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    化學發(fā)光法弱陽性質(zhì)控品的制備及應用評價

    2024-02-28 08:23:32肖杰陳亞琴韓小玲
    中國衛(wèi)生標準管理 2024年1期
    關鍵詞:雅培弱陽性原裝

    肖杰 陳亞琴 韓小玲

    加強傳染病防治一直是國家衛(wèi)生領域的工作重點。國家衛(wèi)生健康委員會制定了預防艾滋病、梅毒和肝炎母嬰傳播的工作規(guī)范,其中傳染性指標的篩查是核心內(nèi)容之一[1]。傳染性4 項包括乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、丙型肝炎抗體(hepatitis C antibody,HCV-Ab)、梅毒螺旋體特異性抗體(treponema pallidum specific antibody,TP-Ab)、人類免疫缺陷病毒抗原抗體(human immunodeficiency virus antigen antibody,HIV-Ag/Ab),成為手術前監(jiān)測患者感染狀態(tài)必須檢查的指標。目前臨床上常用的免疫學檢測方法有膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)及化學發(fā)光法,化學發(fā)光法通過全自動化學發(fā)光免疫分析儀對抗原抗體反應后發(fā)光強度進行測定,以確定待測物含量,具有操作簡便、敏感度高、特異性強等優(yōu)勢,已普遍應用于臨床醫(yī)療機構[2-4]。為保證檢驗結果的準確性,臨床實驗室需開展室內(nèi)質(zhì)量控制(簡稱質(zhì)控),《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床免疫學定性檢驗領域的應用說明》[5]明確指出,宜選擇水平為臨界值2~4 倍的弱陽性質(zhì)控物對檢測結果進行日常監(jiān)測,但我國很多醫(yī)院使用的化學發(fā)光免疫分析儀均為進口品牌,其配套的弱陽性質(zhì)控品也采用進口的質(zhì)控血清,價格昂貴,大大增加了檢驗科的使用成本[6]。目前國內(nèi)替代產(chǎn)品少見,也缺乏自制傳染病弱陽性質(zhì)控品的相關研究。因此,本研究結合實際工作,利用稀釋后的陽性患者血清標本自制弱陽性質(zhì)控品,應用于全自動化學發(fā)光免疫分析儀的室內(nèi)質(zhì)控過程中,取得了較理想的效果,制備方法、應用情況及均一性、穩(wěn)定性評估報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    陽性血清和陰性血清均來自2023 年1—2 月武漢大學附屬愛爾眼科醫(yī)院檢驗科日常檢測標本,患者清晨空腹采血5 mL,收集到無添加劑的真空采血管中2 h內(nèi)送至實驗室,以3 000 r/min 的速度離心15 min,分離血清待測。納入標準:(1)陽性樣本HBsAg 濃度2~10 IU/mL,HCV-Ab、TPAb、HIV-Ag/Ab 的樣本發(fā)光值/標準發(fā)光值(S/CO)均在5~20。(2)陰性樣本上層血清外觀清澈、無纖維蛋白絮狀附著。排除標準:(1)來自妊娠、腫瘤、自身免疫性疾病患者的樣本。(2)血清有明顯脂肪血、溶血、黃疸。本研究經(jīng)武漢大學附屬愛爾眼科醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準(倫理審批編號:2023IRBKY0801)。

    1.2 方法

    1.2.1 儀器和試劑

    儀器采用美國雅培公司生產(chǎn)的I2000SR 全自動化學發(fā)光免疫分析儀,試劑、校準品及耗材等均為原廠進口配套產(chǎn)品;美國雅培CONTROL+1 原裝質(zhì)控品,批號為32053FN01,按說明書要求存放至2~8 ℃冰箱冷藏保存;一次性采血管為美國BD 公司(Becton,Dickinson and Company)生產(chǎn)。

