香雪抗病毒口服液體外抗甲型流感病毒及炎癥因子的作用機(jī)制研究

李杰婷 ，陳俏連 ，趙昕 ，楊子峰，王玉濤*

1.廣州呼吸健康研究院，廣東 廣州 510000

2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510000

3.廣東省化學(xué)測(cè)量與應(yīng)急檢測(cè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510000

4.廣東省科學(xué)院測(cè)試分析研究所（中國(guó)廣州分析測(cè)試中心），廣東 廣州 510000

流感病毒是具有包膜的單鏈負(fù)鏈核糖核酸（RNA）病毒，根據(jù)核衣殼蛋白（NP）和基質(zhì)蛋白（MP）分為A、B、C、D（甲、乙、丙、?。? 種類型[1-2]。其中甲型流感病毒（IAV）可引起人畜共患呼吸道傳染病，對(duì)人類健康構(gòu)成巨大威脅。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，季節(jié)性流感每年可導(dǎo)致300～500 萬人患上嚴(yán)重疾病，每年可致25～50 萬人死亡[3]。預(yù)防和控制流感最有效方法是接種疫苗和抗病毒藥物[4-5]，但病毒變異和耐藥性使流感難以控制[6]。因此，迫切需要尋找新的抗病毒藥物。

在我國(guó)中藥用于預(yù)防和治療流感已有數(shù)千年的歷史，在治療流感具有多途徑、多靶點(diǎn)、不良反應(yīng)少且不易產(chǎn)生耐藥的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，而被臨床廣泛應(yīng)用?？共《究诜鹤鳛榻?jīng)典中藥制劑，臨床用于流感、手足口病、上呼吸道感染、手足口病等疾病[7]。全方由9 味中藥組成，方中板藍(lán)根清熱解毒、涼血消腫、利咽散結(jié)，連翹苦涼、清熱解毒以祛邪，二者共為君藥。生石膏、知母甘寒清潤(rùn)，消瀉肺胃之熱，能增強(qiáng)君藥清熱之力為臣藥；廣藿香芳香辛散、解表祛濕，蘆根清熱解暑、生津止渴，生地黃清熱涼血生津，石菖蒲芳香走竄、化濕祛痰，郁金行氣涼血利咽，共為佐藥；共奏清熱祛濕，涼血解毒之效[8]?，F(xiàn)有藥理應(yīng)用和臨床實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，抗病毒口服液在體內(nèi)可通過抑制炎性因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）從而達(dá)到減輕肺部炎癥的作用，且可以提高γ 干擾素（IFN-γ）的含量從而抑制病毒的復(fù)制。此外，抗病毒口服液中的活性成分通過抑制線粒體融合素基因2（Mfn2）的表達(dá)以增強(qiáng)線粒體抗病毒信號(hào)蛋白（MAVS）抗病毒信號(hào)通路促進(jìn)β 干擾素（IFN-β）的分泌，抑制流感病毒的復(fù)制，同時(shí)通過下調(diào)核因子-κB（NF-κB）抑制炎癥反應(yīng)，從而降低應(yīng)激小鼠對(duì)流感病毒的易感性[9-15]。中藥制劑由于現(xiàn)代工藝提取及遣方用藥的配比不同，導(dǎo)致藥效不同，而抗病毒口服液是基于原有的中藥成分，進(jìn)行了新的配比研發(fā)得來。本研究主要探討了香雪抗病毒口服液體外抗流感病毒活性及其調(diào)節(jié)流感病毒誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)作用，以及在體外靶向宿主信號(hào)通路的潛在作用機(jī)制。

