POCT在呼吸道感染病原體檢測(cè)中的應(yīng)用研究

張小偉

（佛山復(fù)星禪誠(chéng)醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，廣東 佛山 528000）

呼吸道感染性疾病主要是由于致病微生物進(jìn)入呼吸道，在大量繁殖后引起了相應(yīng)的癥狀。造成呼吸系統(tǒng)感染的微生物種類包括病菌、病毒、支原體、真菌、寄生蟲等，其中絕大部分呼吸道感染都是由病毒引起的。成人病毒性呼吸道感染的住院率約為0.02%，老年患者可達(dá)到1.2%[1]。病毒性呼吸道感染發(fā)病率高，具有較強(qiáng)的傳染性，尤其是免疫力較低的小兒、老年人最容易發(fā)生感染。春冬兩季是病毒性呼吸道感染的高發(fā)季節(jié)，發(fā)病人群驟增，會(huì)導(dǎo)致醫(yī)院住院治療的人數(shù)增多[2]，使呼吸科工作量增加，病人負(fù)荷重，甚至還會(huì)造成一些免疫力低下的老年人或兒童死亡。呼吸道感染性疾病嚴(yán)重威脅老年人及兒童的健康，并給諸多家庭帶來(lái)了一定的經(jīng)濟(jì)壓力和心理負(fù)擔(dān)。因此，能夠在發(fā)病早期快速、精準(zhǔn)地檢測(cè)出引起呼吸道感染性疾病的病原體種類，對(duì)疾病的臨床治療和轉(zhuǎn)歸具有重要的意義。傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)等檢測(cè)方法雖然準(zhǔn)確性高，但操作復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，不利于大規(guī)模樣本的檢測(cè)、篩查，也會(huì)耽誤患者的最佳治療時(shí)機(jī)，尤其是在一些突發(fā)性公共衛(wèi)生事件中，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法不適用于這種應(yīng)急領(lǐng)域。近年來(lái)，即時(shí)檢驗(yàn)（point-of care testing，POCT）逐漸在臨床上得到了推廣應(yīng)用。該技術(shù)能夠在病人床邊進(jìn)行檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確、樣本微量化等優(yōu)點(diǎn)，能夠簡(jiǎn)化檢測(cè)流程，縮短檢測(cè)時(shí)間，及時(shí)準(zhǔn)確地判斷感染的病原體種類。本文就POCT 的發(fā)展、醫(yī)學(xué)價(jià)值、技術(shù)特點(diǎn)、局限性以及在常見呼吸道感染性疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行綜述，現(xiàn)介紹如下。

1 POCT 的概述

1.1 POCT 的定義及現(xiàn)狀

POCT 是指能夠在采樣地點(diǎn)即時(shí)即刻進(jìn)行檢測(cè)，避免樣本在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中進(jìn)行復(fù)雜的標(biāo)本處理過(guò)程，從而能夠迅速獲得檢驗(yàn)結(jié)果的一種方法[3]。該方法以儀器小型輕便、操作簡(jiǎn)單、程序簡(jiǎn)潔、耗時(shí)短、精確度和靈敏度高為特點(diǎn)，能夠?yàn)榛颊郀?zhēng)取治療時(shí)間。在臨床檢驗(yàn)技術(shù)迅速發(fā)展的今天，我國(guó)臨床常用的POCT 技術(shù)被廣泛應(yīng)用于內(nèi)科疾病、心腦血管疾病、感染性疾病及其他一些疾病的快速檢測(cè)中。同時(shí)，POCT 技術(shù)在急診救護(hù)、重癥監(jiān)護(hù)室、社區(qū)醫(yī)院也發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。

1.2 POCT 的特點(diǎn)和價(jià)值

POCT 的鮮明特點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)室設(shè)備微型化、操作步驟簡(jiǎn)單化及報(bào)告結(jié)果即時(shí)化，可以就近、迅速地得到檢測(cè)結(jié)果，使醫(yī)護(hù)人員能夠根據(jù)檢測(cè)結(jié)果盡早采取有效的治療及處置措施。隨著時(shí)代的不斷發(fā)展，POCT技術(shù)也在不斷的更新。該技術(shù)具有的檢測(cè)速度快、便于攜帶、應(yīng)用簡(jiǎn)易等特性，對(duì)醫(yī)生、護(hù)士及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員都具有強(qiáng)大的吸引力。另外，在臨床應(yīng)用中，POCT 技術(shù)不需要在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)雜的標(biāo)本處理，能夠節(jié)省很多時(shí)間，實(shí)現(xiàn)即采即檢，且操作簡(jiǎn)便。近年來(lái)隨著POCT 技術(shù)的發(fā)展，其應(yīng)用范圍也從醫(yī)院、病房、門診、急診、事故現(xiàn)場(chǎng)等逐漸擴(kuò)展到家庭、救護(hù)車、社區(qū)藥店、社區(qū)服務(wù)中心、海關(guān)等。該技術(shù)能夠滿足醫(yī)生和患者在時(shí)間上的需求，實(shí)際操作中省去了許多復(fù)雜的步驟，可由臨床醫(yī)生、護(hù)士甚至患者或其家屬獨(dú)立完成。與臨床傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)相比，POCT 在診斷時(shí)間上更具優(yōu)勢(shì)。研究指出，POCT 的使用會(huì)縮短臨床醫(yī)學(xué)診斷的時(shí)間，對(duì)改善患者的預(yù)后具有重要且實(shí)際的意義[4]。隨著POCT 技術(shù)的逐步完善、檢測(cè)品質(zhì)的不斷提高以及機(jī)器設(shè)備的不斷優(yōu)化，POCT 在感染性疾病尤其是呼吸道感染性疾病的臨床診斷和治療中將會(huì)起到越來(lái)越重要的作用。

