醒腦解郁方灌胃對大鼠卒中后抑郁的治療作用及機(jī)制

彭濤，楊一帆，2，王海霞，李雨，王濤，閆詠梅，2

1 陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽 712046；2 陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腦病醫(yī)院；3 陜西省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科

卒中后抑郁（PSD）是常見的卒中后精神心理疾病，流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，約55%的卒中患者在發(fā)病后5 年內(nèi)并發(fā)PSD［1］。與無情感障礙的卒中患者相比，PSD 患者的病死率顯著升高，且易誘發(fā)自殺傾向，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，不利于神經(jīng)功能的恢復(fù)，并增加家庭及社會的負(fù)擔(dān)。PSD 的病理機(jī)制復(fù)雜，是神經(jīng)生物學(xué)和心理學(xué)機(jī)制共同作用的結(jié)果，這些機(jī)制包括神經(jīng)再生、突觸的可塑性、神經(jīng)元凋亡、炎癥反應(yīng)、神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)、遺傳易感性以及家庭心理因素等［2］。下丘腦—垂體—腎上腺（HPA）軸介導(dǎo)的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)是維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境及精神活動穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵［3］。當(dāng)經(jīng)歷應(yīng)激事件時，HPA 軸被激活，下丘腦和垂體大量釋放促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、血清促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）和糖皮質(zhì)激素（GC）［4］，在ACTH 和GC 的參與和調(diào)控下，進(jìn)一步生成皮質(zhì)醇（CORT）；ACTH、CORT 合成后被血液輸送到全身各個組織和器官中，而糖皮質(zhì)激素受體（GR）則與下丘腦釋放的CRH、ACTH 結(jié)合，發(fā)揮相應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。這些激素水平升高造成HPA 軸功能紊亂，從而參與抑郁癥的發(fā)生。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，機(jī)體氣血郁滯、津液不通而發(fā)為郁證。陜西名中醫(yī)閆詠梅教授將PSD 分為陰證和陽證，陰證多為痰瘀互結(jié)證，陽證多為郁火脾虛證，以此立法，自擬醒腦解郁方。長期臨床實(shí)踐表明，該方能夠顯著改善抑郁情緒及神經(jīng)功能損傷［5］。2022 年11 月—2023 年5 月，我們通過觀察醒腦解郁方對PSD 大鼠抑郁狀態(tài)及HPA 軸相關(guān)激素的影響，探討其防治PSD 的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雄性SD 大鼠SPF 級60 只，體質(zhì)量（240 ± 20）g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)藥大學(xué)國醫(yī)大師研究院動物房。動物合格證號SCXK（陜）2018-001。飼養(yǎng)條件：溫度（22 ± 2）℃，濕度50% ± 10%，按時通風(fēng)，干燥墊料及自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.1.2 藥品 醒腦解郁方組成：石菖蒲12 g，巴戟天10 g，柴胡12 g，合歡皮15 g，丹參30 g，遠(yuǎn)志12 g，姜黃10 g。中藥飲片購自陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房。將飲片加入蒸餾水煎煮，濾出藥液，然后加熱濃縮。根據(jù)人體用藥劑量101 g/60 kg，以換算系數(shù)6.25 計算大鼠用藥劑量為10.5 g/kg，分別將中藥液濃縮至1.05、2.10 g/mL，4 ℃保存?zhèn)溆?。將鹽酸氟西汀膠囊（20 mg/粒，蘇州禮來制藥有限公司）加入生理鹽水，配制成濃度為0.208 mg/mL的藥液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 主要試劑與儀器 ACTH、CORT ELISA 檢測試劑盒（南京建成生物），2%戊巴比妥鈉、二甲苯、水溶性伊紅Y（上海國藥集團(tuán)），BCA 試劑盒、RIPA裂解液（上海碧云天），TTC 染色液、4%多聚甲醛溶液（武漢賽維爾生物），蘇木素（美國Sigma），PVDF膜（德國MilliPore），CRH 多克隆抗體、GR 多克隆抗體（武漢博士德），β-action（美國Affinity），兔多抗CRH、兔多抗GR（武漢三鷹生物），HRP 標(biāo)記羊抗兔二抗（上海碧云天）。酶標(biāo)儀（美國Thermo），電子天平（常州幸運(yùn)電子），光學(xué)顯微鏡（上海儀圓光學(xué)），電泳儀（北京六一）。

