夾竹桃和龍須藤合劑對(duì)正常大鼠的痛覺(jué)調(diào)節(jié)作用

王紫怡,李佳林,王雪純,付立波

(長(zhǎng)春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春 130032)

夾竹桃(Neriumindicum)是一種廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)的觀賞植物,在我國(guó)各地區(qū)均有栽植[1]。夾竹桃的葉、皮、根、花中含有多種生物活性成分,具有強(qiáng)心、利尿、 抗癌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗菌、消炎等功效[2]。有報(bào)道研究了同屬植物歐洲夾竹桃中兩種果膠類(lèi)酸性多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理活性,通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了夾竹桃葉提取物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用[3-4]。

龍須藤(Bauhiniachampionii)為豆科羊蹄甲屬植物,又稱羊蹄藤、烏郎藤、過(guò)崗圓龍、九龍?zhí)?、梅花入骨丹? 分布于華東、華中、華南、西南等地。其味苦、澀,性平,具有祛風(fēng)除濕、活血止痛、健脾理氣等功效,臨床用于治療風(fēng)濕痹痛、胃脘脹痛、跌打損傷、痢疾等癥[5]。目前從龍須藤中已分離鑒定出數(shù)十種化合物,主要含有黃酮類(lèi)、糖類(lèi)、揮發(fā)油等成分[6]。

目前治療疼痛的方法有很多,常用的是口服鎮(zhèn)痛藥物。臨床上常用的鎮(zhèn)痛藥物有如布洛芬、吲哚美辛、阿司匹林等,雖然這些藥物具有明顯療效,但常常伴隨著一些副作用。因此具有療效溫和、穩(wěn)定、安全的中藥治療方法越來(lái)越受到人們的重視[7]。為探究中草藥材夾竹桃與龍須藤合劑是否具有鎮(zhèn)痛作用,本次試驗(yàn)采用灌胃和行為學(xué)測(cè)痛方法來(lái)探究夾竹桃與龍須藤合劑是否參與正常大鼠的痛覺(jué)調(diào)節(jié)作用,以便為后續(xù)中草藥材的鎮(zhèn)痛作用的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6只雄性Wistar大鼠,體重在180～200 g,由白求恩醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。每只單獨(dú)飼養(yǎng),3天換一次墊料,室溫穩(wěn)定在25 ℃,提供充足水源,一天3次喂食。

在實(shí)驗(yàn)前期,對(duì)大鼠進(jìn)行熱板和壓板的適應(yīng)性訓(xùn)練。大約每天上午9點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試,每只大鼠測(cè)3輪,連續(xù)測(cè)5天。以便大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境,得到更為準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)用品及儀器

夾竹桃和龍須藤干葉片原樣、氯化鈉注射液(遼寧民康制藥有限公司)、灌胃針 (深圳瑞沃德公司)、YLS-6B智能熱板儀(上海曼普生物公司)、YLS-3E電子壓痛儀(意大利UGO)、電磁爐。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 不同質(zhì)量濃度的夾竹桃與龍須藤的合劑的配制

取夾竹桃,龍須藤干葉片原樣各20 g,分別加水進(jìn)行煎煮,使其溶液濃縮至500 mL,得到40 mg/mL的母液。取母液配制濃度分別為5、20、40 mg/mL的合劑備用。灌胃用量每次2 mL。

1.2.2 行為學(xué)測(cè)痛

1.2.2.1 熱板測(cè)試

將電子熱板儀溫度設(shè)定為(52±0.2)℃,將大鼠雙爪分別與熱板儀接觸,踩下計(jì)時(shí)器,此時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),由于大鼠會(huì)感知到足底的灼熱感,出現(xiàn)后足回縮,離開(kāi)與熱板儀的接觸面,此時(shí)再次踩下計(jì)時(shí)器,計(jì)時(shí)結(jié)束。熱板儀上顯示的測(cè)量時(shí)間,即為大鼠的熱痛閾值(hindpaw withdrawal latency,HWL)。以第6天注射生理鹽水后測(cè)得大鼠的HWL作為對(duì)照,從第7天開(kāi)始用不同濃度的夾竹桃和龍須藤合劑進(jìn)行灌胃。在每次灌胃之前需要先測(cè)3次大鼠的HWL,作為基礎(chǔ)值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min進(jìn)行熱板測(cè)痛,測(cè)大鼠的HWL。

