植物乳桿菌RG-034 對大鼠腹瀉型腸易激綜合征的治療作用

徐馮蓮，許銳鵬，張沂，王子昱，李煜龍，陳貴浩，方偉蓉*

1.中國藥科大學 基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床藥學學院，江蘇 南京 210009

2.廣東強基藥業(yè)有限公司，廣東 潮州 515636

腹瀉型腸易激綜合征是一種常見的慢性非器質(zhì)性消化系統(tǒng)疾病，臨床癥狀表現(xiàn)為反復性腹痛和腹瀉，是腸易激綜合征最主要的亞型[1-2]。腹瀉型腸易激綜合征的發(fā)生與腦-腸軸功能異常、內(nèi)臟超敏反應、心理應激等因素密切相關(guān)[3]，對患者的生活質(zhì)量造成了嚴重影響，持續(xù)的健康問題易導致患者產(chǎn)生焦慮和抑郁等心理問題[4]。近年來研究表明腸道菌群失調(diào)參與了腹瀉型腸易激綜合征的發(fā)生發(fā)展，腹瀉型腸易激綜合征患者的腸道菌群與正常人相比存在明顯差異，常表現(xiàn)為有益菌減少，有害菌增多[5]。同時，腹瀉型腸易激綜合征患者腸道內(nèi)微生物的定植能力受損，表現(xiàn)為益生菌的流失[6]。腹瀉型腸易激綜合征的傳統(tǒng)治療方法包括生活方式和飲食干預、心理治療以及藥物治療[7]。止瀉藥、抗抑郁藥、抗痙攣藥、抗生素等藥物雖然可以緩解癥狀，但存在療效有限、不良反應嚴重、適應范圍狹窄、易產(chǎn)生依賴性等問題[8-9]。

植物乳桿菌是一種公認的益生菌，能在低pH值環(huán)境中生長，具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡、抑制有害菌生長等益生作用[10-11]。植物乳桿菌可以增強免疫系統(tǒng)功能，促進食物消化和營養(yǎng)吸收，緩解腸道炎癥。此外，植物乳桿菌產(chǎn)生的乳酸和其他有益代謝產(chǎn)物有助于維持腸道健康[12]。由于其多種益生作用，植物乳桿菌被廣泛應用于乳制品、發(fā)酵食品和膳食補充劑中[13]。植物乳桿菌已被證明對革蘭陽性菌、革蘭陰性細菌以及真菌有良好的抑制作用[14-15]。植物乳桿菌1201 可以提高Akkermansia、Lactobacillus和Bifidobacterium等有益細菌的相對豐度，減輕腸道炎癥反應，從而維護腸道健康[16]。植物乳桿菌GMNL-662 通過調(diào)節(jié)腸道菌群構(gòu)成，降低嗜黏蛋白菌屬，維持腸道生態(tài)平衡，抵御炎癥；其代謝產(chǎn)物能夠增強腸道屏障功能，抑制致病菌定植，調(diào)節(jié)腸內(nèi)免疫，降低炎癥因子水平[17]。植物乳桿菌HCS03-001 無溶血作用及致病性，在小鼠急性毒性實驗中未引起毒性反應，表現(xiàn)出良好的安全性和潛在的益生特性[18]。

常見的益生菌產(chǎn)品劑型包括粉劑、片劑和顆粒劑等，然而這些劑型容易受環(huán)境影響，水分、高溫、胃酸和小腸中的消化酶等都會降低益生菌的活力，減少活菌數(shù)量。腸溶膠囊是一種良好的益生菌制備技術(shù)，能夠在腸道內(nèi)釋放活性成分，從而保護益生菌免受胃酸和胃蛋白酶的破壞，提高其存活率和保持活性。本研究制備了植物乳桿菌RG-034 大鼠腸溶膠囊，實現(xiàn)了結(jié)腸定位釋放，為益生菌提供更好的保護和釋放效果。然而，植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征的治療作用未見報道。本研究通過ig 番瀉葉聯(lián)合隔日禁食制備大鼠腹瀉型腸易激綜合征模型，研究植物乳桿菌RG-034 對大鼠腹瀉型腸易激綜合征的治療效果及可能機制，為其進一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