1.2 動物分組與造模 采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為正常對照組、PSD 組、氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組、醒腦解郁方高劑量組，每組各12 只。采用大腦中動脈栓塞（MCAO）聯(lián)合慢性不可預(yù)知溫和刺激（CUMS）制備PSD 模型，按照Willner 法稍微改進(jìn)。正常對照組不做處理，其他4 組采用線栓法制備MCAO 模型。大鼠禁食24 h后，麻醉固定，沿頸部正中縱向切開，充分暴露大鼠右側(cè)頸總動脈和分叉。將頸外動脈、頸內(nèi)動脈分離，結(jié)扎頸總動脈和頸外動脈，在頸總動脈近心端用眼科剪剪開一小口，將線栓插入18～20 mm，直至有阻力時說明進(jìn)入大腦中動脈，固定線栓。1 h后拔出線栓，結(jié)扎頸內(nèi)動脈，縫合傷口，待麻醉復(fù)蘇后放回原籠中繼續(xù)飼養(yǎng)。術(shù)后連續(xù)3 d 給予青霉素肌內(nèi)注射預(yù)防感染。術(shù)后24 h 內(nèi)采用Longa 5 分法進(jìn)行神經(jīng)功能評定，0 分：正常，無神經(jīng)功能損傷；1 分：輕度神經(jīng)功能損傷，偏癱側(cè)前爪內(nèi)收；2 分：中度神經(jīng)功能損傷，行走時大鼠向肢體癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈；3 分：重度神經(jīng)功能損傷，偏癱側(cè)肢體不能支撐大鼠行走；4 分：喪失行走能力，意識不清。剔除得分0 和4 分的大鼠，以得分1～3 為卒中造模成功，繼續(xù)后續(xù)抑郁癥造模實(shí)驗(yàn)。MCAO 術(shù)后第4 天開始，PSD 組、氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組和高劑量組采用CUMS 法制備抑郁模型，正常對照組不做處理。選取7 種不同的刺激方式，包括禁食禁水24 h、潮濕墊料24 h、夾尾2 min、強(qiáng)迫4 ℃下游泳5 min、足底20 V 電擊2 min、晝夜顛倒、晃籠3 min，每天隨機(jī)選取1種刺激，相同刺激方式不重復(fù)進(jìn)行，每種刺激方式使用2～3 次，以確保不可預(yù)知性，連續(xù)21 d。

1.3 藥物干預(yù)方法 4 只大鼠在造模后神經(jīng)功能缺損評分為0分，麻醉死亡2只，造模死亡5只，灌胃死亡4 只，均予以剔除，每組剩余9 只大鼠。CUMS期間，正常對照組和PSD 組給予0.9%氯化鈉溶液，氟西汀組予0.208 mg/mL 鹽酸氟西??；醒腦解郁方低、高劑量組分別予1.05、2.10 g/mL 醒腦解郁方藥液，連續(xù)灌胃21 d。

1.4 大鼠抑郁狀態(tài)評估 每天觀察并記錄大鼠的精神狀態(tài)、行為活動、毛色、進(jìn)食、飲水、糞便情況，比較大鼠治療前后體質(zhì)量。于CUMS 實(shí)驗(yàn)第0、11、21 天觀察大鼠強(qiáng)迫游泳時肢體動作及游動時間，評估大鼠糖水消耗量，測試大鼠在敞箱中4 min內(nèi)水平方向行走格數(shù)和垂直方向時前肢抬起次數(shù)。

