電針調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化抑制腦卒中肢體痙攣大鼠腦皮質(zhì)炎癥反應(yīng)的研究

黃慧源，易麗貞，黃麟荇，陳瑞雪，綻 晟，岳增輝*

湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿與康復(fù)學(xué)院，湖南 長沙 410208

腦卒中肢體痙攣（post-stroke spasticity, PSS）是腦卒中后最常見的并發(fā)癥之一。研究顯示，腦卒中發(fā)生3 周后肢體痙攣的發(fā)生率可達(dá)40%以上，主要表現(xiàn)為肌張力增高、肢體疼痛、僵硬、干擾正常運(yùn)動(dòng)模式等[1]。 PSS 是中風(fēng)患者致殘的重要原因之一，不僅增加患者家庭的醫(yī)療支出，更影響患者重返社會(huì)的活動(dòng)質(zhì)量，已成為亟待解決的社會(huì)問題[2]。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腦卒中發(fā)生后，伴隨腦血流量和供氧量的不足，可引發(fā)腦缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)，釋放大量炎癥因子，進(jìn)而損傷神經(jīng)功能，導(dǎo)致PSS 發(fā)生[3-4]。 課題組前期研究證明，電針治療腦卒中后肢體痙攣療效確切，能夠有效改善神經(jīng)功能損傷、降低肌張力、促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)[5-6]。 相關(guān)研究顯示，針刺能通過下調(diào)腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6, IL-6）和C 反應(yīng)蛋白（C-reaction protein, CRP）等炎癥因子來緩解卒中后痙攣狀態(tài)，說明抑制炎癥反應(yīng)是針刺緩解PSS 的重要機(jī)制之一[7-8]。 但這些研究僅局限于針刺對炎癥因子表達(dá)的調(diào)控，缺乏明確的作用靶標(biāo)。 因此，電針抑制炎癥反應(yīng)來緩解PSS 的機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。

研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)存在于缺血性中風(fēng)的幾乎所有階段，小膠質(zhì)細(xì)胞（microglia, MG）介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥是缺血性中風(fēng)的典型病理標(biāo)志[9]。當(dāng)缺血性腦損傷發(fā)生后，腦內(nèi)靜息的MG 依靠精細(xì)側(cè)枝感知到微環(huán)境變化，被迅速激活，形態(tài)上變?yōu)榘w較大、突起變短、細(xì)胞呈圓形或桿狀的“阿米巴狀”[10]。離子鈣結(jié)合銜接分子-1（ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba-1）表達(dá)于所有分型的MG，可作為MG 的直接標(biāo)志物，用于檢測和定位小膠質(zhì)細(xì)胞的存在。 在腦缺血、缺氧的刺激下，激活的MG 被極化形成M1、M2兩種表型：促炎M1 型不僅會(huì)釋放IL-6、TNF-α、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）等促炎因子，還會(huì)改變血腦屏障通透性、誘導(dǎo)興奮性神經(jīng)毒性，進(jìn)而造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷；而抗炎M2 型則通過釋放白細(xì)胞介素-10（interleukin-10, IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β）等抗炎因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子，發(fā)揮抑制炎癥、保護(hù)神經(jīng)元的積極作用[11-12]。 因此，如何通過對MG 的調(diào)控作用，抑制MG 的激活，促進(jìn)MG 由M1 型向M2 型極化來減輕炎癥反應(yīng)，成為緩解PSS 的重要方向。

本實(shí)驗(yàn)通過觀察電針對PSS 大鼠MG 標(biāo)志物Iba-1、M1 型標(biāo)志物白細(xì)胞分化抗原16（cluster of differentiation 16, CD16）、M2 型標(biāo)志物白細(xì)胞分化抗原206（cluster of differentiation 206, CD206）陽性熒光強(qiáng)度的影響，以及炎癥因子IL-6、IL-1β、TGF-β含量和mRNA 的表達(dá)變化，探討電針緩解PSS 的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的SPF級(jí)健康成年雄性大鼠共計(jì)48 只，體質(zhì)量（280±20） g，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（湘）2019-0004。 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，室溫（23±2） ℃，濕度50%±10%，自由進(jìn)食、飲水，規(guī)律更換墊料及籠具消毒。 隨機(jī)抽取10 只大鼠作為假手術(shù)組，剩余大鼠進(jìn)行造模，最終造模成功大鼠20 只，再隨機(jī)分為模型組和電針組，每組10只。本實(shí)驗(yàn)通過了湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查（批號(hào)：LL2022031601）。

