不孕癥患者生殖道支原體、衣原體感染及藥敏分析

姚觀昀 蔡麗萍 詹華深 楊川藝 劉媛娉 陳祖陣 黃海燕

生殖道感染是指生殖道受細(xì)菌、霉菌、衣原體、支原體等病原微生物感染的總稱。據(jù)統(tǒng)計(jì), 我國常見的生殖道感染患病率為40.2%, 且患病率呈逐年遞增的趨勢(shì)［1］。生殖道感染中常見的病原體主要有支原體和衣原體, 且隨著抗菌藥物的濫用, 其病原體的耐藥性也發(fā)生了改變。支原體和衣原體感染可引起宮頸炎、尿道炎和前列腺炎等生殖道疾病, 這些疾病也是導(dǎo)致女性不孕、早產(chǎn)及流產(chǎn)的主要因素。而支原體感染是引起女性不孕的主要病原體, 支原體可寄生在人體各種細(xì)胞上, 如輸卵管細(xì)胞、泌尿生殖道、呼吸道等, 常見的衣原體和支原體類型包括沙眼衣原體、解脲支原體和人型支原體［2,3］。女性尿道炎、宮頸炎和盆腔炎常見的病原體為沙眼衣原體, 研究表明, 支原體耐藥性與抗菌藥物的濫用密切相關(guān)［4］。因此, 分析不孕癥患者生殖道衣原體、支原體的感染率, 并根據(jù)藥敏結(jié)果確定支原體敏感藥物, 對(duì)不孕癥患者生殖道感染的臨床治療、保障女性生殖健康具有重要意義。本研究選取福建省三明市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院診治的130 例不孕癥患者為研究對(duì)象, 檢測(cè)患者生殖道支原體、衣原體感染率, 并分析支原體對(duì)常規(guī)抗菌類藥物的耐藥情況, 旨在為改善不孕癥患者生殖道感染的臨床癥狀, 合理使用抗菌類藥物提供參考依據(jù), 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月～2021 年12 月福建省三明市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院診治的130 例不孕癥患者為研究對(duì)象, 患者年齡22～41 歲, 平均年齡(30.56±3.48)歲；病程1～3 年, 平均病程(1.67±0.45)年。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡≥22 歲；②符合世界衛(wèi)生組織(WHO)制定的不孕癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；③臨床資料完整,且依從性良好；④近1 個(gè)月內(nèi)未使用過相關(guān)抗菌藥物進(jìn)行治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他嚴(yán)重心臟、腎臟等重要器官功能障礙的患者；②合并嚴(yán)重感染性疾病或免疫缺陷類疾病的患者；③有嚴(yán)重精神疾病或精神病史的患者；④不能配合完整研究?jī)?nèi)容的患者。