1.5 標(biāo)本采集 給藥結(jié)束后次日，將大鼠麻醉，每組分別取6只大鼠采集腹主動脈血，離心分離血清，-80 ℃保存，用于血清ACTH、CORT檢測。剪斷大鼠兩側(cè)肋骨，顯露心臟，使用生理鹽水進(jìn)行心臟灌注，隨后斷頭取腦。每組分別取3 只大鼠全腦，加入多聚甲醛固定，4 ℃保存，用于組織病理學(xué)觀察；剩余6 只大鼠取全腦，冰上分離海馬和下丘腦組織，-80 ℃保存，用于檢測海馬、下丘腦組織CRH、GR 蛋白表達(dá)水平。

1.6 血清HPA 軸相關(guān)激素ACTH、CORT 檢測 采用ELISA 法。取血清樣本37 ℃水浴鍋中解凍，加入PBS 溶液后勻漿。取出預(yù)先包被封閉好的96 孔板，用移液槍將標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋的樣品依次加入每個孔中，37 ℃孵育120 min。棄去液體，甩干，加入生物素標(biāo)記抗體工作液，37 ℃孵育60 min。棄去液體，甩干，洗板，加入TMB 顯色液，37 ℃避光孵育20 min。加入TMB 終止液混勻，終止反應(yīng)。上酶標(biāo)儀，于450 nm 處測OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算ACTH、CORT含量。

1.7 大鼠海馬組織形態(tài)觀察 采用HE 染色法。取腦組織，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋、切片，脫蠟。加入蘇木素染液染色5 min，浸洗返藍(lán)。加入1%伊紅染液染色5 min。置于無水乙醇、二甲苯中脫色透明，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察海馬組織病理改變。

1.8 海馬、下丘腦組織HPA軸相關(guān)激素CRH、GR蛋白檢測 采用Western blotting法。取海馬、下丘腦組織，加入蛋白裂解液，提取總蛋白，采用BCA 法檢測蛋白濃度。加入5×蛋白上樣緩沖液，按30 μg 蛋白/孔道上樣，SDS-PAGE分離蛋白，轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂牛奶室溫封閉1 h。TBST洗膜，加入一抗β-actin（1∶1 000）、CRH（1∶500）、GR（1∶3 000），4 ℃孵育過夜。TBST洗膜，加入二抗（稀釋比例均為1∶600），常溫孵育2 h，TBST清洗。滴加超敏ECL發(fā)光顯影液顯影，拍照，用Image J軟件分析條帶灰度值。以β-actin為內(nèi)參，計算目的蛋白的相對表達(dá)量。

1.9 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS26.0統(tǒng)計軟件。計量資料采用S-W 法進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示，方差齊性時多組間比較采用單因素方差分析、兩組間比較采用LSD法，方差不齊時采用Tamhane'sT2檢驗(yàn)；重復(fù)測量的數(shù)據(jù)比較采用重復(fù)測量資料的方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠抑郁狀態(tài)比較 各組大鼠體質(zhì)量變化情況見表1。與正常對照組比較，PSD組體質(zhì)量降低（P＜0.01），與PSD 組比較，氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組和高劑量組的體質(zhì)量均增加（P均＜0.01）。各組大鼠抑郁行為學(xué)評分比較見表2 ～ 5。實(shí)驗(yàn)第11天時，與正常對照組比較，PSD組強(qiáng)迫游泳時間縮短、糖水消耗量降低、水平及垂直運(yùn)動得分降低（P均＜0.01）；與PSD 組比較，氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組和高劑量組游泳時間及水平運(yùn)動得分變化均增加（P均＜0.05），醒腦解郁方低劑量組、高劑量組的垂直運(yùn)動得分及低劑量組的糖水消耗量變化無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。第21 天時，與正常對照組比較，PSD 組強(qiáng)迫游泳時間縮短、糖水消耗量減少、水平及垂直運(yùn)動得分降低（P均＜0.01）；與PSD 組比較，氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組和高劑量組游泳時間、水平及垂直運(yùn)動得分變化均增加（P均＜0.05），氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組糖水消耗量增加（P均＜0.01），醒腦解郁方高劑量組糖水消耗量無明顯變化（P＞0.05）。