1.2 主要試劑與儀器

Triton X-100（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：T8200）；DAPI 染液（武漢皮諾飛生物科技有限公司，貨號(hào)：PN0015）；Iba-1 抗體、CD16 抗體、CD206抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：10904-1-AP、16559-1-AP、18704-1-AP）；IL-6、IL-1β、TGF-β ELISA 試劑盒（廈門侖昌碩生物科技有限公司，貨號(hào)：YD-30219，YD-30206，YD-31072）；TRIZOL（美國Invitrogen 公司，貨號(hào)：10296028）；NMDA 受體（美國sigma 公司，型號(hào)：M3262）；戊巴比妥鈉（Merck KGaA 默克公司，貨號(hào)：P3761）；MACO 線栓（北京西濃科技有限公司，貨號(hào)：A43040）。

大鼠腦立體定位儀（上海玉研科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：SA-150）；牙科鉆（南京金恒川電子有限公司，型號(hào)：MF4G）；華佗牌一次性無菌針灸針、電針儀（蘇州醫(yī)療用品廠，型號(hào)：0.25 mm×25 mm、SDZ-V）；分光光度計(jì)（美國THERMO 公司，型號(hào)：Nanodrop lite）；熒光定量PCR儀（美國Applied biosystems 公司，型號(hào)：StepOne Software）。

1.3 造模方法及成模標(biāo)準(zhǔn)

參考課題組前期研究的造模方法[13]，應(yīng)用改良大腦中動(dòng)脈閉塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）線栓法+內(nèi)囊注射N-甲基-D-天冬氨酸受體（N-methyl-D-aspartic acid receptor, NMDA）受體法制備腦卒中肢體痙攣大鼠模型。 腹腔注射2%戊巴比妥鈉（0.3 mL/100 g）麻醉大鼠，仰臥位固定，備皮。頸部觸及甲狀軟骨，在其稍偏右側(cè)切開2 cm，暴露大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈（right common carotid artery,RCCA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（right internal carotid artery, RICA）、頸外動(dòng)脈（right external carotid artery, RECA）視野并鈍性分離，將RCCA 遠(yuǎn)心端、RECA 近心端進(jìn)行結(jié)扎，動(dòng)脈夾夾閉RICA。 在RCCA 上用眼科剪在距離RCCA 分叉膨大5 mm 處剪一小口，從此口插入線栓至RICA 內(nèi)，松開動(dòng)脈夾，插入深度18～20 mm，在感到稍有阻力后不再繼續(xù)插入。 隨后在RCCA 下穿線備用，結(jié)扎固定線栓與血管。常規(guī)縫合、消毒，術(shù)后腹腔注射速尿（0.1 mg/kg），避免腦水腫。 第2 天對MCAO 大鼠進(jìn)行Zea Longa 神經(jīng)功能缺損評分，1～3分大鼠行內(nèi)囊注射NMDA 受體法[14]。 麻醉MCAO 大鼠，俯臥位固定于大鼠腦立體定位儀，消毒備皮，于顱頂矢狀縫縱行切口2 cm， 止血鉗兩側(cè)拉開，暴露前囟、右側(cè)頂骨和額骨交界骨縫視野。 內(nèi)囊定位參考《大鼠立體定位圖譜》[15]，在前囟后1.4 mm、矢狀縫右側(cè)2.4 mm 做一標(biāo)記，此處用牙科鉆鉆2 mm 小孔，微量注射器垂直插入7 mm，在5 min 內(nèi)緩慢注射5 μL NMDA。 注射完成后等待5 min 再取出注射器，壓迫止血、常規(guī)縫合、聚維酮碘消毒。術(shù)后注射速尿，防止腦水腫。 予葡萄糖水及飼料，燈照保暖。 大鼠蘇醒后，Zea Longa 評分為1～3 分，電生理描記張力信號(hào)數(shù)值為0～1 g，則視為造模成功。 假手術(shù)組僅進(jìn)行鈍性分離，不結(jié)扎不插線栓，第2 天內(nèi)囊注射0.9%氯化鈉溶液。

