超聲造影與乳腺癌組織中BRMS1、ING4 表達的相關性研究

陳金笑，王瑤，柯林燕

乳腺癌的發(fā)病率和死亡率在女性惡性腫瘤中位列首位。超聲檢查是臨床進行乳腺篩查的首選方式，雖可及時發(fā)現(xiàn)病灶，但鑒別性質(zhì)有所不足。超聲造影通過增強血液和氣體聲阻抗差[1]，清晰顯示病灶的灌注模式顯示度，從而提高病灶良惡性的診斷能力。生長抑制因子4（ING4）是主要發(fā)揮抑癌基因功能、抑制腫瘤血管新生和促進腫瘤細胞凋亡的重要生長抑制因子，可參與調(diào)控惡性腫瘤細胞的周期、凋亡等過程。唐卉等[2]指出，乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因（BRMS1）的表達直接參與乳腺癌發(fā)生及進展，其表達水平與臨床病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈負相關，不僅可抑制機體乳腺癌細胞的遠處轉(zhuǎn)移，而且還能參與其他惡性腫瘤細胞的遠處轉(zhuǎn)移?；诖?，本研究旨在探討超聲造影與乳腺癌組織中BRMS1、ING4 表達的關系，為乳腺癌臨床干預提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年2月至2023年2月麗水市人民醫(yī)院收治的乳腺癌患者68 例，設為乳腺癌組，年齡30 ～60 歲，平均（38.4±4.3）歲；腫塊大小（10.30±9.75）mm。另選同期收治的68 例乳腺良性腫瘤為對照組，年齡25 ～58 歲，平均（36.3±5.3）歲；腫塊大?。?0.00±10.23）mm，且每位患者均僅單乳1個結(jié)節(jié)。所有患者均簽署了相關知情同意書，且本研究經(jīng)麗水市人民醫(yī)院科研倫理委員會審批通過。

乳腺癌組納入標準：（1）符合乳腺癌診斷標準[3]；（2）首次確診；（3）接受乳腺癌改良根治術。對照組納入標準：（1）符合《乳腺疾病診療學》中乳腺結(jié)節(jié)診斷標準[3]；（2）行超聲下微創(chuàng)旋切手術，病理學診斷為纖維瘤等良性結(jié)節(jié)；（3）觸診可觸及乳腺結(jié)節(jié)。排除標準：（1）心肺功能異常；（2）合并其他惡性腫瘤；（3）超聲造影圖像不清晰或不完整；（4）處于哺乳期；（5）對超聲對比劑過敏。

1.2 BRMS1、ING4 檢測 對照組行超聲下微創(chuàng)旋切手術。采用美國強生公司的麥默通（MaIIlIIlotome，MMT）真空輔助旋切系統(tǒng)，系統(tǒng)由遠端微電腦控制。囑患者取仰臥位，健側(cè)上肢抓住對側(cè)床頭，使用日本日立（HITACHI）公司生產(chǎn)的HV VISION Preirus（大二郎神）超聲診斷儀（頻率3 ～10.0 MHz）掃查乳腺腫塊及周圍血管情況，用標記筆標明，盡量避免乳暈等血流豐富區(qū)域進針。在病灶約5 cm 范圍行皮膚消毒、鋪巾，使用注射器抽取5 ml 的1%鹽酸利多卡因，在病灶周邊進行局部麻醉。使用一次性尖刀切約3 mm 的微創(chuàng)切口，將旋切刀頭（8 G）置于病灶深面，使頭端凹槽完全對準病灶并調(diào)節(jié)至取樣模式反復多次切割，切割完畢后使用抽吸模式將腫塊和殘腔滲血吸盡，抽出刀頭，最后使用彈力繃帶加壓包扎傷口72 h。將旋切后的腫瘤送病理檢查。

乳腺癌組接受乳腺癌改良根治術去除病灶。術中取病灶組織，經(jīng)8% SDS-PAGE 電泳后轉(zhuǎn)至PDVF膜，封閉非特異結(jié)合位點，加入BRMS1、ING4 一抗（1∶500），37℃溫育2h，再加入二抗（1∶5000），37℃溫育2 h，ECL 發(fā)光液顯色。

1.3 超聲造影檢查 采用法國Aixplorer 新聲威特種兼?zhèn)湓\斷儀（生產(chǎn)廠家：SuperSonic Imagine 法國聲科醫(yī)療有限公司；探頭型號：12-5 淺表探頭；超聲波頻率：4 ～15 MHz）。HFR CEUS 的對比劑采用意大利Bracco 公司的SonoVue（六氟化硫氣體59 mg/瓶，白色凍干粉25 mg/瓶）。

使用常規(guī)超聲對腫塊進行連續(xù)多切面掃查，選取乳腺病灶血流信號最豐富的切面切換至CEUS模式。經(jīng)肘正中靜脈團注SonoVue 4.8 ml，隨即推注5.0 ml 0.9%氯化鈉注射液，同時啟動圖像存儲功能，存儲時間2 min，造影結(jié)束后將圖像轉(zhuǎn)存至移動硬盤。勾畫2 個感興趣區(qū)：病灶內(nèi)增強最顯著的區(qū)域和病灶周圍同一深度的正常腺體組織。分析生成時間一強度曲線，比較曲線中達峰強度（PI）和曲線下方面積大?。ˋUC）。

CEUS 由2 名具有3年以上淺表疾病超聲診斷經(jīng)驗的醫(yī)師進行操作，操作結(jié)束后獨立觀看造影動態(tài)圖像進行評估。若判斷結(jié)果不一致，則由科內(nèi)副主任醫(yī)師盲審判斷最終結(jié)果。CEUS 乳腺癌判斷標準參考乳腺疾病超聲檢查質(zhì)量控制專家共識（2019 版）[4]。

