東鄉(xiāng)族人群Duffy、Kidd、Diego 血型系統(tǒng)等位基因頻率多態(tài)性研究

崔軍 張偉萍 惠霞 張曉萍 李國(guó)英 楊海燕

（1.臨夏回族自治州中心血站,甘肅 臨夏 731100；2.甘肅省紅十字血液中心；3.甘肅省人民醫(yī)院）

人類紅細(xì)胞血型抗原在不同地域、不同人（種）群中出現(xiàn)的頻率呈高度多態(tài)性，其分布存在明顯的地區(qū)和民族差異，是人類遺傳學(xué)的1個(gè)重要遺傳標(biāo)志[1]。東鄉(xiāng)族為甘肅省特有少數(shù)民族，中國(guó)境內(nèi)東鄉(xiāng)族的人口數(shù)為774 947，主要聚居在甘肅省臨夏回族自治州的東鄉(xiāng)族自治縣，居住環(huán)境比較封閉，有民族語(yǔ)言，無(wú)民族文字[2]。我們通過研究甘肅省東鄉(xiāng)族人群Duffy、Kidd、Diego 血型系統(tǒng)等位基因頻率及多態(tài)性分布特點(diǎn)，為臨床輸血治療提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 對(duì)象與方法

1.1 調(diào)查對(duì)象

所有標(biāo)本來(lái)自2017 年1—12 月甘肅省臨夏回族自治州中心血站的東鄉(xiāng)族隨機(jī)獻(xiàn)血者共100名。納入標(biāo)準(zhǔn)：3 代以內(nèi)為臨夏本地東鄉(xiāng)族人群、無(wú)血緣關(guān)系。參與實(shí)驗(yàn)研究的獻(xiàn)血者均簽署了知情同意協(xié)議。每位獻(xiàn)血者采集靜脈外周血8 mL，EDTA-Na2抗凝，-20℃保存。

1.2 試劑與儀器

血液基因組DNA 提取試劑盒(天根公司，批號(hào)：R6329)；人類紅細(xì)胞稀有血型基因分型檢測(cè)試劑盒（中濟(jì)萬(wàn)泰公司，批號(hào)：20180604)，2K-15 高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（Sigma 公司)，NanoDrop Lite 分光光度計(jì)（Thermo 公司），7500 PCR 儀(Applied Biosystems公司)。

1.3 方法

1.3.1 基因組DNA提取

按照基因組DNA提取試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，同時(shí)測(cè)定DNA溶液濃度和純度，要求濃度為（30～50）ng/μL，純度A260/A280為1.8～2.0，-20℃以下保存。

1.3.2 Duffy、Kidd、Diego血型系統(tǒng)基因分型

采用熒光PCR法進(jìn)行基因分型，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。等位基因頻率計(jì)算：某等位基因頻率=某等位基因的純合子頻率+1/2 雜合子頻率。等位基因不配合率（MP）依據(jù)公式計(jì)算，MP=2ab(1-ab)[3]，a，b分別代表等位基因a和b的頻率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

不同民族Duffy、Kidd、Diego 血型系統(tǒng)等位基因頻率比較采用四格表χ2的Fisher 精確檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 甘肅東鄉(xiāng)族Duffy、Kidd、Diego血型系統(tǒng)等位基因頻率

Duffy 血型基因型未檢出FY*01N 和FY*02N；Kidd 血型基因型未檢出JK*01N和JK*02N；Diego 血型基因型未檢出DI*01/01。Duffy、Diego血型系統(tǒng)符合Hardy-Weinberg 遺傳法則（P＞0.05），Kidd 血型系統(tǒng)不符合Hardy-Weinberg遺傳法則（P＜0.05），見表1。

表1 甘肅東鄉(xiāng)族人群Duffy、Kidd、Diego血型系統(tǒng)表現(xiàn)型與等位基因頻率分布（n=100）Table 1 Phenotype and allele frequency distribution of Duffy, Kidd and Diego blood group system in Dongxiang ethnic group of Gansu Province(n=100)

