大熊貓?jiān)畜wB超檢查的體位探究

楊 平，奉永友，黃祥明，王 順，蘭景超，吳孔菊，唐浩元，方 俊

（成都大熊貓繁育研究基地，四川省瀕危野生動(dòng)物保護(hù)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都，610081）

大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）屬食肉目（Carnivora）熊科（Ursidae），是國家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物，有“活化石”和“國寶”之稱。大熊貓胚胎有延遲著床的現(xiàn)象，環(huán)境適宜后才開始在子宮內(nèi)著床分化形成胎兒［1-3］，大熊貓妊娠期波動(dòng)較大，一般85～201 d［4］，最長可達(dá)324 d［2］。即使胚胎成功著床，雌性大熊貓也可能因應(yīng)激或其他未知原因發(fā)生流產(chǎn)［5］或胚胎被母體吸收［6］等情況。雖然大熊貓?jiān)谌焉锖笃诘牟墒沉匡@著減少并出現(xiàn)明顯的妊娠行為［7］，但部分雌性大熊貓存在假孕現(xiàn)象，且假孕大熊貓?jiān)诩に睾托袨樯吓c真孕大熊貓極為相似，難以直接區(qū)分［8］。因此，采用激素［9］、行為［7］和孕期判斷大熊貓是否懷孕通常容易出現(xiàn)誤判［10-11］。

B 超是一種現(xiàn)代化輔助診斷技術(shù)，廣泛應(yīng)用于家畜臨床生產(chǎn)，部分飼養(yǎng)繁育機(jī)構(gòu)也用于大熊貓懷孕情況監(jiān)測［6，8，12］。因大熊貓破壞性較強(qiáng)，麻醉對(duì)胎兒有影響且僅有部分大熊貓?jiān)敢馀浜瞎ぷ魅藛T完成特定動(dòng)作，所以目前B 超少量應(yīng)用于大熊貓?jiān)畜w檢查且均模仿孕婦B 超檢查的仰躺體位［1，13-15］。但由于大部分大熊貓?jiān)谌焉锖笃谑秤陆?、行?dòng)謹(jǐn)慎、緊張和休息時(shí)間增多，尤其是減食后期雌性大熊貓無食欲、不愿動(dòng)，大多數(shù)都拒絕配合行為訓(xùn)練特別是動(dòng)作較大的行為如仰躺，致使只有極少數(shù)大熊貓?jiān)跍p食后期仍愿意完成仰躺體位且能配合完成孕體B 超檢查。因此，有報(bào)道能配合完成非麻醉孕體B 超檢查的大熊貓樣本極少［1.6.16］，非麻醉孕體B 超檢查僅限于實(shí)驗(yàn)室研究階段，難以在生產(chǎn)中大規(guī)模推廣?；诖?，本研究通過探索減食期大熊貓自然表達(dá)且能配合完成非麻醉孕體B 超檢查的合適體位，以期將孕體B 超技術(shù)在大熊貓繁育工作中大范圍推廣并指導(dǎo)生產(chǎn)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

對(duì)成都大熊貓繁育研究基地2022 年配種的22只大熊貓（表1）進(jìn)行孕體B超檢查探索，因部分大熊貓緊張、不配合等原因，最后完成16 只孕體B 超檢查。

表1 2022年配種大熊貓的基本信息Tab.1 The information about breeding giant pandas in 2022

1.2 飼養(yǎng)管理

雌性大熊貓完成配種后，按配種大熊貓管理。管理內(nèi)容包括但不限于提供良好的外界環(huán)境條件和均衡營養(yǎng)，即提供單獨(dú)且不受影響的飼養(yǎng)場地，保持環(huán)境安靜，溫濕度適宜，充分滿足大熊貓對(duì)竹的需要，確保大熊貓血清鈣磷含量正常，對(duì)于出現(xiàn)妊娠反應(yīng)的大熊貓加強(qiáng)觀察，采集尿樣監(jiān)測孕激素變化。

1.3 試驗(yàn)工具

訓(xùn)練專用口哨、目標(biāo)棒、食物背桶（小鐵盆）、針管、酸鈣、蘋果、窩頭、耦合劑、B 超探頭（廢棄品）、百勝M(fèi)yLab DeLta Vet 型超聲診斷儀（SC3421腹部電子凸陣探頭，超聲頻率1～8 MHz）、伸縮式訓(xùn)練籠和平板床。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 訓(xùn)練和脫敏

通過綜合評(píng)估雌性大熊貓食物喜好和身體狀態(tài)，個(gè)性化使用窩頭、蘋果、酸鈣和蜂蜜水等食物對(duì)10 只雌性個(gè)體采用正增強(qiáng)方法開展仰躺行為訓(xùn)練和B 超脫敏（圖1），訓(xùn)練期間嚴(yán)格遵循塑形十大原則，讓大熊貓適應(yīng)操作人員、B 超探頭以及耦合劑。

圖1 訓(xùn)練籠內(nèi)的仰躺訓(xùn)練和B超脫敏Fig.1 The training of lying back and the desensitization by B-ultrasound in the training cage

