血清lncRNA MIAT、HMGB1水平變化與急性心源性腦梗死病情及預后的關系

江濤，許昕煒，姜加宏

興化市中醫(yī)院心內科，江蘇興化 225700

急性腦梗死又稱急性缺血性腦卒中，其致死率和致殘率極高，起病較急，患者常伴有語言和肢體障礙，嚴重時會導致昏迷不醒，甚至死亡［1］。與其他類型的腦梗死相比，心源性腦梗死起病更急，起病時間一般在數分鐘內，患者既往多合并房顫等疾病，長期房顫會造成心房內附壁血栓形成，脫落后進入大腦大動脈，進而引起腦梗死［2］。早期尋找敏感度高的血清生物學指標，對于評估急性心源性腦梗死患者的病情程度及預后有重要參考價值，是早期治療的關鍵和前提。長鏈非編碼RNA 心肌梗死相關轉錄基因（lncRNA MIAT）可調控血管動脈粥樣硬化過程，在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用［3］。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）通過與其受體的相互作用參與炎癥反應，與心腦血管疾病的發(fā)生密切相關［4-5］。但lncRNA MIAT、HMGB1 與急性心源性腦梗死的關系鮮見報道。本研究觀察了急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1水平變化，探討其與病情嚴重程度及預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標準：①符合急性腦梗死診斷標準［6］，均接受頭顱磁共振檢查證實存在梗死病灶；②急性起病，發(fā)病時間＜12 h；③有栓塞來源的心臟病病史，經磁共振、超聲或CT 等檢查證實且無大動脈病變；④入院后給予溶栓藥物、抗凝藥物、腦細胞活化劑等治療。排除標準：①合并自身免疫系統(tǒng)疾病或惡性腫瘤；②哺乳期或妊娠期發(fā)生腦梗死；③既往有腦出血、腦外傷、腦梗死或其他嚴重心腦血管疾病病史。選擇2020 年5 月—2022 年11 月我院收治并符合上述標準的急性心源性腦梗死患者122 例作為觀察組，同期體檢健康志愿者118 例作為對照組。觀察組男54 例、女68 例，年齡（46.25 ± 7.56）歲，BMI（23.01 ± 3.08）kg/m2，吸煙史49 例、糖尿病史27 例、高血壓史60 例，左心房增大（左心房橫徑＞35 mm）17 例，左心室射血分數（LVEF）＜50% 13 例，梗死面積：小/中面積梗死（梗死病灶直徑≤4 cm）76 例、大面積梗死（梗死病灶直徑＞4 cm）46 例，美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評分［7］＜16 分81 例、≥16 分41 例。對照組男46 例、女72 例，年齡（45.56 ± 8.46）歲。兩組性別、年齡均具有可比性（P均＞0.05）。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審核（2022-026），患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 血清HMGB1檢測方法 采用ELISA法。兩組入組后抽取肘靜脈血3 mL，于室溫靜置30 min，以3 000 r/min 離心10 min，分離血清，-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆?。采用ELISA 試劑盒檢測血清HMGB1水平，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3 血清lncRNA MIAT 檢測方法 采用實時熒光定量PCR 法。取兩組血清，提取總RNA，使用反轉錄試劑盒合成模板cDNA。lncRNA MIAT 引物序列：上游引物5'-CGATGCCTCGCAATGACGAC-3'、下游引物5'-CTCAGTACTGCGATACGCGTCG-3'，內參GAPDH 引物序列：上游引物5'-GCCTCGTGAGCGAGCGCGCA-3'、下游引物5'-CAGTAGACTACCGTCTGACAC-3'。PCR 反應體系：模板cDNA 2 μL，SYBR Green qPCR Master Mix 10 μL，上、下游引物各1 μL，ddH2O 補足至20 μL。循環(huán)結束后獲取Ct 值，采用2-ΔΔCt法計算lncRNA MIAT 相對表達量。