1.2 方法 取樣：利用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道, 使宮頸暴露, 先用無菌大棉簽擦拭陰道及宮頸分泌物, 再將無菌拭子插入子宮頸管內(nèi)約2 cm 處, 旋轉(zhuǎn)無菌拭子至少30 s 后取出宮頸分泌物, 0.5 h 內(nèi)送檢。采用支原體培養(yǎng)、鑒定藥敏試劑盒(改良肉湯稀釋法)(珠海浪峰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)), 沙眼衣原體抗原檢測(cè)試劑盒(乳膠法)(艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn))對(duì)130 例不孕癥患者的生殖道分泌樣本中的支原體進(jìn)行篩查及藥敏分析, 將待測(cè)生殖道分泌物樣本接種于培養(yǎng)基中, 控制培養(yǎng)溫度在37℃左右, 培養(yǎng)時(shí)間48 h, 嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求檢測(cè)藥物敏感性, 包括交沙霉素、克拉霉素、美滿霉素、多西環(huán)素、阿奇霉素等。按照衣原體抗原檢測(cè)說明書操作, 進(jìn)行衣原體抗原檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 分析不孕癥患者基本情況, 生殖道支原體、衣原體感染率, 生殖道支原體藥敏結(jié)果；比較原發(fā)性不孕癥和繼發(fā)性不孕癥患者病原體感染情況。①衣原體感染：10～20 min 內(nèi), 檢測(cè)板僅出現(xiàn)1 條紅色質(zhì)控線(C)表示衣原體陰性；同時(shí)出現(xiàn)1 條紅色檢測(cè)線(T)和1 條紅色質(zhì)控線(C)表示衣原體陽性。②支原體感染：培養(yǎng)基持續(xù)48 h 不變色表示支原體陰性；培養(yǎng)基中解脲支原體鑒定孔在24 h 內(nèi)由橙黃色變?yōu)榧t色表示解脲支原體陽性；培養(yǎng)基中人型支原體鑒定孔在48 h 內(nèi)由橙黃色變?yōu)榧t色表示為人型支原體陽性。③單純衣原體感染：在解脲支原體和人型支原體感染均陰性情況下, 衣原體感染陽性；混合感染：解脲支原體感染陽性, 人型支原體感染陰性, 衣原體感染陽性。④單純支原體感染：在衣原體感染陰性情況下, 解脲支原體感染或解脲支原體與人型支原體感染。⑤藥敏分析：藥敏孔變紅, 表示孔中有支原體生長(zhǎng), 顯示支原體對(duì)該種抗生素耐藥或者中敏, 反之則為敏感。以An 表示高濃度藥敏孔, Bn 表示低濃度藥敏孔。敏感：An(-)Bn(-)；中敏：An(-)Bn(+)；耐藥：An(+)Bn(+)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不孕癥患者基本情況分析 130 例不孕癥患者的平均年齡為(30.56±3.48)歲, 其中年齡＞35 歲的患者54 例, 占41.5%；居住在農(nóng)村的患者79 例, 占比60.8%；平均病程為(1.67±0.45)年, 其中病程≥2 年的患者68 例, 占比52.3%；原發(fā)性不孕癥患者57 例, 占比43.8%。見表1。

表1 130 例不孕癥患者的基本情況分析 (n, %)

2.2 不孕癥患者生殖道支原體、衣原體感染率分析130 例不孕癥患者中檢出支原體、衣原體共62 例, 總感染率為47.7%, 主要為生殖道解脲支原體、人型支原體和沙眼衣原體, 其中單獨(dú)檢出解脲支原體28 例,感染率為45.1%, 單獨(dú)檢出人型支原體4 例, 感染率為6.5%, 單獨(dú)檢出沙眼衣原體14 例, 感染率為22.6%, 檢出解脲支原體+人型支原體8 例, 感染率為12.9%, 檢出解脲支原體+沙眼衣原體6 例, 感染率為9.7%, 檢出人型支原體+沙眼衣原體0 例, 感染率為0, 檢出解脲支原體+人型支原體+沙眼衣原體2 例, 感染率為3.2%。見表2。

表2 130 例不孕癥患者生殖道支原體、衣原體感染率分析 (n, %)

2.3 原發(fā)性不孕癥和繼發(fā)性不孕癥患者病原體感染情況比較 繼發(fā)性不孕癥患者生殖道解脲支原體、人型支原體、沙眼衣原體、解脲支原體+人型支原體、解脲支原體+沙眼衣原體、解脲支原體+人型支原體+沙眼支原體感染率與原發(fā)性不孕癥患者比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表3 原發(fā)性不孕癥和繼發(fā)性不孕癥患者病原體感染情況比較［n(%)］