1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行分析，滿足正態(tài)分布且方差齊的計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t 檢驗；相關分析采用Pearson相關性分析或Spearman 相關性分析。P ＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組和對照組BRMS1、ING4 相對蛋白表達水平比較 乳腺癌組患者BRMS1 和ING4 表達均低于對照組（均P ＜0.05），見表1。

表1 乳腺癌組和對照組BRMS1、ING4 相對蛋白表達水平比較

2.2 乳腺癌組和對照組超聲造影參數(shù)比較 乳腺癌組患者PI 和AUC 超聲造影參數(shù)均高于對照組（均P ＜0.05），見表2。

表2 乳腺癌組和對照組超聲造影參數(shù)比較

2.3 BRMS1、ING4 蛋白表達與超聲造影參數(shù)的相關性分析 BRMS1、ING4 蛋白表達與PI和AUC超聲造影參數(shù)均呈負相關（均P ＜0.05），見表3。

表3 BRMS1、ING4 蛋白表達與超聲造影參數(shù)的關系

2.4 乳腺癌不同臨床分期患者BRMS1、ING4 蛋白表達比較 乳腺癌組中I～II期患者BRMS1、ING4蛋白均高于乳腺癌組中III ～IV 期患者（均P ＜0.05），見表4。

表4 乳腺癌不同臨床分期患者BRMS1、ING4 蛋白表達比較

2.5 乳腺癌不同臨床分期患者超聲造影參數(shù)比較

乳腺癌組中I ～II 期分期患者PI 和AUC 超聲造影參數(shù)均低于乳腺癌III～IV期患者（均P＜0.05），見表5。

表5 乳腺癌不同臨床分期患者的超聲造影參數(shù)比較

2.6 乳腺癌組患者BRMS1、ING4 蛋白表達和超聲造影參數(shù)與臨床分期的相關性 乳腺癌組患者不同臨床分期與BRMS1、ING4 蛋白表達均呈負相關（r=-0.364、-0.471，均P ＜0.05），與PI、AUC 超聲造影參數(shù)均呈正相關（r=0.671、0.586，均P ＜0.05）。

3 討論

乳腺癌的發(fā)生、進展和侵襲機制涉及多基因和多階段，超聲造影可利用血流灌注的強度和血流消退的順序，對病灶內(nèi)微血管分布及灌注特征進行可視化呈現(xiàn)，具有實時和便捷的特點。

BRMS1 基因作為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子中的新興因子，對惡性腫瘤起到抑制作用；ING4 基因編碼的蛋白主要定位于細胞核內(nèi)，可通過抑制缺氧誘導因子的表達而抑制腫瘤血管的新生，其蛋白表達缺失可與惡性腫瘤的發(fā)生和進展存在密切聯(lián)系。因乳腺癌組患者中癌組織的不斷增殖和進展，BRMS1 和ING4 蛋白對機體的惡性腫瘤起到抑制作用，所以蛋白表達低于乳腺良性腫瘤患者。在超聲造影中PI、AUC 參數(shù)描述的是整個動態(tài)增強周期腫瘤組織對比劑濃度變化的趨勢，可反映病灶組織的血流灌注和通透性。陳沛芬等[5]研究顯示，乳腺癌患者在行超聲造影檢查時PI 和AUC 參數(shù)高于良性結(jié)節(jié)患者，這提示乳腺癌患者癌組織中的血流灌注高于良性結(jié)節(jié)，且與腫瘤特性所相吻合。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組患者的BRMS1 和ING4 表達均低于對照組（均P ＜0.05），PI 和AUC 超聲造影參數(shù)均高于對照組（均P ＜0.05），相關性分析顯示，BRMS1、ING4 蛋白表達與PI 和AUC 超聲造影參數(shù)均呈負相關（均P ＜0.05）。這說明造影的PI 和AUC 參數(shù)對評估乳腺癌患者具有一定的診斷意義。

腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因指一些基因編碼的蛋白酶，其能夠直接或間接地抑制具有促進轉(zhuǎn)移作用的蛋白，從而降低癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的一類基因。BRMS1 已被反復證實在多種腫瘤中表達，并抑制腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移。ING4 基因在大多數(shù)已被檢測的正常組織中均有表達[6]，但在腫瘤組織中表達突變或者下調(diào)。乳腺癌是一種血管依賴性病變，癌細胞會向血液循環(huán)中釋放，且因機體的新生血管缺乏肌層，管壁較薄且走形不規(guī)則，極易形成高速血流，超聲造影檢查所使用的對比劑為大分子物質(zhì)，僅存在于機體血管內(nèi)，并不會滲入細胞間隙內(nèi)，因此在直接反映病灶血供狀態(tài)的同時并不會受到細胞通透性的影響[7-9]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組中I ～II 期患者的BRMS1、ING4 蛋白均高于乳腺癌III ～IV 期患者（均P ＜0.05），PI 和AUC 超聲造影參數(shù)均低于乳腺癌III ～IV 期患者（均P ＜0.05）；乳腺癌患者不同臨床分期與BRMS1、ING4 蛋白表達均呈負相關，與PI、AUC超聲造影參數(shù)均呈正相關（均P＜0.05）。這說明不同分級的乳腺癌，其造影指標參數(shù)也會有不同的變化，而造影指標參數(shù)也與BRMS1、ING4 蛋白具有一定的關系。

利益沖突 所有作者聲明無利益沖突