表1 各組大鼠體質(zhì)量變化情況（g，± s）

表1 各組大鼠體質(zhì)量變化情況（g，± s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PSD組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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表2 各組大鼠強(qiáng)迫游泳時間比較（s，± s）

表2 各組大鼠強(qiáng)迫游泳時間比較（s，± s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PSD組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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表3 各組大鼠糖水消耗量比較（mL，± s）

表3 各組大鼠糖水消耗量比較（mL，± s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PSD組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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表4 各組大鼠水平運(yùn)動行走格數(shù)比較（格/4分鐘，± s）

表4 各組大鼠水平運(yùn)動行走格數(shù)比較（格/4分鐘，± s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PSD組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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表5 各組大鼠垂直運(yùn)動實(shí)驗(yàn)雙上肢抬起次數(shù)比較（次/4分鐘，± s）

表5 各組大鼠垂直運(yùn)動實(shí)驗(yàn)雙上肢抬起次數(shù)比較（次/4分鐘，± s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PSD組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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2.2 各組大鼠血清ACTH、CORT 水平比較 與正常對照組比較，PSD 組血清ACTH、CORT 水平升高（P均＜0.01）；與PSD 組比較，氟西汀組和醒腦解郁方低劑量組血清ACTH 水平降低（P均＜0.05），且醒腦解郁方低劑量組血清ACTH 水平低于氟西汀組（P＜0.01），醒腦解郁方高劑量組血清ACTH 水平與PSD組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與PSD組比較，氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組和高劑量組血清CORT 水平均降低（P均＜0.05），且氟西汀組和醒腦解郁方低劑量組血清CORT 水平低于醒腦解郁方高劑量組（P均＜0.01）。見表6。

表6 各組大鼠血清ACTH、CORT水平比較（ng/mL，± s）

表6 各組大鼠血清ACTH、CORT水平比較（ng/mL，± s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PSD 組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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2.3 各組大鼠海馬組織病理形態(tài)比較 PSD 組大鼠海馬組織神經(jīng)元數(shù)量缺失明顯，排列松散，輪廓模糊，胞體腫脹，胞核消失，呈現(xiàn)炎性改變；氟西汀組及醒腦解郁方低劑量組和高劑量組大鼠海馬組織神經(jīng)元較PSD 組結(jié)構(gòu)基本完整，損傷減輕，水腫減少，細(xì)胞存活量增多，排列較為整密。見OSID碼圖1。

2.4 各組大鼠海馬組織GR 和下丘腦組織CRH 蛋白表達(dá)水平比較 與正常對照組比較，PSD 組大鼠海馬組織GR 蛋白表達(dá)水平降低，下丘腦組織CRH蛋白表達(dá)水平升高（P均＜0.01）；與PSD 組比較，氟西汀組及醒腦解郁方低、高劑量組海馬組織GR 蛋白表達(dá)水平升高，下丘腦組織CRH 蛋白表達(dá)水平降低（P均＜0.01）。見表7。

表7 各組大鼠海馬組織GR與下丘腦組織CRH蛋白表達(dá)比較（± s）

表7 各組大鼠海馬組織GR與下丘腦組織CRH蛋白表達(dá)比較（± s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PSD 組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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3 討論

