素造模能更好地模擬FD 復(fù)雜的中醫(yī)證型以制備更貼合臨床病證的動物模型。在造模方式的選取上，F(xiàn)D 脾虛證動物造模多選用IA 灌胃結(jié)合小平臺站立，疊加飲食不節(jié)法或勞倦過度法更符合臨床實際。FD 肝郁證動物模型多沿用郭海軍的夾尾激怒法，其制備方法簡便又能很好模擬因情志刺激影響肝疏泄所致肝氣郁結(jié)的發(fā)病機理，疊加飲食不節(jié)法模型更穩(wěn)定。FD 肝郁脾虛證模型制備方法多樣，多以夾尾刺激法為基礎(chǔ)，結(jié)合飲食不節(jié)、勞倦過度等方法，亦有選用慢性束縛法疊加勞倦過度和飲食不節(jié)方法，因未見有針對改良夾尾刺激法和慢性束縛法的比較研究，具體造模效果難評孰優(yōu)孰劣。改良夾尾刺激法原理是引起大鼠暴怒而致肝郁，慢性束縛法原理是通過束縛其行動致其郁怒而肝氣郁結(jié)，《靈樞·本神》言：“肝氣虛則恐，實則怒”，肝氣過亢易于發(fā)怒，肝氣虛，則易生郁怒之變，由此認(rèn)為，改良夾尾刺激法以氣郁為主，慢性束縛法以氣虛為主。隨著現(xiàn)代研究的深入，IA 灌胃亦應(yīng)用至FD 肝郁脾虛造模過程中?；诟斡羝⑻撟C因虛致實、虛實夾雜、病程纏綿的特點，刺激因素越多越能更好地模擬FD 復(fù)雜的發(fā)病機理，越利于保持模型的穩(wěn)定，但多種刺激方式的應(yīng)用過程較繁瑣，造模成本高，操作具有一定難度，具體可根據(jù)實驗需要選用適宜的動物造模方法。在實驗動物的選擇上，因大鼠和小鼠的飼養(yǎng)較為廉價，故多選用大鼠、小鼠作為實驗動物，相對于小鼠，大鼠白天休息、夜間活動和對光照、噪音敏感的生活習(xí)性更符合FD 的發(fā)病機理。在品系的選擇上，因Wistar 大鼠腫瘤發(fā)病率低，對刺激更敏感，更廣泛地用于肝郁及肝郁脾虛造模過程中，SD 大鼠生長發(fā)育較快，造模周期周期相對較短，亦廣為研究者歡迎［43］。

評價指標(biāo)的選擇上，用于評價FD 脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證模型的行為學(xué)實驗多選用糖水偏好實驗、曠場實驗。糖水偏好實驗是通過計算糖水消耗率以觀察動物興趣缺失程度，曠場實驗是大鼠置于黑暗的自制木箱，通過觀察其運動的距離、時間以評價動物自主行動、探索度及緊張度，可用于評價抑郁癥［44］?；谀X腸軸理論，F(xiàn)D 多伴隨精神情志的異常，故多選用糖水偏好實驗評估FD 模型，而曠場實驗可評估動物是否存在焦慮緊張，廣泛用于肝郁脾虛證模型的評估［45］。FD 脾虛模型的評價多以其出現(xiàn)的倦怠乏力、毛色枯槁、便溏等脾虛表現(xiàn)等作為其評價指標(biāo)，因脾虛證主要表現(xiàn)為消化與吸收功能的異常，乳酸可反映機體疲乏的狀態(tài)，與“勞倦傷脾”理論相契合，故血清淀粉酶活力、D-木糖、乳酸可作為衡量脾虛程度的客觀指標(biāo)［13］。腦腸肽是腦腸軸分布的肽類統(tǒng)稱，因肝主疏泄，調(diào)暢氣機，可調(diào)節(jié)人精神情志活動，肝病犯胃，肝郁脾虛，出現(xiàn)胃腸疾病與情志變化，其機理與腦腸軸頗為相似，故多以腦腸肽作為肝郁脾虛的評估指標(biāo)［46］。

2.2 FD 病證結(jié)合動物模型的發(fā)展思路

《功能性消化不良中醫(yī)診療專家共識意見（2017）》將FD 分為脾虛氣滯型、肝胃不和型、脾胃濕熱型、脾胃虛寒（弱）型、寒熱錯雜型5 個證型［47］。對FD 病證結(jié)合動物模型進(jìn)行整理發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)D 一般分為脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證、脾胃虛寒證、胃虛停飲證、寒熱錯雜證，未與指南證型相匹配，其原因可能在于難以復(fù)刻其相關(guān)臨床癥狀，且FD 病證結(jié)合模型研究多側(cè)重于脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證，脾胃虛寒證、胃虛停飲證、寒熱錯雜證研究頗少，這與其證型復(fù)雜，現(xiàn)有造模方法無法全面精準(zhǔn)模擬其發(fā)病機制相關(guān)。造模過程中結(jié)合飲食不節(jié)或脾虛勞倦更利于模型的穩(wěn)定，這與現(xiàn)代人生活習(xí)性相符，基于《素問·本病論》：“人飲食勞倦即傷脾”，又如李東垣言：“百病皆由脾胃衰而生”，可知，脾虛是FD 的發(fā)病基礎(chǔ)。設(shè)計成熟規(guī)范的FD 脾虛證造模方法或有利于FD 病證結(jié)合模型的進(jìn)一步研究，但目前FD 病證結(jié)合模型普遍存在無客觀評判標(biāo)準(zhǔn)及具體評分細(xì)則的問題，多以造模動物出現(xiàn)的倦臥嗜睡、體重減輕等一般狀態(tài)、病理組織學(xué)改變、胃腸動力學(xué)相關(guān)血清指標(biāo)、蛋白檢測等作為評判標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)D肝郁脾虛證引用了曠場實驗作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，相比于FD 其他病證結(jié)合模型更具說服力，而曠場實驗用于抑郁癥模型的評估，可用于評價肝失疏泄引起的氣機失調(diào)如肝郁氣滯證，但用于評價FD 肝郁脾虛模型則客觀證據(jù)不足，對造模動物出現(xiàn)的一般狀態(tài)評價的主觀性過強，且未有規(guī)范的評分標(biāo)準(zhǔn)?；谥嗅t(yī)發(fā)病機理的復(fù)雜性，目前尚未有與人類FD 某個中醫(yī)證型十分貼合的中醫(yī)動物模型。制備操作性強、造模成本低、模擬程度高且評價系統(tǒng)完善的病證結(jié)合動物模型有助于進(jìn)一步探索FD 的發(fā)病機制及有效的治療策略。因此，在FD 的進(jìn)一步研究中，仍需不斷探索成熟理想的病證結(jié)合動物模型。

作者貢獻(xiàn)度說明：

鄧嫻：負(fù)責(zé)收集文獻(xiàn)資料，擬定寫作思路，撰寫論文；譚瑾軒、陳映西、潘娜、劉付杰義：參與資料整理，修改論文；黃曉燕：負(fù)責(zé)指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。

所有作者聲明不存在利益沖突關(guān)系。