HDCP患者血清miR-181b、PLGF、IL-17與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系及其對不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值

羅玉萍,張楊,何曉焱,鐘媛

(瀘州市人民醫(yī)院產(chǎn)科,四川 瀘州 646000)

妊娠高血壓疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP)是指在妊娠期出現(xiàn)血壓升高的產(chǎn)科常見病,其臨床表現(xiàn)多樣,包括血壓升高、蛋白尿和水腫等,嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)抽搐和昏迷,是導(dǎo)致孕婦及新生兒死亡的主要原因之一[1-2]。HDCP治療的目的是控制疾病進(jìn)展,預(yù)防重度子癇前期和子癇發(fā)生,降低圍生產(chǎn)期死亡率,改善母嬰預(yù)后,故早期干預(yù)預(yù)防HDCP具有重要臨床意義,篩選具有特征性的指標(biāo)也尤為重要[3]。胎盤生長因子(placenta growth factor,PLGF)表達(dá)于胎盤,可以誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖,維持血管通透性,在正常妊娠胎盤的形成和發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用,分泌異常與HDCP密切相關(guān)[4]。miR-181b參與心血管疾病、免疫疾病和惡性腫瘤的發(fā)病過程,表達(dá)異常與炎癥水平變化有關(guān),HDCP發(fā)病本質(zhì)也與大量促炎因子釋放有關(guān)[5]。白細(xì)胞介素17(IL-17)由T淋巴細(xì)胞分泌,在多種細(xì)胞中表達(dá),在炎性反應(yīng)和自身免疫疾病中表達(dá)異常[6]。本研究旨在探討HDCP患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系及對不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年10月至2021年10月瀘州市人民醫(yī)院收治的126例HDCP孕婦為研究對象,其中患者年齡(32.16±2.83)歲;產(chǎn)前體質(zhì)量指數(shù)(24.07±2.51)kg/m2;孕周(36.54±2.58)周;孕次(1.56±0.14)次;合并糖尿病21例。根據(jù)HDCP嚴(yán)重程度[7]分為妊娠期高血壓組(n=61)、子癇前期組(n=37)和重度子癇前期組(n=28);根據(jù)妊娠結(jié)局不同分為正常組(n=62)和不良妊娠組(n=64)。本研究符合《赫爾辛基宣言》相關(guān)倫理準(zhǔn)則。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)參照中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會制定的《妊娠期高血壓疾病診治指南(2012年版)》[8],確診為HDCP;(2)妊娠前血壓正常;(3)均為單胎妊娠,頭位。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并嚴(yán)重肝、腎功能不全,心腦血管系統(tǒng)疾病者;(2)神經(jīng)功能障礙或無法配合者;(3)合并嚴(yán)重感染或惡性腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 血清學(xué)指標(biāo)檢測 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測患者血清IL-17水平,試劑盒購自江西艾博因生物科技有限公司;化學(xué)發(fā)光法檢測血清PLGF水平,檢測儀器為Roche cobas E610免疫分析儀,試劑盒為Roche配套試劑盒。

1.2.2 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測血清miR-181b表達(dá)水平[9]采集清晨空腹靜脈血5 mL,4 000 r/min離心10 min 取上層血清,加入Trizol提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Invitrogen公司)將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA為模板,PCR擴增試劑盒(Takara公司)進(jìn)行PCR擴增。以U6為內(nèi)參,U6引物序列為:上游:5′-ATTGGAACGATACAGAGA AGATT-3′;下游:5′-GGAACGCTTCACGAATTTG-3′。miR-181b引物序列為:上游:5′-AACATTCATTGCTGTCGGTGGG-3′,下游:5′-GCGAAGCACAGAATTAATACGACTCAC-3′,長度78 bp;PCR反應(yīng)體系:反應(yīng)體積20 μL,95 ℃ 3 min、95 ℃ 12 s、60 ℃ 40 s、72 ℃ 20 s,共40個循環(huán)。重復(fù)實驗3次,取平均值,采用2-ΔΔCt法計算相對表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)不同HDCP嚴(yán)重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平;(2)不同妊娠結(jié)局HDCP患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平;(3)血清miR-181b、PLGF、IL-17水平與HDCP嚴(yán)重程度的關(guān)系;(4)不同HDCP嚴(yán)重程度孕婦的妊娠結(jié)局;(5)血清miR-181b、PLGF、IL-17對HDCP不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同HDCP嚴(yán)重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比較

不同HDCP嚴(yán)重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。血清miR-181b和IL-17水平比較:重度子癇前期患者>子癇前期組>妊娠期高血壓組;PLGF水平比較:重度子癇前期患者<子癇前期組<妊娠期高血壓組。見表1。

表1 不同HDCP嚴(yán)重程度患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比較

2.2 不同HDCP妊娠結(jié)局患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比較

不良妊娠組患者血清miR-181b、IL-17水平高于正常組(P<0.05);PLGF水平低于正常組(P<0.05)。見表2。

表2 不同HDCP妊娠結(jié)局患者血清miR-181b、PLGF、IL-17水平比較

2.3 血清miR-181b、PLGF、IL-17水平與HDCP嚴(yán)重程度的相關(guān)性

相關(guān)性分析顯示,血清miR-181b和IL-17水平與HDCP嚴(yán)重程度正相關(guān)(P<0.05),血清PLGF水平與HDCP嚴(yán)重程度負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清miR-181b、PLGF、IL-17水平與HDCP嚴(yán)重程度的相關(guān)性