1.3 POCT 的局限性

由于POCT 的實(shí)際操作過(guò)程比較簡(jiǎn)單，因此操作人員大多是未經(jīng)過(guò)正規(guī)培訓(xùn)的醫(yī)生、護(hù)士甚至是患者本人或其家屬等非專業(yè)人員，在實(shí)際操作過(guò)程中基本上不會(huì)實(shí)施質(zhì)控，這就導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一定的誤差。同時(shí)，檢驗(yàn)標(biāo)本采集、試劑采購(gòu)和保存等都比較隨意，儀器間無(wú)比對(duì)試驗(yàn)，平時(shí)既無(wú)室內(nèi)質(zhì)控，又無(wú)室間質(zhì)評(píng)，檢驗(yàn)質(zhì)量完全處于無(wú)人管理的狀態(tài)，這些因素都使得POCT 的準(zhǔn)確度、靈敏度、精密度不如傳統(tǒng)檢測(cè)方法[3]。

2 POCT 在常見呼吸道感染性疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

2.1 新型冠狀病毒肺炎（新冠肺炎）

2019 年肆虐全球的新冠肺炎對(duì)人們的生活造成了很大的影響，在最初流行時(shí)新冠肺炎的致死率較高。本病是一種由新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）感染引起的急性呼吸道傳染病，其潛伏期為1 ～14 d。后來(lái)盡管新冠肺炎患者多為輕型病例，但本病具有高度傳染性，發(fā)病人數(shù)眾多。國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)公布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》中提到，新冠肺炎確診病例必須有病原學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性的依據(jù)，即逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)SARS-CoV-2 核酸呈陽(yáng)性，或經(jīng)高通量測(cè)序與已知的SARS-CoV-2 高度同宗[5]?？焖贆z出SARS-CoV-2 對(duì)新冠肺炎疫情的防控及患者的早診斷、早治療、早隔離具有重要意義。SARS-CoV-2 的POCT 技術(shù)包括核酸檢測(cè)、抗原檢測(cè)和抗體檢測(cè)，其中核酸檢測(cè)結(jié)果是主要診斷依據(jù)，抗原、抗體檢測(cè)結(jié)果是核酸檢測(cè)結(jié)果重要的輔助診斷依據(jù)。核酸檢測(cè)對(duì)及早發(fā)現(xiàn)無(wú)癥狀感染者以及疾病的治療具有重要意義，也有助于疫情的早期防控。抗原、抗體檢測(cè)主要是檢測(cè)呼吸道分泌物中病毒感染所產(chǎn)生的SARS-CoV-2 蛋白質(zhì)，可在30 min 內(nèi)獲得檢測(cè)結(jié)果。人體感染SARS-CoV-2 后最早產(chǎn)生的抗體是免疫球蛋白M（IgM）抗體，隨著病程的延長(zhǎng)，IgM 抗體的滴度逐漸消失，免疫球蛋白G（IgG）抗體逐漸產(chǎn)生。因此，IgM、IgG 抗原檢測(cè)可以作為新冠肺炎的輔助診斷方法[6]。