RG-034 菌粉（廣東強基藥業(yè)有限公司，批號20221214）；植物乳桿菌RG-034 大鼠腸溶膠囊（廣東強基藥業(yè)有限公司，批號20220729）；RG-034 菌株（批號20231016）；大腸埃希菌[菌號CMCC（B）44102]，乙型副傷寒沙門菌[菌號CMCC（B）50094]，金黃色葡萄球菌[菌號CMCC（B）26003]均來自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。De Man、Rogosa、Sharpe（MRS）平皿（批號20231001）；番瀉葉（豪州市永剛飲片廠有限公司，批號A220622）；蒙脫石散（江蘇奇冠藥店有限公司，批號U22457）。

1.2 實驗儀器

YQX-Ⅱ厭氧培養(yǎng)箱（上海躍進醫(yī)療器械有限公司）；SPX-250-Ⅱ生化培養(yǎng)箱（上海躍進醫(yī)療器械有限公司）；BSA224S 型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；EPED-20TF 超純水機（南京易普達科技發(fā)展有限公司）。

1.3 實驗動物

SD 大鼠，24 只，雌雄各半，SPF 級，體質(zhì)量200～250 g，購于上海市計劃生育科學研究所實驗動物經(jīng)營部，生產(chǎn)許可證號SCXK（滬）2018-0006，合格證編號20180006040529。動物均飼養(yǎng)于中國藥科大學動物實驗中心清潔級環(huán)境中，所有動物研究均遵循國際醫(yī)學倫理規(guī)范并經(jīng)中國藥科大學動物倫理委員會批準，動物實驗倫理批號2022-08-022。

2 方法

2.1 RG-034 菌粉的制備及活菌數(shù)測定

將植物乳桿菌菌株RG-034置于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，離心分離后，加入凍干保護劑，制得植物乳桿菌RG-034 菌粉。無菌稱取3.0 g RG-034 菌粉，加入27.0 mL 無菌生理鹽水，充分搖勻，取1 mL 做10倍系列稀釋。最終稀釋度為1×10-9，取最終稀釋度的菌液100 μL 滴入MRS 瓊脂培養(yǎng)基平皿上，共做3 個平皿。用玻棒涂布均勻，37 ℃厭氧條件下倒置培養(yǎng)36～48 h，觀察每個平皿菌落生長情況并計數(shù)。依據(jù)《中國藥典》2020 年版三部規(guī)定：每1 克菌粉活菌數(shù)不少于1×1010CFU?；罹鷶?shù)計算公式如下：

2.2 植物乳桿菌RG-034 大鼠腸溶膠囊的制備

取處方量植物乳桿菌RG-034 菌粉、預膠化淀粉和硬脂酸鎂，混合均勻后，將其填充至腸溶型大鼠動物試驗膠囊中，制得植物乳桿菌RG-034 大鼠腸溶膠囊，每粒膠囊活菌數(shù)為1×109CFU。

2.3 RG-034 抑菌試驗

實驗以大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌為指示菌株，采用類似“牛津杯法”檢測RG-034 抑菌性[19]。

2.3.1 RG-034 菌株的擴增及菌餅制備 RG-034 菌株從甘油管活化后，按5%的比例接種至5 mL/15 mL（15 mL 離心管裝5 mL 培養(yǎng)基）的MRS 培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12～24 h，看到明顯混濁后獲得RG-034乳酸菌菌液；將9.5 mL/15 mL 的MRS 固體管沸水浴加熱，待瓊脂完全融化后，放入55 ℃水浴鍋，備用；將1.0 mL RG-034 乳酸菌菌液與19.0 mL MRS固體培養(yǎng)基混勻，傾注入9 cm 平皿內(nèi)；完全凝固后，放入樂扣盒，放入除氧袋，平皿倒置培養(yǎng)；37 ℃培養(yǎng)36～48 h，取出平皿，用內(nèi)徑9 mm 的打孔器，在瓊脂培養(yǎng)基上打孔，獲得菌餅，備用。

2.3.2 致病菌的擴增和菌餅制備 大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌從甘油管活化后，按5%的比例接種至10 mL/15 mL 的液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12～24 h；將5 mL/15 mL 的半固體培養(yǎng)基沸水浴加熱，待瓊脂完全融化后，放入55 ℃水浴鍋內(nèi)；用無菌生理鹽水稀釋液至10-1級（約1×108CFU/mL）、10-2級（約1×107CFU/mL）2 個濃度；取稀釋液0.5 mL 與5 mL 半固體培養(yǎng)基混勻，傾注入9 cm 平皿內(nèi)，等待完全凝固，備用。

