• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    篤斯越橘對心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)及UPLC-MS分析

    2023-12-29 00:00:00王化李夢莎何丹嬈王春麗周麗萍
    中國食物與營養(yǎng) 2023年3期

    摘 要:目的:探討篤斯越橘對氧化損傷心肌細(xì)胞的作用。方法:以篤斯越橘果實為原料提取得到粗提物1個,并進(jìn)一步純化得到4個柱層析組分,建立H2O2氧化模型,考察提取物及純化產(chǎn)物對氧化損傷細(xì)胞存活率的影響,并對最優(yōu)組分進(jìn)行成分分析。結(jié)果:篤斯越橘粗提物及4種純化產(chǎn)物均能提高氧化損傷H9c2心肌細(xì)胞的存活率,其中30%乙醇水溶液洗脫組分效果最好,能有效減少ROS和MDA生成,提高SOD活性;對該組分進(jìn)行超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-MS)分析,鑒定出花色苷14種。結(jié)論:篤斯越橘果實提取及純化產(chǎn)物均對H2O2引起的H9c2心肌細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用。

    關(guān)鍵詞:心肌細(xì)胞;氧化損傷;篤斯越橘;超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析;花色苷

    氧化應(yīng)激是缺血性心臟病、心力衰竭、高血壓等諸多病理性心血管損傷的共通機(jī)制,在這些疾病發(fā)生過程中都有過量的活性氧(ROS)產(chǎn)生,大量積累時會引起細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷,致使心肌細(xì)胞凋亡或壞死,而大量心肌細(xì)胞的凋亡和壞死進(jìn)一步加重了疾病的程度[1-4]。減少細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷,降低細(xì)胞凋亡對治療心血管疾病具有重要的意義,采用心肌細(xì)胞作為實驗氧化應(yīng)激對象的研究越來越多[5-6]。作為重要ROS之一,過氧化氫(H2O2)易獲得,性質(zhì)比較穩(wěn)定,極容易穿透細(xì)胞膜,在細(xì)胞內(nèi)與鐵離子經(jīng)反應(yīng)形成具有極高活性的自由基,因而漸漸成為細(xì)胞氧化損傷研究的重要工具[7-9]。

    篤斯越橘(Vaccinium uliginosum )為杜鵑花科越橘屬落葉灌木[10],為我國分布最廣且儲量最大的野生藍(lán)莓。篤斯越橘果實形狀多變,成熟時果皮藍(lán)紫色,有白霜,果肉瑩白多汁,口感細(xì)膩,風(fēng)味酸甜、薄澀,有著悠久的食用歷史及藥用價值[11]。篤斯越橘果實中的花色苷和黃酮等活性成分的含量高于部分常見藍(lán)莓品種,抗氧化能力較強(qiáng)[12-13]。近年來,篤斯越橘因其豐富的活性成分及顯著的功效而受到相關(guān)各領(lǐng)域的關(guān)注和研究。本試驗研究了篤斯越橘果實提取物對H2O2誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,并對其中主要的花色苷成分進(jìn)行LC-MS分析,以期為我國野生藍(lán)莓抗心血管氧化損傷的深入研究及開發(fā)利用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    篤斯越橘,收集于大興安嶺地區(qū)塔河縣;XDA-6樹脂,南開大學(xué)樹脂廠;H9c2心肌細(xì)胞,江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司;DMEM培養(yǎng)基,Gibco公司;CCK-8試劑盒,碧云天生物技術(shù)有限公司;H2O2、抗壞血酸(維生素C)、活性氧檢測試劑盒,Sigma公司;胎牛血清,Gibco公司;胰蛋白酶,北京索萊寶;MDA檢測試劑盒、SOD檢測試劑盒,南京建成生物工程公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    ACQUITY超高效液相色譜(配備2996 PDA檢測器和Quattro Premier質(zhì)譜系統(tǒng)),Waters公司;Bio-Rad680 酶標(biāo)儀,美國Molecular Devices;CO2培養(yǎng)箱,美國Thermo Scientific;CK40倒置顯微鏡(型號IX51),Olympus公司;cytation 5高內(nèi)涵細(xì)胞成像分析系統(tǒng),美國BioTek公司;無菌操作臺,上海BOXUN;BS210S電子天平,北京Sartorious有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 提取方法 采用超聲波輔助提取工藝提取,提取液為體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇,料液比為1∶10(W1∶V)、提取溫度設(shè)定40 ℃、提取時間30 min,提取2次,合并提取液。提取液48 ℃減壓濃縮后凍干得到篤斯越橘花色苷粗提物,標(biāo)記為D0。

