雞蛋黃中4種生物活性成分聯(lián)合提取工藝

郭曉徐，劉恒洋，尹玉鑫，宋紹奇，劉美玉*

（1.河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北 邯鄲 056038；2.邯鄲市天然產(chǎn)物與功能性食品開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 邯鄲 056038）

雞蛋黃約占雞蛋質(zhì)量的50%，蛋黃中生物活性成分很多，其中重要成分有卵黃免疫球蛋白（immunoglobulin of yolk，IgY）、卵黃高磷蛋白（phosvitin，PV）、蛋黃油和卵磷脂（phospholipids，PL）[1-2]。IgY 是蛋黃中唯一的免疫蛋白，主要存在于漿液中，約占蛋黃總蛋白的10%[3]。IgY 具有較強(qiáng)的抗菌免疫活性，且安全無(wú)毒，同時(shí)還具有增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能的能力[4-5]，廣泛應(yīng)用于抗病毒、抗細(xì)菌感染、抗腫瘤以及免疫學(xué)診斷等領(lǐng)域[6-8]，在動(dòng)物疾病控制中也被廣泛應(yīng)用[9]；PV 是一種富含磷酸絲氨酰殘基的天然活性蛋白質(zhì)[10]，具抗氧化性[11]、熱穩(wěn)定性和乳化性能，常用于化妝品、營(yíng)養(yǎng)品、醫(yī)藥制造等領(lǐng)域[12]，還可作為鈣強(qiáng)化的輔助劑，應(yīng)用前景廣闊[13-14]。蛋黃油藥食兩用，其味甘、性平，不僅能清熱解毒，而且具有殺菌、消炎、止痛和修復(fù)表皮細(xì)胞的功能[15-16]。PL 在促進(jìn)神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)、提高大腦活力、延緩機(jī)體衰老、防止血管硬化和抗血栓等方面均有顯著作用[17]，還具有良好的乳化、潤(rùn)濕、分散等作用，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)[18-19]。本文采用水稀釋法[20]、鹽析法[21]、有機(jī)溶劑提取法從蛋黃中提取分離卵黃免疫球蛋白、卵黃高磷蛋白、蛋黃油和卵磷脂，探究雞蛋黃綜合利用最大化、提高雞蛋價(jià)值且適合工業(yè)化生產(chǎn)的工藝條件，以期為雞蛋精深加工提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

新鮮雞蛋：邯鄲市復(fù)興區(qū)標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)雞場(chǎng)。

酶聯(lián)免疫試劑盒：上海研尊生物科技有限公司；考馬斯亮藍(lán)（G250、R250）：上海康朗生物科技有限公司；牛血清白蛋白（1 mg/mL）：合肥博美生物科技有限責(zé)任公司；硫酸銨、95%乙醇、正己烷、氯化鈉（均為分析純）：天津歐博凱化工有限公司；0.1 mol/L HCl、0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖液（phosphate buf-fered saline，PBS）（pH7.2）：河北工程大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品深加工實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 儀器與設(shè)備

酶標(biāo)儀（EL311s）：賽默飛世爾科技有限公司；冷凍干燥機(jī)（SCIENTZ-10ND）：寧波新芝生物科技股份有限公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（TG16）：湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（UV-2700）：日本島津儀器有限公司；消化爐（HYP-1040）：上海巴玖實(shí)業(yè)有限公司；多通道磁力攪拌器（SP200-2T）：杭州米歐儀器有限公司；臺(tái)式酸度計(jì)（PB-10）：賽多利斯公司；生物安全柜（HR40-11A2）：青島海爾生物醫(yī)療股份有限公司；電子天平（PX22ZH）：奧豪斯儀器有限公司；高溫鼓風(fēng)干燥箱（BPG-9100BH）：上海一恒科技有限公司；恒溫水浴槽（WT100-18）：杭州米歐儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 制備流程

