• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    德氏乳桿菌與嗜熱鏈球菌ISL3家族轉(zhuǎn)座子的比較與分析

    2024-01-01 00:00:00段景秀宋磊
    關(guān)鍵詞:轉(zhuǎn)座子拷貝陰性菌

    摘" 要: 對(duì)存在于德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)和嗜熱鏈球菌(Lactobacillus delbrueckii)中的 3類(lèi)ISL3家族轉(zhuǎn)座子進(jìn)行了篩選和定位,確定了各自的反向重復(fù)序列(IRs)和其外部的正向重復(fù)序列(DRs). 觀察到 3類(lèi)轉(zhuǎn)座子的IRs有部分相同(5’-GGCTCTATAATTT-3’//5’- TTGACAAAGAGCC-3’),堿基A和T豐富的8 bp的DRs中保守堿基均為第5位T. 3類(lèi)轉(zhuǎn)座子中,轉(zhuǎn)座酶之間約30%的相同性,與IRs的部分相同性以及對(duì)最保守堿基的識(shí)別有關(guān). 分析結(jié)果為后續(xù)進(jìn)行相關(guān)的分子實(shí)驗(yàn)與研究或建立簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的數(shù)據(jù)庫(kù)打下基礎(chǔ).

    關(guān)鍵詞: 德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii); 嗜熱鏈球菌(Lactobacillus delbrueckii); ISL3家族轉(zhuǎn)座子; 反向重復(fù)序列(IRs); 正向重復(fù)序列(DRs)保守堿基

    中圖分類(lèi)號(hào): Q 933""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A""" 文章編號(hào): 1000-5137(2024)03-0409-18

    Comparison and analysis of the ISL3 family between Lactobacillus delbrueckii and Streptococcus thermophilus

    DUAN Jingxiu, SONG Lei*

    (College of Life Sciences, Shanghai Normal University, Shanghai 200234, China)

    Abstract: In this study, three types of ISL3 family transposons in Lactobacillus delbrueckii and Streptococcus thermophilus are screened and localized. Their inverted repeat sequences (IRs) and external direct repeat sequences (DRs) were determined. Notably, the IRs of the three types of IRs partially shared the sequence 5'-GGCTCATAATTT-3'//5'-TTGACAAGAGCC-3', and the 5th T was identified as the most conserved base in the 8 bp AT-rich DRs. Approximately 30% similarity among the three types of transposases in the ISL3 family transposons was attributed to the partial similarity of IRs and the recognition of the most conservative base of DRs. These findings will serve as a foundation for subsequent molecular experiments, research, or the establishment of a database on simple transposons.

    Key words: Lactobacillus delbrueckii; Streptococcus thermophilus; ISL3 family transposons; inverted repeat sequences (IRs);" conservative base of the direct repeat sequences (DRs)

    0" 引言

    德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)和嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)均屬于厚壁菌門(mén)(Firmicutes),德氏乳桿菌是乳桿菌屬(Lactobacillus)的代表種之一[1],而嗜熱鏈球菌是鏈球菌屬(Streptococcus)中唯一的食用菌種[2].

    細(xì)菌通過(guò)可移動(dòng)遺傳元件,如原噬菌體和轉(zhuǎn)座子等發(fā)生水平轉(zhuǎn)移后的基因占自身基因組中極其重要的一部分,在基因組的進(jìn)化中發(fā)揮重要作用[3-4]. 插入序列(IS)是原核生物基因組中最小和含量最豐富的自主轉(zhuǎn)座子,通常大小為700~3 000 bp,僅攜帶一或兩個(gè)轉(zhuǎn)座酶基因[5-6]. IS兩端是反向重復(fù)序列(IRs),是轉(zhuǎn)座酶結(jié)合、供體DNA切除和DNA鏈轉(zhuǎn)移所必需的[6]. 通常,目標(biāo)DNA在插入位點(diǎn)處會(huì)產(chǎn)生2~14 bp的正向重復(fù)序列(DRs)[7-8]. BENDER等[9]對(duì)Tn10,以及HU等[10]對(duì)IS903的研究均表明,IRs外部的DRs結(jié)構(gòu)是非常重要的.

    2006年,SIGUIER等[11]建立了ISfinder(www-is.biotoul.fr)數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)實(shí)驗(yàn)獲得的或上傳到NCBI的IS進(jìn)行存儲(chǔ). 之后KICHENARADIA等[12]為該數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)了一個(gè)窗口并增加了一個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)(截至2017年11月). 目前,幾乎所有可用于檢測(cè)原核生物中的IS的工具,如ISQuest等都是基于同源性的方法并依賴(lài)ISfinder中的數(shù)據(jù)[13]. 只有pnaISa[14]是基于IS的結(jié)構(gòu)特征,不需要參考數(shù)據(jù)庫(kù),但相同轉(zhuǎn)座子的外部DRs不唯一. 2021年,PUTEROVá等[5]開(kāi)發(fā)了digIS軟件來(lái)監(jiān)測(cè)原核生物基因組中遠(yuǎn)緣和假定的新插入的IS. 雖然IS可基于不同的參數(shù)進(jìn)行分類(lèi),但轉(zhuǎn)座酶中氨基酸的相同性仍然是一個(gè)主要參數(shù)[4,8,15].

    嗜熱鏈球菌與德氏乳桿菌保加利亞亞種之間存在著復(fù)雜的關(guān)系[16],通常作為發(fā)酵劑在酸奶生產(chǎn)中使用. 對(duì)兩者的研究大多集中在發(fā)酵方面,例如菌株篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化以及共生等,而在轉(zhuǎn)座子方面的研究相對(duì)較少. GERMOND等[17]在鑒定存在于牛奶發(fā)酵中的酶的基因關(guān)系時(shí),在德氏乳桿菌中發(fā)現(xiàn)了ISL3,其大小為1 494 bp,兩側(cè)有38 bp的IRs,插入時(shí)產(chǎn)生8 bp的DRs.