    1.3.2 純化方法 采用柱層析法對篤斯越橘提取物進(jìn)行分離純化,通過固定相介質(zhì)篩選和流動相介質(zhì)優(yōu)化,確定了分離的固定相介質(zhì)為XDA-6型介質(zhì),依次以蒸餾水、10%乙醇水溶液、30%乙醇水溶液、50%乙醇水溶液、70%乙醇水溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫,收集不同濃度乙醇洗脫液,得到4個分離純化組分,分別標(biāo)記為D1(篤斯越橘10%乙醇洗脫物)、D2(篤斯越橘30%乙醇洗脫物)、D3(篤斯越橘50%乙醇洗脫物)、D4(篤斯越橘70%乙醇洗脫物)。

    1.3.3 H2O2損傷模型建立 試驗時選擇生長狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞,計數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度約5×103 個/mL,接種于96孔板內(nèi),0.1 mL/孔,CO2培養(yǎng)箱設(shè)定為37 ℃、CO2濃度5%,培養(yǎng)24 h。H2O2用DMEM培養(yǎng)基(無血清)稀釋配制成50、100、200、400、800 μmol/L濃度梯度處理液,分別處理H9c2細(xì)胞1、2、3、4、5、6 h,每組6個重復(fù)。處理結(jié)束按照CCK-8試劑盒說明書操作檢測細(xì)胞存活率。

    1.3.4 篤斯越橘提取物最佳濃度選擇 實驗時選擇生長狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞接種于96孔板內(nèi),培養(yǎng)24 h,每孔給予不同濃度的篤斯越橘提取物(0、0.1、1.0、10、50、100、200、300、400、500、1 000 mg/L)預(yù)處理1 h后,加入H2O2(400 μmol/L)處理2 h,加入CCK-8測試液,酶標(biāo)儀于450 nm測定OD值,計算細(xì)胞相對存活率,每組6個重復(fù)。

    1.3.5 篤斯越橘提取物處理時間選取 選擇生長狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞接種于96孔板內(nèi),培養(yǎng)24 h,篤斯越橘提取物培養(yǎng)不同時間(0、1、2、4、12、24 h)后加入H2O2(400 μmol/L)處理2 h,加入CCK-8測試液,450 nm測定OD值,計算細(xì)胞相對存活率,每組6個重復(fù)。

    1.3.6 不同篤斯越橘提取物純化組分對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用 選擇生長狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞接種于96孔板內(nèi),培養(yǎng)24 h,分別加入5種不同篤斯越橘提取物純化組分(D0、D1、D2、D3、D4)和維生素C溶液,培養(yǎng)2 h后加入H2O2(400 μmol/L)處理2 h,加入CCK-8測試液,450 nm測定OD值,計算細(xì)胞相對存活率,每組6個重復(fù)。

    1.3.7 H9c2心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測 選取生長狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中,在培養(yǎng)箱中生長24 h。加入相同濃度(100 mg/L)不同溶液處理,分別標(biāo)記為DH(篤斯越橘提取物D2純化物組)、VH(維生素C組)、CK(空白對照組)、Model(H2O2模型組)。培養(yǎng)心肌細(xì)胞2 h,加入H2O2濃度400 μmol/L,損傷處理2 h,用無血清DMEM稀釋DFCH-DA濃度到10 μmol/L,干預(yù)結(jié)束后,在每孔加入1 mL,繼續(xù)在培養(yǎng)箱培養(yǎng)30 min,再用無血清DMEM培養(yǎng)液洗3次,高內(nèi)涵細(xì)胞成像系統(tǒng)分析,每組3個重復(fù)。

    1.3.8 H9c2心肌細(xì)胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定 將細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中,在培養(yǎng)箱中生長24 h。各組處理方法同1.3.7,取處理后細(xì)胞按照MDA和SOD檢測試劑盒說明書操作進(jìn)行測定,每組3個重復(fù)。

    1.3.9 UPLC-MS分析條件 ACQUITY超高效液相色譜,Aeris PEPTTDE XB-C18 色譜柱 (150 × 4.60 mm,3.6 μm,Torrance,CA);流動相A為乙腈,流動相B為5%甲酸水溶液,梯度洗脫(0 min,5% A;2 min,7% A;10 min,7% A;20 min,15% A;30 min,80% A;35min,80% A;40 min,5% A);檢測波長為520 nm;流速1.0 mL/min;柱溫為40 ℃;進(jìn)樣10 μL。正離子模式,掃描m/z 100和1 000之間的離子;毛細(xì)管電壓0.6 kV;錐孔電壓30 V;離子源溫度120 ℃;脫溶劑氣溫度350 ℃。

    1.3.10 統(tǒng)計學(xué)分析 采用統(tǒng)計軟件 SPSS 17.0進(jìn)行組間單因素方差分析,并進(jìn)行t檢驗,以P<0.05為差異顯著用不同字母標(biāo)記,利用R版本4.1.2加載數(shù)據(jù)包ggplot2進(jìn)行繪圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 H2O2濃度和處理時間對心肌細(xì)胞存活率的影響