2.4 不同HDCP嚴(yán)重程度孕婦妊娠結(jié)局比較

126例HDCP患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局64例,占50.79%,其中合并多種不良妊娠結(jié)局患者8例。重度子癇前期組孕婦早產(chǎn)、新生兒體重過低、新生兒窒息、胎兒窘迫和產(chǎn)后出血的發(fā)生率高于妊娠期高血壓組和子癇前期組(P<0.05)。見表4。

表4 不同HDCP嚴(yán)重程度孕婦妊娠結(jié)局比較[n(%)]

2.5 血清miR-181b、PLGF、IL-17對HDCP不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值

以是否發(fā)生不良妊娠結(jié)局為因變量進(jìn)行變量賦值(發(fā)生不良妊娠結(jié)局=1,未發(fā)生不良妊娠結(jié)局=0),ROC曲線分析顯示,miR-181b、IL-17及PLGF對HDCP不良妊娠結(jié)局均有預(yù)測價值(P<0.05),且三者聯(lián)合檢測的預(yù)測價值更高(P<0.05)。見表5及圖1。

表5 血清miR-181b、PLGF、IL-17對HDCP不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值

3 討論

HDCP是妊娠期特有且常見的嚴(yán)重威脅孕產(chǎn)婦生命安全的產(chǎn)科并發(fā)癥,其發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸上升趨勢[10]。HDCP對母嬰健康影響大,易誘導(dǎo)不良妊娠結(jié)局,未及時干預(yù)可發(fā)展為重度子癇前期甚至子癇,產(chǎn)生更嚴(yán)重后果[11]。

本研究結(jié)果顯示,重度子癇前期患者血清miR-181b和IL-17水平高于妊娠期高血壓組和子癇前期組(P<0.05),血清PLGF水平低于妊娠期高血壓組和子癇前期組(P<0.05);子癇前期患者血清miR-181b和IL-17水平高于妊娠期高血壓組(P<0.05),血清PLGF水平明顯低于妊娠期高血壓組(P<0.05),表明HDCP越嚴(yán)重,患者血清miR-181b和IL-17水平越高,PLGF水平越低。相關(guān)性分析顯示,血清miR-181b和IL-17水平與HDCP嚴(yán)重程度正相關(guān)(P<0.05),血清PLGF水平與HDCP嚴(yán)重程度負(fù)相關(guān)(P<0.05),證實了血清miR-181b、PLGF、IL-17水平與HDCP嚴(yán)重程度間具有相關(guān)性,提示臨床可以通過檢測血清miR-181b、PLGF、IL-17水平評估患者HDCP嚴(yán)重程度及發(fā)生HDCP的可能性。血清PLGF是血管內(nèi)皮生長因子的一員,與胎盤有密切關(guān)系,可通過刺激內(nèi)皮細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞增殖浸潤,促進(jìn)胎盤血管生成[12]。既往研究[13-14]顯示,HDCP孕婦血清PLGF水平較低,會使胎盤正常功能發(fā)生紊亂,母體血供異常,從而導(dǎo)致孕婦的營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)減少,進(jìn)而誘發(fā)胎兒窒息、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局。HDCP發(fā)病時,誘導(dǎo)機體釋放大量炎癥因子,激活炎癥反應(yīng),損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,加重HDCP嚴(yán)重程度,可能與miR-181b表達(dá)上調(diào)有關(guān)[15]。

本研究中,重度子癇前期組孕婦早產(chǎn)、新生兒體重過低、新生兒窒息、胎兒窘迫和產(chǎn)后出血等不良妊娠結(jié)局發(fā)生率高于妊娠期高血壓組和子癇前期組(P<0.05),表明白不良妊娠結(jié)局發(fā)生概率與患者HDCP嚴(yán)重程度有關(guān),患者HDCP越嚴(yán)重,發(fā)生不良妊娠結(jié)局的可能性也越高。

此外,本研究結(jié)果顯示,不良妊娠組患者血清miR-181b、IL-17水平高于正常組(P<0.05),PLGF水平低于正常組(P<0.05),表明血清miR-181b和IL-17水平越高、PLGF水平越低的患者,越容易發(fā)生不良妊娠結(jié)局,臨床需對這類患者加以關(guān)注。妊娠期孕婦發(fā)生獨特的免疫改變,表現(xiàn)為細(xì)胞平衡被打破,IL-17為Th17細(xì)胞分泌的代表性細(xì)胞因子,在體內(nèi)廣泛參與炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答[16]。Ito等[17]研究發(fā)現(xiàn),IL-17可激活ROS/NF-κB信號途徑誘導(dǎo)胎膜破裂,增加不良妊娠結(jié)局風(fēng)險,本研究結(jié)果與之基本一致。ROC曲線分析顯示,miR-181b、IL-17和PLGF均對HDCP不良妊娠結(jié)局有預(yù)測價值(P<0.05),三者聯(lián)合檢測的預(yù)測價值更高(P<0.05),表明聯(lián)合檢測能夠更靈敏地預(yù)測HDCP患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險。

綜上,血清miR-181b、IL-17水平與HDCP嚴(yán)重程度正相關(guān),PLGF水平與HDCP嚴(yán)重程度負(fù)相關(guān)。同時血清miR-181b、IL-17水平越高,PLGF水平越低,發(fā)生不良妊娠結(jié)局的幾率越大。因此臨床可通過檢測血清miR-181b、PLGF和IL-17水平預(yù)測HDCP進(jìn)展和妊娠結(jié)局。