2.3.3 抑菌圈直徑測量 將乳酸菌菌餅輕放在半固體培養(yǎng)基表面，每個皿中各放1 塊RG-034 菌餅和1 塊空白培養(yǎng)基；34 ℃，平皿正置培養(yǎng)16～18 h。用游標卡尺測量抑菌圈大小并記錄，拍照記錄平皿情況。

2.4 分組及給藥

2.4.1 番瀉葉溶液的制備 每100 克番瀉葉加入1 L純水，充分攪拌后浸泡30 min，沸水煎煮30 min，兩層紗布過濾取上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將藥液減壓濃縮至100 mL，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆肹20]。

2.4.2 動物分組 健康成年SD 大鼠飼養(yǎng)于中國藥科大學藥學動物實驗中心，適應性飼養(yǎng)1 周后，按體質(zhì)量隨機分為對照組、模型組、蒙脫石散組、植物乳桿菌RG-034 組，每組6 只，雌雄各半。

2.4.3 造模與給藥 對照組大鼠每天ig 生理鹽水，期間正常飲食。其余各組大鼠ig 番瀉葉溶液5 g/kg，1 次/d，連續(xù)2 周。同時在造模第1 周時，各造模組大鼠進行隔日禁食，饑飽交替。自第3 周開始，除對照組和模型組外，蒙脫石散組ig 0.81 g/kg 蒙脫石散，1 次/d，連續(xù)給藥3 周；植物乳桿菌RG-034 組單次ig 膠囊1 粒（1×109CFU/粒，15 mg）[21]，2次/d。動物給藥期間正常飲水進食。

2.5 檢測指標及方法

2.5.1 一般狀態(tài)變化 實驗過程中記錄各組大鼠的體質(zhì)量、精神狀態(tài)、皮毛色澤、反應力、活動度、存活率以及糞便性狀。

2.5.2 稀便率、稀便級和腹瀉指數(shù)的測定 分別在給藥前1 d 及給藥第7、14、21 天進行指標檢測，當天給藥結(jié)束后，將大鼠置于墊有濾紙的代謝籠內(nèi)，每籠1 只，每隔1 h 更換濾紙，連續(xù)檢測5 h，記錄每只大鼠的稀便粒數(shù)以及糞便總粒數(shù)。干便與稀便的區(qū)分方法：以濾紙上有無污跡為標準，糞便次數(shù)以每粒或每堆（不能分清粒數(shù)者）為1 次。

依據(jù)稀便污染濾紙形成污跡面積的大小進行分級（表1）。污跡直徑的測量方法：糞便形狀為圓形，則直接量直徑；如為橢圓形則測量最長和近似圓的直徑，相加除以2。統(tǒng)計時先逐個統(tǒng)計每一堆濕便的級數(shù)，將該鼠所有稀便級數(shù)相加除以稀便次數(shù)，得到稀便的平均級數(shù)即稀便級。

表1 稀便級判別標準Table 1 Classification of loose stool level

2.5.3 16S rRNA 高通量測序 大鼠脫頸處死，在盲腸下端2～3 cm 處，取8 cm 左右的結(jié)腸，用無菌磷酸鹽緩沖液輕輕清洗，直到?jīng)]有內(nèi)容物流出。用無菌顯微鏡玻片刮取附著在結(jié)腸表面的組織細菌，裝入備好的無酶EP 管內(nèi)，隨后置于液氮中保存。

實驗結(jié)束后，將取材得到的大鼠結(jié)腸組織細菌采用16S rRNA 高通量測序技術(shù)進行腸道菌群的檢測。基本流程：從樣品中提取總基因組DNA，采用Nanodrop 對DNA 進行定量，并通過1.2 %瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 提取質(zhì)量。對細菌16S rRNA 基因的v4～v5 區(qū)域進行PCR 擴增，將擴增產(chǎn)物進行磁珠純化回收，隨后將PCR 擴增回收產(chǎn)物進行熒光定量。根據(jù)熒光定量結(jié)果，按照每個樣本的測序量需求，對各樣本按相應比例進行混合。采用Illumina公司的TruSeq Nano DNA LT Library Prep Kit 制備測序文庫，并進行高通量測序。16S rRNA 高通量測序以及生物信息分析流程由蘇州帕諾米克生物醫(yī)藥科技有限公司提供，根據(jù)公司平臺生成的數(shù)據(jù)和圖片進行統(tǒng)計分析處理。