2.4 不孕癥患者生殖道支原體藥敏結(jié)果分析 40 例支原體陽性菌株對(duì)交沙霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、羅紅霉素、多西環(huán)素、氧氟沙星、阿奇霉素、克拉霉素、美滿霉素、紅霉素等10 種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示, 支原體耐藥的藥物包括氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、羅紅霉素、阿奇霉素和美滿霉素, 其中單純解脲支原體耐藥性較高的有氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、羅紅霉素、阿奇霉素和美滿霉素, 單純?nèi)诵椭гw耐藥性較高的有氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿奇霉素和美滿霉素, 解脲支原體混合人型支原體耐藥性較高的有氧氟沙星、阿奇霉素。支原體敏感的藥物包括克拉霉素、交沙霉素、多西環(huán)素、紅霉素, 其中單純解脲支原體敏感性較高的藥物有多西環(huán)素、交沙霉素、紅霉素和克拉霉素, 單純?nèi)诵椭гw敏感性較高的藥物有多西環(huán)素和克拉霉素, 解脲支原體混合人型支原體敏感性較高的藥物有多西環(huán)素和克拉霉素。見表4。

表4 不孕癥患者生殖道支原體藥敏結(jié)果分析［n(%)］

3 討論

不孕癥分為原發(fā)性不孕和繼發(fā)性不孕, 導(dǎo)致不孕癥的原因?yàn)槟行圆挥团圆辉? 支原體、衣原體感染是引起男性不育或女性不孕的主要原因［6］。支原體是介于細(xì)菌和病毒間的原核微生物, 其可在男性或女性泌尿生殖道內(nèi)繁殖, 當(dāng)機(jī)體免疫能力下降或炎癥反應(yīng)導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境紊亂后, 支原體會(huì)大量繁殖并造成生殖道感染, 從而影響男性生殖道功能與精子質(zhì)量, 引起女性尿道炎、宮頸炎和盆腔炎, 甚至流產(chǎn)［7］。支原體通過在機(jī)體生殖道黏膜細(xì)胞表層粘附, 導(dǎo)致細(xì)胞損傷或死亡, 從而引起局部黏膜炎癥反應(yīng), 最終導(dǎo)致輸卵管功能障礙, 其還通過粘附在精子細(xì)胞表面, 阻撓精卵細(xì)胞結(jié)合, 發(fā)生不孕不育。解脲支原體、人型支原體在女性泌尿生殖道中較為常見, 是引起女性生殖道感染和不孕癥的主要病原體, 同時(shí)還與不良妊娠結(jié)局和新生兒慢性疾病有關(guān)［8］。沙眼衣原體屬革蘭陰性病原體,是一種含有脫氧核糖核酸和核糖核酸, 在細(xì)胞內(nèi)寄生,能夠以二次分裂方式進(jìn)行繁殖的原核細(xì)胞型微生物。沙眼衣原體與不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性較高, 衣原體感染細(xì)胞使得細(xì)胞產(chǎn)生抗原, 誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生自身免疫反應(yīng), 惡化母胎耐受機(jī)制, 造成不良妊娠結(jié)局［9］。沙眼衣原體可寄生于機(jī)體黏膜上皮細(xì)胞中, 機(jī)體遭受感染后能夠生成特異性細(xì)胞免疫和體液免疫, 但通常免疫力不強(qiáng), 且持續(xù)較短, 可使患者出現(xiàn)免疫病理損傷、隱性感染、反復(fù)感染［10,11］。沙眼衣原體可分為兩種形態(tài), 即原體和始體, 原體具有高度傳染性且在細(xì)胞外呈孢子樣；而始體體積較大, 形狀不規(guī)則, 主要在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制, 代謝不活躍［12,13］。沙眼衣原體主要存在于陰道分泌物、精液中, 可通過親密接觸傳播。當(dāng)女性患者遭受沙眼衣原體感染后, 沙眼衣原體可侵入子宮頸、輸卵管等柱狀上皮細(xì)胞, 使宮頸局部出現(xiàn)充血、腫大, 促使分泌物產(chǎn)生, 影響精子向子宮上行, 進(jìn)而導(dǎo)致患者出現(xiàn)不孕不育, 此外患者經(jīng)感染后還可出現(xiàn)盆腔炎、宮頸炎等疾病。解脲支原體是一種最小原核生物, 介于細(xì)菌與病毒之間, 是性傳播疾病的重要病原體之一。解脲支原體可定植于生殖道黏膜上皮細(xì)胞、尿道, 性接觸是感染解脲支原體的主要途徑, 此外接觸污染物也可導(dǎo)致感染［14,15］。解脲支原體在泌尿生殖道上皮細(xì)胞定植后, 通過釋放神經(jīng)毒素、促使過氧化氫生成、吸收細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與膽固醇等, 造成細(xì)胞損傷。當(dāng)女性患者遭受支原體感染后, 支原體能夠侵入患者輸卵管黏膜, 使黏膜上皮細(xì)胞凋亡, 導(dǎo)致輸卵管堵塞或粘連, 影響卵細(xì)胞進(jìn)入子宮, 進(jìn)而導(dǎo)致不孕不育［16,17］。此外, 支原體感染細(xì)胞后能夠激活機(jī)體免疫應(yīng)答, 導(dǎo)致抗子宮內(nèi)膜的抗體生成, 影響子宮內(nèi)膜功能, 使受精卵難以著床, 進(jìn)而誘發(fā)不孕不育。女性患者經(jīng)支原體感染后還可出現(xiàn)宮頸炎、陰道炎、盆腔炎、子宮內(nèi)膜炎等疾病。本研究收集130 例生殖道感染的不孕癥患者為研究對(duì)象, 檢測(cè)并分析支原體、衣原體在患者中的陽性感染率及對(duì)抗菌類藥物的耐藥性和敏感性。