卵黃免疫球蛋白、卵黃高磷蛋白、蛋黃油和卵磷脂4 種活性物質(zhì)聯(lián)合提取工藝流程見(jiàn)圖1。

圖1 提取工藝流程Fig.1 Scheme of extraction process

1.3.2 IgY 提取的單因素設(shè)計(jì)

準(zhǔn)確稱(chēng)取5 份蛋黃液，每份5 g，分別添加蛋黃液2、4、6、8、10 倍體積的蒸餾水稀釋?zhuān)⒂?.1 mol/L 的HCl 調(diào)至不同pH 值（4.0、4.5、5.0、5.5、6.0），攪拌均勻，于-20 ℃下冷凍12 h，4 ℃解凍。分別在4 500×g離心（15、25、35、45、55 min）后得到上清液水溶性組分（water soluble fraction，WSF）和沉淀物（脂蛋白）。在上清液中（WSF）加入不同用量的4 ℃飽和硫酸銨，使硫酸銨濃度達(dá)到30%、40%、50%、60%、70%，4 ℃下靜置12 h，進(jìn)行第1 次鹽析，4 500×g離心25 min 后取沉淀，溶于適量pH7.2 的磷酸鹽緩沖液，加入上清液（WSF）體積2/3 的4 ℃蒸餾水和1/3 的4 ℃飽和硫酸銨，進(jìn)行第2 次鹽析，靜置4 h，3 000×g離心20 min，取沉淀溶于適量PBS，置于10 kDa 透析袋中，透析脫鹽20 h，期間換水6～7 次，冷凍干燥，得IgY 成品。

1.3.3 IgY 提取的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)IgY 提取的單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取稀釋倍數(shù)、pH 值、離心時(shí)間、硫酸銨濃度4 個(gè)因素，以IgY 含量為判斷標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，正交因素與水平見(jiàn)表1。

表1 正交因素與水平Table 1 Factors and levels of orthogonal experiments

1.3.4 PV 提取的單因素設(shè)計(jì)

將脂蛋白在常溫下風(fēng)干2 h，準(zhǔn)確稱(chēng)取5 份，每份3 g。加入不同體積比（1∶0、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4）的混合有機(jī)溶劑（95%乙醇∶正己烷）。溶劑使用量為脂蛋白的不同倍數(shù)（2、4、6、8、10 倍），磁力攪拌30 min，靜置8 h，3 000×g離心20 min，取下層膠狀物，烘干，用玻璃棒碾碎，溶于不同濃度（1.65、1.70、1.75、1.80、1.85 mol/L）氯化鈉溶液中。氯化鈉溶液使用量設(shè)計(jì)為5、10、15、20、25 mL，混合均勻，靜置6 h，3 000×g離心20 min，取上清液于不同溫度（50、60、70、80、90 ℃）的水浴鍋中加熱30 min，過(guò)濾，收集濾液，置于8～10 kDa透析袋中透析脫鹽20 h，冷凍干燥后即為PV 成品。

1.3.5 PV 提取的響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用Design-Expert 10.0.8軟件，進(jìn)行Box-Behnken 三因素三水平響應(yīng)面設(shè)計(jì)，以混合有機(jī)溶劑體積比、溶劑使用量、氯化鈉濃度為自變量，以提取的PV 含量為響應(yīng)值進(jìn)行優(yōu)化。其響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素和水平見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)因素與水平Table 2 Response surface test factors and levels

1.3.6 蛋黃油和卵磷脂提取

上層油狀物是溶解在混合有機(jī)溶劑中的蛋黃油、卵磷脂等，提取蛋黃油、卵磷脂首先要去除混合有機(jī)溶劑。在45 ℃、50 r/min 的條件下，對(duì)上層油狀物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，以去除有機(jī)溶劑，所得產(chǎn)物加入丙酮溶解，靜置5 h，3 000×g離心20 min。取上層液體進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至無(wú)液體蒸餾出，得到蛋黃油。下層沉淀用適量無(wú)水乙醇溶解，加入丙酮反復(fù)碾洗，至丙酮顏色澄清透明，取沉淀，用蒸餾水清洗干凈，真空干燥，得淡黃色膠條狀卵磷脂（PL）。