1.4 預后評估方法 觀察組出院后90 d 進行門診復診，根據mRS 量表［8］對預后進行評估，mRS 評分≥3 分定義為預后不良、mRS 評分＜3 分定義為預后良好。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS25.0 統(tǒng)計軟件。計量資料采用S-W正態(tài)性檢驗，呈正態(tài)分布以表示，兩組間比較采用t檢驗；非正態(tài)分布以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用秩和檢驗。計數資料以n（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗。急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平與病情程度的關系采用Spearman等級相關分析法。采用多元逐步回歸分析患者預后不良的獨立影響因素。繪制血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平預測急性心源性腦梗死患者預后不良的受試者工作特征（ROC）曲線，計算曲線下面積（AUC），分析其預測價值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平比較觀察組血清lncRNA MIAT、HMGB1水平均高于對照組（P均＜0.05）。見表1。

表1 兩組血清lncRNA MIAT、HMGB1水平比較（）

表1 兩組血清lncRNA MIAT、HMGB1水平比較（）

注：與對照組比較，*P＜0.05。

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2.2 不同梗死面積及NIHSS 評分的急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平比較 梗死面積為小/中面積、大面積的急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT 分別為1.62 ± 0.25、2.57 ±0.48，血清HMGB1水平分別為（6.78 ± 1.29）、（7.97 ±1.64）μg/L，二者比較P均＜0.05。NIHSS評分為＜16分、≥16 分的患者血清lncRNA MIAT 分別為1.78 ±0.34、2.38 ± 0.52，血清HMGB1 水平分別為（6.60 ±1.26）、（8.47 ± 1.50）μg/L，二者比較P均＜0.05。

2.3 急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平與梗死面積及NIHSS 評分的關系急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT 水平與梗死面積、NIHSS 評分均呈正相關關系（r分別為0.640、0.631，P均＜0.05），血清HMGB1 水平與梗死面積、NIHSS 評分均呈正相關關系（r分別為0.568、0.575，P均＜0.05）。見OSID碼圖1、2。

2.4 血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平對急性心源性腦梗死患者預后不良的影響 急性心源性腦梗死患者中預后良好90 例、預后不良32 例，其年齡分別為（55.42 ± 10.16）、（55.87 ± 11.03）歲，BMI分別為（23.08 ± 3.10）、（22.92 ± 3.07）kg/m2，二者比較P均＞0.05；其血清lncRNA MIAT 分別為（1.80 ±0.36）、（2.49 ± 0.56），血清HMGB1 分別為（6.68 ±1.24）、（8.77 ± 1.69）μg/L，二者比較P均＜0.05。二者男性、吸煙史、糖尿病史、高血壓史、NIHSS評分構成比例比較差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05），預后不良者血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平及左心房增大、LVEF＜50%、大面積梗死的比例均高于預后良好者（P均＜0.05）；見表2。以急性心源性腦梗死患者是否預后不良（是 = 1；否 = 0）為因變量，以lncRNA MIAT（連續(xù)變量）、HMGB1（連續(xù)變量）、左心房增大（是 = 1；否 = 0）、LVEF＜50%（是 = 1；否 = 0）、梗死面積（大面積 = 1；小/中面積 = 0）為自變量行多元逐步回歸分析，結果顯示血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平升高及大面積梗死均是急性心源性腦梗死患者預后不良的獨立危險因素（P均＜0.05）。見表3。

表2 不同預后的急性心源性腦梗死患者臨床特征比較［例（%）］

表3 急性心源性腦梗死患者預后不良影響因素的多元逐步回歸分析結果

2.5 血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平對急性心源性腦梗死患者預后不良的預測價值 血清lncRNA MIAT、HMGB1 單獨及聯合預測急性心源性腦梗死患者預后不良的AUC 分別為0.847、0.779、0.937，聯合預測的AUC高于二者單獨預測（P均＜0.05），見表4及OSID碼圖3。