PSD 是卒中發(fā)病后常見的一種情感障礙性疾病，表現(xiàn)為一系列情緒低沉、言語減少、興趣缺失、食欲減退、睡眠欠佳、思維悲觀等情感精神障礙的綜合征。PSD 的病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，其機(jī)制涉及反應(yīng)性和內(nèi)源性兩方面。反應(yīng)性機(jī)制也稱為社會心理機(jī)制，腦卒中后出現(xiàn)肢體運(yùn)動功能障礙、言語障礙等，一定程度上可加重負(fù)面情緒，給患者造成嚴(yán)重心理負(fù)擔(dān)，繼而導(dǎo)致抑郁、焦慮等情緒產(chǎn)生。內(nèi)源性機(jī)制主要包括神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說、炎性因子學(xué)說、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)說、營養(yǎng)因子學(xué)說等。目前PSD 尚無特異性治療方案，藥物治療仍是首選，代表藥物有5-羥色胺再攝取抑制劑、特異性5-羥色胺能抗抑郁藥以及三環(huán)類藥物，這些藥物雖然能夠有效緩解PSD患者癥狀，但長期服用會引起便秘、口干、頭暈、失眠等不良反應(yīng)，甚至增加出血風(fēng)險，不利于患者恢復(fù)及治療。

PSD 是繼發(fā)于中風(fēng)的一種精神心理疾病，屬于“中風(fēng)”“郁證”的范疇。閆詠梅教授根據(jù)多年臨床診療經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為PSD 乃諸因相互影響、交互為患，并由此開創(chuàng)醒腦解郁方。方中石菖蒲芳香化痰、醒腦開竅；遠(yuǎn)志性善宣泄通達(dá)，具有寧心安神、祛痰的功效，二藥合用，安神定志、豁痰開竅之效愈顯，共為君藥；丹參活血調(diào)經(jīng)、清心除煩；柴胡疏肝行氣、解郁瀉熱；配以合歡皮解郁和血，郁金開郁行氣、清心開竅，佐以長于補(bǔ)腎溫陽之巴戟天，其性溫可調(diào)和全方用藥偏涼之弊。全方共奏醒腦解郁、化痰活血、理氣扶正之功?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，石菖蒲水提物對獲得性無助模型大鼠具有抗抑郁作用，其機(jī)制可能是通過增強(qiáng)5-羥色胺的神經(jīng)系統(tǒng)功能來發(fā)揮作用［6］。遠(yuǎn)志所含皂苷和寡糖酯類化合物能夠抑制神經(jīng)遞質(zhì)失衡和促進(jìn)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)來發(fā)揮對抑郁癥的治療作用［7］。丹參多酚酸是丹參的重要活性成分之一，具有抗炎、抗氧化作用，其可通過抑制JAK2/STAT3 信號通路活化以及IL-6、IL-1β、TNF-α表達(dá)，減輕神經(jīng)炎癥，調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平，改善星形膠質(zhì)細(xì)胞功能，從而有效改善大鼠抑郁樣行為［8］。柴胡的主要活性成分柴胡皂苷A 能夠抑制HPA 軸失衡、促進(jìn)BDNF 表達(dá)、抑制免疫炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)mTOR 信號通路，通過多種途徑來改善抑郁癥狀［9-10］。郁金的有效成分β-谷甾醇、姜黃素以及合歡皮中的總皂苷、多糖等活性成分可通過調(diào)控NFκB 信號通路，以及調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和促炎因子表達(dá)，發(fā)揮抗抑郁和神經(jīng)保護(hù)作用［11-12］。巴戟天所含成分寡糖、多糖、棕櫚酸和丁二酸都具有抗抑郁功效。動物實(shí)驗(yàn)表明，巴戟天寡糖能使抑郁大鼠海馬中BDNF、突觸蛋白表達(dá)明顯提高，還可增加海馬神經(jīng)元數(shù)量，促使神經(jīng)細(xì)胞再生，調(diào)節(jié)神經(jīng)可塑性［13-14］。我們的前期動物實(shí)驗(yàn)表明，醒腦解郁方可通過調(diào)控海馬組織內(nèi)凋亡蛋白Bcl-2/Bax表達(dá)，改善海馬神經(jīng)元形態(tài)，上調(diào)海馬區(qū)鈣調(diào)蛋白mRNA 以及鈣調(diào)蛋白依賴激酶Ⅱ的表達(dá)，并可提高T淋巴細(xì)胞功能，增強(qiáng)抑郁大鼠的免疫功能［15-17］，對PSD 發(fā)揮多途徑、多靶點(diǎn)的治療作用。

