復(fù)方中草藥對許氏平鲉幼魚生長和非特異性免疫酶活性的影響

玄一凡　寧可源　魏凌俊　王偉　王茂林　張藝川

摘 要：為探究復(fù)方中草藥對許氏平鲉（Sebastes schlegelii）幼魚生長與免疫酶活性的影響，選取144尾重量相近的許氏平鲉幼魚分為4組，每組設(shè)3個平行，每個平行12尾魚。將黃芪、當(dāng)歸、紅棗、干姜、甘草、白術(shù)六種中草藥等比例混合后超微粉碎，分別按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)0（對照組）、1%、2%、3%加入到許氏平鲉基礎(chǔ)飼料中進(jìn)行投喂，試驗(yàn)為期42 d。結(jié)果表明：與對照組相比，各試驗(yàn)組許氏平鲉的過氧化氫酶（CAT）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性顯著提高（P＜0.05），1%組的增重率、特定生長率和攝食率顯著高于其他組（P＜0.05），總抗氧化能力（T-AOC）無明顯差異（P＞0.05），而飼料系數(shù)低于對照組及3%組（P＜0.05）。綜上所述，在飼料中添加復(fù)方中草藥對許氏平鲉生長和免疫功能有顯著提升作用，建議的最適添加量為1%。

關(guān)鍵詞：許氏平鲉（Sebastes schlegelii）；復(fù)方中草藥；生長；免疫

許氏平鲉（Sebastes schlegelii）又稱黑鮶、黑魚、刺毛、黑寨、黑頭魚，屬鲉形目，平鲉科，平鲉屬。許氏平鲉是巖礁性魚，為冷溫性近海底層經(jīng)濟(jì)魚類，其形態(tài)特征為體延長，側(cè)扁，頭大，頭上有明顯低弱的骨棱和棘；口大，下頜稍長于上頜，口內(nèi)有絨毛狀齒；眼間隔較寬，約等于眼徑；體被櫛鱗，體背部黑褐色，有不規(guī)則深黑色斑塊，腹部灰白色；體長一般在20～30 cm，大者可達(dá)50 cm。許氏平鲉的生殖期在冬春季，卵胎生。仔魚表層性，常在海藻等漂浮物下聚集。許氏平鲉分布于我國渤海、黃海、東海，是我國北方沿海養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)魚類[1-2]。許氏平鲉主要養(yǎng)殖模式為沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖[3]。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，網(wǎng)箱中養(yǎng)殖密度不斷提升，導(dǎo)致病害頻發(fā)[4]，造成不少的經(jīng)濟(jì)損失。

中草藥具有毒性小、不良反應(yīng)少、不容易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，性價比高。一些草藥的成分不僅有抗菌、抗病毒的作用，還具有免疫調(diào)節(jié)的作用，可以顯著增強(qiáng)水產(chǎn)動物的抗病能力，提高其免疫力[5]；可以顯著增強(qiáng)魚類的抗氧化能力和免疫力還能提高攝食率，改善腸道消化從而促進(jìn)魚類的生長。復(fù)方中草藥相較單一中草藥，其中的活性成分更加豐富，可以更好地發(fā)揮魚類的免疫作用方式。目前，關(guān)于復(fù)方中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用，已有了許多研究。尚書鳳等[6]研究表明在飼料中添加復(fù)方中藥超微粉對草魚的生長有明顯的促進(jìn)作用。付廷斌等[7]研究表明復(fù)方中藥對雜交鱘抗氧化能力、非特異性免疫和肝功能均有促進(jìn)作用。本試驗(yàn)將黃芪、當(dāng)歸、紅棗、生姜、甘草、白術(shù)六種中草藥制成的復(fù)方中藥加入到飼料中，探究其對許氏平鲉幼魚生長和免疫酶活性的影響。試驗(yàn)設(shè)置不同含量的復(fù)方中草藥處理組，通過對比不同處理組之間的免疫和生長性能，確定最佳的復(fù)方中草藥添加濃度，以實(shí)現(xiàn)最佳的免疫增強(qiáng)和生長促進(jìn)效果。通過本試驗(yàn)的研究，我們期望能夠?yàn)樵S氏平鲉的養(yǎng)殖業(yè)提供一種潛在的天然免疫增強(qiáng)劑，并為飼料添加劑的開發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)選用大小相近，平均重量為（71.08±0.36）g健康的許氏平鲉幼魚144尾，暫養(yǎng)7 d適應(yīng)養(yǎng)殖條件，養(yǎng)殖期間投喂基礎(chǔ)飼料。

