安徽省兩棲類新紀(jì)錄
——孟聞琴蛙

2023年6月10日，在安徽省黃山市黃山風(fēng)景區(qū)（30°8'1.18″ N，118°16'9.33″ E；海拔223 m）進(jìn)行兩棲動(dòng)物調(diào)查過程中，采集到琴蛙屬（Nidirana）標(biāo)本2號。該蛙背面棕色；背側(cè)褶深棕色；前肢皮膚較為光滑，軀干后端皮膚較為粗糙，具疣粒；大腿、脛部和跗部均具3 條黑色橫斑；指端吸盤略膨大，呈圓形；叫聲為2～7 個(gè)相同的規(guī)則音節(jié)。分子系統(tǒng)學(xué)分析結(jié)果表明，安徽黃山采集的琴蛙標(biāo)本與孟聞琴蛙（N.mangveni）模式標(biāo)本［1］聚成一單系支，支持率為1.00?；趐-distance 模型估算，該標(biāo)本與孟聞琴蛙模式標(biāo)本遺傳距離為0。綜上所述，鑒定此次采集的琴蛙標(biāo)本為孟聞琴蛙，系安徽省兩棲類新紀(jì)錄種［2-3］。采集的樣品取部分肝臟組織保存于95%乙醇的凍存管內(nèi)，-80 ℃儲存；標(biāo)本使用10%福爾馬林固定，沖洗后浸在75%乙醇中保存［4］。標(biāo)本現(xiàn)保存于安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，標(biāo)本編號AHU0610-01、AHU0610-02。

孟聞琴蛙隸屬于無尾目（Anura）蛙科（Ranidae）琴蛙屬，Lyu等［1］通過形態(tài)學(xué)、聲學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析將其發(fā)表為新種，模式產(chǎn)地為浙江省金華市磐安縣大盤山風(fēng)景區(qū)，此前長期被鑒定為彈琴蛙（Nidirana adenopleura），現(xiàn)有文獻(xiàn)記錄該物種也在江西省［5］分布。

本次采集的2號琴蛙標(biāo)本均為雄性，體長50.67～51.55 mm，頭長大于頭寬，吻長大于眼徑，形態(tài)學(xué)特征與孟聞琴蛙模式標(biāo)本基本一致（表1）。背面棕色，背側(cè)褶明顯，深棕色；軀干后端皮膚粗糙，具密集疣粒；體側(cè)部具稀疏疣粒，體側(cè)上部棕色，具有黑色小圓斑（圖1A、B）；前肢背面皮膚光滑，具稀疏疣粒，肩部與聲囊連接處具有黑斑（圖1C）；大腿和脛部背面皮膚較為粗糙，具疣粒和肌肉束狀縱行膚棱；肩腺白色。四肢背面棕色；鼓膜明顯，淺棕色。頭長大于頭寬；吻長大于眼徑；吻棱明顯；舌心形，后端具缺刻；虹膜上1/3部棕白色，下2/3部紅棕色；具1 對咽側(cè)下外聲囊，聲囊肉色（圖1D）；后肢貼體前伸時(shí)，脛跗關(guān)節(jié)達(dá)眼前角與鼻孔之間；指趾端略微膨大分別形成圓形吸盤和長而尖的吸盤；指間無蹼，第Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ指兩側(cè)具明顯緣膜，第Ⅰ指無緣膜，相對指長：Ⅰ＜Ⅱ＜Ⅳ＜Ⅲ。

圖1 孟聞琴蛙（ AHU0610-01，；洪飛 攝）Fig.1 Nidirana mangveni（ AHU0610-01；Photoed by HONG Fei）

表1 孟聞琴蛙成體量度Tab.1 Adult measurement of Nidirana mangveni

孟聞琴蛙與彈琴蛙形態(tài)學(xué)特征較為相似，但也有如下鑒別特征：彈琴蛙體型肥碩，而孟聞琴蛙體型較為細(xì)長；孟聞琴蛙具有較弱的顳褶，彈琴蛙則沒有。除此之外，從聲音上也能區(qū)分兩者，彈琴蛙鳴聲為2 或3 聲相同音節(jié)，而孟聞琴蛙鳴聲為2～7聲相同音節(jié)［1］。本研究樣品符合孟聞琴蛙的鑒別特征。