2.6 統(tǒng)計學分析

3 結(jié)果

3.1 植物乳桿菌RG-034 菌粉活菌數(shù)

結(jié)果如表2 所示，每克RG-034 菌粉的活菌數(shù)為2.5×1011CFU，符合《中國藥典》2020 年版三部標準規(guī)定。

表2 植物乳桿菌RG-034 粉活菌計數(shù)Table 2 Viable bacteria count of Lactobacillus plantarum RG-034 powder

3.2 植物乳桿菌RG-034 抑菌效果

乳酸菌能夠產(chǎn)生有機酸、過氧化氫等代謝產(chǎn)物、分泌細菌素，具有抑制致病菌生長及減少腐敗菌毒素產(chǎn)生的作用，因此抑菌功能是乳酸菌重要的益生特性[22]。實驗選取大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌為指示菌。結(jié)果如表3 和圖1 所示，空白培養(yǎng)基未產(chǎn)生抑菌圈，植物乳桿菌RG-034 菌餅周圍出現(xiàn)抑菌圈。植物乳桿菌RG-034 對不同濃度的大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為15.90～25.06 mm，提示其對以上3 種指示菌均有一定程度的抑制作用。

圖1 植物乳桿菌RG-034 的抑菌作用Fig.1 Antibacterial ability of Lactobacillus plantarum RG-034

表3 植物乳桿菌RG-034 抑菌作用Table 3 Experimental results of antimicrobial properties of Lactobacillus plantarum RG-034

3.3 各組大鼠一般狀態(tài)變化

對照組大鼠形體正常，活動靈活，毛色光亮，未見腹瀉現(xiàn)象。其余各試驗組大鼠在造模第2 天后均出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，造模2 周內(nèi)各組大鼠腹瀉明顯，毛色晦暗，肛周污穢。給藥階段，模型組大鼠上述情況加重，出現(xiàn)毛發(fā)結(jié)穗、扎堆蜷縮、倦怠懶動、激惹，抓捕抵抗減弱。給藥1 周后，蒙脫石散組與植物乳桿菌RG-034 組大鼠精神有所好轉(zhuǎn)，活動度有所增加。

體質(zhì)量如圖2 所示。造模期間，對照組大鼠體質(zhì)量按正常生長規(guī)律增長，其余各試驗組大鼠體質(zhì)量下降顯著，表明腹瀉型腸易激綜合征大鼠模型造模成功，可嚴重影響大鼠的自然生長。給藥期間，與模型組大鼠相比，植物乳桿菌RG-034 組和蒙脫石散組大鼠體質(zhì)量均有所上升，表明RG-034 治療能增加腹瀉型腸易激綜合征大鼠的體質(zhì)量。造模過程中，蒙脫石散組有1 只大鼠死亡（n＝5），其余各組大鼠均存活（n＝6）。

圖2 植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠體質(zhì)量的影響（，n =6）Fig.2 Effects of the Lactobacillus plantarum RG-034 on the body weight (,n =6)

3.4 植物乳桿菌膠囊RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠稀便率的影響

實驗過程中，對照組大鼠未排出稀便。給藥前，與對照組相比，各造模組大鼠稀便率極顯著升高，表明腹瀉模型造模成功。由圖3 可見，給藥第14、21 天，與模型組相比，植物乳桿菌RG-034 組大鼠稀便率顯著下降（P＜0.05、0.01）。

圖3 植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠稀便率的影響（，n =6）Fig.3 Effects of the Lactobacillus plantarum RG-034 on the loose stool rate (,n =6)

3.5 植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠稀便級的影響

實驗過程中，對照組大鼠所排糞便均干燥且成形，其稀便級均為0。給藥前，與對照組相比，各造模組大鼠稀便級極顯著升高，表明腹瀉模型造模成功。由圖4 可見，給藥第7、14、21 天，與模型組相比，蒙脫石散組和植物乳桿菌RG-034 組大鼠稀便級未有明顯差異。

圖4 植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠稀便級的影響（，n =6）Fig.4 Effects of the Lactobacillus plantarum RG-034 on the loose stool level (,n =6)