    本研究對(duì)存在于德氏乳桿菌與嗜熱鏈球菌全測(cè)序基因組中的ISL3家族轉(zhuǎn)座子的邊界序列及其DRs的保守堿基T進(jìn)行了比較與分析,確定其保守堿基的規(guī)律,從而了解ISL3家族轉(zhuǎn)座子在兩菌株之間的異同,為后續(xù)了解兩菌之間ISL3家族的親緣關(guān)系及其進(jìn)化規(guī)律提供依據(jù),也可為后續(xù)進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究以及建立轉(zhuǎn)座子的數(shù)據(jù)庫(kù)打下基礎(chǔ).

    1" 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    本研究使用從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中下載的德氏乳桿菌和嗜熱鏈球菌基因組全測(cè)序的基因注釋文件(GenBank文件)和核酸序列文件(FASTA文件)作為基本材料. 德氏乳桿菌共有26個(gè)亞種(截至2020年11月),嗜熱鏈球菌共有72個(gè)亞種(截至2021年3月).

    1.2 研究工具

    使用的數(shù)據(jù)庫(kù)是NCBI.

    使用軟件包括:文本編輯器、Multiple Sequence Alignment by CLUSTALW(https://www.genome.jp/tools-bin/clustalw)、DNA反向互補(bǔ)工具(https://www.vectorbuilder.cn/tool/dna-reverse-complement.html).

    1.3 研究方法及步驟

    1.3.1 ISL3家族轉(zhuǎn)座子的篩選及分類(lèi)

    (1) 任意選取一個(gè)德氏乳桿菌(或嗜熱鏈球菌)菌株中含有ISL3家族轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座酶序列為基準(zhǔn)(附表1),在NCBI全基因組測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行種內(nèi)比對(duì),選出相同性為100%和99%的轉(zhuǎn)座酶序列位置.

    (2) 分別用所獲取的轉(zhuǎn)座酶的上邊界上游400 bp,或下邊界下游400 bp堿基序列在NCBI的全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)或部分測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中,按標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)進(jìn)行種內(nèi)比對(duì),確定上邊界(或下邊界)的比對(duì)結(jié)果小于400 bp,且離其遠(yuǎn)的菌株作為陰性菌. 將陰性菌中的比對(duì)結(jié)果上下游各延伸1 kb的序列進(jìn)行種內(nèi)比對(duì)(Match/Mismatch中選擇(1,-2)). 在目標(biāo)轉(zhuǎn)座酶所在菌株的比對(duì)結(jié)果中,如果發(fā)現(xiàn)有序列重疊區(qū),則可以大概預(yù)測(cè)該轉(zhuǎn)座子在該菌株的位置,同時(shí)嘗試是否能前后延長(zhǎng)邊界序列(允許存在3個(gè)不連續(xù)堿基的不匹配).

    1.3.2 利用CLUSTALW確定IRs

    利用CLUSTALW將德氏乳桿菌(或嗜熱鏈球菌)得出的轉(zhuǎn)座子堿基序列,按照其相同性分別進(jìn)行序列比對(duì),利用反向互補(bǔ)工具將所有轉(zhuǎn)座子堿基序列的方向調(diào)整為一致,可得出其IRs的起始點(diǎn)和終末點(diǎn),從而確定IRs,手動(dòng)確定IRs外側(cè)的DRs.如果與轉(zhuǎn)座酶序列相同性一致的轉(zhuǎn)座子中,DRs包含IRs中的堿基的情況出現(xiàn)頻率大于25%,就將被包含堿基統(tǒng)計(jì)為DRs中的堿基.

    1.3.3 DRs保守堿基的確定

    以序列的方向,即5’到3’確定堿基位次. 首先,依次數(shù)出德氏乳桿菌(或嗜熱鏈球菌)中相同性一致的轉(zhuǎn)座子DRs各個(gè)位點(diǎn)中堿基T出現(xiàn)的頻次,統(tǒng)計(jì)其占總轉(zhuǎn)座子數(shù)量的百分比(即為其頻率). 另外,將德氏乳桿菌(或嗜熱鏈球菌)中相同性一致的轉(zhuǎn)座子,按其整合位點(diǎn)進(jìn)行歸類(lèi)(即DRs相同,并且在不同菌株的同一整合位點(diǎn)為同一類(lèi)),統(tǒng)計(jì)DRs各個(gè)位點(diǎn)中堿基T出現(xiàn)的頻次,統(tǒng)計(jì)其占相同性一致轉(zhuǎn)座子的總類(lèi)數(shù)的百分比(即為其頻率).

    2" 結(jié)果與分析

    2.1 3類(lèi)ISL3家族基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的結(jié)構(gòu)

    德氏乳桿菌ISL3基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子Ld-KCTC3034ISL3-1-1大小為1 517 bp(表1),反向重復(fù)序列大小為38 bp,如圖1(a)所示;嗜熱鏈球菌ISL3基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子St-LMD9ISL3-1-1大小為1 429 bp(表3),IRs大小為24 bp,如圖1(b)所示;嗜熱鏈球菌基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子St-13496ISL3-2-1大小為1 433 bp(表5),IRs大小為28 bp,如圖1(c)所示. 由圖1可知, 3類(lèi)ISL3家族基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的IRs(波浪線部分)均為不完美反向重復(fù)(上游以GG開(kāi)頭,下游以CC結(jié)尾),中間包含一個(gè)ISL3家族轉(zhuǎn)座酶(斜線框部分),同時(shí)IRs外部均有8 bp的DRs(橫線部分).

    2.2 Ld-ISL3-1轉(zhuǎn)座子的分析

    在德氏乳桿菌的26個(gè)亞種菌株中,與Ld-KCTC3034ISL3-1-1含有的轉(zhuǎn)座酶比對(duì)結(jié)果100%相同的共有15個(gè)拷貝,與其為99%相同的有10個(gè)拷貝,分別從中確定了10個(gè)和7個(gè)有陰性菌并且大小為1.5 kb 左右的Ld-ISL3-1. 剩下的8個(gè)(約30%)沒(méi)有被定位的原因是轉(zhuǎn)座酶假基因化、沒(méi)有找到陰性菌或能找到陰性菌但其大小明顯大于1.5 kb. 在17個(gè)Ld-ISL3-1中,Ld-KCCM 34717 ISL3-1 和Ld-NWC_1_2 ISL3-1分別有5個(gè)拷貝(表1,2).

