南五靈安神復(fù)方改善睡眠作用的研究

江南 廖逸茹 童鈺琴 王松濤

睡眠障礙指睡眠-覺(jué)醒過(guò)程中表現(xiàn)出來(lái)的各種功能障礙, 失眠和睡眠質(zhì)量下降是常見(jiàn)的睡眠障礙癥狀。據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查, 在世界范圍內(nèi)約1/3 的人有睡眠障礙, 中國(guó)有各類(lèi)睡眠障礙的人更是高達(dá)38.2%, 高于世界27%的比例［1］。在當(dāng)今經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展, 工作節(jié)奏加快的社會(huì)背景下, 成年人社會(huì)生活競(jìng)爭(zhēng)壓力驟增,極易導(dǎo)致睡眠障礙, 出現(xiàn)失眠、睡眠質(zhì)量下降等癥狀。《2017 年中國(guó)網(wǎng)民失眠地圖》調(diào)研發(fā)現(xiàn), 近80%參與者曾失眠, 而2002 年的數(shù)據(jù)是45.4%, 同時(shí)越發(fā)達(dá)城市失眠網(wǎng)民越多, 這與成年人的焦慮壓力有關(guān)。藥物是治療睡眠障礙的主要手段?，F(xiàn)在西醫(yī)臨床治療睡眠障礙以苯二氮 類(lèi)鎮(zhèn)靜藥物為主, 但這類(lèi)藥物往往存在嚴(yán)重的副作用, 包括殘留效應(yīng)、遺忘效應(yīng)、停藥效應(yīng)和依賴(lài)成癮。此外, 還有較大數(shù)量的睡眠障礙人群因未達(dá)到臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)或不愿就醫(yī), 不能或不愿服用藥物, 而選擇保健食品對(duì)睡眠障礙進(jìn)行干預(yù)。目前, 占市場(chǎng)主導(dǎo)地位的改善睡眠保健食品是以腦白金為代表的褪黑素類(lèi)保健食品, 這類(lèi)產(chǎn)品具有見(jiàn)效快的優(yōu)勢(shì), 但其有效性和安全性也受到多方質(zhì)疑, 主要表現(xiàn)在對(duì)褪黑素改善睡眠作用的不確切性及長(zhǎng)期過(guò)量服用引起毒副作用［2］。隨著健康中國(guó)和中藥治未病理念的深入人心,中藥類(lèi)改善睡眠保健食品也受到睡眠障礙人群的廣泛關(guān)注。根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論配伍的中藥, 不僅能“治標(biāo)”,改善睡眠質(zhì)量, 還能“治本”, 調(diào)節(jié)情志, 減輕心理壓力。因此, 在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下進(jìn)行鎮(zhèn)靜、安神保健食品的組方設(shè)計(jì)和產(chǎn)品開(kāi)發(fā), 為市場(chǎng)提供有療效、安全、經(jīng)濟(jì)的改善睡眠的中藥保健食品, 是未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)。為此, 作者根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)方, 開(kāi)發(fā)了由南五味子、靈芝、茯苓、麥冬組成的南五靈安神復(fù)方, 通過(guò)提取工藝研究獲得穩(wěn)定可重復(fù)的南五靈安神復(fù)方提取物(另文發(fā)表), 對(duì)其安神功效及其可能的作用機(jī)制進(jìn)行研究, 為其保健食品的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)KM雄性小鼠, 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院動(dòng)物中心提供［合格證號(hào)：SCXK(川)2018-19］,體重18～22 g, 在正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。小鼠飼養(yǎng)于環(huán)境溫度20±2℃, 相對(duì)濕度40%～70%,12 h 人工/明暗循環(huán)交替, 通風(fēng)良好的動(dòng)物房?jī)?nèi)［醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證書(shū)： SCXK(川)2018-100 號(hào)］,實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 南五靈安神復(fù)方提取物, 實(shí)驗(yàn)室自制；戊巴比妥鈉(sigma 公司)；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)(成都市科隆化學(xué)品有限公司), 對(duì)氯苯丙氨酸(4-Chloro-DL-phenylalanine), (Sigma 公司)美國(guó), 規(guī)格：5 g/瓶, 批號(hào)1002993175, 小鼠Glu ELISA 試劑盒(上海酶聯(lián)), 小鼠γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA) ELISA 試劑盒(上海酶聯(lián)), 小鼠5-羥色胺(serotonin, 5-HT)ELISA 試劑盒(上海酶聯(lián))。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀(成都泰盟科技有限公司, 型號(hào)：ZZ-6)；電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司, 型號(hào)：ME20A)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司, 型號(hào)：DHG-9245A)；真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司, 型號(hào)：DZF-6050)；恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司,型號(hào)：DZKWD-4)；酶標(biāo)儀(Thermo, 型號(hào)：DENLEY DRAGON Wellscan MK 3)離心機(jī)(Eppendorf)；移液槍(Thermo)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 南五靈安神復(fù)方提取物的制備 分別稱(chēng)取干燥的南五味子、靈芝、茯苓飲片粗粉各108 g 及麥冬飲片粗粉54 g 進(jìn)行提取。制備方法為10 倍量95%乙醇回流提取2次, 1.5 h/次, 然后再加12倍量水, 煎煮1次,1.0 h/次, 提取液濾過(guò)后濃縮揮盡溶劑, 經(jīng)減壓干燥得醇水提取物。提取物的得率為：28.25%。