    通過外源H2O2引起細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生活性氧,造成氧化應(yīng)激損傷模型。試驗結(jié)果顯示,不同濃度H2O2對H9c2心肌細(xì)胞的相對存活率影響不同。隨著H2O2濃度升高,細(xì)胞相對存活率降低;400 μmol/L和800 μmol/L濃度下細(xì)胞相對存活率隨時間延長而降低。在H2O2 濃度為400 μmol/L時處理2~3 h,心肌細(xì)胞存活率達(dá)到了(49.98±2.33)%,接近50%,表明400 μmol/L的H2O2能誘導(dǎo)適當(dāng)氧化應(yīng)激損傷及細(xì)胞活力,模型穩(wěn)定、易重復(fù),作為試驗中的損傷模型使用(圖1)。

    2.2 篤斯越橘提取物濃度和培養(yǎng)時間對心肌細(xì)胞存活率的影響

    圖2為不同濃度篤斯越橘提取物對400 μmol/L H2O2氧化損傷處理心肌細(xì)胞存活率的影響。0.1、1、10 mg/L這3個濃度與單純加入H2O2組細(xì)胞存活率(50.15%)無顯著差異,而50~500 mg/L篤斯越橘提取物處理過的心肌細(xì)胞能顯著改善H2O2對細(xì)胞存活率造成的影響,存活率最高提高至67.89%。濃度為1 000 mg/L時,心肌細(xì)胞的存活率也與H2O2組達(dá)到顯著性差異,降低至40.54%,表明高濃度篤斯越橘提取物不利于心肌細(xì)胞生存。提取物預(yù)處理濃度范圍100~300 mg/L效果最好,均可極顯著降低H2O2誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷,各組間差異不顯著,進(jìn)一步分組試驗中取100 mg/L作為提取物試驗濃度。

    如圖3所示,加入篤斯越橘提取物培養(yǎng)0~24 h均對心肌細(xì)胞氧化損傷有較好的保護(hù)作用。各時間分組均與H2O2模型組差異顯著,效果最好為培養(yǎng)時間2 h組,細(xì)胞存活率63.79%,與H2O2組相比死亡抑制率達(dá)到35.41%,為篤斯越橘提取物培養(yǎng)心肌細(xì)胞最佳試驗時間。

    2.3 篤斯越橘花色苷對心肌細(xì)胞保護(hù)作用

    如圖4所示,篤斯越橘各組分及維生素C均有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用,細(xì)胞存活率與H2O2模型組比均達(dá)到差異顯著。篤斯越橘中的D2組分表現(xiàn)最好,細(xì)胞存活率為70.17%,與H2O2組相比死亡抑制率達(dá)到37.62%。其次為D3組,細(xì)胞存活率為65.16%,與H2O2組相比死亡抑制率為27.79%。篤斯越橘粗提物D0組的保護(hù)作用最低,與H2O2組相比死亡抑制率僅為6.63%。

    常用氧化應(yīng)激化學(xué)誘導(dǎo)劑H2O2能引起細(xì)胞明顯的氧化損傷。在本研究中,H2O2濃度為400 μmol/L時處理H9c2心肌細(xì)胞2 h,細(xì)胞相對存活率在50%左右,表明該氧化應(yīng)激細(xì)胞損傷模型成功,結(jié)果與Chen等[14-15]的研究結(jié)果相一致。近年來研究發(fā)現(xiàn),花色苷對細(xì)胞氧化損傷具有較好的保護(hù)作用,李亞巍等[16]發(fā)現(xiàn),藍(lán)莓花色苷對H2O2所致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有明顯的保護(hù)作用;劉迪等[17]研究表明,矢車菊素-3-O-葡萄糖苷對人胚腎HEK-293細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用,細(xì)胞活性顯著提高,與本試驗結(jié)果一致。本試驗結(jié)果顯示,富含花色苷的篤斯越橘提取物處于低濃度(0.1~10 mg/L)時對H9c2細(xì)胞活性無明顯影響,而50~500 mg/L篤斯越橘提取物對H2O2誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞活性的降低均有顯著的改善作用。

    2.4 篤斯越橘提取物處理可減少H2O2誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞ROS生成

    通過DCFH-DA探針檢測確定經(jīng)由篤斯越橘提取物D2預(yù)處理對H9c2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激ROS水平的影響,如圖5所示,顯微鏡下呈現(xiàn)綠色熒光為ROS,與CK組相比,H2O2模型組心肌細(xì)胞中釋放ROS顯著增多(Plt;0.01),DH、VH組則較H2O2組的ROS釋放顯著降低。H2O2組心肌細(xì)胞中熒光強(qiáng)度(417.6±30.7)比CK組增強(qiáng)了456.9%,而DH、VH組的熒光強(qiáng)度則下降為(139.3±16.2)、(142.7±22.1),比H2O2組分別降低了66.64%、65.84%?;钚匝跏菣C(jī)體正常的代謝產(chǎn)物,生物體內(nèi)氧化過程中總是伴隨著ROS的釋放。其存在具有兩面性:低含量的ROS對機(jī)體具有一定的積極生理作用,殺菌、解毒、細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因活性誘導(dǎo)、刺激生長、分裂和細(xì)胞凋亡等;大量的ROS則會對機(jī)體造成損傷[18]。DCF熒光探針法是通過DCFH-DA進(jìn)入細(xì)胞膜后水解,被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化生成有熒光的DCF。綠色熒光強(qiáng)度與ROS的水平成正比,根據(jù)熒光信號強(qiáng)度可分析ROS的水平。結(jié)果表明,篤斯越桔提取物D2和維生素C均能有效清除心肌細(xì)胞內(nèi)的活性氧,降低H2O2帶來的氧化損傷。