    利用CLUATALW確定Ld-ISL3-1的IRs完全相同,包括基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子Ld-KCTC3034ISL3-1-1(圖1(a)、附圖1(a)和1(b));在IRs外部,也均有8 bp富含堿基A和T的DRs(圖1(a)、表1和表2、附圖1(a)和1(b)).按DRs各位點(diǎn)中堿基T出現(xiàn)的頻次占總轉(zhuǎn)座子數(shù)量的百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果為:在與基準(zhǔn)轉(zhuǎn)座子相同性為100%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第5位和第6位堿基T出現(xiàn)的頻率均為100%;在與其相同性為99%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第5位和第6位堿基T出現(xiàn)的頻率分別為85.71%和71.43%(表1,2). 按整合位點(diǎn)類(lèi)別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)得出結(jié)果與其一致. 由此推斷,該類(lèi)Ld-ISL3-1的DRs的保守堿基為第5位T.

    在沒(méi)有被定位出簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的8個(gè)轉(zhuǎn)座酶基因中,1個(gè)被注釋為假基因. 利用現(xiàn)有的方法發(fā)現(xiàn)剩余的7個(gè)中:有陰性菌且大小大于1.5 kb的基因有3個(gè);沒(méi)有陰性菌的基因,利用IRs比對(duì)確定大小大于1.5 kb的有2個(gè),等于1.5 kb的有2個(gè). 對(duì)上述大于1.5 kb的基因,在其上下游分別存在IRs,在IRs的外側(cè)也分別確定了8個(gè)堿基的DRs,且第5位都是保守堿基T. 對(duì)上述大小等于1.5 kb的基因,其中一個(gè)在其上下游找到了IRs,另一個(gè)找到的IRs有個(gè)別堿基的突變,但它們均沒(méi)有找到DRs.

    2.3 St-ISL3-1轉(zhuǎn)座子的分析

    在嗜熱鏈球菌的72個(gè)菌株中,與St-LMD9ISL3-1-1中的轉(zhuǎn)座酶相同性為100%的共有65個(gè)拷貝, 為99%的有34個(gè)拷貝,從中分別確定了62個(gè)和33個(gè)有陰性菌并且大小為1.4 kb左右的拷貝(表3,4). 極個(gè)別的數(shù)據(jù)沒(méi)有被確定,原因都是沒(méi)有找到陰性菌. 在95個(gè)St-ISL3-1中,St-SMQ301ISL3-1有8個(gè)拷貝(表3,4).

    CLUATALW結(jié)果發(fā)現(xiàn),95個(gè)St-ISL3-1的IRs絕大多數(shù)完全相同,包括基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的(圖1(b)、附圖2(a)和2(b)). St-STHCIRM1358ISL3-1-1下游IRs的倒數(shù)第二個(gè)堿基由C突變?yōu)門(mén)(附圖2(a));St-ATCC19258ISL3-1-1和St-NCTC12958ISL3-1-1下游IRs的倒數(shù)第二個(gè)堿基由C突變?yōu)锳(附圖 2(b)). 上述3個(gè)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)由于IRs的突變而對(duì)其轉(zhuǎn)座酶的綁定產(chǎn)生影響. St-ISL3-1的IRs外部也均有8 bp富含AT的DRs,按DRs各位點(diǎn)中堿基T出現(xiàn)的頻次占總轉(zhuǎn)座子數(shù)量的百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果是:與基準(zhǔn)轉(zhuǎn)座子相同性為100%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第3位和第5位堿基T出現(xiàn)的頻率分別為87.10%和98.39%;與其相同性為99%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第3位和第5位堿基T出現(xiàn)的頻率分別為90.91%和87.88%. 按整合位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果是:與基準(zhǔn)轉(zhuǎn)座子相同性為100%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第3位和第5位堿基T出現(xiàn)的頻率分別為90.30%和95.65%;與其相同性為99%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第3位和第5位堿基T出現(xiàn)的頻率分別為86.96%和95.65%. 由此推斷,St-ISL3-1的DRs的保守堿基為第5位堿基T(表3,4).

    在沒(méi)有被定位出簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的4個(gè)轉(zhuǎn)座酶基因中,都沒(méi)有確定出陰性菌,利用IRs比對(duì)只確定出1個(gè)大小為1.5 kb的轉(zhuǎn)座子,但無(wú)DRs,其余的在轉(zhuǎn)座酶的10 kb范圍均不含有IRs.

    2.4 St-ISL3-2轉(zhuǎn)座子的分析

    在72個(gè)嗜熱鏈球菌的菌株中,與基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子St-13496ISL3-2-1含有的轉(zhuǎn)座酶相同性為100%的共有130個(gè)拷貝,為99%的有59個(gè)拷貝,從中分別確定了122個(gè)和52個(gè)有陰性菌并且大小為1.4 kb左右的拷貝. 其他約10%沒(méi)有被定位的原因是沒(méi)有找到陰性菌,或能找到陰性菌但其大小明顯大于1.4 kb. 在174個(gè)St-ISL3-2中,St-ST3ISL3-2有11個(gè)拷貝,為最多(表5,6).

    CLUATALW結(jié)果表明,St-ISL3-2IRs絕大多數(shù)完全相同,包括基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的IRs(圖1(c)、附圖3(a)和附圖3(b)). St-STHCIRM1121ISL3-2-1上游IRs的第1位堿基由G突變?yōu)锳,可能會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)產(chǎn)生極大的影響(附圖3(b)). 在IRs外部,絕大部分有8 bp富含AT的DRs,但在S. thermophilus MN-BM-A01和 MN-ZLW-002中各存在一個(gè)僅有7 bp富含AT的DRs,故不對(duì)這兩個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行保守堿基分析.對(duì)按DRs各位點(diǎn)中堿基T出現(xiàn)的頻次占總轉(zhuǎn)座子數(shù)量的百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì),第4,5和6位數(shù)值接近. 按整合位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果是:在與基準(zhǔn)轉(zhuǎn)座子相同性為100%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第3位和第5位堿基T出現(xiàn)的頻率分別為84.62%和88.46%;在與其相同性為99%的簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中,第3位和第5位堿基T出現(xiàn)的頻率均為77.78%. 由此可知,St-ISL3-2的DRs的最保守堿基為第5位T(表5,6).