2.2 甘肅東鄉(xiāng)族Duffy、Kidd、Diego血型系統(tǒng)等位基因頻率與我國(guó)其他地區(qū)不同民族比較

見表2。

表2 甘肅東鄉(xiāng)族與我國(guó)其他地區(qū)不同民族Duffy、Kidd、Diego血型等位基因頻率分布比較Table 2 Comparison of allele frequency distribution of Duffy,Kidd and Diego blood groups system between Dongxiang ethnic group in Gansu Province and other ethnic groups in China

3 討論

截止2023年7月，國(guó)際輸血協(xié)會(huì)（ISBT）已確認(rèn)45個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，共360個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)抗原[18]。目前臨床重視的主要是ABO 和Rh 2 個(gè)血型系統(tǒng)，對(duì)Duffy、Kidd、Diego 等血型系統(tǒng)的關(guān)注相對(duì)較少。但這些血型可引起血型鑒定困難、交叉配血不合或者輸血后引起免疫性溶血反應(yīng)[19]，特別是抗-Jkb可能引起溶血性輸血反應(yīng)以及胎兒新生兒溶血病[20]。因此，了解不同民族人群Duffy、Kidd、Diego 血型系統(tǒng)等位基因分布的差異，對(duì)指導(dǎo)本地區(qū)臨床科學(xué)合理用血和及時(shí)提供安全的血液具有重要意義[21]。

在甘肅東鄉(xiāng)族人群中Duffy、Kidd、Diego 血型系統(tǒng)對(duì)偶抗原Fya/Fyb、Jka/Jkb的不配合率比較高。理論上抗原不配合率越高，在隨機(jī)輸血及妊娠等免疫過程中刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫性意外抗體的概率就越高，從而增加反復(fù)輸血患者及多次妊娠者的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致免疫性溶血反應(yīng)和胎兒新生兒溶血病的發(fā)生率增加。Kidd血型抗體都具有低免疫原性，在血漿中能迅速下降到很低或者不能檢測(cè)的水平，一般很難被檢測(cè)，易發(fā)生漏檢問題，但又會(huì)引起嚴(yán)重和致命的速發(fā)型溶血反應(yīng)，也能引發(fā)遲發(fā)型溶血反應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致少尿、腎功能衰竭等嚴(yán)重后果[22]。因此，臨床上應(yīng)重視ABO 和Rh 血型系統(tǒng)以外的血型抗原的配合性輸血，提高患者的輸血療效。

甘肅東鄉(xiāng)族人群紅細(xì)胞抗原等位基因的多態(tài)性分布呈現(xiàn)了一定的民族性和地域特征。Duffy血型系統(tǒng)等位基因分布與西安漢族、新疆回族、新疆哈薩克族等西北地區(qū)各民族相近，與東北地區(qū)和南方地區(qū)不同民族差異較大；Kidd 血型系統(tǒng)等位基因分布與中國(guó)北方地區(qū)各民族相近，與南方地區(qū)部分民族差異較大；Diego 血型系統(tǒng)等位基因分布與中國(guó)各民族相近，說(shuō)明東鄉(xiāng)族人群與中國(guó)西北地區(qū)各民族一樣經(jīng)歷了復(fù)雜的融合過程，在吸收和融合其他民族的基礎(chǔ)上形成了不同于其他地區(qū)種族人群的特點(diǎn)，使血型抗原等位基因分布具有地域性和民族特異性。

綜上所述，甘肅東鄉(xiāng)族人群Duffy、Kidd、Diego血型系統(tǒng)等位基因分布具有較為豐富的多態(tài)性及地區(qū)性遺傳特征，具有中國(guó)西北地區(qū)人群及特有民族遺傳特征，分析其等位基因多態(tài)性分布特點(diǎn)，將為群體遺傳學(xué)、人類學(xué)研究提供本地區(qū)本民族寶貴的基礎(chǔ)資料，同時(shí)為臨床輸血治療提供指導(dǎo)。