    1.2.2 弱陽性質(zhì)控品的制備

    根據(jù)中國合格評定國家認可委員會《實驗室內(nèi)部研制質(zhì)量控制樣品的指南》[7]文件要求,分別收集傳染性4項陽性血清(無明顯溶血、黃疸、脂肪血和污染)5 mL裝于4 支無菌試管中,56 ℃加熱30 min 滅活[8],用陰性患者血清倍比稀釋,直到各項測定值在臨界值3 倍左右(HBsAg、HCV-Ab、TP-Ab、HIV-Ag/Ab 臨界值分別為0.05 IU/mL、1 S/CO、1 S/CO、1 S/CO),在稀釋后的各項血清中加入5 g/L 疊氮化鈉防腐,高速離心去除纖維沉淀物,再分別轉(zhuǎn)移至50 mL 的潔凈試管中,用凍存管將以上不同項目的弱陽性質(zhì)控品按每天用量分裝、封口、標記,-20 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?。剩余血清嚴格按照生物危險品進行廢棄處理,操作過程中人員均需做好防護措施,陽性血清稀釋、分裝均在生物安全柜內(nèi)進行操作,以防止傳染性樣本對人員和環(huán)境造成污染。

    1.2.3 自制弱陽性質(zhì)控均一性評價

    質(zhì)控品完成配制后,對其進行均一性評價,依據(jù)《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》[9]的方案,在儀器經(jīng)過全面保養(yǎng)、各項目重新定標、室內(nèi)質(zhì)控在控的情況下,對一批4 項指標弱陽性質(zhì)控品分別抽查20 支,隨機分為2 組(第1 組、第2 組),按患者標本檢測程序同時進行檢測。比較2 組檢測HCV-Ab、TP-Ab、HIV-Ag/Ab 的S/CO 值,HBsAg 的IU/mL 值,差異無統(tǒng)計學意義則均一性評價通過[10]。

    1.2.4 自制質(zhì)控品與原裝進口質(zhì)控品比較

    每日取各指標自制弱陽性質(zhì)控品1 支,在室溫復溶后,隨日常標本一同上機檢測,并用相應的原裝雅培CONTROL+1 質(zhì)控品進行平行檢測30 d,計算2 種質(zhì)控品的均值(x-)、標準差(SD),比較兩種質(zhì)控品檢測結果的一致性。

    1.2.5 復溶后4 ℃穩(wěn)定性觀察

    將-20 ℃保存的自制質(zhì)控品室溫復溶后,每天測定1 次后于4~8 ℃保存,連續(xù)檢測20 d,計算出、SD 和變異系數(shù)(CV),根據(jù)WS/T 494—2017《臨床定性免疫檢驗重要常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》[11]對批間精密度的要求,批間CV 應<15%,以此判斷復溶后4 ℃穩(wěn)定性是否良好。

    1.2.6 長期穩(wěn)定性觀察

    在-20 ℃凍存條件下,連續(xù)測定4 項自制弱陽性質(zhì)控品4 個月,計算測定結果每個月x-、SD,觀察自制質(zhì)控品的穩(wěn)定性。

    1.3 統(tǒng)計學處理

    采用SPSS 27.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析,計量資料以()表示,2 組間比較采用兩獨立樣本均數(shù)t檢驗,多組比較采用方差分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 自制弱陽性質(zhì)控品均一性評價

    HBsAg、HCV-Ab、TP-Ab、HIV-Ag/Ab 弱陽性質(zhì)控品2 組間檢測結果比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),均一性評價通過。見表1。

    表1 自制弱陽性質(zhì)控品均一性評價()

    表1 自制弱陽性質(zhì)控品均一性評價()

    2.2 自制弱陽性質(zhì)控品與原裝雅培質(zhì)控品30 d 檢測值比較

    每日取出自制弱陽性質(zhì)控品融化后,觀察其外觀清澈透明,未見渾濁及沉淀現(xiàn)象。自制弱陽性質(zhì)控品各項目的30 d 測定結果與原裝質(zhì)控品基本一致,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

    表2 自制弱陽性質(zhì)控品與原裝雅培質(zhì)控品30 d 檢測值比較()

    表2 自制弱陽性質(zhì)控品與原裝雅培質(zhì)控品30 d 檢測值比較()

    2.3 4 項自制弱陽性質(zhì)控品復溶后4 ℃放置20 d 穩(wěn)定性

    將復溶后的自制弱陽性質(zhì)控品存放至4 ℃冰箱,連續(xù)測定20 d,各指標質(zhì)控品的CV 均<15%。見表3。

    表3 4 項自制弱陽性質(zhì)控品復溶后4 ℃放置20 d 穩(wěn)定性

    2.4 自制弱陽性質(zhì)控品4 個月穩(wěn)定性

    -20 ℃保存條件下,連續(xù)測定4 個月,自制弱陽性質(zhì)控品每個月結果間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

