馬齒莧外洗散劑的薄層鑒別及初步穩(wěn)定性考察

劉繼均 周 艷 王 凌 陳土榮 趙毛香 李澤福 梁培鑫

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510378）

散劑系指原料藥物或與其適宜的輔料經(jīng)粉碎、均勻混合制成的干燥粉末狀制劑［1］，具有分散程度大、起效快、易吸收、生物利用度高、便于攜帶等優(yōu)點(diǎn)，且散劑的使用量便于控制，更適用于老人和小孩［2］。馬齒莧外洗散劑為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院的臨床經(jīng)驗(yàn)方，主要由馬齒莧、板藍(lán)根、香附、木賊、薏苡仁、柴胡、磁石、敗醬草、訶子、紅花、大青葉等中藥組成。該制劑為外洗散劑，灰褐色細(xì)粉，具有清熱燥濕、解毒消疣的功效，臨床主要用于治療帶狀皰疹、水痘、尋常疣、扁平疣、跖疣、尖銳濕疣等病毒性皮膚病。為了更好地控制馬齒莧外洗散劑的質(zhì)量，保證其臨床療效，本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法（TLC）對(duì)其進(jìn)行了定性鑒別研究，建立了方中板藍(lán)根、大青葉、紅花和訶子的薄層定性鑒別方法，并對(duì)該制劑進(jìn)行了穩(wěn)定性考察。

1 儀器與實(shí)驗(yàn)用藥

1.1 儀器預(yù)制硅膠G 薄層板（青島海洋化工廠分廠，規(guī)格：10 cm×10 cm）；硅膠G（青島海洋化工廠）；KS-150EI 型超聲波清洗機(jī)（寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司）；WFH-203B三用紫外分光儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；MSE125P-OCE-DU 分析天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；LHS-150SC 型恒溫恒濕培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；MTC-250 藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（上海三騰儀器有限公司）；DHG-9140型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；LRH-70 生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；MIR-150A 霉菌培養(yǎng)箱（上海三騰儀器有限公司）；BOS-150干熱滅菌器（上海三騰儀器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥馬齒莧外洗散劑（批號(hào)：210501、210701、210901）由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院制劑室提供；馬齒莧、板藍(lán)根、香附、木賊、薏苡仁、柴胡、磁石、敗醬草、訶子、紅花、大青葉等中藥飲片購(gòu)自嶺南中藥飲片有限公司，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)吳雪茹教授鑒定均為正品；板藍(lán)根對(duì)照藥材（批號(hào)：DZYC-K-007）、大青葉對(duì)照藥材（批號(hào)：DZYC-D-021）、紅花對(duì)照藥材（批號(hào)：DZYC-H-008）、靛玉紅對(duì)照品（批號(hào)：D-025-181119）均由成都瑞芬思生物科技有限公司提供；沒(méi)食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-201605）由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 馬齒莧外洗散劑的薄層鑒別研究

2.1.1 板藍(lán)根和大青葉薄層鑒別取本品15 g，加二氯甲烷（天津市大茂化學(xué)試劑廠）60 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液濃縮至1～2 mL，作為供試品溶液。另取大青葉對(duì)照藥材0.2 g，加二氯甲烷5 mL，超聲20 min，濾過(guò)，即得大青葉對(duì)照藥材溶液。另取板藍(lán)根對(duì)照藥材5 g，加乙酸乙酯（天津市大茂化學(xué)試劑廠）50 mL，回流2 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)佣燃淄?.5 mL 使溶解，即得板藍(lán)根對(duì)照藥材溶液。再取靛玉紅對(duì)照品，加二氯甲烷制成1 mL 含0.1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。參照TLC（通則0502）實(shí)驗(yàn)［1］，吸取上述4種溶液各5～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷（天津市大茂化學(xué)試劑廠）-乙酸乙酯（3∶2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜、對(duì)照普色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

圖1 板藍(lán)根、大青葉TLC鑒別圖譜

2.1.2 紅花薄層鑒別取本品30 g，加甲醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠）25 mL，密塞，超聲40 min，靜置，取上清液作為供試品溶液。另取紅花對(duì)照藥材0.23 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。TLC（通則0502）實(shí)驗(yàn)，吸取上述2 種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上，以3.6%鹽酸（廣東銘固化學(xué)科技有限公司）-乙酸乙酯-甲醇（7∶1∶3）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜、對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