1.3.7 指標(biāo)測(cè)定

總蛋白質(zhì)含量的測(cè)定：采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總蛋白質(zhì)含量[22]。

IgY 含量的測(cè)定：使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)分別測(cè)定提取液在260 nm 和280 nm 處的吸光值，并以生理鹽水作為對(duì)照，根據(jù)下列公式來(lái)計(jì)算IgY 含量[23]。

Q=1.50A280-0.75A260

式中：Q為IgY 含量，mg/mL；A280和A260為IgY 在280 nm 和260 nm 處的吸光值。

PV 含量的測(cè)定：磷的含量用微量定磷法來(lái)檢測(cè)，由于卵黃高磷蛋白含有約10%的磷，所以有機(jī)磷含量的10 倍就是卵黃高磷蛋白的含量[24]，計(jì)算公式如下。

M=10M1

式中：M為PV 含量，mg/mL；M1為有機(jī)磷含量，mg/mL。

PV 回收率的計(jì)算公式如下。

R=M1/M2×100

式中：R為PV 回收率，%；M1為PV 含量，mg/mL；M2為回收物中總蛋白質(zhì)的含量，mg/mL。

IgY 活性的測(cè)定：采用酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

使用IBM SPSS Statistics 軟件對(duì)IgY 提取正交試驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。使用Design-Expert 10.0.8 軟件對(duì)PV 提取響應(yīng)面試驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 IgY 提取試驗(yàn)結(jié)果分析

2.1.1 稀釋倍數(shù)對(duì)IgY 含量的影響

稀釋倍數(shù)對(duì)IgY 含量的影響見(jiàn)圖2。

圖2 稀釋倍數(shù)對(duì)IgY 含量的影響Fig.2 Effect of dilution fold on IgY content

由圖2 看出，隨著稀釋倍數(shù)的增加，IgY 含量呈上升趨勢(shì)，在稀釋6 倍后，上升趨勢(shì)趨于平緩。根據(jù)上清液顏色變化發(fā)現(xiàn)稀釋4 倍時(shí)，上清液顏色渾濁；6 倍時(shí)上清液有輕微的淡黃色，稀釋8、10 倍后上清液為澄清透明。上清液顏色變化與圖2 結(jié)合可推斷稀釋4 倍時(shí)，脂蛋白未完全分離，IgY 含量在20 mg/mL 左右。稀釋6、8 倍IgY 含量均在28 mg/mL 左右，6 倍為一個(gè)轉(zhuǎn)折點(diǎn)。結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)的成本和蛋白質(zhì)含量，綜合考慮稀釋倍數(shù)選4、6、8 倍較為合適。

2.1.2 pH 值對(duì)IgY 含量的影響

pH 值對(duì)IgY 含量的影響見(jiàn)圖3。

圖3 pH 值變化對(duì)IgY 含量的影響Fig.3 Effect of pH change on IgY content

由圖3 可知，IgY 含量隨pH 值的增加呈先升高后降低的趨勢(shì)。在pH5.0 時(shí)IgY 含量為最高值，此時(shí)的上清液透明，說(shuō)明脂蛋白和水溶性蛋白已經(jīng)分離完全。卵黃免疫球蛋白在pH4～11 時(shí)蛋白活性保持穩(wěn)定，因此，pH 值選擇4.5、5.0、5.5 較為合適。

2.1.3 離心時(shí)間對(duì)IgY 含量的影響

離心時(shí)間對(duì)IgY 含量的影響見(jiàn)圖4。

圖4 離心時(shí)間對(duì)IgY 含量的影響Fig.4 Effect of centrifugation time on IgY content

由圖4 得出，IgY 含量隨離心時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，在離心時(shí)間為35 min 后IgY 含量上升緩慢，說(shuō)明此時(shí)溶液中的蛋白均已形成沉淀。從實(shí)際生產(chǎn)角度出發(fā)，離心時(shí)間的延長(zhǎng)必然會(huì)導(dǎo)致生產(chǎn)成本和機(jī)器損耗加大。因此，離心時(shí)間選擇25、35、45 min 較為合適。