1.4.2 劑量分組及受試樣品給予時(shí)間 KM 小鼠50 只, 設(shè)置溶劑對(duì)照組, 模型對(duì)照組, 南五靈安神復(fù)方提取物小、中、大劑量組, 每組10 只。南五靈安神復(fù)方提取物小、中、大劑量組以人體推薦量的10、20、30 倍為給藥劑量, 即3.5、7.0、10.5 g 生藥/kg, 受試樣品給予時(shí)間30 d。溶劑對(duì)照組、模型對(duì)照組以0.5% 羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)灌胃, 1 次/d, 連續(xù)灌胃30 d。

1.4.3 對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響 參照實(shí)驗(yàn)方法［3］, 末次給藥30 min 后進(jìn)行小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn), 將各組小鼠按編號(hào)順序分別獨(dú)立放入自主活動(dòng)測(cè)試儀中, 記錄小鼠的自主活動(dòng)情況。15 min/次, 統(tǒng)計(jì)后10 min 小鼠活動(dòng)次數(shù)。

自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 采集各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血,按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行小鼠外周血中Glu 和小鼠GABA的含量測(cè)定, 通過(guò)考察南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)與小鼠睡眠相關(guān)的兩個(gè)神經(jīng)遞質(zhì)的影響［4］, 初步探討南五靈安神復(fù)方提取物改善睡眠的作用機(jī)制。

1.4.4 直接睡眠實(shí)驗(yàn) 觀察提取物小、中、大劑量組給予不同劑量的南五靈安神復(fù)方提取物后, 是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象。

1.4.5 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn) 參照實(shí)驗(yàn)方法［3］, 在戊巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上, 觀察受試物是否能延長(zhǎng)睡眠時(shí)間, 若睡眠時(shí)間延長(zhǎng), 則說(shuō)明受試物與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用。正式試驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn), 確定使動(dòng)物100%入睡, 但又不使睡眠時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的戊巴比妥鈉劑量(30～60 mg/kg), 用此劑量正式實(shí)驗(yàn)。

各組小鼠末次給予溶劑對(duì)照及不同劑量提取物后,出現(xiàn)峰作用前10～15 min, 給各組動(dòng)物腹腔注射戊巴比妥鈉, 注射量為0.1 ml/10 g, 以翻正反射消失為指標(biāo),觀察受試樣品能否延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間。

1.4.6 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn) 參照實(shí)驗(yàn)方法［3］, 觀察受試物與戊巴比妥鈉的協(xié)同作用。正式實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn), 確定戊巴比妥鈉閾下催眠劑量(16～30 mg/kg), 即80%～90%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量。動(dòng)物末次給予不同劑量的南五靈安神復(fù)方提取物后, 出現(xiàn)峰作用前10～15 min, 各組動(dòng)物腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量, 記錄30 min 內(nèi)入睡動(dòng)物數(shù)(翻正反射消失達(dá)1 min 以上者)。