蔡晶晶等［18］通過觀察育齡期不孕癥患者支原體、衣原體感染情況及藥敏結(jié)果發(fā)現(xiàn), 育齡期不孕癥患者衣原體、支原體感染率較高, 耐藥譜也較復(fù)雜, 支原體對(duì)強(qiáng)力霉素和阿奇霉素的敏感性較高。萬優(yōu)萍［19］通過觀察并分析沙眼衣原體和解脲支原體與不孕不育癥患者的關(guān)系發(fā)現(xiàn), 生殖道感染沙眼衣原體和解脲支原體與不孕不育癥具有相關(guān)性, 藥敏結(jié)果發(fā)現(xiàn), 解脲支原體對(duì)阿奇霉素、環(huán)酯紅霉素和強(qiáng)力霉素等抗菌藥物敏感性較高。本研究結(jié)果顯示, 130 例不孕癥患者中檢出支原體、衣原體共62 例, 總感染率為47.7%；感染類型主要為生殖道解脲支原體、人型支原體和沙眼衣原體。對(duì)支原體敏感的藥物包括克拉霉素、交沙霉素、多西環(huán)素、紅霉素, 其中單純解脲支原體敏感性較高的藥物有多西環(huán)素、交沙霉素、紅霉素和克拉霉素,單純?nèi)诵椭гw敏感性較高的藥物有多西環(huán)素和克拉霉素。與上述文獻(xiàn)研究結(jié)果相符, 結(jié)果提示, 諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星等抗菌類藥物的長(zhǎng)期不規(guī)范使用導(dǎo)致支原體染色體基因位點(diǎn)發(fā)生突變, 使得細(xì)胞膜通透性降低, 細(xì)胞內(nèi)藥物積累濃度降低從而產(chǎn)生耐藥性。多西環(huán)素和克拉霉素的支原體敏感性均較高, 可將這兩種抗菌藥物作為不孕癥患者支原體感染的首選藥物,但需要根據(jù)臨床醫(yī)師建議進(jìn)行用藥, 防止耐藥率升高,從而保障臨床療效。

綜上所述, 不孕癥患者生殖道支原體、衣原體感染率較高, 耐藥性和敏感性較為復(fù)雜, 建議臨床首選藥物為多西環(huán)素和克拉霉素, 降低不孕癥患者生殖道感染發(fā)生率, 保障女性生殖健康。同時(shí), 本研究也存在不足之處, 本研究選取的樣本量為130 例, 樣本量需要增大, 對(duì)衣原體的耐藥性及敏感性需進(jìn)一步研究。