1.4 干預(yù)方法

從造模成功后的第1 天開始，選擇患側(cè)（左側(cè)肢體）的陽陵泉和曲池進(jìn)行電針治療，穴位定位參考《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位》[16]。 陽陵泉位于大鼠腓骨小頭下側(cè)距離足三里外側(cè)5 mm 處，直徑約3 mm。曲池位于大鼠橈骨近端關(guān)節(jié)外側(cè)前方的凹陷中，直徑約3 mm。 治療時(shí)將大鼠固定在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，使用華佗牌0.25 mm×25 mm 毫針對大鼠患側(cè)陽陵泉、曲池進(jìn)行針刺，隨后進(jìn)行1 min 的行針手法刺激（左右捻轉(zhuǎn)180°，平補(bǔ)平瀉，頻率80 次/min）。 再使用電針儀將兩個(gè)穴位上的針灸針連接同一組電極，正極接在患側(cè)陽陵泉穴毫針針柄，負(fù)極接在同側(cè)曲池穴毫針針柄，設(shè)置頻率為80 Hz、電壓為30 V，治療強(qiáng)度以大鼠肢體輕微抖動(dòng)為度。每次治療時(shí)長為30 min，每天1 次，連續(xù)治療7 d。假手術(shù)組和模型組在同等條件下僅進(jìn)行抓取固定，不進(jìn)行電針干預(yù)。

1.5 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.5.1 Zea Longa 神經(jīng)功能缺損評分 分別于治療前后對大鼠進(jìn)行Zea Longa 神經(jīng)功能缺損評分[17]。提尾雙上肢自然伸展，計(jì)0 分（無神經(jīng)損傷）；提尾對側(cè)前肢內(nèi)收屈曲，計(jì)1 分（輕度神經(jīng)損傷）；爬行時(shí)向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)，計(jì)2 分（中度神經(jīng)損傷）；站立或爬行時(shí)向?qū)?cè)傾倒，計(jì)3 分（重度神經(jīng)損傷）；無自主活動(dòng)無意識(shí)，計(jì)4 分。 評分與動(dòng)物神經(jīng)缺損程度成正相關(guān)。

1.5.2 電生理描記法檢測大鼠患側(cè)間接肌張力 分別于治療前后使用BL-420F 生物機(jī)能系統(tǒng)檢測大鼠間接肌張力。 每組隨機(jī)選取6 只大鼠淺度麻醉，兩根電極分別插入大鼠患側(cè)（左后肢）股四頭肌和尾部，一根棉線系在大鼠左后肢下端，棉線另一端經(jīng)過張力傳感器與BL-420F 生物機(jī)能系統(tǒng)相連，給予0.5 g 后負(fù)荷，刺激量為3 mA，持續(xù)時(shí)間30 s。 通過BL-420F 左后肢股四頭肌產(chǎn)生的電信號(hào)，可以反映大鼠間接肌張力，描記數(shù)值大小與大鼠肌張力成反相關(guān)。

1.5.3 免疫熒光染色法檢測大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá) 運(yùn)用免疫熒光染色法檢測大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)內(nèi)MG 標(biāo)記物（Iba-1）、M1 標(biāo)記物（CD16）、M2 標(biāo)記物（CD206）的表達(dá)。 大鼠治療第7 天，電生理檢測結(jié)束后腹腔麻醉處死大鼠。 每組隨機(jī)選取3 只大鼠，心臟灌注生理鹽水和4%多聚甲醛各250 mL，在冰臺(tái)上斷頭取腦，分離缺血側(cè)皮質(zhì)，常規(guī)固定、脫水、包埋、5 μm 厚度切片。 取冰凍組織切片，置室溫冷卻干燥，PBS 洗滌5 min×3 次；3%過氧化氫溶液封閉10 min，PBS 洗滌5 min×3 次； 加入0.5% Triton X-100通透液室溫放置10 min，PBS 漂洗；滴加山羊血清室溫封閉30 min；在37 ℃條件下加入一抗Iba-1（1∶500）、CD16（1∶300）、CD206（1∶300）孵育2 h、加入熒光二抗孵育1 h、加入TSA-570 孵育30 min，PBS洗滌5 min×3 次；避光加入DAPI 核染5 min，PBS洗滌5 min×3 次，封片，4 ℃避光保存。使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察拍照，每只大鼠隨機(jī)觀察3 張切片，每張切片隨機(jī)觀察3 個(gè)視野（×400 倍），用Image-Pro Plus 6.0 軟件分析各視野面熒光平均密度值。