    2.5 篤斯越橘提取物處理對H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD活性影響

    MDA為生物體內(nèi)脂質(zhì)物質(zhì)受自由基氧化生成的最終氧化產(chǎn)物。ROS極易氧化細(xì)胞膜中不飽和脂肪酸而形成脂質(zhì)自由基,引發(fā)脂質(zhì)過氧化,導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷,引起MDA水平升高,因此MDA水平直接反映了細(xì)胞膜受到自由基氧化損傷的嚴(yán)重程度。由圖6 a可見,H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激模型組MDA水平與對照組相比顯著上升(Plt;0.01),表明H2O2模型組的心肌細(xì)胞受刺激后細(xì)胞膜出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷;與H2O2組相比,篤斯越橘提取物和維生素C均能顯著抑制氧化應(yīng)激細(xì)胞中的MDA含量,表明維生素C、篤斯越桔提取物具有對抗ROS引發(fā)的脂質(zhì)氧化的作用,能有效減輕氧化應(yīng)激對機(jī)體損傷的活性。

    抗氧化酶系在機(jī)體的抗氧化及維護(hù)氧化應(yīng)激動態(tài)平衡中發(fā)揮著重要作用。SOD可催化過氧陰離子產(chǎn)生歧化反應(yīng)清除自由基,因此SOD的活力能間接反映H9c2心肌細(xì)胞清除自由基能力的強(qiáng)弱。如圖6 b所示,與對照組相比,H2O2組細(xì)胞中SOD活性顯著下降,表明模型組的H2O2破壞了H9c2細(xì)胞的氧化動態(tài)調(diào)節(jié)平衡能力,細(xì)胞自身抗氧化代謝調(diào)控能力不足以應(yīng)付外界刺激,細(xì)胞受到嚴(yán)重的氧化應(yīng)激損傷;加入篤斯越橘提取物和維生素C的處理組與H2O2組相比SOD酶活性均顯著提高,分別提高68.21%、76.07%,兩者差異不顯著,表明兩種抗氧化活性成分均能減輕H2O2對細(xì)胞SOD抗氧化酶的破壞,減輕氧化應(yīng)激損傷及提高對外界氧化應(yīng)激的調(diào)控能力。

    2.6 UPLC-MS分析

    篤斯越橘提取物D2組分檢測得到質(zhì)譜數(shù)據(jù)(圖7、附表),結(jié)合文獻(xiàn)[19-21]分析共鑒定出花色苷14種,其中飛燕草素-3-葡萄糖苷(22.92%)、錦葵素-3-葡萄糖苷(18.38%)、矮牽牛素-3-葡萄糖苷(14.48%)含量較高。綜合分析,飛燕草素類花色苷占37.74%、矢車菊素類花色苷占9.4%、矮牽牛素類花色苷占17.18%、芍藥素類花色苷占2.07%、錦葵素類花色苷占21.38%。

    3 結(jié)論

    本試驗利用心肌細(xì)胞氧化損傷模型,研究篤斯越橘提取物及其純化物對氧化損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用,結(jié)果表明,篤斯越橘果實提取物及4個純化物均對H2O2引起的H9c2心肌細(xì)胞氧化損傷有一定的保護(hù)作用,其中純化物D2組分表現(xiàn)最好,細(xì)胞存活率為(70.17±3.34)%,與H2O2組相比死亡抑制率達(dá)到37.62%,具有非常好的抗心肌氧化損傷作用,能夠有效減少細(xì)胞ROS產(chǎn)生,提高SOD活性,降低MDA生成,可以進(jìn)一步研究開發(fā)為相關(guān)醫(yī)療保健產(chǎn)品。對D2組分進(jìn)行UPLC-MS分析,鑒定出花色苷14種,其中飛燕草素-3-葡萄糖苷、錦葵素-3-葡萄糖苷和矮牽牛素-3-葡萄糖苷含量較高,是篤斯越橘提取物抗氧化損傷作用中重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn)

    [1]Anchez-Flores M,Marcos-Perez D,Costa S,et al.Oxidative stress,genomic features and DNA repair in frail elderly:a systematic review[J].Ageing Res Rev,2017(37):1-15.

    [2]田野.活性氧在急性心肌梗死心肌再灌注損傷中的作用和機(jī)制[J].臨床心血管病雜志,2017,33(7):611-614.