1 材料

香雪抗病毒口服液浸膏（規(guī)格0.352 g 生藥/mL，批號(hào)20210129）購(gòu)自廣州市香雪制藥股份有限公司；磷酸奧司他韋（批號(hào)20200308）購(gòu)自南京康南林化工實(shí)業(yè)有限公司。以（R,S）-告依春、連翹酯苷A、連翹苷作為對(duì)照品對(duì)抗病毒口服液進(jìn)行HPLC測(cè)定，每1 g 含（R,S）-吿依春73.58 μg，連翹酯苷A 890.94 μg，連翹苷3 544.06 μg。取351.50 g 該浸膏作為藥效研究樣品，每1 g 香雪抗病毒口服液浸膏含1.22 g 生藥材，每1 mL 抗病毒口服液含本濃縮液0.352 g。

狗腎細(xì)胞系（MDCK）和人肺癌上皮細(xì)胞系（A549）均引自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫（ATCC）。2 種細(xì)胞采用10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco 公司）培養(yǎng)。

甲型流感病毒A/PR/8/34（H1N1）和A/Aichi/2/68（H3N2）均購(gòu)自ATCC，依照標(biāo)準(zhǔn)病毒培養(yǎng)方法擴(kuò)增保存。病毒滴度通過觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）并采用Reed-Muench 法計(jì)算半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量（TCID50）表示。

2 方法

2.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

采用噻唑藍(lán)（MTT）染色法檢測(cè)香雪抗病毒口服液對(duì)MDCK 細(xì)胞和A549 細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。將生長(zhǎng)密度適度的細(xì)胞接種到96 孔培養(yǎng)板中，24 h 后匯成單層細(xì)胞。加入DMEM 配制的香雪抗病毒口服液（1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、50、100 mg/mL）培養(yǎng)液加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，48 h 后去上清并用含0.5 mg/mL MTT 的PBS 溶液溫育細(xì)胞4 h；棄上清并加入二甲基亞砜（DMSO）溶解活細(xì)胞內(nèi)甲瓚晶體。使用Multiskan Spectrum 酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher公司）測(cè)定490 nm 處的吸光度（A）。根據(jù)A值計(jì)算細(xì)胞存活率。

細(xì)胞存活率＝（A藥物組－A空白組）/（A正常組－A空白組）

將細(xì)胞存活率及對(duì)應(yīng)藥物濃度用GraphPad Prism 建立曲線，進(jìn)行非線性回歸方程（曲線擬合）并計(jì)算出藥物的半數(shù)細(xì)胞毒性濃度（TC50）[16]。

2.2 體外抗病毒活性實(shí)驗(yàn)

以細(xì)胞病變抑制法對(duì)待測(cè)藥物進(jìn)行抗病毒活性檢測(cè)。在96 孔板細(xì)胞長(zhǎng)至單層后，接種100 個(gè)TCID50病毒液（100 μL/孔），37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h 后，棄去病毒液，將DMEM-F12 培養(yǎng)基（含1.5 μg/mL TPCK 處理的胰蛋白酶）配制不同質(zhì)量濃度（1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、50、100 mg/mL）香雪抗病毒口服液、陽性對(duì)照藥物奧司他韋（1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、50、100 μmol/L），加入培養(yǎng)板中，48 h 后觀察并記錄致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）。采用Reed-Muench 法計(jì)算半數(shù)有效濃度（IC50），選擇指數(shù)（SI）＝TC50/IC50。SI 判斷標(biāo)準(zhǔn)：SI＜1 表示無效；SI 為1～2 表示高毒低效；SI＞2表示低毒高效[16]。

抑制率＝（A藥物組－A病毒組）/（A正常組－A病毒組）

IC50＝Antilog[B＋（50－B）/（A－B）]×C

A＝log（抑制率＞50%藥物濃度）；B＝log（抑制率＜50%藥物濃度）；C＝log 稀釋倍數(shù)

2.3 空斑減少實(shí)驗(yàn)

用MOI＝0.05 的H1N1 病毒感染6 孔板中的單層MDCK 細(xì)胞，分別設(shè)置H1N1 感染組、香雪抗病毒口服液（5、10、20 mg/mL）組（在香雪抗病毒口服液體外抗病毒活性實(shí)驗(yàn)中，已測(cè)得IC50＝8.665 mg/mL，在此基礎(chǔ)上，選擇接近IC50濃度，低于IC50和高于IC50的3 個(gè)濃度，且呈梯度關(guān)系）。另設(shè)置對(duì)照組和非感染的香雪抗病毒口服液20 mg/mL 組。

