HPLC 法同時(shí)測定曲安奈德苯海拉明水楊酸酊中三種有效成分的含量

陳霞飛，簡淑娟，林鳳屏，劉麗婷，歐陽珠，黎曉敏

惠州市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 惠州 516001

曲安奈德苯海拉明水楊酸酊是惠州市皮膚病防治研究所生產(chǎn)的醫(yī)院制劑，與藥廠制劑比較，具有密切結(jié)合臨床、適應(yīng)性強(qiáng)、治療作用明確、?？铺厣珡?qiáng)、副作用少等優(yōu)點(diǎn)，其主要成分是醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明、水楊酸，具有抗菌消炎和抗過敏等作用。臨床主要用于治療神經(jīng)性皮炎、慢性濕疹、結(jié)節(jié)性癢疹、皮膚淀粉樣變及疥瘡結(jié)節(jié)等。由于原制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有高效液相色譜法測定醋酸曲安奈德的含量，而鹽酸苯海拉明、水楊酸采用的是滴定法，其中鹽酸苯海拉明的測定中使用了大量的易制毒化學(xué)品三氯甲烷。三氯甲烷有毒，為可疑致癌物。為了實(shí)現(xiàn)對該制劑質(zhì)量的更好把控，通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料［1-9］，本研究建立了高效液相色譜法同時(shí)檢測醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和水楊酸含量的方法，有利于更好地控制該制劑的質(zhì)量和減少有毒有害溶劑的使用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（安捷倫科技公司,型號：1260）；高效液相色譜儀（日本島津公司,型號：LC-20A）；電子天平（梅特勒-托利多集團(tuán)，型號：XS105DU）；電熱干燥箱（德國賓德集團(tuán)，型號：ED-53）。

1.2 試藥

鹽酸苯海拉明對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100066-200807，含量：99.9%）；醋酸曲安奈德對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100125-202007，含量：98.4%）；水楊酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100106-202106，含量：99.8%）；色譜甲醇（默克股份有限公司）；水（超純水）；鹽酸苯海拉明水楊酸酊（惠州市皮膚病防治研究所，批號：202210201、202210211、202210251、202210271、202210281 和202211011，規(guī)格：60 mL/瓶；含醋酸曲安奈德0.000 5 g/mL、鹽酸苯海拉明0.01 g/mL、水楊酸0.01 g/mL）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為資生堂CAPCELL PAK C18 MG Ⅱ（250 mm×4.60 mm，5 μm）；以甲醇-水（每1 000 mL水中加三乙胺7 mL，磷酸調(diào)節(jié)pH 值為7.2）（70∶30）為流動(dòng)相；檢測波長為240 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃；紫外檢測器；進(jìn)樣量為20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸苯海拉明對照品39.96 mg，置10 mL 量瓶中，加水振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液①。精密稱取醋酸曲安奈德對照品10.47 mg，置50 mL 量瓶中，加甲醇振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液②。精密稱取水楊酸對照品40.56 mg，置10 mL 量瓶中，加甲醇振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液③。精密吸取上述三種對照品貯備液各5 mL置同一200 mL 量瓶中，加甲醇-水（70∶30）稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取供試品1 mL，置100 mL 量瓶中，加甲醇-水（70∶30）稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備

按制劑處方工藝制備不含醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和水楊酸的空白制劑。按供試品溶液制備方法稀釋，即得陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)行測定，在相同保留時(shí)間位置上，陰性對照溶液未檢測出水楊酸、鹽酸苯海拉明和醋酸曲安奈德峰。各色譜峰分離度均符合規(guī)定，結(jié)果表明，輔料對樣品含量測定無干擾，專屬性良好。結(jié)果見圖1。