    [3]陳興宇,孫樂,李艷,等.ROS介導(dǎo)的自噬在心血管疾病中的作用[J].心臟雜志,2019,31(2):207-211.

    [4]Cadenas S.ROS and redox signaling in myocardial ischemiareperfusion injury and cardioprotection[J].Free Radic Biol Med,2018(117):76-89.

    [5]羅丹,李玉慈.槲皮黃酮對高糖誘導(dǎo)的心肌H9c2細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的抑制作用[J].中國藥師,2021,24(6):1075-1079.

    [6]賈增芹,杜勝利,荀志紅,等.穩(wěn)心顆粒對心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡損傷的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2020,29(22):2405-2410.

    [7]MAO C,Lu H,Kong N,et al.Levocarnitine protects H9c2 rat cardiomyocytes from H2O2-induced mitochondrial dysfunction and apoptosis[J].Int J Med Sci,2013,11(11):1107-1115.

    [8]厲新新,劉麗娟,陳寶石,等.銀杏內(nèi)酯B 對H2O2誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J].眼科新進(jìn)展,2016,36(9):822-825.

    [9]Peng X,Hu T,Zhang Y,et al.Synthesis of caffeic acid sulfonamide derivatives and their protective effect against H2O2 induced oxidative damage in A549 cells[J].RSC Advances,2020,10(17):9924-9933.

    [10]宗長玲,鄧萌,宗成文,等.篤斯越橘研究進(jìn)展[J].北方園藝,2011(12):173-176.

    [11]蘇上,王麗金,吳杰,等.篤斯越橘化學(xué)成分及其功能活性的研究進(jìn)展[J].植物學(xué)報,2016,51(5):691-704.

    [12]Hkkinen SH,Trrnen AR.Content of flavonols and selected phenolic acids in strawberries and Vaccinium species:influence of cultivar,cultivation site and technique[J].Food Res Int,2000,33(6):517-524.

    [13]Taruscio TG,Barney DL,Exon J.Content and profile of flavanoid and phenolic acid compounds in conjunction with the antioxidant capacity for a variety of northwest Vaccinium berries[J].J Agric Food Chem,2004,52(10):3169-3176.

    [14]Chen L,Xin X,Yuan Q,et al.Phytochemical properties and antioxidant capacities of various colored berries[J]. J Sci Food Agric,2014(94):180-188.

    [15]薛晉紅.橙皮素對H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D].太原:山西醫(yī)科大學(xué),2017.

    [16]李亞巍,昌盛,王黎明,等.藍(lán)莓花色苷對過氧化氫所致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2016,27(8):1830-1831.

    [17]劉迪,孫宏宇,時文艷,等.矢車菊素-3-O-葡萄糖苷對H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J].食品工業(yè)科技,2019(6):273-278.

    [18]邊云飛.氧化應(yīng)激與心血管疾?。跰].北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社,2012.

    [19]Li R,Wang P,Guo Q,et al.Anthocyanin composition and content of the Vaccinium uliginosum berry[J]. Food Chem,2011(125):116-120.

    [20]Wang E,Yin Y,Xu C,et al.Isolation of high-purity anthocyanin mixtures and monomers from blueberries using combined chromatographic techniques[J]. J Chromatogr A,2014(1327):39-48.

    [21]Ancillotti C,Ciofi L,Pucci D.Polyphenolic profiles and antioxidant and antiradical activity of Italian berries from Vaccinium myrtillus L.and Vaccinium uliginosum L.subsp.gaultherioides (Bigelow)S.B.Young [J]. Food Chemistry,2016,(204):176-184.

    Protective Effects of Vaccinium uliginosum on Hydrogen Peroxide-induced Cellular Oxidative Stress Injury in Cardiomyocytes and UPLC-MS Analysis

    WANG Hua1,LI Meng-sha1,HE Dan-rao1,WANG Chun-li2,ZHOU Li-ping1

    (1Institute of Natural Resources and Ecology,Heilongjiang Academy of Sciences/Sino-Finnish Center for Berry Research and Technology,Harbin 150040,China;2 Harbin Examing and Inspection Center for Products Quality,Harbin 150030,China)

    Abstract:Objective To investigate the effect of Vaccinium uliginosum "on oxidative damage of cardiomyocytes.Method One crude extract was extracted from the fruit and further four column chromatographic components were obtained.An H2O2 oxidation model was established to investigate the effects of the extract and purified products on the survival rate of oxidative damage cells,and the optimal components were analyzed.Result The extract of Vaccinium uliginosum "fruit and four column chromatography purified products can improve the survival rate of H9c2 cardiomyocytes.Among them,30% ethanol aqueous solution has the best effect,which can effectively reduce the production of ROS and MDA and improve the activity of SOD.By UPLC-MS analysis,14 kinds of anthocyanins were identified.Conclusion The extract of Vaccinium uliginosum "fruit and four column chromatography purified products have protective effects on the oxidative damage of H9c2 cardiomyocytes caused by H2O2.