H1N1 病毒感染的MDCK 細(xì)胞于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱吸附2 h；換掉病毒液，加入含香雪抗病毒口服液（5、10、20 mg/mL）的0.8%瓊脂（含1.5 μg/mL TPCK 處理的胰蛋白酶）覆蓋細(xì)胞單層。H1N1 感染組和對(duì)照組加入等量培養(yǎng)液（含0.8%瓊脂＋1.5 μg/mL TPCK 處理的胰蛋白酶）；在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育，48 h 后使用10%福爾馬林固定并去除覆蓋瓊脂，1%結(jié)晶紫染色，流水洗滌后計(jì)數(shù)斑塊。

2.4 免疫熒光法檢測(cè)抗流感時(shí)相實(shí)驗(yàn)

MDCK 細(xì)胞接種含小玻片培養(yǎng)板上，棄去上清，加入MOI＝1 的H1N1 病毒感染細(xì)胞，4 ℃吸附2 h，各組別加入含TPCK 酶的DMEM 培養(yǎng)基。感染后0、2、4、6 h 分別加入含TPCK 酶的香雪抗病毒口服液10 mg/mL，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組，置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)8 h。然后取出玻片用4%多聚甲醛室溫固定30 min；PBST 洗滌3 次（5 min/次），加入0.5% Triton X-100 通透10 min，PBST 洗滌3次（5 min/次），加入5%羊血清封閉30 min；吸棄封閉液加入H1N1 病毒NP 蛋白的特異性抗體（1∶100，用1%羊血清稀釋），置4 ℃孵育過夜；加入FITC 標(biāo)記二抗（1∶200，用1%羊血清稀釋），室溫1 h，PBST 洗滌3 次，甘油封（含細(xì)胞核染料）在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。

2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 測(cè)定炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)

在6 孔板A549 細(xì)胞長(zhǎng)至單層，加入MOI＝0.02的H1N1 流感病毒培養(yǎng)液1 mL/孔作為模型組，在模型組的基礎(chǔ)上，設(shè)置香雪抗病毒口服液（0.25、2.5、25 mg/mL）組，另設(shè)置非H1N1 感染的香雪抗病毒口服液（25 mg/mL）組和對(duì)照組。將細(xì)胞置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中吸附2 h 后，棄去上清，再加入含待測(cè)藥物的DMEM-F12 培養(yǎng)基，24 h 后，加入TRIzol 試劑裂解各組細(xì)胞，提取總RNA。方法如下：在各組別中加入1 mL TRIzol/孔裂解細(xì)胞，然后加入0.2 mL 氯仿充分混勻；室溫靜置2 min，12 000 r/min，4 ℃離心15 min。轉(zhuǎn)移上清至1.5 mL EP 管中，按體積比加入異丙醇沉淀，室溫靜置10 min，12 000 r/min，4 ℃離心10 min，棄去上清。然后加入1 mL 75%酒精4 ℃、7 500×g離心5 min棄上清；再加入20 μL DEPC 水溶解RNA，測(cè)定RNA 濃度并用PrimeScriptTMRT Master Mix 試劑盒（TaKaRa Bio）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。并采取Tag Man Premix Ex TapTMII（Takara Bio）對(duì)cDNA 樣品進(jìn)行RTqPCR 檢測(cè)。PCR 數(shù)據(jù)使用檢測(cè)系統(tǒng)（ABI PRISM?7500 Real-time PCR system，美國(guó)Applied Biosystems Co.）進(jìn)行分析。PCR 產(chǎn)物的相對(duì)表達(dá)量使用2-ΔΔCt方法計(jì)算[17]，引物序列見表1。