1.2.2.2 壓板測(cè)試

將壓板示數(shù)的指針調(diào)至0,將大鼠雙足分別與壓板的圓形臺(tái)面接觸,此時(shí)開(kāi)始踩壓力板,持續(xù)踩踏,示數(shù)會(huì)逐漸加大,這也意味著壓力逐漸增大。直至大鼠后足發(fā)生撤回,脫離圓形臺(tái)面,停止踩踏,此時(shí)指針的示數(shù)即視為大鼠的壓痛閾值HWL。以第6天注射生理鹽水后測(cè)得大鼠的HWL作為對(duì)照,從第7天開(kāi)始用不同濃度的夾竹桃和龍須藤合劑進(jìn)行灌胃。在每次灌胃之前先測(cè)3次大鼠的HWL作為基礎(chǔ)值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min進(jìn)行壓板測(cè)痛,測(cè)大鼠的HWL。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理方法

用實(shí)驗(yàn)前測(cè)得的3次HWL值的平均值作為基礎(chǔ)值,實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的結(jié)果與其比較。應(yīng)用SPSS 27.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,非正態(tài)分布數(shù)據(jù)應(yīng)用非參數(shù)檢驗(yàn)方法,正態(tài)分布數(shù)據(jù)應(yīng)用t檢驗(yàn)方法,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 灌胃5 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后正常大鼠的HWL的變化

由表1可知,與灌入生理鹽水組相比,灌胃5 mg/mL的合劑對(duì)正常大鼠右爪的熱刺激HWL有極顯著差異(P<0.01);左爪的機(jī)械刺激HWL有顯著差異(P<0.05);對(duì)左爪熱刺激HWL和對(duì)右爪的機(jī)械刺激HWL無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表1 灌胃5 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后對(duì)大鼠熱刺激與機(jī)械刺激HWL的影響

2.2 灌胃20 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后正常大鼠的HWL的變化

由表2可知,與對(duì)照組相比,灌胃20 mg/mL的合劑對(duì)正常大鼠的左爪的熱刺激和機(jī)械刺激HWL均有顯著差異(P<0.05);右爪的熱刺激HWL和機(jī)械刺激HWL均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 灌胃20 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后對(duì)大鼠熱刺激與機(jī)械刺激HWL的影響

2.3 灌胃40 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后正常大鼠的HWL的變化

由表3可知,與灌入生理鹽水組相比,灌胃40 mg/mL的合劑對(duì)正常大鼠左右爪的機(jī)械刺激HWL均有顯著差異(P<0.05);對(duì)右爪的熱刺激有極顯著差異(P<0.01);對(duì)左爪熱刺激HWL無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 灌胃40 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后對(duì)大鼠熱刺激與機(jī)械刺激HWL的影響

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,三個(gè)濃度(5、20、40 mg/mL)下的夾竹桃與龍須藤合劑對(duì)正常大鼠灌胃,大鼠的HWL與生理鹽水組相比有了明顯的增大,均在15 min大鼠的HWL達(dá)到最佳,表明合劑起到了明顯的鎮(zhèn)痛作用。隨著時(shí)間的增加,正常大鼠對(duì)熱刺激和機(jī)械刺激的痛覺(jué)敏感程度逐漸降低。

通過(guò)高效液相色譜法和液-質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)等提取夾竹桃中的化學(xué)成分,可知強(qiáng)心苷類(lèi)化合物在夾竹桃中含量最多,是最主要的活性成分[8-9]。且強(qiáng)心苷具有顯著的強(qiáng)心、抗癌、抑菌、鎮(zhèn)痛、祛瘀等作用[10]。運(yùn)用硅膠、聚酰胺等柱色譜手段進(jìn)行分離純化,其成分大多是醇提取物,且這些成分的鎮(zhèn)痛抗炎作用較強(qiáng)[11]。有臨床報(bào)道,采用龍須藤煎煮液能緩解類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的癥狀,降低關(guān)節(jié)疼痛,增加雙手握力,并能在較短時(shí)間內(nèi)使患者腰腿疼痛緩解[12]。中藥可通過(guò)增加5-羥色胺含量及其受體的表達(dá)、激活阿片受體、抑制環(huán)氧合酶活性、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌等來(lái)發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[13]。對(duì)于夾竹桃與龍須藤合劑中的主要鎮(zhèn)痛成分是如何參與大鼠痛覺(jué)調(diào)節(jié)機(jī)制,目前尚不清楚,有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。