1.5.4 ELISA 法檢測大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)炎癥因子含量 運(yùn)用ELISA 法檢測大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)炎癥因子IL-6、IL-1β、TGF-β 的含量。 大鼠治療第7 天電生理檢測結(jié)束后，麻醉后斷頭處死各組剩余大鼠，在冰臺(tái)上快速取出大腦，分離缺血側(cè)皮質(zhì)，分裝于凍存管內(nèi)，在-80 ℃冰箱保存。 取50 mg 凍存皮質(zhì)組織勻漿，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，采用酶標(biāo)儀在450 nm 波長處測量樣本的吸光度值。

1.5.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)炎癥因子的mRNA 表達(dá) 每組隨機(jī)挑選3 只大鼠取適量皮質(zhì)組織研磨粉碎，加入裂解液，按照試劑盒說明分離純化總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 后使用熒光定量PCR 儀進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR 擴(kuò)增。 循環(huán)后以β-actin為內(nèi)參基因，采用2-△△CT法計(jì)算IL-6、IL-1β、TGF-β的mRNA 相對表達(dá)量。引物由武漢金開瑞生物工程有限公司合成，引物序列詳見表1。

表1 各基因PCR 引物序列

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行分析處理。 所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)性分布的數(shù)據(jù)用“±s”表示，不符合正態(tài)分布的資料用“M（QR）”來描述。 組間比較滿足正態(tài)性者，采用單因素方差分析，方差齊時(shí)選擇LSD 法，方差不齊采用Tamhane's T2 法，非正態(tài)分布采用秩和檢驗(yàn)。 均以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠Zea Longa 神經(jīng)功能缺損評分比較

治療前，假手術(shù)組大鼠正?；顒?dòng)，未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損情況；與假手術(shù)組比較，另外兩組大鼠Zea Longa 評分均升高（P＜0.01），提示造模成功；且模型組與電針組大鼠之間評分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠Zea Longa 評分仍升高明顯（P＜0.01）；與模型組相比，電針組大鼠神經(jīng)功能缺損評分降低（P＜0.05）；且電針組評分治療后較治療前顯著降低（P＜0.01）。 詳見表2。

表2 各組大鼠治療前后Zea Longa 神經(jīng)功能缺損評分比較[M（QR），n=10，分]

2.2 各組大鼠間接肌張力比較

治療前，與假手術(shù)組對比，其余兩組電生理所測的間接肌張力數(shù)值明顯降低（P＜0.01），證明模型制備成功；且模型組與電針組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，模型組間接肌張力數(shù)值相比假手術(shù)組仍下降明顯（P＜0.01）；但電針組間接肌張力數(shù)值較模型組明顯升高（P＜0.01）；且電針組治療后數(shù)值比治療前顯著升高（P＜0.01）。 詳見表3。

表3 各組大鼠治療前后間接肌張力比較（±s，n=6，g）

表3 各組大鼠治療前后間接肌張力比較（±s，n=6，g）

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01；與治療前比較，△△P＜0.01。

組別假手術(shù)組模型組電針組治療前2.612±0.595 0.427±0.163**0.342±0.142**治療后2.713±0.559 0.517±0.085**1.122±0.228##△△

2.3 各組大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)Iba-1、CD16、CD206陽性表達(dá)比較

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠缺血側(cè)大腦皮質(zhì)中Iba-1、CD16 平均熒光強(qiáng)度表達(dá)上升（P＜0.01），CD206平均熒光強(qiáng)度表達(dá)下降（P＜0.01）。 與模型組相比，電針組大鼠缺血側(cè)大腦皮質(zhì)中Iba-1、CD16 平均熒光強(qiáng)度表達(dá)下降（P＜0.05，P＜0.01），CD206 平均熒光強(qiáng)度表達(dá)上升（P＜0.01）。 詳見圖1。

圖1 各組大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞Iba-1、CD16、CD206 表達(dá)比較（免疫熒光，標(biāo)尺=50 μm，±s，n=3）

2.4 各組大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)炎癥因子IL-6、IL-1β、TGF-β 含量及mRNA 比較

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠缺血側(cè)大腦皮質(zhì)中IL-6、IL-1β 含量及mRNA 表達(dá)顯著上升（P＜0.01），TGF-β 含量及mRNA 表達(dá)顯著下降（P＜0.01）；與模型組相比，電針組大鼠缺血側(cè)大腦皮質(zhì)中IL-6、IL-1β含量及mRNA 表達(dá)顯著下降（P＜0.05，P＜0.01），TGF-β含量及mRNA 表達(dá)顯著上升（P＜0.01）。 詳見表4—5。