1.4.2 工作小組及測量方法

大熊貓非麻醉孕體B 超檢查小組工作期間需3 或4 人，一人操作B 超機(jī)記錄圖像，一人操作探頭檢查，1 或2 人分散大熊貓注意力并觀察大熊貓狀態(tài)提醒探頭操作人員。

待被測大熊貓穩(wěn)定后，工作人員首先梳理其腹部毛發(fā)暴露腹部皮膚（以直線的形狀），然后在皮膚上涂抹藕合劑，再將MyLab DeLta Vet 型超聲診斷儀的探頭接觸涂有耦合劑的皮膚，探測到胎兒后抓取圖像和視頻；減食前每2 d 跟蹤1 次；減食后根據(jù)妊娠大熊貓配合程度而定，但每次進(jìn)行B 超檢查的前1 d晚上減少食物和飲水的供給。

1.4.3 記錄指標(biāo)

自妊娠大熊貓開始減食后，每天記錄采食情況、糞便量及喜食的食物。

2 結(jié)果

2.1 訓(xùn)練完成結(jié)果

因多種原因影響，參與行為訓(xùn)練的10 只大熊貓?jiān)跍p食前有6只能配合完成仰躺體位，4只不能完成仰躺體位和B超檢查；在減食后有7只大熊貓不配合完成仰躺體位和B超檢查（其中有3只在減食前能完成仰躺體位和B 超檢查），有3 只能配合完成仰躺體位和B 超檢查，但是隨著減食時(shí)間加長，睡覺時(shí)間增加，在減食后期參與行為訓(xùn)練的意愿降低，動(dòng)作完成度明顯變差，每次配合訓(xùn)練的時(shí)間明顯縮短，B 超檢查時(shí)間也極短（表2）。

表2 行為訓(xùn)練及脫敏完成情況Tab.2 The completion of training and desensitization

2.2 孕體B超檢查配合情況

因大熊貓緊張、不配合檢測等多種原因，2022年共對(duì)16只妊娠后期減食大熊貓完成B超檢查，其中7只假孕，9只子宮內(nèi)檢查到孕體（5只單胎，4只雙胞胎）。這16只大熊貓中有5只（奧林匹亞、家園、艾莉、績麗和婭韻）在減食前完成仰躺訓(xùn)練和B 超檢查，但在減食階段只有2只（奧林匹亞、績麗）繼續(xù)配合完成仰躺訓(xùn)練和B超檢查（圖2），1只在減食后期拒絕仰躺而犬坐（婭韻）（圖3），2只在減食后期不愿配合或配合意愿不高而趴、靠坐和側(cè)躺（家園、艾莉）（表3）。

圖2 奧林匹亞孕體B超檢查Fig.2 The B-ultrasound examination of Aolinpiya

圖3 減食前后的體位Fig.3 The postures before anorexia and after anorexia

表3 參與孕體B超檢查的妊娠大熊貓Tab.3 The pregnant giant panda participated in B-ultrasound examination

16 只大熊貓中有11 只在減食前未完成仰躺訓(xùn)練和B超檢測。其中，有4只納入訓(xùn)練計(jì)劃但未學(xué)會(huì)（雅韻、福祿、怡云和北川）；7只未進(jìn)行訓(xùn)練（文莉、二巧、香冰、成大、星辰、妮小和雅竹），但通過趴（圖4）、側(cè)躺（圖5）、犬坐（圖6）、倦坐（圖7）、靠坐（圖8）及半蹲（圖9）等一種或多種體位配合完成了B超檢查，其中星辰為野外放歸大熊貓（圖9，表3）。

圖4 體位(趴)及胎兒（單胎和雙胞胎）Fig.4 The posture（lying on its back）and the conceptus（single and twins）

圖5 體位(側(cè)躺)及單胎Fig.5 The posture（lying on its side）and the single conceptus

圖6 體位(犬坐)及雙胞胎Fig.6 The posture（sitting position of dog）and the twin conceptus

圖7 體位(倦坐)及雙胞胎Fig.7 The posture（curling）and the twin conceptus

圖8 體位(坐靠)及單胎Fig.8 The posture（sitting back）and the single conceptus

圖9 體位半蹲及野化放歸（假孕）Fig.9 The posture（squatting）and the reintroduction（pseudopregnancy）

2.3 首次檢查到孕體的時(shí)間

9 只產(chǎn)仔大熊貓?jiān)谌焉锖笃诘臏p食總時(shí)長為21～32 d，首次發(fā)現(xiàn)孕體時(shí)減食時(shí)長差異較大，最短為9 d（孕體體長13.9 mm）（圖10），最長為29 d；減食時(shí)長在9～15 d 的有4 只，孕體體 長為13.9～36.9 mm；首次同時(shí)發(fā)現(xiàn)雙胞胎時(shí)減食時(shí)長最短為13 d，最長為29 d；仰躺體位下首次發(fā)現(xiàn)孕體時(shí)減食時(shí)長約15 d（孕體體長16.0～21.3 mm），非仰躺體位下首次發(fā)現(xiàn)孕體時(shí)減食時(shí)長為9～11 d（孕體體長13.9～36.9 mm）（表4）。