2.1.4 硫酸銨濃度對(duì)IgY 含量的影響

硫酸銨濃度對(duì)IgY 含量的影響結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 硫酸銨濃度對(duì)IgY 含量的影響Fig.5 Effect of ammonium sulfate concentration on IgY content

由圖5 可知，隨著硫酸銨濃度的增加，IgY 含量整體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，硫酸銨濃度為60%時(shí)，IgY 含量最高，隨后含量下降。高濃度的鹽離子在蛋白質(zhì)溶液中會(huì)與蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)水分子，使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀出來(lái)，但是過(guò)高的鹽濃度會(huì)增加后期的脫鹽工作量，也會(huì)導(dǎo)致脫鹽不徹底，降低IgY 蛋白含量和純度。因此硫酸銨濃度選擇50%、60%、70%較為合適。

2.1.5 IgY 提取的正交試驗(yàn)結(jié)果分析

IgY 提取的正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 IgY 提取的正交試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Orthogonal experimental results of IgY extraction

由表3 可知，各因素對(duì)IgY 含量影響順序?yàn)橄♂尡稊?shù)＞硫酸銨濃度＞pH 值＞離心時(shí)間。IgY 含量最高的正交試驗(yàn)組為第8 組，5 g 蛋黃液可提取出33.37 mg卵黃免疫球蛋白。直觀(guān)分析最優(yōu)組合為A3B2C1D3，然而均值的最優(yōu)組合為A3B2C2D3。其差別在于離心時(shí)間的選擇，考慮到實(shí)際生活中大規(guī)模的生產(chǎn)和成本，離心時(shí)間的選擇越小越好，故最優(yōu)組合為A3B2C1D3。

對(duì)最優(yōu)組合進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，其平均值為33.22mg/mL。與試驗(yàn)結(jié)果33.37 mg/mL 非常接近，試驗(yàn)重復(fù)性很高。

IgY 提取方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 IgY 提取方差分析Table 4 Analysis of variance of IgY extraction

由表4 可知，各因素對(duì)結(jié)果的影響大小為稀釋倍數(shù)＞硫酸銨濃度＞pH 值＞離心時(shí)間，與直觀(guān)分析結(jié)果一致。其中稀釋倍數(shù)、硫酸銨濃度、pH 值對(duì)結(jié)果影響極顯著（P＜0.01），離心時(shí)間對(duì)IgY 含量影響不顯著（P＞0.05）。進(jìn)一步說(shuō)明試驗(yàn)穩(wěn)定性良好。

2.2 PV 提取試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 不同混合有機(jī)溶劑體積比對(duì)PV 含量的影響

不同混合有機(jī)溶劑體積比對(duì)PV 含量的影響見(jiàn)圖6。

圖6 混合有機(jī)溶劑體積比對(duì)PV 含量的影響Fig.6 Effect of volume ratio of mixed organic solvent on PV content

由圖6 可知，卵黃高磷蛋白的含量隨著混合有機(jī)溶劑中正己烷的增加先升高后降低。正己烷的存在能夠加強(qiáng)脂類(lèi)和蛋白質(zhì)的分離效果，隨著正己烷的增加，在收集卵黃高磷蛋白時(shí)，附著在燒杯壁上的蛋白也隨之增加，收集不徹底可能是導(dǎo)致蛋白含量降低的原因。如用混合有機(jī)溶劑收集附著在燒杯壁上的蛋白會(huì)造成溶劑使用量的變化，影響結(jié)果。從生產(chǎn)成本和蛋白含量的角度出發(fā)，選用混合有機(jī)溶劑體積比為1∶0、1∶1、1∶2 較為合適。

2.2.2 不同溶劑使用量對(duì)PV 含量的影響

不同溶劑使用量對(duì)PV 含量的影響見(jiàn)圖7。

圖7 溶劑使用量對(duì)PV 含量的影響Fig.7 Effect of solvent usage on PV content

由圖7 可知，PV 含量隨有機(jī)溶劑使用量的增加而增加，在使用量為6 倍混合有機(jī)溶劑時(shí)蛋白含量沒(méi)有大的變化，說(shuō)明此時(shí)有機(jī)溶劑的作用已可以做到蛋白質(zhì)和脂類(lèi)分離效果的最大化。此后溶劑使用量的增加不會(huì)增加生產(chǎn)效益，還會(huì)使生產(chǎn)成本加大，環(huán)境污染加大。綜合考慮選用6 倍溶劑使用量進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.2.3 不同氯化鈉濃度對(duì)PV 含量的影響