3.6 植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠腹瀉指數(shù)的影響

實驗過程中，對照組大鼠腹瀉指數(shù)均為0。給藥前，與對照組相比，各造模組大鼠腹瀉指數(shù)顯著升高，表明腹瀉模型造模成功。由圖5 可見，給藥第14、21 天，與模型組相比，植物乳桿菌RG-034組大鼠腹瀉指數(shù)顯著下降（P＜0.05、0.01）。

圖5 植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠腹瀉指數(shù)的影響（，n =6）Fig.5 Effects of the Lactobacillus plantarum RG-034 on the loose stool index (,n =6)

3.7 植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠腸道菌群的影響

3.7.1 物種累計曲線 物種積累曲線顯示，隨著測序樣本的數(shù)量與相應的等級值增加，大鼠樣本菌群數(shù)量與相對豐度趨于恒定值，表明測序樣本量合理，已達到充分的測序深度，能夠反映一定的群落豐富度，見圖6。

圖6 物種累計曲線Fig.6 Species accumulation curve

3.7.2 大鼠結(jié)腸組織菌群物種組成分析 根據(jù)OTU聚類結(jié)果，分別在綱、屬水平上發(fā)現(xiàn)，4 組的腸道菌群群落結(jié)構(gòu)基本相似，而構(gòu)成比有差異。

如圖7 所示，在綱（class）水平上，各組大鼠梭狀芽胞桿菌綱（Clostridia）、彎曲桿菌綱（Campylobacteria）、芽孢桿菌綱（Bacilli）、擬桿菌綱（Bacteroidia）4 種菌綱豐度相對較高。與對照組相比，模型組彎曲桿菌綱有所升高，芽孢桿菌綱和擬桿菌綱則明顯降低。而蒙脫石散組和植物乳桿菌RG-034 組的菌群結(jié)構(gòu)則有所變化。

圖7 綱水平上物種分布Fig.7 Species distribution at class level

如圖8 所示，在屬（genus）水平上，4 組中排在前4 位的菌屬主要有螺桿菌屬Helicobacter、毛螺菌屬Lachnospiraceae_NK4A136_group、布勞特氏菌屬Blautia、Muribaculaceae菌屬。與對照組相比，模型組螺桿菌屬、毛螺菌屬、布勞特氏菌屬明顯升高，Muribaculaceae明顯降低。蒙脫石散組和植物乳桿菌RG-034 組的菌群結(jié)構(gòu)則在模型組的基礎(chǔ)上有所變化。

圖8 屬水平上物種分布Fig.8 Species distribution at genus level

3.7.3 大鼠結(jié)腸組織菌群多樣性比較 β 多樣性分析用來比較不同樣本在物種多樣性方面的相似程度。采用Jaccard 的算法計算樣本間的距離，得到主坐標（PCoA）分析的結(jié)果。如圖9 所示，模型組與對照組的腸道菌群在坐標系的不同空間區(qū)域分布，且對照組、模型組的組內(nèi)集群效果好，植物乳桿菌RG-034 組較差，說明了植物乳桿菌RG-034 組樣本在向?qū)φ战M靠近，在一定程度上改善了腹瀉型腸易激綜合征大鼠模型的β 多樣性。

圖9 基于Jaccard 距離的PCoA 分析Fig.9 PCoA analysis based on Jaccard distance

3.7.4 代謝通路預測 如圖10、11 所示，KEGG 通路富集分析結(jié)果顯示，各樣本功能可能與細胞進程、環(huán)境信息處理、遺傳信息處理、人類疾病、生物體系統(tǒng)以及各種物質(zhì)與能量代謝有關(guān)。MetaCyc 富集分析結(jié)果顯示各樣本功能可能與生物合成、降解作用、同化作用、解毒作用、前體代謝物和能量的產(chǎn)生、聚糖途徑、高分子修飾以及物質(zhì)代謝有關(guān)。