2.2 流感

流感是由流感病毒感染引起的呼吸道傳染性疾病，具有傳播速度快、覆蓋面廣、傳染性強(qiáng)、呈周期性流行等特點(diǎn)，可引起全球性感染。病毒培養(yǎng)、免疫熒光法、PCR 核酸檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)等是流感病毒常規(guī)的檢測(cè)方法。但這些方法多因檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)所用儀器設(shè)備特殊等很難被臨床上廣泛使用。屬于POCT 技術(shù)的膠體金免疫層析法（GICA）是通過(guò)利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)，以膠體金為標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)的一種方法，其檢測(cè)結(jié)果在較短時(shí)間內(nèi)便可獲得。GICA 操作簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉，適用于大樣本的篩查，也可作為早期診斷病毒感染的有效手段。臨床檢測(cè)流感病毒及區(qū)別不同流感病毒亞型的最佳方法是PCR法。目前，臨床已有依據(jù)逆轉(zhuǎn)錄PCR 方式的POCT 檢測(cè)試劑盒，可以實(shí)現(xiàn)智能化、多重PCR 檢測(cè)，能夠同時(shí)檢測(cè)流感病毒和呼吸道合胞病毒，并且檢測(cè)結(jié)果可在1 h 內(nèi)獲得，有較高的敏感性和特異性，為臨床決策提供了科學(xué)的依據(jù)[7]。

2.3 支原體肺炎（mycoplasmapneumonia，MP）

MP 是感染肺炎支原體所導(dǎo)致的一種間質(zhì)性肺炎，多見于兒童，尤其是嬰幼兒。研究表明，近年來(lái)MP 的發(fā)病率逐年上升[8]。肺炎支原體是最常見的造成兒童肺炎的病原體之一。采用GICA 檢測(cè)末梢血MPIgM 抗體是如今較為常見的POCT 技術(shù)，適用于醫(yī)院呼吸科或急診科迅速篩查疑似MP 患兒。該方法在小兒MP-IgM 抗體檢測(cè)中的敏感性較高，且具有操作簡(jiǎn)便、快速、用血量少、試劑保存方便等優(yōu)點(diǎn)，可一步完成檢測(cè)，有利于臨床兒科對(duì)MP 的診斷，是早期快速診斷小兒MP 的有效方法。但抗原含量低時(shí)采用GICA 進(jìn)行檢測(cè)很容易發(fā)生漏診，陰性結(jié)果并不能排除MP，并且IgM 抗體可以在一部分痊愈患者體內(nèi)持續(xù)存在，對(duì)短時(shí)間再度感染的MP 的評(píng)估會(huì)有一定的困難[9]。

2.4 結(jié)核病

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的一種人獸共患的慢性傳染性疾病，可經(jīng)呼吸道飛沫傳播[10]。結(jié)核病的診斷金標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)疑似患者的痰液或肺泡灌洗液標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)，但細(xì)菌培養(yǎng)所需的時(shí)間較長(zhǎng)，且涂片需要手工制作，影響因素較多。進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，即便是采用速度最快的培養(yǎng)技術(shù)，也最少需要2 周才能出結(jié)果，這時(shí)再制定治療方案會(huì)耽誤患者的病情，而憑借經(jīng)驗(yàn)制定的治療方案又容易造成結(jié)核分枝桿菌耐藥[11]。因此，快速準(zhǔn)確地獲得檢測(cè)結(jié)果對(duì)結(jié)核病患者治療方案的制定及促進(jìn)疾病轉(zhuǎn)歸具有重要的意義。目前，可用于輔助診斷結(jié)核病的POCT 技術(shù)越來(lái)越多，例如利用免疫膠體金技術(shù)能夠檢測(cè)血清、血漿或全血中的結(jié)核分枝桿菌抗體。該技術(shù)對(duì)大規(guī)模疑似結(jié)核病患者的初篩具有重要價(jià)值，但對(duì)于一些免疫系統(tǒng)異常的人群，檢測(cè)的靈敏度可能會(huì)相對(duì)較低。在結(jié)核病的診斷中應(yīng)用POCT 技術(shù)能夠輔助臨床診斷，且能較準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌的耐藥基因，對(duì)指導(dǎo)臨床治療具有重要的意義。

3 結(jié)語(yǔ)

與傳統(tǒng)的病原學(xué)檢測(cè)相比，POCT 在呼吸道感染性疾病的診斷中具有更快的檢測(cè)速度，能大大縮短檢測(cè)時(shí)間，簡(jiǎn)化檢測(cè)步驟，快速得出檢測(cè)結(jié)果，且成本較低，對(duì)于臨床治療方案的制定、傳染性疾病的防控以及患者預(yù)后的改善均具有重要作用。在應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件時(shí)，POCT 是快速檢測(cè)致病病原體的強(qiáng)有力工具。雖然目前POCT 技術(shù)發(fā)展比較迅速，但其在臨床檢驗(yàn)中還無(wú)法替代傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢查，只能作為臨床檢驗(yàn)技術(shù)的有力補(bǔ)充[12]。隨著POCT 技術(shù)的逐步創(chuàng)新和完善，相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目也會(huì)逐漸增加，只有正確地認(rèn)識(shí)并且合理利用POCT 技術(shù)，才能發(fā)揮其最大作用，為臨床檢驗(yàn)及疾病診斷創(chuàng)造更大的價(jià)值。