1.4.7 對(duì)PCPA 所致失眠小鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響 溶劑對(duì)照組, 模型對(duì)照組, 南五靈安神復(fù)方提取物小、中、大劑量組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按實(shí)驗(yàn)組別等體積灌胃給藥, 溶劑對(duì)照組、模型對(duì)照組灌胃0.5% CMC-Na, 連續(xù)給藥30 d。實(shí)驗(yàn)第28、29、30 天, 模型對(duì)照組及受試藥物組小鼠每日腹腔注射1 次配制好的對(duì)PCPA 溶液(300 mg/kg),給藥體積為10 ml/kg, 溶劑對(duì)照組腹腔注射同體積的生理鹽水, 連續(xù)3 d。第30 天, 末次給藥30 min 后小鼠眼球取血, 脫頸椎處死, 在枕骨大孔處快速剪斷延髓,去除顱骨, 完全暴露、分離腦組織。在冰上快速取腦,在預(yù)冷的生理鹽水中洗凈血液, 將小鼠大腦半球一分為二, 迅速分離出海馬組織, 組織稱(chēng)重后, 在冰浴條件下充分勻漿, 制備100 g/L 的腦組織勻漿, -4℃離心,取上清液于EP 管并保存在-80℃冰箱中待測(cè)。采用ELISA 檢測(cè)試劑盒, 按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定各組小鼠海馬組織中γ-GABA 、5-HT 含量［4,5］, 結(jié)果用t 檢驗(yàn)兩兩對(duì)比。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響 自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 提取物小、中、大劑量組小鼠活動(dòng)次數(shù)、站立次數(shù)、合并次數(shù)與溶劑對(duì)照組比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說(shuō)明安神處方提取物對(duì)小鼠的自發(fā)活動(dòng)無(wú)影響。見(jiàn)表1。

表1 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響( ±s, 次)

表1 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響( ±s, 次)

注：與溶劑對(duì)照組比較, P>0.05

組別 劑量 動(dòng)物數(shù)(只) 活動(dòng)次數(shù) 站立次數(shù) 合并次數(shù)溶劑對(duì)照組 — 10 10.3±5.21 95.6±15.28 105.9±14.07提取物小劑量組 3.5 g 生藥/kg 10 12.3±6.15 98.5±21.51 110.8±20.93提取物中劑量組 7.0 g 生藥/kg 10 11.5±5.85 92.3±22.31 103.8±21.52提取物大劑量組 10.5 g 生藥/kg 10 10.4±5.32 83.7±20.29 94.1±22.11

2.2 對(duì)小鼠外周血中Glu 和GABA 的影響 提取物小、中、大劑量組小鼠外周血中Glu 均低于溶劑對(duì)照組, 提取物中、大劑量組小鼠外周血中GABA 均高于溶劑對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05 或<0.01),且具有明顯的量效關(guān)系 ；提取物小劑量組小鼠外周血中GABA 與溶劑對(duì)照組比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。該結(jié)果提示南五靈安神復(fù)方是通過(guò)提高抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA 濃度, 降低興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu 濃度, 通過(guò)提高GABA/Glu 的比率起到改善睡眠的安神作用。

表2 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)小鼠外周血中Glu 和GABA 的影響( ±s)

表2 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)小鼠外周血中Glu 和GABA 的影響( ±s)

注：與溶劑對(duì)照組比較, aP<0.05, bP<0.01

組別 劑量 動(dòng)物數(shù)(只) Glu(ng/ml) GABA(ng/ml) GABA/Glu溶劑對(duì)照組 — 10 57.64±1.64 47.83±2.01 0.83提取物小劑量組 3.5 g 生藥/kg 10 56.16±1.30a 48.30±2.16 0.86提取物中劑量組 7.0 g 生藥/kg 10 53.90±3.66a 50.44±3.15a 0.94提取物大劑量組 10.5 g 生藥/kg 10 52.44±2.10b 54.21±7.12a 1.03