不同氯化鈉濃度對(duì)PV 含量的影響見(jiàn)圖8。

圖8 氯化鈉濃度對(duì)PV 含量的影響Fig.8 Effect of NaCl concentration on PV content

由圖8 可知，卵黃高磷蛋白在一定濃度的NaCl 溶液中有較好的溶解性，卵黃高磷蛋白在1.65～1.85 mol/L NaCl 溶液中蛋白溶解性先增加后下降，1.75 mol/L 的NaCl 溶液中溶解性最好，提取蛋白含量最高。實(shí)際生產(chǎn)中NaCl 濃度增加會(huì)加大成本。綜合考慮，NaCl 溶液濃度選擇1.70、1.75、1.80 mol/L 較為合適。

2.2.4 不同氯化鈉用量對(duì)PV 含量的影響

不同氯化鈉用量對(duì)PV 含量的影響見(jiàn)圖9。

圖9 氯化鈉用量對(duì)PV 含量的影響Fig.9 Effect of sodium chloride dosage on PV content

由圖9 可知，NaCl 溶液作為卵黃高磷蛋白的溶解劑對(duì)結(jié)果而言是比較穩(wěn)定的，PV 含量在NaCl 用量15 mL 和25 mL 處有較高值，隨著用量的增加對(duì)結(jié)果的影響幅度在0.2 mg 以?xún)?nèi)。用量的增加必然會(huì)加大后續(xù)的脫鹽流程的工作量，從成本和蛋白含量?jī)煞矫婵紤]，選用15 mL 作為NaCl 的用量。

2.2.5 不同溫度對(duì)PV 含量的影響不同溫度對(duì)PV 含量的影響見(jiàn)圖10。

圖10 溫度對(duì)PV 含量的影響Fig.10 Effect of temperature on PV content

由圖10 可知，隨著溫度的升高，卵黃高磷蛋白的含量也會(huì)隨之增加，在50～90 ℃范圍內(nèi)，蛋白含量增幅在0.5 mg 以?xún)?nèi)。卵黃高磷蛋白具有較好的熱穩(wěn)定性，溫度的升高會(huì)使其它的蛋白變性從而沉淀下來(lái)，起到一定的純化效果。從純度和含量等方面考慮，以90 ℃作為溫度最佳選擇。

2.2.6 PV 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果分析

對(duì)PV 提取的工藝以單因素試驗(yàn)確定的水平因素，結(jié)合卵黃高磷蛋白含量，根據(jù)表2 進(jìn)行響應(yīng)面提取優(yōu)化，結(jié)果如表5、表6所示。

表5 響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果Table 5 Experimental results of response surface design

表6 模型方差分析Table 6 Analysis of variance

PV 含量的二次回歸擬合方程：PV 含量/（mg/mL）=33.35+0.747 5A+0.581 3B-0.316 3C+0.305 0AB+0.425 0AC-0.647 5BC-4.95A2-1.91B2-3.54C2。

通過(guò)表6 的模型方差分析可以得出，A、B對(duì)PV含量顯著影響（P＜0.05），A2、B2、C2均為極顯著（P＜0.01），C影響不顯著（P＞0.05），且各因素之間的交互作用不顯著，并且對(duì)響應(yīng)值卵黃高磷蛋白含量的影響順序?yàn)锳＞B＞C。

根據(jù)回歸方程得出各因素之間交互作用對(duì)PV 含量影響的響應(yīng)面和等高線(xiàn)，見(jiàn)圖11。

圖11 各因素交互作用的響應(yīng)面與等高線(xiàn)Fig.11 Response surface and contour map of interaction of various factors