表4 各組大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)IL-6、IL-1β、TGF-β含量比較（±s，n=7，pg/g）

表4 各組大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)IL-6、IL-1β、TGF-β含量比較（±s，n=7，pg/g）

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01。

組別假手術(shù)組模型組電針組IL-6 549.31±31.74 1414.40±96.69**925.47±47.61##IL-1β 263.61±32.43 621.47±18.83**430.11±9.58##TGF-β 4 018.93±137.03 2 366.11±175.03**3 095.76±119.40##

表5 各組大鼠大腦皮質(zhì)IL-6、IL-1β、TGF-β 的mRNA表達(dá)比較（±s，n=3）

表5 各組大鼠大腦皮質(zhì)IL-6、IL-1β、TGF-β 的mRNA表達(dá)比較（±s，n=3）

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別假手術(shù)組模型組電針組IL-6 1.061±0.053 4.012±0.684**2.944±0.126#IL-1β 1.001±0.040 1.963±0.183**1.369±0.048##TGF-β 1.000±0.008 0.516±0.058**0.787±0.016##

3 討論

腦卒中肢體痙攣，屬于中醫(yī)學(xué)“筋病”“痙病”“偏枯”范疇，病位在經(jīng)筋，為腦源性神經(jīng)系統(tǒng)病變之一?！夺樉木塾ⅰぐ侔Y賦》中記載：“半身不遂，陽陵泉遠(yuǎn)達(dá)曲池。 ”[18]當(dāng)代國醫(yī)大師呂景山提出“對穴”理論，認(rèn)為陽陵泉、曲池二穴配伍能有效促進(jìn)中風(fēng)后肢體功能恢復(fù)[19]。 陽陵泉和曲池分別為手陽明大腸經(jīng)和足少陽膽經(jīng)的合穴，“合主逆氣而泄”，針刺曲池能夠攝納陽明氣血，發(fā)揮行氣活血通絡(luò)之效，針刺筋會(huì)之陽陵泉能夠平抑肝陽、舒筋活絡(luò)，是治療全身筋病、手足拘攣的重要穴位。 兩穴上下相配為用，共奏平肝潛陽、舒筋利節(jié)之功。 課題組前期研究已證明，電針此兩穴對緩解卒中后痙攣狀態(tài)效果明顯[20-21]。 針刺作為一種外周神經(jīng)刺激療法，在鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用；電針集電生理刺激和針刺效應(yīng)為一體，可通過減輕炎癥反應(yīng)來改善神經(jīng)功能損傷和運(yùn)動(dòng)障礙[22-23]。 相關(guān)研究顯示，對炎癥模型小鼠的陽陵泉和曲池進(jìn)行針刺，能夠明顯下調(diào)TNF-α、IL-1β 等炎癥因子，減輕炎癥反應(yīng)，這可能與這兩個(gè)穴位附近的感受器和自由神經(jīng)末梢敏感點(diǎn)十分豐富有關(guān)，針灸通過對其機(jī)械刺激，發(fā)揮免疫抑制作用[24]。在缺血性腦卒中發(fā)生后，中斷的腦血流消耗大腦的氧氣和葡萄糖，會(huì)引發(fā)上位運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元炎癥，最終導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙[25]。 相關(guān)研究表明，PSS 患者體內(nèi)表現(xiàn)出更高水平的炎癥因子，如IL-6、IL-1β 和TNF-α，可見PSS 與炎癥參數(shù)水平密切相關(guān)[3]。因此，電針陽陵泉、曲池能夠疏風(fēng)通絡(luò)、清火散結(jié)，通過電針刺激此兩穴附近的多態(tài)感受器，可發(fā)揮免疫抗炎效應(yīng)，降低機(jī)體炎癥水平，以促進(jìn)PSS 患者肢體運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。