表1 RT-qPCR 引物探針序列Table 1 Primers and probes sequences for RT-qPCR

2.6 蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)信號(hào)通路蛋白表達(dá)

A549 細(xì)胞接種6 孔板中培養(yǎng)24 h 長(zhǎng)至單層，分別設(shè)置對(duì)照組、H1N1 病毒感染的模型組、香雪抗病毒口服液（5、10、20 mg/mL）組以及非H1N1感染的香雪抗病毒口服液20 mg/mL 組。首先用PBS洗滌細(xì)胞，加入MOI＝0.1 的H1N1 病毒感染A549細(xì)胞，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱孵育2 h，棄病毒上清液，按設(shè)置組別加入相應(yīng)培養(yǎng)基。24 h 后使用預(yù)冷PBS 洗滌細(xì)胞1 次，加入適量的RIPA 裂解液裂解細(xì)胞、提取總蛋白；采用BCA 試劑盒（Beyotime，中國(guó)）檢測(cè)樣品的蛋白濃度。取定量的蛋白樣品進(jìn)行10% SDS-PAGE 凝膠電泳；使用BIO-RAD 的半干轉(zhuǎn)或濕轉(zhuǎn)法將蛋白條帶轉(zhuǎn)至PVDF 膜上，5%牛血清白蛋白室溫封閉1 h；4 ℃孵育對(duì)應(yīng)抗體過夜，次日使用TBST 洗滌PVDF 膜并室溫孵育相應(yīng)二抗，TBST 洗滌3 次后加入ECL 發(fā)光液，使用化學(xué)發(fā)光成像儀進(jìn)行曝光，獲得目的蛋白條帶。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，GraphPad Prism 9 軟件做圖，計(jì)量資料以表示，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），如果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則進(jìn)行組間LSD 檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 香雪抗病毒口服液的細(xì)胞毒性和抗流感活性

香雪抗病毒口服液對(duì)MDCK、A549 細(xì)胞的TC50分別為42.12、79.36 mg/mL，見圖1。香雪抗病毒口服液對(duì)MDCK 細(xì)胞的H1N1 和H3N2 毒株有一定的抑制作用，IC50分別為 8.665、5.260 mg/mL，見表2。

圖1 香雪抗病毒口服液對(duì)MDCK 和A549 細(xì)胞的細(xì)胞毒性（n=3）Fig.1 Effects of Xiangxue Kangbingdu Oral Liquid on viability of MDCK cell and A549 cell (n=3)

表2 香雪抗病毒口服液對(duì)流感病毒H1N1 和H3N2 的體外抑制作用Table 2 Inhibitory effects of Xiangxue Kangbingdu Oral Liquid against influenza virus strains H1N1 and H3N2 in vitro

此外，空斑減少實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2 所示，與H1N1感染組相比，香雪抗病毒口服液20 mg/mL 組可以有效抑制病毒斑塊的形成。非感染的香雪抗病毒口服液20 mg/mL 組不會(huì)引起炎癥反應(yīng)。結(jié)果表明香雪抗病毒口服液在體外具有抗甲型流感病毒活性。

圖2 香雪抗病毒口服液對(duì)感染H1N1 的MDCK 細(xì)胞空斑數(shù)量的影響Fig.2 Effect of Xiangxue Kangbingdu Oral Liquid on the number of plaque in MDCK cells infected with H1N1

3.2 香雪抗病毒口服液對(duì)H1N1 病毒感染的NP 蛋白表達(dá)的影響

H1N1 病毒感染MDCK 細(xì)胞后0、2、4、6 h 給予香雪抗病毒口服液10 mg/mL 干預(yù)治療，結(jié)果顯示0～2 h 給藥干預(yù)處理，病毒合成的NP 蛋白不但明顯減少（圖3），而且可以觀察到大部分NP 蛋白被限制在細(xì)胞核內(nèi)；4～6 h 后再給藥干預(yù)，對(duì)病毒合成的NP 蛋白無影響。該結(jié)果提示香雪抗病毒口服液可抑制H1N1 病毒的NP 蛋白釋放，且其作用階段可能在病毒復(fù)制早期。