圖10 體長最短的孕體Fig.10 The conceptus with the shortest length

表4 首次檢查到孕體的基本情況Tab.4 The information on detecting conceptus for the first time

3 討論

3.1 首次B超檢測到孕體的時(shí)間

本研究發(fā)現(xiàn)9只產(chǎn)仔大熊貓?jiān)谌焉锖笃诘臏p食時(shí)長為21～32 d，首次發(fā)現(xiàn)孕體最早在產(chǎn)前13 d，一般集中在產(chǎn)前10～13 d，即妊娠大熊貓減食9～15 d（孕體體長為13.9～36.9 mm），與此前報(bào)道［4］一致。通過多次B超檢查大熊貓發(fā)現(xiàn)，檢查到孕體時(shí)B超探頭的位置多集中在體表下乳頭正下方5～10 cm的區(qū)域內(nèi)，因此，可用其下乳頭進(jìn)行體表定位。妊娠B超診斷技術(shù)具有操作便捷、時(shí)間短、安全性高以及臨床診斷價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)，通過妊娠B超診斷能提前確定妊娠大熊貓是否懷孕，從而指導(dǎo)母獸的營養(yǎng)制定、飼養(yǎng)管理、產(chǎn)房調(diào)整以及育幼準(zhǔn)備等工作，尤其是可以為母獸提前補(bǔ)充營養(yǎng)制劑，避免難產(chǎn)等異常情況，提高幼仔出生后的成活率［16］。此外，通過研究發(fā)現(xiàn)雌性大熊貓減食9～15 d時(shí)孕體體長為13.9～36.9 mm，此時(shí)減食時(shí)間較短，對(duì)母獸開展孕體B超檢查配合度相對(duì)較高，孕體也較好識(shí)別。

3.2 妊娠母獸體位

目前，妊娠大熊貓?jiān)畜wB 超檢查均采用仰躺體位，雖然仰躺體位便于識(shí)別孕體，但對(duì)母獸要求較高。本研究中的10 只大熊貓參與行為訓(xùn)練在減食前僅有5 只配合仰躺和B 超檢查，在減食后期上述5 只妊娠大熊貓中也只有3 只配合仰躺和B 超檢查，特別是有一只大熊貓經(jīng)過2 年強(qiáng)化訓(xùn)練，減食前配合度很高而減食后基本不采食食物、不理會(huì)口令、不愿配合或行為極差，即使配合完成仰躺的B 超檢查，時(shí)間也極短。因此，訓(xùn)練大熊貓?jiān)跍p食期間采用仰躺配合進(jìn)行孕體B超檢查不具有大范圍推廣的可行性。

通過觀察妊娠后期的大熊貓發(fā)現(xiàn)，部分妊娠大熊貓?jiān)跍p食后期性格溫順，喜歡休息，活動(dòng)少，表達(dá)很多放松行為如趴在睡床上、走動(dòng)后趴在地上、犬坐、側(cè)臥、靠墻（睡床）而坐、倦坐及半蹲等?；诖笮茇埖纳鲜鎏攸c(diǎn)，本研究改變了現(xiàn)有訓(xùn)練仰躺B 超檢查的思路，靜等大熊貓表現(xiàn)出趴、犬坐、側(cè)臥、靠坐、倦坐及半蹲等非仰躺體位，并在保證自身安全的前提下進(jìn)行B 超檢查，當(dāng)大熊貓表現(xiàn)出不適或拒絕行為則結(jié)束B 超檢查，待其恢復(fù)后再開展。通過研究最后發(fā)現(xiàn)B 超檢查發(fā)現(xiàn)孕體的體位有趴、側(cè)躺、犬坐、倦坐、靠坐和半蹲等，且孕體檢查到的時(shí)間以及孕體的體長在非仰躺體位和仰躺體位之間相近，該發(fā)現(xiàn)突破了現(xiàn)有大熊貓?jiān)畜wB 超檢查局限于仰躺體位的限制。此外，妊娠后期大熊貓更愿意表達(dá)各種難度低的行為，非仰躺體位對(duì)母獸無應(yīng)激反應(yīng)且在實(shí)際中經(jīng)常出現(xiàn)，大幅減少對(duì)減食后期母獸的體位要求，因此采用非仰躺體位為大熊貓?jiān)畜wB 超檢查的大規(guī)模推廣提供了可能性。

本研究的探索結(jié)果改變了現(xiàn)有孕體B 超檢查思路，由讓大熊貓配合人完成特定動(dòng)作開展B 超變?yōu)樽屓说却笮茇堊匀环潘啥鴮C(jī)進(jìn)行B 超檢查，極大地減少了對(duì)妊娠母獸的應(yīng)激反應(yīng)，更有利于孕體B超在大熊貓繁育中的大范圍推廣。