    在沒(méi)有被定位出簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的15個(gè)轉(zhuǎn)座酶基因中,利用現(xiàn)有的方法發(fā)現(xiàn),存在陰性菌且大于1.4 kb的拷貝有6個(gè);沒(méi)有陰性菌的利用與IRs比對(duì),確定大小是1.5 kb的有8個(gè);剩余1個(gè)在轉(zhuǎn)座酶的10 kb范圍內(nèi)不含有IRs. 上述大于1.4 kb的5個(gè)拷貝插入到了IS3-like element ISSth1b轉(zhuǎn)座子的內(nèi)部,此時(shí)找到的DRs均不含有第5位的保守堿基T,推測(cè)原有的IS3-like element ISSth1b轉(zhuǎn)座子影響了其識(shí)別DRs中的保守堿基;1個(gè)被ISL3轉(zhuǎn)座子插入,其兩對(duì)IRs的外側(cè)都有8個(gè)堿基的DRs,且第5位都是T. 上述大小為1.4 kb的8個(gè)中,1個(gè)存在DRs,并且第5位是保守堿基T, 7個(gè)沒(méi)有找到DRs.

    3" 討 論

    3.1 3類(lèi)ISL3家族簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子IRs , DRs同轉(zhuǎn)座酶序列的關(guān)系

    1995 年,GERMOND等[17]確定了L. delbrueckii N123中ISL3家族簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的IRs大小為38 bp. 1998年,MAHILLON等[7]的研究也有相同的結(jié)果,唯一不同為:其上游IRs第16位堿基為T(mén),而本研究結(jié)果為C(圖1(a)). 同時(shí),在L. delbrueckii N123中的,和實(shí)驗(yàn)中所形成的4個(gè)ISL3家族轉(zhuǎn)座子也在IRs的外側(cè)有8 bp的DRs,也是AT豐富區(qū),而且保守堿基也是第5位T[17]. 實(shí)驗(yàn)中所形成的4個(gè)ISL3家族轉(zhuǎn)座子的IRs與本研究結(jié)果完全一致[17].

    Ld-ISL3-1,St-ISL3-1和St-ISL3-2的IRs在5’或3’均有部分完全相同(圖1的5’-GGCTCTATAATTT-3’//5’-TTGACAAAGAGCC-3’);而在St-ISL3-1和St-ISL3-2中,IRs幾乎完全相同(圖1的波浪線部分). 在 3類(lèi)ISL3家族轉(zhuǎn)座子IRs外部均存在8 bp的AT豐富的DRs,并且最保守堿基均為第5位T.

    基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子Ld-KCTC3034ISL3-1-1中含有的轉(zhuǎn)座酶氨基酸(aa)數(shù)為427個(gè),St-LMD9ISL3-1-1 與St-13496ISL3-2-1含有的轉(zhuǎn)座酶均由418個(gè)aa組成. 對(duì) 3類(lèi)ISL3家族轉(zhuǎn)座子中基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中含有的轉(zhuǎn)座酶序列進(jìn)行CLUSTALW比對(duì),得出三者中有104個(gè)aa是相同的,如圖2(a)所示,該104個(gè)aa與轉(zhuǎn)座酶的部分綁定和對(duì)保守堿基的識(shí)別相關(guān). St-LMD9ISL3-1-1與St-13496ISL3-2-1中含有的轉(zhuǎn)座酶,有245個(gè)aa是相同的,該245個(gè)aa與轉(zhuǎn)座酶的完全綁定相關(guān),如圖2(b)所示. 所以,轉(zhuǎn)座酶中剩余的141個(gè)aa(245減去104)與非三者共有的IRs的綁定相關(guān).

    3.2 DRs不滿(mǎn)足保守堿基規(guī)律的情況

    在Ld-SL3-1中,只有Ld-NWC12ISL3-1-4的DRs第5位堿基T不是保守堿基. 可觀察到,其轉(zhuǎn)座酶第310位的G(甘氨酸)突變成了V(纈氨酸),推測(cè)轉(zhuǎn)座酶的點(diǎn)突變可能會(huì)使其對(duì)保守堿基的識(shí)別產(chǎn)生影響.

    在St-SL3-1中,只有St-ST64987ISL3-1-2的DRs第5位堿基T不是保守堿基. 其上游DRs前端、DRs和下游DRs后端形成11 bp的莖環(huán)結(jié)構(gòu),環(huán)即為DRs(圖3). St-24740ISL3-1-3,St-13496ISL3-1-2,St-24738ISL3-1-2,St-24739ISL3-1-2這4個(gè)轉(zhuǎn)座子的DRs均相同(為5’-ATATAAAT-3’),在不同菌株的同一整合位點(diǎn),它們分別在上下游DRs處形成一個(gè)包含完整DRs(圖中的豎線部分:5’-ATATAAAT-3’)的雙層莖結(jié)構(gòu)(圖4). 特殊結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)可能使保守堿基的位點(diǎn)發(fā)生變化.

    與標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子St-13496ISL3-2-1中含有的轉(zhuǎn)座酶相同性為100%的拷貝中,有3類(lèi)邊界DRs的保守堿基不符合所推測(cè)出的規(guī)律,它們的DRs分別為5’-AAATAAAA-3’,5’-AGATATAA-3’,5’-CATTATTT-3’. 對(duì)它們的DRs的旁鄰序列進(jìn)行了分析,并無(wú)明顯的特殊結(jié)構(gòu)而影響其保守堿基的位置,推測(cè)St-ISL3-2中轉(zhuǎn)座酶具有相對(duì)專(zhuān)一性的作用特點(diǎn). 在與標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子中含有的轉(zhuǎn)座酶相同性為99%的拷貝中,也存在類(lèi)似的情況.