圖3 香雪抗病毒口服液對(duì)H1N1 病毒感染MDCK 細(xì)胞后NP 蛋白表達(dá)和核輸出的影響Fig.3 Effect of Xiangxue Kangbingdu Oral Liquid on NP protein expression and nuclear output of MDCK cells infected with H1N1 virus

3.3 香雪抗病毒口服液對(duì)H1N1 感染誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞因子和趨化因子mRNA 表達(dá)的影響

如圖4 所示，與模型組比較，香雪抗病毒口服液能呈劑量相關(guān)性降低H1N1 誘導(dǎo)的A549 細(xì)胞炎癥因子TNF-α、RIG-I、CCL5、MIP-1β、IP-10、IL-10、IFN-λ、IFN-β、IL-8mRNA 的表達(dá)（P＜0.05、0.01、0.001）。非感染的香雪抗病毒口服液25 mg/mL組未引起顯著的炎性反應(yīng)。

圖4 香雪抗病毒口服液對(duì)H1N1 病毒誘導(dǎo)的A549 細(xì)胞炎癥因子mRNA 相對(duì)表達(dá)量的影響（，n=3）Fig.4 Effect of Xiangxue Kangbingdu Oral Liquid on the relative expression of mRNA of inflammatory factors in A549 cells induced by H1N1 virus (,n=3)

3.4 香雪抗病毒口服液對(duì)H1N1 感染誘導(dǎo)的信號(hào)通路分子表達(dá)的影響

如圖5 所示，與對(duì)照組相比，模型組的TLR3、RIG-I、MDA-5 和磷酸化的NF-κB p65、IκBα、STAT1、STAT2、STAT3 明顯上調(diào)。而在香雪抗病毒口服液的干預(yù)下，能抑制TLR3、RIG-I 和MDA-5受體的表達(dá)，下調(diào)NF-κB p65、IκBα、STAT1、STAT2、STAT3 的磷酸化水平，且在20 mg/mL 濃度下尤為明顯。

圖5 香雪抗病毒口服液對(duì)H1N1 病毒感染A549 細(xì)胞引起的信號(hào)通路蛋白的影響Fig.5 Effects of Xiangxue Kangbingdu Oral Liquid on signaling pathway proteins induced by H1N1 virus infection in A549 cells

4 討論

香雪抗病毒口服液是以白虎湯和清瘟敗毒飲為基礎(chǔ)加減而制成。藥理應(yīng)用和臨床實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)其有較好的抗病毒療效，但其抗病毒、抗炎的作用機(jī)制尚較少。此外，中藥制劑由于現(xiàn)代工藝提取及遣方用藥的配比不同，導(dǎo)致藥效不同，而香雪抗病毒口服液是基于原有的中藥成分，進(jìn)行了新的配比研發(fā)得來。因此，本研究主要探討了香雪抗病毒口服液的體外抗病毒和抗炎活性及作用機(jī)制。

本研究以CPE 法、MTT 檢測(cè)和空斑減少實(shí)驗(yàn)觀察了香雪抗病毒口服液對(duì)甲型流感病毒的抗病毒作用。結(jié)果表明，香雪抗病毒口服液對(duì)H1N1 和H3N2 病毒的抑制作用顯著，IC50分別為8.665、5.260 mg/mL，且能顯著減少H1N1 病毒斑塊數(shù)目。同時(shí)免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，香雪抗病毒口服液可減少甲型流感病毒的NP 蛋白合成，而且主要在流感病毒復(fù)制的早期，說明香雪抗病毒口服液可能作用于病毒入侵的吸附、穿入或內(nèi)體釋放階段。另一種可能性與宿主的免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。