根據(jù)二次回歸方程得到響應(yīng)面圖均為凸起開(kāi)口向下的曲面，表示PV 含量存在最大值，響應(yīng)曲面的坡度越陡說(shuō)明變化越快，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響越顯著；等高線(xiàn)呈橢圓形、越密集，交互作用越強(qiáng)，等高線(xiàn)呈圓形、越稀疏則相反。

由圖11 可知，A、B、C三者間的兩兩交互作用對(duì)PV 含量影響不顯著，該結(jié)論與方差分析結(jié)果一致。

2.2.7 結(jié)果驗(yàn)證

根據(jù)回歸模型，利用Box-Behnken 對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析處理，得到提取卵黃高磷蛋白的最佳條件為混合有機(jī)溶劑體積比為1∶1.078、有機(jī)溶劑使用量為6.34 倍、氯化鈉濃度為1.747 mol/L，測(cè)得卵黃高磷蛋白含量為33.437 mg/mL。

為檢驗(yàn)響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果的可靠性，綜合考慮實(shí)際操作的局限性，取混合有機(jī)溶劑體積比為1∶1.08、有機(jī)溶劑使用量為6.35 倍、氯化鈉濃度為1.75 mol/L。在此最優(yōu)條件下進(jìn)行5 次驗(yàn)證試驗(yàn)，卵黃高磷蛋白含量為33.30 mg/mL，與理論值比較，相對(duì)誤差較小，重復(fù)性好，因此該優(yōu)化提取工藝參數(shù)模型準(zhǔn)確可靠。此方法為取3 g 沉淀物（脂蛋白），而5 g 蛋黃液可得到4.5 g沉淀物（脂蛋白），5 g 蛋黃液可得到49.95 mg PV，即1 g蛋黃液可得9.99 mgPV。

2.3 蛋黃油和卵磷脂分離結(jié)果分析

上層液體旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得蛋黃油，下層沉淀經(jīng)丙酮純化、真空干燥后得卵磷脂，實(shí)測(cè)值與理論值見(jiàn)表7。

表7 試驗(yàn)實(shí)測(cè)值與理論值比較Table 7 Comparison between measured value and theoretical value

從表7 看出，蛋黃油提取含量偏低，其原因?yàn)椴捎萌軇┹腿》ㄌ崛〉包S油，參考文獻(xiàn)[25]出油率僅60%左右，此方法提取率偏低。提取過(guò)程中多次離心分離，也可能導(dǎo)致脂類(lèi)附著于離心管上，造成含量偏低。

卵磷脂提取量與理論值相接近，提取產(chǎn)品顏色為淡黃色。高純度的卵磷脂顏色為淡黃乳白色，這說(shuō)明本方法提取的卵磷脂純度較高。

3 結(jié)論

本文探索了以雞蛋黃為原料，制備卵黃免疫球蛋白、卵黃高磷蛋白、蛋黃油、蛋黃卵磷脂的工藝流程。新鮮蛋黃預(yù)處理后的蛋黃液在一定條件下應(yīng)用不同的提取方法，通過(guò)單因素試驗(yàn)選取因素、以正交試驗(yàn)或響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明，正交試驗(yàn)優(yōu)化IgY 提取的最優(yōu)工藝條件為5 g 蛋黃稀釋8 倍、調(diào)pH 值到5.0、離心時(shí)間為35 min、硫酸銨濃度為70%；響應(yīng)面優(yōu)化PV 提取的最佳提取工藝條件為混合有機(jī)溶劑體積比（95%乙醇∶正己烷）1∶1.08、有機(jī)溶劑使用量為6.35 倍、氯化鈉濃度為1.75 mol/L。在此條件下5 g 蛋黃可得33.30 mg IgY、49.95 mg PV、0.97 g 蛋黃油、0.53 g PL，換算得1 g 蛋黃得6.66 mg IgY、9.99 mg PV、194 mg 蛋黃油、106 mg PL。該方法成本低、無(wú)污染、便捷、高效，可為功能食品提供功能基料，極大提高雞蛋附加值，保障蛋雞業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。