    3.3 DRs與整合位點(diǎn)的關(guān)系

    Ld-KCTC3034ISL3-1-1與Ld-KCCM34717ISL3-1-1的DRs完全相同(5’-CAAATAAA-3’),并且整合在不同菌株的同一位點(diǎn)中. Ld-KCTC3034ISL3-1-3,Ld-KCCM34717ISL3-1-4,Ld-ND02ISL3-1-1雖然DRs完全相同(5’-TTATTTCT-3’),但Ld-KCTC3034ISL3-1-3與Ld-KCCM34717ISL3-1-4整合在同一位點(diǎn),Ld-ND02ISL3-1-1整合于另一位點(diǎn). Ld-KCTC3034ISL3-1-2和Ld-KCCM34717ISL3-1-5含有的轉(zhuǎn)座酶與基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子Ld-KCTC3034ISL3-1-1含有的轉(zhuǎn)座酶分別具有100%和99%的相同性,但是這2個(gè)轉(zhuǎn)座子均含有相同的DRs(5’-CTTTTTT-3’),并且整合于同一位點(diǎn). St-ISL3-2中有21個(gè)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子含有5’-AGATATAA-3’的DRs,有20個(gè)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子含有5’-AAAAAAAA-3’的DRs,有15個(gè)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子含有5’-TAAAAAGA-3’的DRs,并且它們分別整合于同一位點(diǎn)(間隔序列中),這些位點(diǎn)為該類(lèi)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的整合熱點(diǎn). 黃元銘等[18]的研究表明,可移動(dòng)元件的插入位置越多,代表其轉(zhuǎn)座活性越高,因此在本研究中,St-ISL3-2的轉(zhuǎn)座活性最高,但也可能是由于該轉(zhuǎn)座子在該菌株中存在的時(shí)間過(guò)久,導(dǎo)致其插入位點(diǎn)最多.

    將3個(gè)基準(zhǔn)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的核酸序列在ISfinder[11]數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn),預(yù)測(cè)出的3種ISL3轉(zhuǎn)座子與ISfinder數(shù)據(jù)庫(kù)中存儲(chǔ)的ISL3家族轉(zhuǎn)座子具有幾乎完全相同的IRs. Ld-ISL3-1的高同源序列ISL3(即E.value等于0)就是GERMOND等[17]在1995年的研究結(jié)果,該簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子可以發(fā)生轉(zhuǎn)位;St-ISL3-2的高同源序列ISSth1是MONNET等[19]在2004年的研究結(jié)果,該簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子可以發(fā)生轉(zhuǎn)位,并且該ISSth1的DRs中第5位堿基也是T;St-ISL3-1的高同源序列是ISSmu2[20],IS1193D,IS1193,ISSth8[21-22],但沒(méi)有這些簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子是否發(fā)生轉(zhuǎn)位的數(shù)據(jù),從現(xiàn)有的數(shù)據(jù)表現(xiàn)可知,這個(gè)簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子極大概率是可以轉(zhuǎn)位的.

    本研究結(jié)果表明:可利用ISL3轉(zhuǎn)座子作為基本元件構(gòu)建復(fù)合轉(zhuǎn)座子,從而實(shí)現(xiàn)大片段的基因轉(zhuǎn)移,也可以利用其活躍的“跳躍”能力建立基因突變數(shù)據(jù)庫(kù),為全面分析基因組中基因的功能做準(zhǔn)備. 同時(shí),也可為建立簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子的數(shù)據(jù)庫(kù)提供數(shù)據(jù).

    4" 結(jié) 論

    本研究對(duì)存在于德氏乳桿菌和嗜熱鏈球菌中的3類(lèi)ISL3家族轉(zhuǎn)座子進(jìn)行了分析,得出德氏乳桿菌中ISL3家族轉(zhuǎn)座子與嗜熱鏈球菌中的2類(lèi)轉(zhuǎn)座子的IRs部分相同,嗜熱鏈球菌中2類(lèi)轉(zhuǎn)座子的IRs則幾乎完全相同. 3類(lèi)ISL3家族轉(zhuǎn)座子DRs大小均為8 bp,且是AT豐富區(qū),最保守堿基均為第5位堿基T. 由此推斷出,3類(lèi)轉(zhuǎn)座子中,轉(zhuǎn)座酶之間約30%的相同性,與IRs的部分相同性和對(duì)最保守堿基的識(shí)別有關(guān).

    參考文獻(xiàn):

    [1]""" 文偉, 楊泰, 韋良開(kāi), 等. 德氏乳桿菌的生物學(xué)功能及其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用 [J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2019,31(4):1533-1539.

    WEN W, YANG T, WEI L K, et al. Biological functions of Lactobacillus delbrueckii and its application in animal production [J]. Journal of Animal Nutrition, 2019,31(4):1533-1539.

    [2]""" GOH Y J, GOIN C, O'FLAHERTY S, et al. Specialized adaptation of a lactic acid bacterium to the milk environment: the comparative genomics of Streptococcus thermophilus LMD-9 [J]. Microbial Cell Factories, 2011,10:1-22.

    [3]""" DOBRINDT U, HOCHHUT B, HENTSCHEL U, et al. Genomic islands in pathogenic and environmental microorganisms [J]. Nature Reviews Microbiology, 2004,2(5):414-424.

    [4]""" CATHERINE G, PHAN T N L, MICHAEL C, et al. Detection and characterization of transposons in bacteria [J]. Methods in Molecular Biology, 2020,2075:81-90.

    [5]""" PUTEROVá J, MARTINEK T. DigIS: towards detecting distant and putative novel insertion sequence elements in prokaryotic genomes [J]. BMC Bioinformatics, 2021,22(1):258.

    [6]""" VANDECRAEN J, CHANDLER M, AERTSEN A, et al. The impact of insertion sequences on bacterial genome plasticity and adaptability [J]. Critical Reviews in Microbiology, 2017,43(6):709-730.