流感病毒感染可誘導(dǎo)IL-8、IL-10、TNF-α、IP-10、CCL5、MIP-1β 等細(xì)胞因子及趨化因子產(chǎn)生[18]，并激活I(lǐng)FN 依賴的抗病毒宿主應(yīng)答，但也可能引起炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。研究表明，“細(xì)胞因子風(fēng)暴”是誘發(fā)重癥流感及死亡的原因之一[19]。體外模型發(fā)現(xiàn)，經(jīng)香雪抗病毒口服液20 mg/mL 處理后，TNF-α、CCL5、MIP-1β、IP-10、IL-10、IL-8、IFN-β、IFNλmRNA 表達(dá)均顯著降低。

當(dāng)流感病毒通過呼吸道入侵機(jī)體后，靶向感染呼吸道上皮細(xì)胞，宿主天然免疫反應(yīng)被迅速啟動(dòng)，通過模式識(shí)別受體（PRRs），識(shí)別病原相關(guān)分子模式（PAMPs），啟動(dòng)抗病毒級(jí)聯(lián)反應(yīng)。首先PRRs（包括RIG-I、MDA5、TLRs）特異性識(shí)別在甲型流感病毒復(fù)制過程中形成的核酸和中間產(chǎn)物：RIG-I 和MDA5 的CARD 結(jié)構(gòu)域進(jìn)一步與線粒體膜中的MAVS 蛋白發(fā)生作用；TLRs 依賴或不依賴Myd88適配體以激活β 干擾素TIR 結(jié)構(gòu)域銜接蛋白（TRIF）[20]。激活的MAVS 和TRIF 共同誘導(dǎo)NFκB 的激活。在沒有病原體刺激的情況下，NF-κB 與IκBα 結(jié)合形成一個(gè)復(fù)合物。當(dāng)IκBα 被激活形成磷酸化的IκBα 時(shí)，導(dǎo)致NF-κB/IκBα 復(fù)合物降解并釋放轉(zhuǎn)錄因子p65，使NF-κB 信號(hào)通路激活，從而介導(dǎo)促炎細(xì)胞因子（TNF-α、IL-8、IL-6 等）以及I 型（IFN-α、IFN-β）、II 型（IFN-γ）與III 型（IFN-λ）干擾素的釋放[21]。機(jī)體的免疫反應(yīng)有利于抵抗并清除病毒，減輕組織損傷，但過度的免疫反應(yīng)也會(huì)介導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重失衡的炎癥因子風(fēng)暴以及促使病毒的子代病毒復(fù)制。本研究的結(jié)果表明，20 mg/mL香雪抗病毒口服液不僅抑制了H1N1 感染引起的A549 細(xì)胞中RIG-I 和MDA-5 表達(dá)的上調(diào)，而且還抑制了TLR3 的表達(dá)。同時(shí)NF-κB p65 和IκBα 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化也明顯受到抑制。

此外，IFNs 可以被適配器受體識(shí)別，并進(jìn)一步激活JAK-STAT 轉(zhuǎn)錄因子。然后，磷酸化的STAT1和STAT2 形成異源二聚體，進(jìn)入細(xì)胞核，誘導(dǎo)干擾素刺激基因（ISGs）的表達(dá)，調(diào)節(jié)抗病毒蛋白的合成，如Mx 家族蛋白、干擾素誘導(dǎo)蛋白15 抗體（ISG-15）、干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白（IFITMS）等[22-23]。20 mg/mL 香雪抗病毒口服液可顯著抑制p-STAT1 和p-STAT2 轉(zhuǎn)錄因子的激活，從而抑制干擾素產(chǎn)生和級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)。

綜上，香雪抗病毒口服液對(duì)甲型流感病毒的作用機(jī)制可能是通過抑制模式識(shí)別受體（RIG-I、MDA-5、TLR3）的表達(dá)，從而抑制NF-κB 及JAKSTAT 信號(hào)通路激活，下調(diào)促炎因子和趨化因子的產(chǎn)生，減少炎癥反應(yīng)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突