取AHU0610-01、AHU0610-02 肝臟組織，采用苯酚/氯仿抽提法提取其基因組DNA，使用引物5'-TYTCWACWAAYCAYAAAGAYATCGG-3'和5'-ACYTCRGGRTGRCCRAARAATCA-3'（Y 表示堿基C/T）對其COI基因進(jìn)行擴(kuò)增［6］，PCR 產(chǎn)物送至擎科生物科技（武漢）有限公司測序，得到2 號標(biāo)本線粒體COI基因片段，并提交到GenBank（OR394180、OR394181）。從NCBI數(shù)據(jù)庫下載琴蛙屬30個(gè)物種的COI基因序列，并選取琉球拇棘蛙（Babina holsti）作為外群，使用MrBayes 3.1.2 構(gòu)建貝葉斯樹［7］。同時(shí)，使用MEGA v6.0［8］中的pdistance 模型計(jì)算琴蛙屬物種間的遺傳距離。結(jié)果表明，基于COI基因進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，來自NCBI 數(shù)據(jù)庫中的彈琴蛙和孟聞琴蛙各自成單系，安徽黃山風(fēng)景區(qū)采集的琴蛙與孟聞琴蛙正模序列聚成一單系支，支持率為1.00（圖2）。基于p-distance 模型估算，采集于黃山風(fēng)景區(qū)的標(biāo)本與孟聞琴蛙模式標(biāo)本序列的遺傳距離為0，小于該屬之間的最小遺傳距離（4.8%）。因此，基于形態(tài)學(xué)和分子系統(tǒng)學(xué)的證據(jù)均表明此次在安徽省黃山風(fēng)景區(qū)發(fā)現(xiàn)的琴蛙為孟聞琴蛙。

圖2 基于線粒體COI基因琴蛙屬的貝葉斯樹Fig.2 Bayesian inference tree of Nidirana based on mitochondrial COI gene

近幾年來，隨著生物多樣性研究的深入，Lyu等［1］在浙江省金華市磐安縣大盤山風(fēng)景區(qū)發(fā)現(xiàn)曾被誤定為彈琴蛙的琴蛙新種，并命名為孟聞琴蛙。雖然在Lyu 等發(fā)表的文章中并未對安徽省的琴蛙樣本進(jìn)行采集分析，但據(jù)中國兩棲類網(wǎng)站［2-3］記載，安徽省有彈琴蛙的分布（宣城、池州、黃山）。據(jù)Lyu 等［1］描述，彈琴蛙鳴叫聲為2或3聲，孟聞琴蛙為2～7聲，筆者在黃山進(jìn)行兩棲類調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，同一片池塘內(nèi)，2或3聲和2～7聲的琴蛙叫聲都存在，兩者叫聲具有重合區(qū)間，即都會發(fā)出2 或3 聲的叫聲，由于研究區(qū)域的局限性，并未對池州和宣城的琴蛙屬物種進(jìn)行研究。綜上所述，目前尚不能確定安徽省是否具有彈琴蛙的分布，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

黃山風(fēng)景區(qū)是我國著名的山岳型風(fēng)景名勝區(qū)，位于北緯30°線，屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，地形復(fù)雜，植被垂直分布明顯，擁有多樣的生態(tài)系統(tǒng)［9］。此次孟聞琴蛙的發(fā)現(xiàn)豐富了黃山風(fēng)景區(qū)兩棲類多樣性，目前，還未有文獻(xiàn)記載黃山風(fēng)景區(qū)進(jìn)行過全面系統(tǒng)的兩棲動(dòng)物多樣性研究，后續(xù)要加強(qiáng)該區(qū)域兩棲動(dòng)物的調(diào)查研究，澄清該區(qū)域兩棲動(dòng)物多樣性。