    [7]""" MAHILLON J, CHANDLER M. Insertion sequences [J]. Microbiology and Molecular Biology Reviews, 1998,62(3):725-774.

    [8]""" SIGUIER P, GOURBEYRE E, CHANDLER M. Bacterial insertion sequences: their genomic impact and diversity [J]. FEMS Microbiology Reviews, 2014,38(5):865-891.

    [9]""" BENDER J, KLECKNER N. Tn10 insertion specificity is strongly dependent upon sequences immediately adjacent to the target-site consensus sequence [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1992,89(17):7996-8000.

    [10]" HU W Y, DERBYSHIRE K M. Target choice and orientation preference of the insertion sequence IS903 [J]. Journal of Bacteriology, 1998,180(12):3039-3048.

    [11]" SIGUIER P, PEROCHON J, LESTRADE L, et al. ISfinder: the reference centre for bacterial insertion sequences [J]. Nucleic Acids Research, 2006,34:32-36.

    [12]" KICHENARADIA P, SIGUIER P, PEROCHON J, et al. ISbrowser: an extension of ISfinder for visualizing insertion sequences in prokaryotic genomes [J]. Nucleic Acids Research, 2010,38:62-68.

    [13]" BISWAS A, GAUTNIER DT, RANJAN D, et al. ISQuest: fnding insertion sequences in prokaryotic sequence fragment data [J]. Bioinformatics, 2015,31(21):3406-3412.

    [14]" TREEPONG P, GUYEUX C, MEUNIER A, et al. PanISa: ab initio detection of insertion sequences in bacterial genomes from short read sequence data [J]. Bioinformatics, 2018,34(22):3795-3800.

    [15]" SIGUIER P, FILEE J, CHANDLER M. Insertion sequences in prokaryotic genomes [J]. Current Opinion in Microbiology, 2006,9(5):526-531.

    [16]" HERVE-JIMENEZ L, GUILLOUARD I, GUEDON E, et al. Physiology of Streptococcus thermophilus during the late stage of milk fermentation with special regard to sulfur amino-acid metabolism [J]. Proteomics, 2008,8(20):4273-4286.

    [17]" GERMOND J E, LAPIERRE L, DELLEY M, et al. A new mobile genetic element in Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus [J]. Molecular and General Genetics, 1995,248(4):407-416.

    [18]" 黃元銘, 李臻鵬, 程倩, 等.河弧菌可移動(dòng)遺傳元件的預(yù)測(cè)與分析 [J]. 疾病監(jiān)測(cè), 2022,37(5):591-597.

    HUANG Y M, LI Z P, CHENG Q, et al. Prediction and analysis of mobile genetic elements in Vibrio fluvialis [J]. Disease Monitoring, 2022,37(5):591-597.

    [19]" MONNET C, PERNOUD S, SEPULCHRE A, et al. Selection and properties of Streptococcus thermophilus mutants deficient in urease [J]. Journal of Dairy Science, 2004,87(6):1634-1640.

    [20]" AJDIC D, MCSHAN W M, MCLAUGHLIN R E, et al. Genome sequence of Streptococcus mutans UA159, a cariogenic dental pathogen [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2002,99(22):14434-14439.

    [21]" FLECHARD M, LUCCHETTI-MIGANEH C, HALLET B, et al. Intensive targeting of regulatory competence genes by transposable elements in streptococci [J]. Molecular Genetics and Genomics, 2019,294(3):531-548.

    [22]" MAKAROVA K, SLESAREV A, WOLF Y, et al. Comparative genomics of the lactic acid bacteria [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2006,103(42):15611-15616.

    (責(zé)任編輯:顧浩然)