2.3 對(duì)小鼠直接睡眠的影響 實(shí)驗(yàn)采用的南五靈安神復(fù)方提取物小、中、大劑量組均無(wú)使小鼠直接睡眠的作用, 說(shuō)明南五靈安神復(fù)方在實(shí)驗(yàn)劑量下沒(méi)有使小鼠直接睡眠的中樞抑制作用。

2.4 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn) 對(duì)于戊巴比妥鈉(閾上劑量)誘導(dǎo)的小鼠睡眠實(shí)驗(yàn), 提取物中、大劑量組小鼠睡眠潛伏期均短于溶劑對(duì)照組, 睡眠時(shí)間均長(zhǎng)于溶劑對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05 或<0.01),表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系；提取物小劑量組小鼠睡眠潛伏期、睡眠時(shí)間與溶劑對(duì)照組比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 南五靈安神復(fù)方提取物延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的作用( ±s, s)

表3 南五靈安神復(fù)方提取物延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的作用( ±s, s)

注：與溶劑對(duì)照組比較, aP<0.05, bP<0.01

組別 劑量 動(dòng)物數(shù)(只) 睡眠潛伏期 睡眠時(shí)間溶劑對(duì)照組 — 10 214.8±42.60 3968.4±1637.75提取物小劑量組 3.5 g 生藥/kg 10 217.3±70.78 5271.2±1097.02提取物中劑量組 7.0 g 生藥/kg 10 177.7±26.16a 6211.2±1064.16b提取物大劑量組 10.5 g 生藥/kg 10 172.6±13.00a 8749.2±1303.98b

2.5 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn) 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 提取物中、大劑量小鼠入睡率大于溶劑對(duì)照組, 睡眠潛伏期短于溶劑對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05 或<0.01)。提取物小劑量組小鼠入睡率、睡眠潛伏期與溶劑對(duì)照組比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)的影響(%, ±s)

表4 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)的影響(%, ±s)

注：與溶劑對(duì)照組比較, aP<0.05, bP<0.01

組別 劑量 動(dòng)物數(shù)(只) 入睡率 睡眠潛伏期(s)溶劑對(duì)照組 — 10 40(4/10) 403.25±67.78提取物小劑量組 3.5 g 生藥/kg 10 50(5/10) 357.20±25.68提取物中劑量組 7.0 g 生藥/kg 10 90(9/10)a 250.33±24.04b提取物大劑量組 10.5 g 生藥/kg 10 100(10/10)b 245.22±33.35b

2.6 對(duì)PCPA 所致失眠小鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響 模型對(duì)照組小鼠海馬組織中GABA 和5-HT 低于溶劑對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)；提取物中、大劑量組小鼠海馬組織中GABA 和5-HT 均高于模型對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)。說(shuō)明南五靈安神復(fù)方提取物能夠通過(guò)提高由PCPA 造成的失眠模型小鼠海馬組織里的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)濃度達(dá)到改善睡眠的作用,且表現(xiàn)出量效關(guān)系。提取物小劑量組小鼠海馬組織中GABA 和5-HT 與模型對(duì)照組比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表5。

表5 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)PCPA 所致失眠小鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響( ±s, ng/g)

表5 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)PCPA 所致失眠小鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響( ±s, ng/g)

注：與溶劑對(duì)照組比較, aP<0.01；與模型對(duì)照組比較, bP<0.01

組別 劑量 動(dòng)物數(shù)(只) GABA 5-HT溶劑對(duì)照組 — 10 32.75±6.43 269.87±55.79模型對(duì)照組 — 10 20.51±3.21a 144.37±32.27a提取物小劑量組 3.5 g 生藥/kg 10 25.67±7.83 160.56±38.39提取物中劑量組 7.0 g 生藥/kg 10 32.94±5.76b 190.15±35.27b提取物大劑量組 10.5 g 生藥/kg 10 35.33±7.63b 227.42±43.94b