圖10 KEGG 二級功能通路豐度圖Fig.10 Abundance of KEGG secondary functional pathways

圖11 MetaCyc 二級功能通路豐度圖Fig.11 Abundance of MetaCyc secondary functional pathways

4 討論

腹瀉型腸易激綜合征是一種常見的胃腸道疾病，常伴有氣脹、惡心和食欲不振等癥狀，嚴重影響患者的正常生活。腹瀉型腸易激綜合征的誘發(fā)因素可能與腸道運動紊亂、感染或過敏反應有關(guān)，同時心理因素也可能參與其中。抗生素、止瀉藥、阿片類藥物等藥物存在藥物不良反應較大、治療效果有限、藥物依賴性高且無法徹底治愈等問題[23]。近年來，益生菌制劑成為腹瀉型腸易激綜合征的潛在治療策略。植物乳桿菌是一類常見的腸道益生菌，能夠抑制有害菌的生長，調(diào)節(jié)腸道微環(huán)境，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝[24]。1 項臨床試驗證實，口服植物乳桿菌CCFM8610 后，患者的腹瀉型腸易激綜合征癥狀明顯減輕，同時腸道菌群的多樣性得到恢復，其緩解作用可能與在腸道中促進丁酸生產(chǎn)種屬的相對豐度上升相關(guān)[25]。

番瀉葉的主要成分是大黃素和大黃酚，它們能夠刺激腸道壁上的神經(jīng)末梢，誘發(fā)腸道平滑肌的收縮，進而促進腸道蠕動[26]。在隔日禁食期間，由于飲食模式的變化，可能導致排便頻率、大便量和質(zhì)地發(fā)生變化。此外，隔日禁食可能引起胃酸分泌過多，刺激腸道黏膜，進一步加劇腹瀉型腸易激綜合征的癥狀[27]。本實驗通過采用ig 番瀉葉聯(lián)合隔日禁食成功制備了穩(wěn)定的大鼠腹瀉型腸易激綜合征模型。造模期間，與對照組大鼠相比，各造模組大鼠毛發(fā)失去光澤，出現(xiàn)毛發(fā)凌亂、精神不振等現(xiàn)象，體質(zhì)量降低，糞便溏稀，稀便率、稀便級以及腹瀉指數(shù)顯著升高。ig 給予大鼠植物乳桿菌RG-034 膠囊2 周后，腹瀉情況明顯改善，大便成形，大鼠精神狀態(tài)良好，活動度增加。給藥3 周后，大鼠稀便率、稀便級以及腹瀉指數(shù)相較于模型組顯著下降，表明植物乳桿菌RG-034 對大鼠腹瀉型腸易激綜合征有一定治療作用，持續(xù)用藥才能發(fā)揮最佳療效。

腸道菌群包括了有益菌和有害菌2 大類，其中有益菌占據(jù)主導地位，如雙歧桿菌、乳酸菌和梭菌等。此類有益菌協(xié)助食物消化，合成維生素和酶，平衡免疫系統(tǒng)以及抵抗有害微生物的入侵[28]。在正常情況下，腸道微生態(tài)系統(tǒng)中的腸道菌群保持著動態(tài)平衡，維持腸黏膜上皮細胞的增殖和分化，促進免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育。一旦這種平衡被打破，有害菌將占據(jù)主導地位，造成免疫系統(tǒng)被過度激活，誘發(fā)多種腹瀉型腸易激綜合征癥狀[29]。研究表明腹瀉型腸易激綜合征患者腸道菌群結(jié)構(gòu)與健康人相比存在失調(diào)情況，其腸道微生物在糞菌移植治療后，會出現(xiàn)菌群豐度增加、結(jié)構(gòu)改變的情況[30-31]。近幾年，學者們將腸道菌群作為治療腹瀉型腸易激綜合征的靶點，得到了較好的效果[32]。16S rRNA 高通量測序結(jié)果表明，蒙脫石散和植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠的腸道菌群總體的豐富度和多樣性均無明顯影響，推測植物乳桿菌RG-034 對腹瀉型腸易激綜合征大鼠的治療作用可能不是通過改變大鼠總體腸道菌群的豐富度實現(xiàn)的，而是通過改變其中的某些特定菌的豐富度或者某些特定菌的功能來實現(xiàn)的。此外，測序結(jié)果表明植物乳桿菌RG-034 在一定程度上改善腹瀉型腸易激綜合征大鼠模型的β 多樣性。因此，改善腸道菌群多樣性可能成為植物乳桿菌RG-034 治療腹瀉型腸易激綜合征的潛在機制。

綜上所述，植物乳桿菌RG-034 能夠有效減輕由ig 番瀉葉合并隔日禁食引發(fā)的腹瀉型腸易激綜合征癥狀，為利用植物乳桿菌作為治療腹瀉型腸易激綜合征的方法提供了有力的支持。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突