CUMS 模型是通過模擬人類生活中的不良應(yīng)激事件，從而誘發(fā)動物抑郁樣癥狀，其病理生理機(jī)制更符合人類抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。本研究結(jié)果顯示，在第11 天行為學(xué)測試時，PSD 組多數(shù)大鼠精神萎靡不振，食量減少，體質(zhì)量增長相對減慢，糖水消耗量減少，強(qiáng)迫游泳時間縮短，曠場實(shí)驗(yàn)活動量及活動范圍減小，表明大鼠出現(xiàn)抑郁癥狀；與PSD 組比較，氟西汀組及醒腦解郁方組大鼠均表現(xiàn)為精神狀態(tài)良好，飲食和飲水正常，體質(zhì)量增加，糖水偏好度、強(qiáng)迫游泳時間及曠場實(shí)驗(yàn)得分明顯增高，其中以氟西汀組、醒腦解郁方低劑量組變化更明顯。以上提示氟西汀和醒腦解郁方均可改善PSD 大鼠的抑郁癥狀，且氟西汀短期內(nèi)改善效果更快，而醒腦解郁方短期內(nèi)癥狀改善稍差。在第21 天行為學(xué)測試時，PSD 組大鼠精神狀態(tài)較前更差，體質(zhì)量明顯下降，對刺激無反應(yīng)，糖水消耗量更少，強(qiáng)迫游泳時間及曠場實(shí)驗(yàn)得分明顯減少，表明大鼠抑郁程度繼續(xù)加重；而氟西汀組及醒腦解郁方低劑量組大鼠的精神狀態(tài)及毛發(fā)光澤與空白組相似，體質(zhì)量明顯增加，糖水消耗量、強(qiáng)迫游泳時間及曠場實(shí)驗(yàn)得分均較PSD組明顯增加。組織病理形態(tài)比較發(fā)現(xiàn)，與PSD組比較，氟西汀組及醒腦解郁方組大鼠海馬組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)基本完整，損傷減輕，水腫減少，細(xì)胞存活量增多，排列較為整密。這表明醒腦解郁方能夠減輕PSD模型大鼠海馬神經(jīng)元損傷，改善組織病理變化程度。以上結(jié)果表明，醒腦解郁方可有效改善PSD大鼠的抑郁癥狀，尤其具有遠(yuǎn)期療效。

PSD 發(fā)生過程極其復(fù)雜，不僅涉及一系列的炎癥級聯(lián)反應(yīng)，也激活了相應(yīng)的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)。HPA 軸功能狀態(tài)在PSD 的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制中起著非常關(guān)鍵的作用，是壓力應(yīng)激系統(tǒng)的重要組成部分之一，能夠?qū)Ω鞣N壓力和精神行為的變化做出適應(yīng)性調(diào)節(jié)，使人體內(nèi)環(huán)境和精神活動處于穩(wěn)定狀態(tài)。當(dāng)經(jīng)歷應(yīng)激事件時，HPA 軸被激活，下丘腦室旁核小細(xì)胞區(qū)合成和分泌CRH，CRH 信號傳導(dǎo)至垂體前葉，繼而分泌ACTH 到血液中并進(jìn)入腎上腺，對腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生作用，調(diào)節(jié)腎上腺皮質(zhì)束狀帶、網(wǎng)狀帶的合成與分泌，從而合成腎上腺皮質(zhì)和刺激CORT 分泌［18］。CORT 能負(fù)調(diào)控CRH 和ACTH 的合成和分泌，隨著CORT 水平的增加，下丘腦和海馬體的受體感受器也會受到影響，從而負(fù)反饋調(diào)節(jié)引起應(yīng)激反應(yīng)下調(diào)。另一方面，HPA 軸通過介導(dǎo)炎癥反應(yīng)維持平衡。研究表明，免疫細(xì)胞可以通過釋放促炎細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其關(guān)鍵環(huán)節(jié)仍然涉及HPA 軸，PSD 發(fā)病過程中釋放大量促炎細(xì)胞因子，刺激下丘腦的室旁核分泌CRH、ACTH，促使CORT 大量增加，最后導(dǎo)致HPA 軸功能亢進(jìn)［19］。因此，ACTH、CORT 水平與HPA 軸的功能狀態(tài)密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，抑郁患者表現(xiàn)為CRH、ACTH 和CORT 分泌水平升高［20］。另有研究表明，通過調(diào)節(jié)腦垂體ACTH 和腎上腺CORT 水平可以逐步恢復(fù)HPA 軸的功能，緩解卒中患者的抑郁行為［21］。本研究結(jié)果顯示，PSD 組大鼠血清ACTH、CORT 水平較正常對照組明顯升高，一方面可能是過量的炎癥細(xì)胞因子刺激下丘腦及海馬等區(qū)域，使CRH 水平升高，繼而引起ACTH、CORT 水平相繼升高；另一方面也可能是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)與CNS 相互作用的結(jié)果。氟西汀組和醒腦解郁方低劑量組血清ACTH、CORT水平均明顯下降，表明醒腦解郁方在一定程度上可以抑制HPA軸過高的激素水平。