3 討論

在中醫(yī)學(xué)中, 失眠有多個(gè)稱(chēng)謂, 《難經(jīng)》記載有：“老人臥而不寐, 少壯寐而不寢”。開(kāi)始出現(xiàn)了“不寐”之稱(chēng)［6］。《外臺(tái)秘要》首次出現(xiàn)了“失眠”的病名。近現(xiàn)代中醫(yī)臨床多應(yīng)用不寐或失眠, 1997 年我國(guó)頒布的《中醫(yī)臨床診療術(shù)語(yǔ)》中將“不寐”定為法定病名。近現(xiàn)代醫(yī)家對(duì)于失眠的病因病機(jī)的認(rèn)識(shí), 在對(duì)古代醫(yī)家陰陽(yáng)、營(yíng)衛(wèi)、也神、五臟、痰火等理論繼承的同時(shí)又有了新的發(fā)展。《傷寒論》提到“悵怏不得眠”, 明確了情志病癥為失眠的發(fā)病病因。在現(xiàn)代社會(huì), 精神情志和心理因素在失眠的發(fā)病中占據(jù)著越來(lái)越重要的位置［7］。有調(diào)查研究顯示精神情志因素占失眠發(fā)病因素的76.66%。

臨床上, 失眠治療以古方加減應(yīng)用為主, 如半夏湯, 酸棗仁湯, 黃連阿膠湯, 溫膽湯等。安神類(lèi)中藥具有臨床療效確切、副作用小的特點(diǎn), 被廣泛應(yīng)用于治療各種因素導(dǎo)致的失眠問(wèn)題［8-13］?，F(xiàn)代分子生物學(xué)研究表明, 失眠與相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān), 包括GABA、谷氨酸(glutamate, Glu) 、5-HT、多巴胺(dopamine, DA) 和去甲腎上腺素(norepinephrine, NE) 及其代謝物5-羥吲哚 乙 酸(5-hydroxyindole acetic acid, 5-HIAA)等［14-16］。目前, 對(duì)安神類(lèi)中藥及其有效成分的藥理研究日漸深入, 對(duì)于中藥單體成分、功能因子、單味中藥提取物以及復(fù)方安神中藥發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用的藥理藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制已被廣泛研究并報(bào)道［17］, 安神類(lèi)中藥及其制劑也被廣泛應(yīng)用于臨床并取得了較好的臨床療效［18］。

本研究發(fā)現(xiàn), 南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)小鼠的自發(fā)活動(dòng)無(wú)影響, 沒(méi)有使小鼠直接睡眠的中樞抑制作用；但其中劑量和大劑量能明顯縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0.05)；能明顯延長(zhǎng)小鼠睡眠時(shí)間(P<0.01), 且表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系；也具有明顯增加戊巴比妥鈉閾下劑量的入睡小鼠只數(shù)的作用(P<0.05 或<0.01), 同時(shí)能夠縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0.01)。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中“改善睡眠功能”的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)可認(rèn)為南五靈安神復(fù)方提取物具有改善睡眠功能的作用, 且以中劑量、大劑量效果最佳, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn), 利用對(duì)PCPA 造成失眠小鼠模型, 南五靈安神復(fù)方提取物的中劑量和大劑量均能明顯提高小鼠海馬組織中GABA 和5-HT,與模型對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01), 說(shuō)明南五靈安神復(fù)方提取物能夠通過(guò)提高由PCPA 造成的失眠模型小鼠海馬組織里的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)濃度達(dá)到改善睡眠的作用。研究還發(fā)現(xiàn)南五靈安神復(fù)方提取物對(duì)外周血中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu 有明顯降低其含量的作用(P<0.05 或<0.01)；對(duì)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA 有明顯升高其含量的作用(P<0.05), 且具有明顯的量效關(guān)系。該結(jié)果提示南五靈安神復(fù)方是通過(guò)提高抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA 濃度, 降低興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu 濃度, 通過(guò)提高GABA/Glu 的比率起到改善睡眠的安神作用。

綜上所述, 本研究結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)理論和現(xiàn)代藥理研究, 開(kāi)發(fā)具有安神功效的保健食品, 結(jié)合本文的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論, 說(shuō)明南五靈安神復(fù)方提取物具有確切的改善睡眠功能, 并探討其起效的作用機(jī)制, 可為南五靈安神復(fù)方開(kāi)發(fā)為保健食品提供實(shí)驗(yàn)支持。