MG 是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控者，MG 作為腦內(nèi)常駐免疫細(xì)胞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的首道免疫防線，在監(jiān)測和干預(yù)神經(jīng)元水平活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用[26-27]。生理?xiàng)l件下，MG 表現(xiàn)為“分枝形”的靜息狀態(tài)，維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)平穩(wěn)運(yùn)行；而在腦缺血發(fā)生后，受損腦組織開始釋放損傷相關(guān)模式分子（damage associated molecular patterns, DAMPs），MG 被迅速激活，其形態(tài)、功能和基因表達(dá)上都發(fā)生急劇變化，隨后被極化為促炎型M1 和抗炎型M2 兩種表型，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)損害的“雙刃劍”作用[28]。M1 誘導(dǎo)一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）、IL-6、干擾素（interferon-γ, IFN-γ）等促炎介質(zhì)加重炎癥反應(yīng)，發(fā)揮神經(jīng)毒性作用加重腦損傷；M2 通過釋放IL-4、IL-10、TGF-β 等細(xì)胞因子抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)損傷腦組織的修復(fù)，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[13，29]。 針刺干預(yù)MG 效應(yīng)明顯，能夠抑制MCAO 大鼠缺血半暗帶區(qū)MG 的變性和壞死，通過下調(diào)MG 標(biāo)志物Iba-1的表達(dá)、降低促炎因子TNF-α 和IL-1β 分泌來緩解神經(jīng)炎癥[30]；通過對腦缺血再灌注小鼠的“承漿”“水溝”電針干預(yù)，除可降低促炎因子分泌水平外，還能促進(jìn)MG 向M2 型極化，增加M2 標(biāo)志物精氨酸酶（arginase-1, Arg-1）和抗炎因子的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)[31]。 由此可見，MG 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與卒中后的神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)障礙密切相關(guān)，調(diào)控MG 的激活和極化狀態(tài)或成為調(diào)控神經(jīng)炎癥、緩解痙攣狀態(tài)的關(guān)鍵靶點(diǎn)。 因此，本研究提出電針通過抑制MG的激活水平，促進(jìn)MG 由M1 向M2 極化來降低炎癥反應(yīng)，進(jìn)而緩解PSS 的假說；從MG 標(biāo)志物Iba-1、M1 標(biāo)志物CD16 和M2 標(biāo)志物CD206 的表達(dá)變化，以及促炎因子IL-6 和IL-1β、抗炎因子TGF-β 含量和mRNA 表達(dá)水平，探討電針緩解PSS 的可能機(jī)制。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，PSS 大鼠經(jīng)過電針干預(yù)后，Zea Longa 神經(jīng)功能評分以及電生理肌張力數(shù)值得到顯著改善，表明電針促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)、降低肢體肌張力效果明顯。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，PSS 大鼠缺血側(cè)腦皮質(zhì)內(nèi)MG 的直接標(biāo)志物Iba-1 的陽性熒光強(qiáng)度顯著提高，提示痙攣發(fā)生后小膠質(zhì)細(xì)胞激活；且此時(shí)在模型大鼠中，促炎型M1 的標(biāo)志物CD16 呈現(xiàn)高表達(dá)，同時(shí)促炎因子IL-6、IL-1β 含量和mRNA表達(dá)升高，提示PSS 大鼠體內(nèi)炎癥反應(yīng)形成；而經(jīng)電針干預(yù)后，CD16 表達(dá)減少，但抗炎的M2 標(biāo)志物CD206 表達(dá)顯著增加，且抗炎因子TGF-β 含量和mRNA 表達(dá)也顯示上調(diào)，說明電針能夠抑制PSS 大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)MG 激活，并促進(jìn)促炎M1 表型向抗炎M2 表型極化，有效減輕神經(jīng)炎癥。

綜上所述，電針陽陵泉、曲池能夠發(fā)揮對MG 的調(diào)控作用，抑制PSS 大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)MG 的激活狀態(tài)，限制其M1 促炎表型的發(fā)展，并促進(jìn)MG 由M1 向M2 抗炎表型極化來減輕神經(jīng)炎癥，進(jìn)而促進(jìn)肢體運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)、緩解卒中后痙攣狀態(tài)，為電針治療PSS 的機(jī)制研究提供新思路。 但本研究存在以下幾點(diǎn)不足：（1）沒有分時(shí)間點(diǎn)檢測PSS 大鼠腦內(nèi)MG 的激活及極化水平，無法判斷最佳調(diào)控MG 的時(shí)間點(diǎn)；（2）僅初步驗(yàn)證了電針通過調(diào)控MG 介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥來緩解痙攣，但其具體的分子信號(hào)通路仍不明確，有待今后進(jìn)一步深入研究。