    Keywords:cardiomyocytes;oxidative damage; Vaccinium uliginosum ;UPLC-MS;anthocyanin

    基金項目:黑龍江省自然科學(xué)基金聯(lián)合引導(dǎo)項目(項目編號:LH2019C078);黑龍江省院所基本應(yīng)用技術(shù)研究專項項目(項目編號:ZNBZ2020ZR02);黑龍江省科學(xué)院國際合作項目(項目編號:GH2021-ZR01)。

    作者簡介:王 化(1981— ),女,博士,副研究員,研究方向:植物天然產(chǎn)物。

    通信作者:周麗萍(1976— ),女,博士,副研究員,研究方向:植物天然產(chǎn)物。

    在线a可以看的网站| 身体一侧抽搐| 91狼人影院| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 看免费成人av毛片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日韩三级伦理在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲av成人av| 国产男人的电影天堂91| 99在线人妻在线中文字幕| 97在线视频观看| 一区二区三区免费毛片| 夜夜爽天天搞| 国模一区二区三区四区视频| 午夜老司机福利剧场| 插阴视频在线观看视频| 亚洲国产色片| 久久久色成人| 国产日本99.免费观看| 久久精品国产亚洲网站| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产探花极品一区二区| 色噜噜av男人的天堂激情| or卡值多少钱| 久久久久性生活片| 国产亚洲精品av在线| 欧美一区二区精品小视频在线| 五月玫瑰六月丁香| 久久久久网色| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲成人久久性| 成人国产麻豆网| 亚洲av熟女| 国产精品伦人一区二区| 岛国毛片在线播放| 美女大奶头视频| 一级二级三级毛片免费看| 午夜激情欧美在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久久久久久午夜电影| 在线免费十八禁| 又爽又黄a免费视频| 久久人妻av系列| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产黄a三级三级三级人| 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲精品色激情综合| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 黑人高潮一二区| 听说在线观看完整版免费高清| а√天堂www在线а√下载| 成人午夜高清在线视频| 日韩高清综合在线| 久久久久网色| 男人狂女人下面高潮的视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 少妇的逼水好多| 欧美激情国产日韩精品一区| 我的老师免费观看完整版| 婷婷色综合大香蕉| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 日本爱情动作片www.在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日韩制服骚丝袜av| 欧美+日韩+精品| 欧美高清成人免费视频www| 九九在线视频观看精品| 精品国产三级普通话版| 中国国产av一级| 午夜爱爱视频在线播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产午夜精品论理片| 日韩欧美 国产精品| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲精品色激情综合| 好男人视频免费观看在线| 91精品国产九色| 成人午夜精彩视频在线观看| 插逼视频在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 真实男女啪啪啪动态图| 成人永久免费在线观看视频| 国产老妇女一区| 久久精品国产自在天天线| 成人国产麻豆网| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久久久大精品| 六月丁香七月| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲三级黄色毛片| 黄色配什么色好看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 99久久中文字幕三级久久日本| 国产一区二区激情短视频| av视频在线观看入口| 九九爱精品视频在线观看| 黄色日韩在线| 国产黄a三级三级三级人| 午夜激情欧美在线| 伦理电影大哥的女人| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 六月丁香七月| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久精品人妻少妇| 一区二区三区四区激情视频 | 久久精品影院6| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩成人伦理影院| 少妇丰满av| 一区二区三区免费毛片| 麻豆一二三区av精品| 最好的美女福利视频网| 美女内射精品一级片tv| 可以在线观看毛片的网站| 波多野结衣高清无吗| 一级二级三级毛片免费看| 国产精品蜜桃在线观看 | 欧美日韩乱码在线| 高清在线视频一区二区三区 | 村上凉子中文字幕在线| 亚洲高清免费不卡视频| 国产精品野战在线观看| 久久人人精品亚洲av| 免费人成视频x8x8入口观看| 成人综合一区亚洲| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲欧美清纯卡通| 尾随美女入室| 久久久久久伊人网av| 老司机影院成人| 日韩欧美在线乱码| 久久精品国产清高在天天线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产伦理片在线播放av一区 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产免费男女视频| 亚洲自偷自拍三级| 国产成人aa在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 日韩视频在线欧美| 一区二区三区高清视频在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产色爽女视频免费观看| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲av一区综合| 亚洲第一电影网av| 国产三级中文精品| 97热精品久久久久久| 午夜激情福利司机影院| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲最大成人av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产午夜福利久久久久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 三级毛片av免费| 午夜激情福利司机影院| 色尼玛亚洲综合影院| 麻豆成人av视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 长腿黑丝高跟| 午夜福利在线观看吧| 精品无人区乱码1区二区| 精品久久久噜噜| 少妇熟女aⅴ在线视频| 男人舔奶头视频| 国产精品人妻久久久影院| 1024手机看黄色片| 国产激情偷乱视频一区二区| 精品熟女少妇av免费看| 久久久久久伊人网av| 免费看美女性在线毛片视频| 国产人妻一区二区三区在| 老女人水多毛片| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产不卡一卡二| а√天堂www在线а√下载| 热99re8久久精品国产| 欧美变态另类bdsm刘玥| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 欧美色视频一区免费| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久99久视频精品免费| 