圖1 HPLC色譜圖：A.混合對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照溶液

2.6 線性關(guān)系考察

取“2.2”項(xiàng)下的對照品溶液，分別進(jìn)樣5 μL、10 μL、20 μL、40 μL 和60 μL，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，醋酸曲安奈德回歸方程為：y=1 930.770 3x+1.705 6（r=1.000 0）；鹽酸苯海拉明回歸方程為：y=82.867 3x+2.423 6（r=0.999 9）；水楊酸回歸方程為：y=131 0.109 6x+227.513 8（r=0.996 4）。結(jié)果表明，醋酸曲安奈德在0.026～0.309 μg、鹽酸苯海拉明在0.499～5.988 μg、水楊酸在0.506～6.072 μg 范圍均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品6 份（批號為202210211），按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。醋酸曲安奈德含量為99.92%，RSD 為0.55%；鹽酸苯海拉明含量為100.50%，RSD 為0.53%；水楊酸含量為100.70%，RSD 為0.38%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24、48 h 測定峰面積。醋酸曲安奈德、水楊酸、鹽酸苯海拉明峰面積的RSD 分別為0.66%、0.55%、0.73%。結(jié)果表明三種組分在48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 耐用性試驗(yàn)

按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別用不同廠家的色譜柱（廠家：資生堂，填料：CAPCELL PAK C18 MG II，規(guī)格：250 mm×4.6 mm，5 μm，柱號：A4AD 09543；廠家：安捷倫，填料：ZORBAX Eclipse XDB-C18，規(guī) 格：250 mm×4.6 mm，5 μm，柱 號：USNH023988，廠家：月旭，填料：Xtimate C18，規(guī)格：250 mm×4.6 mm，5 μm，柱號：411502491）和不同的液相色譜儀進(jìn)行測定，記錄色譜圖，三種組分的含量均在90.0%～110.0% 范圍，醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明、水楊酸RSD 分別為0.31%，0.24%，0.32%。結(jié)果表明，此方法耐用性良好。

2.10 回收率試驗(yàn)

取樣品9 份（批號為202210211），每份精密吸取供試品0.5 mL，分別按標(biāo)示含量的80%、100%、120%加入混合對照品溶液，每個(gè)濃度平行制備3 份，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備回收率供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，結(jié)果如表1 所示。

表1 回收率試驗(yàn)測定結(jié)果（n=9）

結(jié)果，醋酸曲安奈德平均回收率為99.8%，RSD 為1.03%；鹽酸苯海拉明平均回收率為99.2%，RSD 為1.18%；水楊酸平均回收率為103.5%，RSD為0.81%。

2.11 含量測定

取6 批樣品，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果如表2 所示。

表2 含量測定結(jié)果

3 討論

曲安奈德苯海拉明水楊酸酊的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)為采用滴定法分別測定其中水楊酸和鹽酸苯海拉明的含量，方法較為煩瑣。本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)，采用HPLC 的方法同時(shí)測定醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和水楊酸的含量，該方法快捷、靈敏，專屬性好，方法準(zhǔn)確度高，可為藥品質(zhì)量的全面評價(jià)提供試驗(yàn)依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)過程中比較了不同品牌的色譜柱，還比較了不同的液相色譜儀，同時(shí)參考《中國藥典》2020 年版二部鹽酸苯海拉明原料含量測定的色譜條件，確定了鹽酸苯海拉明和水楊酸均可采用240 nm 的吸收波長進(jìn)行測定。原標(biāo)準(zhǔn)中醋酸曲安奈德的稀釋溶劑采用的是流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)運(yùn)用流動(dòng)相稀釋樣品容易降解，后來考察了用甲醇-水（70∶30）作為稀釋劑，發(fā)現(xiàn)樣品穩(wěn)定性良好。

本實(shí)驗(yàn)共測定6 個(gè)不同批號的曲安奈德苯海拉明水楊酸酊的含量，結(jié)果均在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限度范圍內(nèi)。說明應(yīng)用HPLC 法測定曲安奈德苯海拉明水楊酸酊的含量是適用可行的，其分析準(zhǔn)確，高效，專屬性強(qiáng)，耐用性好，操作簡便快速，靈敏度高，可有效地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。