1.2 試驗(yàn)所用飼料

試驗(yàn)分為T1（對照組）、T2（1%）、T3（2%）、T4（3%）四組，其中T1組喂基礎(chǔ)飼料，基礎(chǔ)飼料主要成分見表1。黃芪、當(dāng)歸、紅棗、干姜、甘草、白術(shù)六種中草藥超微粉碎后等比例混合成復(fù)方中草藥粉。將復(fù)方中草藥粉分別按1%、2%、3%的比例添加進(jìn)基礎(chǔ)飼料作為試驗(yàn)組飼料。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)開始前停止喂食24 h，將144尾試驗(yàn)用魚隨機(jī)分為4組，每組3個平行，每個平行12尾。放于12個50 L的養(yǎng)殖水槽中，用氣泵24 h充氣增氧，水溫13～16 ℃，溶解氧＞6 mg/L，pH值8.2。養(yǎng)殖周期為42 d，每天8：30和17：30投喂飼料，每日投喂飼料為體重的1%。每天19：30清理剩余飼料以及糞便，同時換水，換水量約為1/3。

1.4 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，停食24 h，每組隨機(jī)選?。澄?，取肝臟組織置于離心管中，標(biāo)記后于-80 ℃冰箱保存。

1.5 生長指標(biāo)及酶活指標(biāo)測定

取樣前稱重，用于計(jì)算終末均重、特定生長率。免疫酶的測定包括過氧化氫酶（CAT）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、總抗氧化能力（T-AOC），上述指標(biāo)試劑盒均采購于南京建成生物工程研究所有限公司，按說明書操作測定。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）”表示。使用SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s 法進(jìn)行組間差異分析，設(shè)差異顯著為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方中草藥對許氏平鲉存活率指標(biāo)的影響

由表2可知，T2、T3和T4組的存活率明顯高于T1組（對照組）（P＜0.05），其中T3組與T4組無明顯差異（P＞0.05）。而之后隨著復(fù)方中草藥含量的增加，反而使T2組許氏平鲉存活率有所下降。T2組的存活率顯著高于其他組（P＜0.05）

2.2 復(fù)方中草藥對許氏平鲉生長指標(biāo)的影響

由表3可知，飼料中添加復(fù)方中草藥對許氏平鲉幼魚生長的影響較為顯著（P＜0.05），T2、T3和T4三個試驗(yàn)組除飼料系數(shù)外各項(xiàng)指標(biāo)均高于T1組（對照組）。其中T2組的終末均重、攝食率、特定生長率、增重率等方面顯著高于其他組，而T2組的飼料系數(shù)顯著低于T1和T4組（P＜0.05），而與T3組無明顯差異（P＞0.05）。T3和T4組在特定生長率、飼料系數(shù)、增重率上無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 復(fù)方中草藥對許氏平鲉免疫指標(biāo)的影響

由圖1可知， T2組肝臟組織中的CAT（過氧化氫酶）顯著高于其他三組（P＜0.05）。由圖2可知，T1與T2組肝臟組織中的T-SOD（總超氧化物歧化酶）活性有明顯差異（P＜0.05），與其他組間無明顯差異（P＞0.05）。由圖3可知各組肝臟組織中T-AOC（總抗氧化能力）的活性無顯著差異（P＞0.05）。

柱狀圖標(biāo)有不同小寫字母表示組間有顯著性差異（P＜0.05），含有相同小寫字母者表示組間無顯著性差異（P＞0.05），下同。

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥對許氏平鲉幼魚生長的影響

由黃芪、當(dāng)歸、紅棗、干姜、甘草、白術(shù)制成的復(fù)方中草藥對許氏平鲉幼魚的生長有促進(jìn)作用。其中黃芪具有補(bǔ)氣養(yǎng)血，益氣固表，脫毒、生肌等作用，麻艷群等[8]研究發(fā)現(xiàn)在斑點(diǎn)叉尾鮰飼料中添加2%的黃芪粉能有效地提高生長性能，改善魚體肌肉品質(zhì)。向梟等[9]研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖能夠清除脂類氫過氧化物（LPO）和抑制LPO 的形成，降低多不飽和脂肪酸的分解，從而增加肌肉脂肪的沉積。白術(shù)中含有的白術(shù)多糖可能通過改變腸道形態(tài)和功能從而影響其生長性能。卓微偉等[10]研究證明了飼料中添加白術(shù)多糖能顯著提升黃顙魚的生長性能。甘草具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒的作用，陳文彬等[11]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加600 mg/kg的甘草多糖可以顯著促進(jìn)肉雞的生長性能。本試驗(yàn)中飼料添加復(fù)方中草藥對許氏平鲉的生長性能起到了促進(jìn)作用，在添加量為1%時的效果最顯著。但添加量為2%～3%時，對生長的促進(jìn)有所降低?？赡苁菑?fù)方中草藥的含量過多對魚的腸道造成了過多的刺激，導(dǎo)致許氏平鲉幼魚的進(jìn)食欲望下降。