尾随美女入室| 国产 一区精品| 婷婷精品国产亚洲av| 成人三级黄色视频| 成人无遮挡网站| 国产色爽女视频免费观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 亚洲精品亚洲一区二区| av国产免费在线观看| 青青草视频在线视频观看| 国产中年淑女户外野战色| 赤兔流量卡办理| 欧美一区二区精品小视频在线| 天堂√8在线中文| 久久久国产成人免费| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 欧美性感艳星| 女人被狂操c到高潮| 少妇高潮的动态图| 成人国产麻豆网| 能在线免费看毛片的网站| 一本精品99久久精品77| 久久久久久久久久成人| 成人二区视频| 中文字幕av在线有码专区| 成年女人看的毛片在线观看| 99久久精品热视频| 国产精品久久久久久av不卡| 日韩亚洲欧美综合| 51国产日韩欧美| 欧美成人精品欧美一级黄| 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 婷婷亚洲欧美| 成年女人看的毛片在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久精品国产清高在天天线| 性色avwww在线观看| 免费看日本二区| 少妇高潮的动态图| 草草在线视频免费看| 日韩欧美精品免费久久| 精品久久久噜噜| 精品人妻偷拍中文字幕| 丰满乱子伦码专区| 热99re8久久精品国产| 久久久欧美国产精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久99久视频精品免费| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久人人精品亚洲av| 免费看美女性在线毛片视频| 熟女人妻精品中文字幕| av专区在线播放| 神马国产精品三级电影在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 成人亚洲精品av一区二区| 波野结衣二区三区在线| 久久久久久久午夜电影| 日韩一区二区三区影片| 国产伦理片在线播放av一区 | 中国国产av一级| 中出人妻视频一区二区| 国产精品一区二区在线观看99 | 久久久国产成人精品二区| 亚洲无线观看免费| 在线观看av片永久免费下载| 中文欧美无线码| 国产男人的电影天堂91| 久久人人爽人人片av| av天堂中文字幕网| 哪里可以看免费的av片| 久久午夜福利片| 一本精品99久久精品77| 97超碰精品成人国产| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| av在线播放精品| 免费观看精品视频网站| 免费观看a级毛片全部| 久久国内精品自在自线图片| kizo精华| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 嘟嘟电影网在线观看| 免费av不卡在线播放| 亚洲av成人av| 午夜福利成人在线免费观看| 日韩欧美 国产精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 日本一本二区三区精品| 男人舔奶头视频| 亚洲av熟女| 精品久久久久久久久久免费视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 免费看日本二区| 全区人妻精品视频| 日韩强制内射视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲中文字幕日韩| 免费观看人在逋| 欧美成人免费av一区二区三区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 久久精品夜色国产| 在线播放无遮挡| 久久这里只有精品中国| 久久午夜亚洲精品久久| 国产亚洲精品av在线| 又粗又爽又猛毛片免费看| 成年女人永久免费观看视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 婷婷亚洲欧美| 国产精品无大码| 亚洲无线在线观看| 成人二区视频| 国产高清不卡午夜福利| 美女黄网站色视频| 97热精品久久久久久| 人妻久久中文字幕网| 伊人久久精品亚洲午夜| 久久国产乱子免费精品| 亚洲高清免费不卡视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 日韩欧美 国产精品| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 性欧美人与动物交配| 成人欧美大片| 日本-黄色视频高清免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 大型黄色视频在线免费观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产日韩欧美在线精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美潮喷喷水| 欧美日韩精品成人综合77777| 给我免费播放毛片高清在线观看| 搞女人的毛片| 久久人人爽人人爽人人片va| 精品久久久久久成人av| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品野战在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 韩国av在线不卡| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧洲日产国产| 国产乱人偷精品视频| 亚洲真实伦在线观看| 18禁在线播放成人免费| 日韩欧美国产在线观看| 国产乱人视频| 91久久精品国产一区二区成人| 免费人成在线观看视频色| av在线蜜桃| 成人漫画全彩无遮挡| 99久久人妻综合| 亚洲精品亚洲一区二区| 91久久精品国产一区二区成人| 在线播放国产精品三级| 午夜福利高清视频| 亚洲av成人av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲色图av天堂| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 成人无遮挡网站| 赤兔流量卡办理| 久久99精品国语久久久| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲精品456在线播放app| 欧美最新免费一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 中文字幕制服av| 久久热精品热| 一个人观看的视频www高清免费观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久国产乱子免费精品| 亚洲av免费高清在线观看| 特级一级黄色大片| 黑人高潮一二区| 欧美成人精品欧美一级黄| 1000部很黄的大片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品一二三区在线看| 欧美三级亚洲精品| 青青草视频在线视频观看| 国产探花在线观看一区二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 麻豆国产av国片精品| 日本熟妇午夜| 亚洲国产欧美人成| 欧美变态另类bdsm刘玥| 免费大片18禁| 99久久九九国产精品国产免费| 卡戴珊不雅视频在线播放| 三级经典国产精品| 日本一二三区视频观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 少妇的逼好多水| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 舔av片在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 天天一区二区日本电影三级| av卡一久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 亚洲色图av天堂| 久久午夜福利片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 毛片女人毛片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩一区二区三区影片| eeuss影院久久| 