    猜你喜歡
    轉(zhuǎn)座子拷貝陰性菌
    2020年全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)報(bào)告(簡(jiǎn)要版)
    毛竹Mariner-like element自主轉(zhuǎn)座子的鑒定與生物信息學(xué)分析*
    地熊蜂基因組中具有潛在活性的轉(zhuǎn)座子鑒定
    中國(guó)生殖健康(2018年1期)2018-11-06 07:14:38
    更 正
    超市手推車(chē)比廁所門(mén)把手臟
    花葉矢竹轉(zhuǎn)錄組中的轉(zhuǎn)座子表達(dá)分析
    Tn7轉(zhuǎn)座子在大腸桿菌、遲鈍愛(ài)德華氏菌及鰻弧菌中的應(yīng)用
    快速檢測(cè)方法篩查糞便中產(chǎn)ESBLs革蘭陰性菌調(diào)查
    文件拷貝誰(shuí)最“給力”
    国产精品国产三级专区第一集| 丝袜美腿在线中文| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲国产成人一精品久久久| 黄色一级大片看看| 中文欧美无线码| 国产成人精品婷婷| 成人av在线播放网站| 别揉我奶头 嗯啊视频| 丝袜喷水一区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美日韩综合久久久久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久精品久久精品一区二区三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲精品色激情综合| 久久久久久久国产电影| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩制服骚丝袜av| 一级a做视频免费观看| 一个人免费在线观看电影| 亚洲精品影视一区二区三区av| 一本一本综合久久| 亚洲成人一二三区av| 观看免费一级毛片| 91狼人影院| 人妻少妇偷人精品九色| 免费av毛片视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 九色成人免费人妻av| 欧美日本视频| 国产精品三级大全| a级一级毛片免费在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 大陆偷拍与自拍| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久99精品国语久久久| 观看免费一级毛片| 亚洲av免费在线观看| 国产一区二区三区av在线| 国产 一区精品| 婷婷色综合大香蕉| 中文欧美无线码| 91av网一区二区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久精品国产自在天天线| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 色综合色国产| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产高清有码在线观看视频| 国产午夜福利久久久久久| 99久国产av精品| 国产精品人妻久久久影院| 伦精品一区二区三区| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 男女边吃奶边做爰视频| 大片免费播放器 马上看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 中文天堂在线官网| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 色哟哟·www| 国产黄片美女视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 美女黄网站色视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 九九在线视频观看精品| 午夜免费观看性视频| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 免费大片黄手机在线观看| 三级经典国产精品| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲av中文av极速乱| 国产乱人视频| 大话2 男鬼变身卡| 国产一级毛片在线| 日韩强制内射视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日本与韩国留学比较| 亚洲自偷自拍三级| 免费观看无遮挡的男女| 精品一区二区三区视频在线| 久久精品国产亚洲av天美| 国产亚洲精品av在线| av.在线天堂| 精品国产三级普通话版| 日日撸夜夜添| 天堂中文最新版在线下载 | 秋霞在线观看毛片| 国产乱来视频区| 中文在线观看免费www的网站| 精品一区二区三卡| 欧美日本视频| 欧美日韩综合久久久久久| 中文天堂在线官网| 26uuu在线亚洲综合色| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 欧美成人午夜免费资源| 国产精品久久久久久久久免| 国产人妻一区二区三区在| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产一级毛片在线| 久久久久性生活片| 国产淫片久久久久久久久| 最近手机中文字幕大全| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 69av精品久久久久久| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲综合色惰| 老司机影院毛片| 精品久久久噜噜| 色5月婷婷丁香| 久久99热6这里只有精品| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 午夜爱爱视频在线播放| 亚洲人与动物交配视频| 午夜激情福利司机影院| 久久草成人影院| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品.久久久| 22中文网久久字幕| 亚洲av成人精品一二三区| 搡老乐熟女国产| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 少妇的逼好多水| 人妻系列 视频| 久久鲁丝午夜福利片| 色综合亚洲欧美另类图片| 免费观看的影片在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲av成人精品一二三区| 大香蕉97超碰在线| 欧美高清成人免费视频www| 美女主播在线视频| av国产久精品久网站免费入址| 天堂网av新在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲天堂国产精品一区在线| 免费高清在线观看视频在线观看| videossex国产| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产极品天堂在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品人妻久久久久久| av免费观看日本| 插阴视频在线观看视频| kizo精华| 色吧在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 黄色配什么色好看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲最大成人中文| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美一区二区亚洲| 国产一区有黄有色的免费视频 | 久久久久九九精品影院| 国产探花极品一区二区| 2018国产大陆天天弄谢| 日本三级黄在线观看| 国产高潮美女av| 搡老乐熟女国产| 高清毛片免费看| 91久久精品电影网| 国产精品久久视频播放| 欧美日本视频| 在线免费观看的www视频| 三级毛片av免费| 国产精品.久久久| 少妇的逼好多水| 如何舔出高潮| 三级国产精品欧美在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产色婷婷99| 久久国产乱子免费精品| 成人av在线播放网站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日韩欧美三级三区| 免费看日本二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲av电影不卡..在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 国产视频首页在线观看| 国产乱来视频区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 婷婷色综合www| av在线亚洲专区| av免费在线看不卡| 国产精品久久久久久久久免| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 69av精品久久久久久| 国产淫语在线视频| 精品久久久久久电影网| 成人二区视频| 亚洲精品视频女| 亚洲高清免费不卡视频| 特级一级黄色大片| 夫妻午夜视频| 丝袜喷水一区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 舔av片在线| 亚洲av在线观看美女高潮| 精品人妻偷拍中文字幕| 美女cb高潮喷水在线观看| 91狼人影院| 亚洲精品色激情综合| 国产精品伦人一区二区| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜亚洲福利在线播放| 18+在线观看网站| 色吧在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| freevideosex欧美| 成人av在线播放网站| 网址你懂的国产日韩在线| 久久精品综合一区二区三区| 丝袜喷水一区| 亚洲国产av新网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲真实伦在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 十八禁网站网址无遮挡 | 天天一区二区日本电影三级| 亚洲最大成人av| 真实男女啪啪啪动态图| 大香蕉97超碰在线| 国产高清不卡午夜福利| 免费观看无遮挡的男女| 欧美+日韩+精品| 床上黄色一级片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美成人一区二区免费高清观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 精品久久国产蜜桃| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 最近2019中文字幕mv第一页| 1000部很黄的大片| 亚洲最大成人手机在线| 精品不卡国产一区二区三区| 毛片一级片免费看久久久久| 十八禁网站网址无遮挡 | 女人久久www免费人成看片| 国产av不卡久久| 国产亚洲一区二区精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美zozozo另类| 在线免费观看不下载黄p国产| 看黄色毛片网站| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 一边亲一边摸免费视频| 国产淫片久久久久久久久| 免费少妇av软件| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 99久久人妻综合| 在线播放无遮挡| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 大片免费播放器 马上看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲精品国产成人久久av| 免费看av在线观看网站| 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美成人精品欧美一级黄| 网址你懂的国产日韩在线| 亚州av有码| 一级黄片播放器| 看免费成人av毛片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 人妻系列 视频| 亚洲色图av天堂| 日韩av免费高清视频| 能在线免费观看的黄片| 欧美日韩综合久久久久久| 国产av国产精品国产| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 夫妻午夜视频| 中文字幕久久专区| 