GR是一種核受體，屬于核轉(zhuǎn)錄因子超家族的一員，調(diào)控著多種下游基因的轉(zhuǎn)錄激活或抑制，參與機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和抗炎等過程，進(jìn)而維持生理內(nèi)穩(wěn)態(tài)［22］。CRH 是由下丘腦分泌的一種肽類激素，主要作用于腺垂體，促進(jìn)腺垂體合成與釋放ACTH。CRH 是HPA 軸激活和級聯(lián)反應(yīng)的起始，隨后刺激垂體前葉釋放ACTH，腎上腺皮質(zhì)受到ACTH刺激后釋放出終產(chǎn)物CORT，進(jìn)而參與各種生理活動的調(diào)控。腦卒中發(fā)生后，由于機(jī)體長期維持在應(yīng)激環(huán)境中，以致交感神經(jīng)亢奮，促使類固醇激素、GC等甾體激素分泌，GC異常分泌會對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生慢性毒害作用，且機(jī)體應(yīng)激時GC 與其受體GR 的結(jié)合增強(qiáng)，進(jìn)而負(fù)反饋調(diào)節(jié)HPA 軸；此外，過度升高的GC可通過GR，作用于中縫核—海馬系統(tǒng)，使5-羥色胺等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子釋放減少，從而導(dǎo)致中風(fēng)患者出現(xiàn)情緒低落、快感喪失等抑郁樣行為。因此，GR 是調(diào)節(jié)HPA 軸功能變化的關(guān)鍵靶點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示，PSD組大鼠海馬GR蛋白表達(dá)減低、下丘腦CRH 蛋白表達(dá)水高，這可能是PSD 大鼠過高的血清CORT 作用于海馬GR，從而使海馬GR 表達(dá)下調(diào)，而下丘腦CRH 表達(dá)升高則是由于炎癥因子刺激所致。經(jīng)醒腦解郁方和氟西汀干預(yù)后，大鼠海馬GR 蛋白水平明顯上調(diào)，下丘腦CRH 蛋白水平顯著下降，說明醒腦解郁方可通過降低血清中過高的激素水平、上調(diào)海馬GR的表達(dá)來調(diào)節(jié)PSD大鼠的HPA 軸，從而抑制HPA 軸持續(xù)亢進(jìn)，改善PSD 模型大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀和抑郁表現(xiàn)，發(fā)揮治療作用。

綜上所述，醒腦解郁方可改善PSD 大鼠海馬神經(jīng)元損傷，通過抑制HPA 軸過度激活，上調(diào)海馬GR蛋白水平、降低下丘腦CRH 蛋白水平，改善大鼠行為學(xué)癥狀，發(fā)揮抗抑郁功效，實(shí)現(xiàn)治療PSD的目的。