成熟少妇高潮喷水视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 中文在线观看免费www的网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 午夜视频国产福利| 免费观看人在逋| www.av在线官网国产| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久精品91蜜桃| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 午夜精品在线福利| 在线播放无遮挡| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 精品一区二区免费观看| 一进一出抽搐动态| 亚洲成人av在线免费| 亚洲在线自拍视频| 国产三级在线视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久久久久久久久久免费av| 国产精品精品国产色婷婷| 国产日韩欧美在线精品| eeuss影院久久| 欧美色视频一区免费| 精品不卡国产一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 18+在线观看网站| 国产男人的电影天堂91| 99久久成人亚洲精品观看| 国产精品福利在线免费观看| 国产成人aa在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成人无遮挡网站| www.av在线官网国产| 在线观看美女被高潮喷水网站| 99久久精品一区二区三区| 波多野结衣高清作品| av黄色大香蕉| 26uuu在线亚洲综合色| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜福利高清视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 人人妻人人看人人澡| 大型黄色视频在线免费观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 女人被狂操c到高潮| 日日啪夜夜撸| 毛片女人毛片| 在线观看免费视频日本深夜| 69av精品久久久久久| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 中文字幕熟女人妻在线| 99热精品在线国产| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久久久网色| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 69人妻影院| 欧美人与善性xxx| 中国国产av一级| 欧美变态另类bdsm刘玥| 变态另类丝袜制服| 久久久久久久亚洲中文字幕| 高清日韩中文字幕在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩中字成人| 啦啦啦啦在线视频资源| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 51国产日韩欧美| 边亲边吃奶的免费视频| 可以在线观看的亚洲视频| 深夜a级毛片| 午夜久久久久精精品| 久久久精品94久久精品| 亚洲色图av天堂| 亚洲欧美日韩高清专用| 精品人妻视频免费看| 一本精品99久久精品77| 激情 狠狠 欧美| 亚洲经典国产精华液单| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩中字成人| 联通29元200g的流量卡| 一个人免费在线观看电影| 国产高清不卡午夜福利| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 男人舔女人下体高潮全视频| 99热精品在线国产| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产熟女欧美一区二区| 美女 人体艺术 gogo| eeuss影院久久| 久久久精品大字幕| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲av二区三区四区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 成人三级黄色视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日韩欧美三级三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 我的女老师完整版在线观看| 国产久久久一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 色视频www国产| 此物有八面人人有两片| 久久久色成人| 久久精品91蜜桃| 亚洲av免费高清在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 中国美女看黄片| av在线亚洲专区| 91久久精品国产一区二区三区| 久久这里有精品视频免费| 亚洲18禁久久av| 国产色爽女视频免费观看| 久久久久久久久大av| 直男gayav资源| 搡女人真爽免费视频火全软件| 桃色一区二区三区在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线观看午夜福利视频| 久久久久久久久久久免费av| 欧美zozozo另类| 亚洲国产精品合色在线| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久久久久久久久成人| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| .国产精品久久| 久久久久九九精品影院| 国内精品美女久久久久久| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 六月丁香七月| 中文亚洲av片在线观看爽| 午夜精品在线福利| 大型黄色视频在线免费观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 深夜a级毛片| 高清毛片免费看| 久久久久久久久大av| 日本一本二区三区精品| 国产av不卡久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲国产欧美在线一区| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲欧洲日产国产| av在线老鸭窝| 免费av毛片视频| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产精华一区二区三区| 永久网站在线| 国产成人aa在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久久性生活片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 人妻久久中文字幕网| 久久久久久久久大av| 国内精品久久久久精免费| 综合色av麻豆| 免费看光身美女| 国模一区二区三区四区视频| 精品一区二区三区人妻视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 美女大奶头视频| 在线播放国产精品三级| 亚洲自偷自拍三级| av在线老鸭窝| 有码 亚洲区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久久精品94久久精品| 成人欧美大片| 亚洲国产精品国产精品| 精品久久久久久久久av| 亚洲无线观看免费| 亚洲av熟女| 日本免费一区二区三区高清不卡| 精品久久久久久久久久久久久| 欧美日韩乱码在线| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产av一区在线观看免费| 综合色丁香网| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲国产欧美人成| 熟女电影av网| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精品久久久久久久久av| 99视频精品全部免费 在线| 99久国产av精品| 日韩强制内射视频| 不卡一级毛片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美日韩乱码在线|