午夜激情久久久久久久| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲在线自拍视频| 黑人高潮一二区| 国产在线一区二区三区精| av免费观看日本| 国产乱来视频区| 国产永久视频网站| 亚洲精品日本国产第一区| 高清午夜精品一区二区三区| 能在线免费看毛片的网站| 伦理电影大哥的女人| 视频中文字幕在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| a级毛片免费高清观看在线播放| 天堂网av新在线| 国产精品一及| 国产综合懂色| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久精品国产亚洲av天美| 美女主播在线视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 国产久久久一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 国产69精品久久久久777片| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 日本欧美国产在线视频| 久久6这里有精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 亚洲18禁久久av| 99久国产av精品国产电影| 欧美xxxx性猛交bbbb| 色尼玛亚洲综合影院| 免费看光身美女| 日本-黄色视频高清免费观看| 2018国产大陆天天弄谢| 干丝袜人妻中文字幕| 搞女人的毛片| 日韩大片免费观看网站| 国产淫片久久久久久久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 免费看a级黄色片| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 国产成人freesex在线| 国产一区二区在线观看日韩| 成年人午夜在线观看视频 | 日韩中字成人| 精品欧美国产一区二区三| h日本视频在线播放| 成人特级av手机在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 街头女战士在线观看网站| 精品久久久久久久末码| 看黄色毛片网站| 我的女老师完整版在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲欧洲日产国产| 又爽又黄a免费视频| 亚洲真实伦在线观看| 视频中文字幕在线观看| 欧美潮喷喷水| 七月丁香在线播放| 久久久久久久大尺度免费视频| 2022亚洲国产成人精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 热99在线观看视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 床上黄色一级片| 九九爱精品视频在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费在线观看成人毛片| 夫妻性生交免费视频一级片| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲国产成人一精品久久久| 大话2 男鬼变身卡| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产一区二区三区av在线| 99久久精品国产国产毛片| 国产又色又爽无遮挡免| 又大又黄又爽视频免费| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 成人毛片60女人毛片免费| 在线观看免费高清a一片| 久久久欧美国产精品| 国产成人91sexporn| 三级毛片av免费| 欧美区成人在线视频| 中国国产av一级| 日韩视频在线欧美| av又黄又爽大尺度在线免费看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 26uuu在线亚洲综合色| 国产视频内射| 亚洲精品自拍成人| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 91av网一区二区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日本-黄色视频高清免费观看| 国精品久久久久久国模美| 国产午夜精品一二区理论片| 有码 亚洲区| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲av男天堂| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日本色播在线视频| 欧美3d第一页| 国产精品一区二区性色av| 久久综合国产亚洲精品| 国产免费又黄又爽又色| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 青春草国产在线视频| 国产精品一区二区性色av| 一级毛片我不卡| 亚洲最大成人中文| 偷拍熟女少妇极品色| 久久这里有精品视频免费| 七月丁香在线播放| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产乱人视频| 老司机影院成人| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 啦啦啦韩国在线观看视频| av免费在线看不卡| 亚洲不卡免费看| 亚洲欧美精品专区久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 免费观看av网站的网址| 69av精品久久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 在现免费观看毛片| 免费看光身美女| 国国产精品蜜臀av免费| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩欧美 国产精品| 久久精品久久精品一区二区三区| 成年女人在线观看亚洲视频 | 久久精品国产自在天天线| 99久国产av精品国产电影| 少妇高潮的动态图| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美性感艳星| 别揉我奶头 嗯啊视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 精品欧美国产一区二区三| 久久久久久久久久久免费av| 久久6这里有精品| 搞女人的毛片| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美另类一区| 日韩一区二区视频免费看| 久久久国产一区二区| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产黄a三级三级三级人| 免费黄频网站在线观看国产| 精品国产三级普通话版| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 日本免费在线观看一区| 丝袜美腿在线中文| 伦精品一区二区三区| 搡老乐熟女国产| 秋霞伦理黄片| 2018国产大陆天天弄谢| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产成人免费观看mmmm| 国产久久久一区二区三区| eeuss影院久久| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 在线免费十八禁| 精品一区二区三区人妻视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 色5月婷婷丁香| 国产成人91sexporn| 国产在线一区二区三区精| 精品国产三级普通话版| 欧美极品一区二区三区四区| 日本午夜av视频| 国产精品伦人一区二区| 91av网一区二区| 如何舔出高潮| 日韩中字成人| 99久国产av精品| 久久精品国产自在天天线| 欧美 日韩 精品 国产| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日本一本二区三区精品| 免费大片18禁| 日本免费在线观看一区| 久久精品久久久久久久性| 久久久久久伊人网av| 少妇的逼水好多| 在线观看免费高清a一片| 我的老师免费观看完整版| 色视频www国产| 国产精品一及| 中国美白少妇内射xxxbb| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 高清av免费在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲四区av| 国产精品国产三级专区第一集| 国产在线一区二区三区精| 久久久久久久午夜电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 伦理电影大哥的女人| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费观看a级毛片全部| 天堂网av新在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 免费观看在线日韩| 女人被狂操c到高潮| 美女黄网站色视频| 欧美人与善性xxx| 99久久精品国产国产毛片| av播播在线观看一区| 久久久a久久爽久久v久久| 免费大片18禁| 亚洲欧美精品自产自拍| 嘟嘟电影网在线观看| 黑人高潮一二区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩亚洲欧美综合| 日韩中字成人| 日韩欧美一区视频在线观看 | 三级国产精品欧美在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲av成人av| 大香蕉久久网| 久久精品夜色国产| 亚洲综合色惰| 高清视频免费观看一区二区 | 国产av在哪里看| 在线观看人妻少妇| 日本免费a在线| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美 日韩 精品 国产| 九色成人免费人妻av| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 乱系列少妇在线播放| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美变态另类bdsm刘玥| 能在线免费看毛片的网站| 国产精品福利在线免费观看| 99热这里只有是精品50| 两个人视频免费观看高清| 国产爱豆传媒在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 中国国产av一级| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 91精品国产九色| 有码 亚洲区| 欧美最新免费一区二区三区| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 联通29元200g的流量卡| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲av中文av极速乱| 在线观看人妻少妇| 国产黄色小视频在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 99久久人妻综合| 偷拍熟女少妇极品色| 精品一区二区三区人妻视频| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品日韩av在线免费观看| 黄色日韩在线| 久久久久性生活片| xxx大片免费视频| 免费无遮挡裸体视频| 国产乱来视频区| 777米奇影视久久| 成人亚洲精品一区在线观看 | 嫩草影院新地址| 日韩人妻高清精品专区| 国产大屁股一区二区在线视频| 日本免费a在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 成人亚洲精品av一区二区| 淫秽高清视频在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 99热这里只有精品一区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 只有这里有精品99| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 日韩欧美 国产精品| 亚洲精品一区蜜桃| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产av国产精品国产| 国产极品天堂在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 一区二区三区免费毛片| 美女大奶头视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 大香蕉97超碰在线| 婷婷六月久久综合丁香|