圖2 紅花TLC鑒別圖譜

2.1.3 訶子薄層鑒別取本品10 g，加乙醇30 mL，超聲處理20 min，取上清液，濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成1 mL 含1 mg 的溶液，作為對(duì)照溶液。TLC（通則0502）實(shí)驗(yàn)，吸取上述2 種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（天津市百世化工有限公司）（6∶4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠）溶液，80 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜、對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖3。

圖3 訶子TLC鑒別圖譜

2.2 馬齒莧外洗散劑的穩(wěn)定性考察根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典：四部》［1］2020 版“通則·9000 指導(dǎo)原則”中的原料藥物與制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則，將3 批馬齒莧外洗散劑分別于恒溫恒濕條件下進(jìn)行加速實(shí)驗(yàn)，溫度（40±2）℃、相對(duì)濕度（75%±5%），分別于第1個(gè)月、2個(gè)月、3 個(gè)月、6 個(gè)月末各考察1 次，按照制劑穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目（包括性狀、鑒別、檢查、微生物限度）進(jìn)行檢查，結(jié)果樣品各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，質(zhì)量穩(wěn)定。見(jiàn)表1。

表1 3批馬齒莧外洗散劑加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表1 可知，馬齒莧外洗散劑在加速實(shí)驗(yàn)中外觀均為棕黃色的粉末，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；各個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣的板藍(lán)根和大青葉、紅花、訶子的薄層鑒別均呈正反應(yīng)，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；外觀均勻度、水分、裝量差異等各項(xiàng)檢查項(xiàng)也均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的微生物限度均符合規(guī)定，說(shuō)明馬齒莧外洗散劑質(zhì)量穩(wěn)定且可靠。

3 討論

板藍(lán)根為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigoticaFort.的干燥根，大青葉為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigoticaFort.的干燥葉。二者植物來(lái)源均為十字花科植物菘藍(lán)，故考慮以其共同化學(xué)成分為對(duì)照進(jìn)行薄層鑒別。在查閱相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，采用前文所述方法進(jìn)行鑒別，所得色譜斑點(diǎn)清晰，供試品色譜與對(duì)照藥材色譜對(duì)應(yīng)良好，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，可作為本品鑒別方法。

《中華人民共和國(guó)藥典：一部》［3］2020年版第157頁(yè)紅花“鑒別”項(xiàng)下采用薄層鑒別方法進(jìn)行鑒別，結(jié)果所得色譜斑點(diǎn)清晰，供試品色譜與對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜對(duì)應(yīng)良好，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。但因丙酮極度易燃，具刺激性及較大毒性。薄層鑒別應(yīng)盡量使用毒性較小的試劑進(jìn)行溶液制備及展開(kāi)，以確保實(shí)驗(yàn)的可操作性及實(shí)驗(yàn)人員的安全［4］，遂換用前文所述薄層方法。結(jié)果所得色譜斑點(diǎn)清晰，供試品色譜與對(duì)照藥材色譜對(duì)應(yīng)良好，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，可作為本品鑒別方法。

《中華人民共和國(guó)藥典：一部》［3］2020年版第194頁(yè)訶子“鑒別”項(xiàng)下薄層鑒別供試液與對(duì)照液制備方法操作較為復(fù)雜，遂尋找較為簡(jiǎn)便的方法。通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，最后采用前文所述方法進(jìn)行鑒別，色譜斑點(diǎn)清晰，供試品色譜與對(duì)照品色譜對(duì)應(yīng)良好，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，可作為本品鑒別方法。

依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典：四部》［1］2020 年版“通則”（0115 散劑），對(duì)本品的外觀均勻度、水分、裝量差異、微生物限度進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均符合規(guī)定。

薄層鑒別是中藥制劑鑒別的主要方法之一［5，6］，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便而被廣泛應(yīng)用。馬齒莧外洗散劑在臨床上以外用熏洗法使用，可以治療及輔助治療病毒性相關(guān)皮膚病，在廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院皮膚科廣受歡迎。薄層鑒別以及相應(yīng)檢查，可以保證其質(zhì)量，今后亦可進(jìn)行含量測(cè)定等相關(guān)研究，進(jìn)一步完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。