    表4 自制弱陽性質(zhì)控品4 個月穩(wěn)定性()

    表4 自制弱陽性質(zhì)控品4 個月穩(wěn)定性()

    注:與1 個月比較,①P >0.05;與2 個月比較,②P >0.05;與3 個月比較,③P >0.05。

    3 討論

    室內(nèi)質(zhì)控是按照一定的策略對穩(wěn)定樣本進行測定,并對測定結果進行統(tǒng)計學分析,其結果反映了檢測儀器或方法的檢測性能,并且能夠?qū)ν鷻z測結果的可靠性進行評價,錯誤的分析結果會給患者及臨床診療造成負面影響[12]。在室內(nèi)質(zhì)量控制過程中重復檢測的穩(wěn)定樣本稱為質(zhì)控品,檢測的目的在于監(jiān)控分析的全程,并且能夠在可能產(chǎn)生有誤結果時向檢測者提出警告。化學發(fā)光免疫分析是特定的抗體或抗原與信號發(fā)生物質(zhì)結合,在光化學反應作用下產(chǎn)生化學發(fā)光現(xiàn)象,發(fā)射出強光,利用光學儀器測量其強度,從而確定樣品中被檢測分子的濃度,具有敏感度高、特異性好、測試時間短、自動化程度高等特點,在臨床傳染病檢測中應用廣泛[13]。良好的質(zhì)控品能夠有效監(jiān)測系統(tǒng)產(chǎn)生的誤差,尤其是在臨界值左右的弱陽性質(zhì)控品對監(jiān)控整個測定過程具有重要意義[14]。但由于原裝配套質(zhì)控品均需要進口,價格昂貴,很多基層醫(yī)院難以承受其經(jīng)濟成本,給室內(nèi)質(zhì)量控制工作造成影響。因此,實驗室自制弱陽性質(zhì)控品已經(jīng)開始在國內(nèi)醫(yī)院應用[15-16]。

    《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床免疫學定性檢驗領域的應用說明》[5]對自制質(zhì)控物的評價要求至少包括均一性評價及穩(wěn)定性評價,本實驗參考了《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》[9]的方案,結果顯示質(zhì)控品的均勻性良好。自制弱陽性質(zhì)控品與原裝雅培質(zhì)控品30 d 檢測值比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),表明自制弱陽性質(zhì)控品可以替代原裝質(zhì)控品用于日常檢測數(shù)據(jù)的監(jiān)測。將復溶后的自制弱陽性質(zhì)控品存放至4 ℃冰箱,連續(xù)測定20 d,各指標質(zhì)控品的CV均<15%,表明穩(wěn)定性良好,提示自配弱陽性質(zhì)控品在4 ℃下至少可穩(wěn)定20 d。質(zhì)控品在-20 ℃冷凍保存,連續(xù)觀察4 個月,各月檢測結果比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),提示自制弱陽性質(zhì)控品在-20 ℃條件下保存能有效穩(wěn)定4 個月。有研究表明,自制質(zhì)控品在-80 ℃下保存能穩(wěn)定至少6 個月[17-18]。但許多基層醫(yī)院并沒有這樣的冷藏條件,相比之下,-20 ℃保存更加可行,并且便于管理和操作。

    自制質(zhì)控品除具有無基質(zhì)效應、制作過程簡單、成本低廉外,還具有一定的可塑性,可以根據(jù)具體的臨床分析需求來進行不同濃度的配制,以實現(xiàn)更加精準的質(zhì)控[19]。通過驗證并確定自制質(zhì)控品的穩(wěn)定時間,發(fā)現(xiàn)在其穩(wěn)定期內(nèi)進行室內(nèi)質(zhì)控完全可行,這為價格昂貴的商品化質(zhì)控物提供了一種可行的替代方案,同時可節(jié)省實驗室成本。此外,制備弱陽性質(zhì)控品的過程中,應嚴格按照生物安全的相關要求做好人員防護措施,收集的傳染病陽性標本在操作前應56 ℃加熱30 min滅活,整個制備過程必須在生物安全柜內(nèi)進行,以防人員發(fā)生感染。

    綜上所述,本院自制傳染性弱陽性質(zhì)控品均勻性、穩(wěn)定性良好,-20 ℃條件保存時,至少可穩(wěn)定4 個月,在其穩(wěn)定期內(nèi)能替代進口質(zhì)控品用于室內(nèi)質(zhì)量控制。

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