3.2 復(fù)方中草藥對許氏平鲉非特異性免疫造成的影響

魚類的免疫也分為特異性免疫和非特異性免疫。一般來說非特異性免疫在大多數(shù)溫度下都可以被激活，而特異性免疫需要較高的溫度，所以魚類更依賴非特異性免疫[12]。T-SOD、T-AOC和CAT是重要的非特異性免疫指標(biāo)。SOD是一種內(nèi)源性抗氧化金屬酶，可以通過清除超氧陰離子自由基的毒性來保護(hù)細(xì)胞或組織免受傷害，在抗氧化、延緩機(jī)體衰老、改善機(jī)體免疫力等方面起著至關(guān)重要的作用[13]。T-AOC是反應(yīng)機(jī)體總抗氧化酶和抗氧化物質(zhì)水平的重要指標(biāo)[14]。CAT被認(rèn)為是一種催化過氧化氫形成水和氧的酶，在水生動物免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要作用[15]。復(fù)方中草藥中的黃芪、當(dāng)歸、甘草、白術(shù)在一定程度上有提高免疫力的作用，而干姜也會起到抗氧化以及殺菌的作用。楊政高等[16]研究發(fā)現(xiàn)SOD的酶活力在一定范圍內(nèi)隨著黃芪多糖的添加量增加而加強(qiáng)，并顯著增強(qiáng)了羅非魚抗菌、抗氧化能力。本試驗(yàn)中T2組SOD酶活性最好，隨后復(fù)方中草藥含量增加，SOD酶活性反而降低，可能是當(dāng)歸含量造成的影響。李曉萌[17]在研究用當(dāng)歸多糖喂食點(diǎn)帶石斑魚中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸多糖添加量為3 000 mg/kg組的SOD酶活性顯著高于添加量更多的其他組。CAT活性各組之間并無顯著差異（P＞0.05）。王一福等[18]研究表明在飼料中添加1%～3%甘草粉有助于提高尖吻鱸肝臟中T-AOC的活性。在本試驗(yàn)中由于有其他草藥成分，發(fā)揮的藥效有所不同，結(jié)果顯示添加量為1%的組T-AOC活性最好。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)在飼料中適量添加黃芪、當(dāng)歸、紅棗、生姜、甘草、白術(shù)制成的復(fù)方中草藥喂養(yǎng)42 d后，可以顯著提高許氏平鲉的生長，降低飼料系數(shù)，提高免疫力及抗氧化能力。但過量的復(fù)方中草藥也會對魚體產(chǎn)生不利影響，適宜的添加量為1%。

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Effect of compound Chinese herbs on growth and non-specific immunoenzymatic activity of Sebastes schlegelii larvae

XUAN Yifan1，2， NING Keyuan1，2， WEI Lingjun1，2， WANG Wei1，2，WANG Maolin1，2， ZHANG Yichuan1，2

（1．Key Laboratory of North Mariculture， Ministry of Agriculture， Dalian Ocean University， Dalian 116023，China; 2.Key Laboratory of Applied Biology and Aquaculture of Fish in Northern Liaoning Province， Dalian? 116023，China）

Abstract：To investigate the effects of compound Chinese herbs on the growth and immunoenzymatic activities of Sebastes schlegelii juveniles. 144 S. schlegelii juveniles of similar weight were selected and divided into four groups， with three parallels in each group and 12 fish in each parallel. Six kinds of Chinese herbs， namely Astragalus， Angelica sinensis， red dates， dried ginger， licorice， Atractylodes macrocephala， were mixed in equal proportions and then ultramicrocrushed， and then added into the basal diet of S. schlegelii at mass percentages of 0 （control group）， 1%， 2%， and 3%， respectively， to feed the S. schlegelii. The experiments lasted for 42 d. The results showed that the catalase （CAT） activity of S. schlegelii in the experimental groups was significantly reduced in the control group. The activities of catalase （CAT） and total superoxide dismutase （T-SOD） of S. schlegelii in each experimental group were significantly higher （P<0.05） than the control group， and the weight gain rate， specific growth rate， and total antioxidant capacity （T-AOC） were significantly higher （P<0.05） than those of the other groups in the 1% group， whereas feed coefficients and feed intake rates were lower （P<0.05） than those of the other groups. In conclusion， the addition of compound herbs to the feed had significant enhancement on growth and immune function of S. schlegelii， and the recommended optimum level of addition is 1%.

Key words：Sebastes schlegelii; compound herbs; growth; immunity

（收稿日期：2023-06-20）

基金項(xiàng)目：2021年遼寧省海洋經(jīng)濟(jì)發(fā)展項(xiàng)目資助;遼寧重要海水魚類高效綠色生產(chǎn)模式研發(fā)與示范（2020JH1/10200002）。

作者簡介：玄一凡（1997.9-），男，碩士，研究方向：水產(chǎn)養(yǎng)殖。E-mail：xyf1478963252010@163.com。

通訊作者：王茂林（1980.4-），男，副教授，研究方向：水產(chǎn)養(yǎng)殖。E-mail：wangmaolin@dlou.edu.cn。