表4 血清lncRNA MIAT、HMGB1單獨及聯合預測急性心源性腦梗死患者預后不良的ROC曲線分析結果

3 討論

2019 年全球疾病負擔研究表明，腦卒中是全球僅次于缺血性心臟病的第二大死亡原因，是致死和致殘的第三大原因（占總殘疾調整壽命的5.7%），其中腦梗死占腦卒中的62.4%［9］。心源性腦梗死也稱為心源性栓塞性腦梗死，占所有腦梗死的20%～30%。心源性腦梗死是一種臨床綜合征，病因是來自心臟的栓塞通過循環(huán)系統(tǒng)，導致腦動脈栓塞和相應的腦功能障礙［10］。

lncRNA 被定義為長度超過200 個核苷酸的非蛋白編碼轉錄物，其中l(wèi)ncRNA MIAT 是一種與心臟肥大、糖尿病心肌病和心臟纖維化等心臟疾病相關的lncRNA［11-13］。lncRNA MIAT 不僅在微血管疾病中發(fā)揮關鍵作用，還在頸動脈狹窄和腦梗死等大血管疾病發(fā)病中具有關鍵作用［14-15］。HMGB1 是一種非組蛋白和高遷移率DNA 結合蛋白，其作為核因子發(fā)揮作用，增強基因轉錄并調節(jié)DNA 修復和染色質重塑［16-17］。既往研究表明，HMGB1 參與了血管炎癥、血栓形成等病理過程［18］。本研究結果顯示，觀察組血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平均高于對照組，大面積梗死、NIHSS 評分為≥16 分的患者血清lncRNA MIAT、HMGB1 均低于小/中面積梗死、NIHSS 評分＜16 分者，預后不良患者的血清lncRNA MIAT、HMGB1水平高于預后良好者；這提示急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1 均升高，且與病情嚴重程度及不良預后有關。本研究多元逐步回歸分析結果顯示，血清lncRNA MIAT、HMGB1 升高及大面積梗死是急性心源性腦梗死預后不良的獨立危險因素。因此，以上因素需引起臨床醫(yī)護人員的重視。ROC 曲線分析結果進一步顯示，血清lncRNA MIAT、HMGB1 聯合檢測對急性心源性腦梗死預后的預測效能更高，其敏感度和特異度分別為86.7%、80.0%，可作為預后評估的重要參考指標。

基于既往研究，推測在急性心源性腦梗死的發(fā)病初期，患者體內炎癥因子水平急劇升高，炎癥及其他病理因素使得血清lncRNA MIAT 水平升高，心臟斑塊失去穩(wěn)定性而出現血栓栓塞，血栓栓塞經過循環(huán)系統(tǒng)造成腦功能障礙，從而促進疾病進展，推動預后不良結局發(fā)生。此外，GUO 等［19］研究顯示，lncRNA MIAT 可通過上調下游基因表達，促進腦梗死中神經細胞自噬和凋亡，推測其可能是lncRNA MIAT 推動急性心源性腦梗死病情進展及不良預后的另一機制。此外，ZHU 等［20］研究顯示，lncRNA MIAT/HMGB1 軸通過激活相關通路參與鼻咽癌的順鉑耐藥性，該過程中升高的lncRNA MIAT 水平調控HMGB1 表達上調。DENG 等［21］研究證實，lncRNA MIAT 通過調節(jié)HMGB1、海綿狀微小RNA-204-5p等，參與腦缺血后的腦微血管內皮細胞損傷?；诩韧芯恐衛(wèi)ncRNA MIAT、HMGB1間的調控關系推測，血清lncRNA MIAT 水平升高后，HMGB1 表達上調，使得急性心源性腦梗死患者炎癥刺激時間延長，血管炎癥加重，從而促進疾病進展。

綜上所述，急性心源性腦梗死患者血清lncRNA MIAT、HMGB1 水平均升高，且與患者的病情嚴重程度有關，二者聯合檢測有助于預測患者預后，有望成為評估急性心源性腦梗死患者病情嚴重程度及預后的分子標志物。但本研究病例數不多，統(tǒng)計結果可能存在一定偏倚，有待今后大樣本研究進行驗證。