化學(xué)發(fā)光法檢測孕婦梅毒螺旋體抗體假陽性探討

鄭壽招

近年來, TP 感染在國人中檢出率不斷升高, 孕婦這特殊群體也不可避免, 現(xiàn)階段國內(nèi)絕大部分二三級醫(yī)院檢驗科對人群的TP 抗體篩查使用CLIA 檢測［1,2］,CLIA 有較高的特異性與靈敏度, 并且能快速標(biāo)準(zhǔn)化及準(zhǔn)確的大批量檢測出結(jié)果。目前為止任何檢測方法在檢驗過程中難免出現(xiàn)假陽性與假陰性結(jié)果［3,4］, 本文主要探討使用CILA 檢測孕婦的TP 抗體篩查引起假陽性的原因。TP 感染的孕婦由于此時人體激素水平的改變可使部分孕婦心身壓力更大, 同時還危及到胎兒的健康問題, 引起諸如胎兒神經(jīng)發(fā)育、早產(chǎn)、死胎等各種問題［5,6］。現(xiàn)階段TP 抗體檢測的方法包括熒光顯微鏡法、ELISA、TPPA 和CLIA 等［7,8］。目前商品化試劑主要應(yīng)用重組TP 抗原TP15、TP47 與TP17 包被［9-12］。TP17 是β-桶狀蛋白, 維護膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、趨化因子、表達粘附分子等方面起重要作用, 是含量豐富的特異性外膜蛋白抗原, 存在于各期梅毒患者病灶中；TP15是TP 外膜含量相對較少的蛋白, 目前功能還未發(fā)現(xiàn)；TP47 是青霉素結(jié)合蛋白, 可誘導(dǎo)血管間粘附分子, 是TP 外膜蛋白中含量最高的成分之一。所有的檢測方法均會受非特異性因素干擾導(dǎo)致的假陽性, 為了使孕婦避免TP 抗體假陽性承受不必要的精神與身體壓力、社會壓力, 緩解醫(yī)患之間的關(guān)系, 本研究探討了引起CLIA 檢測孕婦TP 抗體假陽性的主要因素。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集本院2019～2022 年期間32 份使用CLIA 檢測孕婦TP 抗體陽性、而產(chǎn)后6 個月后再次進行TP 抗體檢測為陰性的標(biāo)本作為假陽性組, 同時隨機選取32 份確診為TP 感染抗體陽性的孕婦標(biāo)本作為真陽性組。

1.2 儀器與試劑 CLIA 為深圳邁瑞CL-6000i 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；所用試劑、校準(zhǔn)品與耗材均為配套,邁瑞TP 抗體檢測試劑包被TP 重組抗原(TP15-TP17-TP47), 發(fā)光物質(zhì)為3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1, 2-二氧環(huán)乙烷(AMPPD), 酶為堿性磷酸酶(ALP)；TPPA 試劑采用日本株式會社檢測試劑盒, 用超聲裂解的TP(Nichols 株)作為抗原, 致敏紅色明膠顆粒, 與樣品中的TP 抗體結(jié)合, 產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng), 稀釋倍數(shù) 1∶80 凝集判讀為陽性結(jié)果；采用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司包被TP 重組單一抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒(TP15 試劑盒、TP17 試劑盒與TP47 試劑盒), 酶標(biāo)儀為鄭州安圖生物工程有限公司的Anthos2010 酶標(biāo)分析儀。

1.3 檢測方法 CLIA 檢測孕婦TP 抗體陽性的標(biāo)本,進行類風(fēng)濕因子(RF)檢測(自身抗體問題)與高速離心(纖維蛋白問題)后再次檢測, 如仍然為TP 抗體陽性, 進行TPPA 驗證以及產(chǎn)后6 個月后再次檢測TP 抗體與TPPA。兩組均應(yīng)用單基因片段包被TP15、TP17與TP47 抗原檢測相應(yīng)的抗體。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 假陽性組TP 抗體表達情況 32 份假陽性組孕婦TP 抗體檢測陽性標(biāo)本的COI 值為1.03～6.09, 其中29 份標(biāo)本TPPA 為陰性, 3 份標(biāo)本TPPA 為陽性, 稀釋倍數(shù)在1∶80 內(nèi), 產(chǎn)后6 個月后復(fù)檢TP 與TPPA 均為陰性。

2.2 兩組抗體基因片段檢測結(jié)果比較 假陽性組TP檢測陽性標(biāo)本采用單基因片段包被TP15、TP17 與TP47 抗原檢測相應(yīng)的抗體, TP15 均為陰性, TP17 陽性6 份, TP47 陽性22 份；產(chǎn)后6 個月后復(fù)查TP、TPPA、TP15、TP17 與TP47 均為陰性。見表1。真陽性組標(biāo)本中, TP15 陽性20 份, TP17 陽性26 份, TP47 陽性11 份。見表2。假孕婦組孕期TP17、TP47 陽性率分別為18.75%(6/32)、68.75%(22/32), 高于本組產(chǎn)后6 個月的0、0, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.621、33.524,P=0.010、0.000＜0.05)。假陽性組孕期TP15 陽性率0、TP17 陽性率18.75%(6/32)低于真陽性組的62.50%(20/32)、81.25%(26/32), TP47 陽性率68.75%(22/32) 高于真陽性組的34.38%(11/32), 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=29.091、25.000、7.570, P=0.000、0.000、0.006＜0.05)。

表1 假陽性組孕期與產(chǎn)后6 個月TP 特異性抗體的表達

3 討論

現(xiàn)階段大部分二三級醫(yī)院已開展CLIA 檢測感染性病毒相關(guān)的抗原抗體。CLIA 有著較高的特異性與敏感性［1］, 并可批量檢測能滿足逐年增長的標(biāo)本量, 特別適用于一些檢測體量比較大的綜合性醫(yī)院［2］。每種檢測方法均由非特異性的干擾引起假陽性, 雖然現(xiàn)在多采用CLIA 進行TP 抗體篩查, 初篩陽性結(jié)果均會結(jié)合患者流行病學(xué)特點以及 TPPA 確證試驗, 以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性, 避免引發(fā)不必要的醫(yī)療事件。但國人對性感染性疾病的認(rèn)知還是存在比較大的歧義, 會感到自卑、心身壓力與社會壓力, 特別對于一些特殊人群,例如孕婦。

通過以上分析, 孕婦TP 抗體假陽性主要是由TP47 基因片段引起的, 可能是由于妊娠期間內(nèi)分泌自身激素的變化與胎兒異質(zhì)性問題產(chǎn)生了干擾物質(zhì)或可引起交叉反應(yīng)的自身抗體, 產(chǎn)生了體外診斷非特異性的假陽性。相關(guān)文獻報道TP15、TP17 與TP47 重組基因片段在檢測TP 抗體的敏感性均為100%, 但特異性方面TP15 重組基因片段為96%, TP17 重組基因片段為100%, 而TP47 重組基因片段只有近20%［12］。故TP47重組基因片段對TP 抗體的檢測特異性比較低, 孕婦這種特殊的人群由于體內(nèi)巨大的變化產(chǎn)生了某些物質(zhì)影響了TP47 重組抗原與酶標(biāo)記相應(yīng)抗原非特異性結(jié)合,使體外檢測實驗結(jié)果呈假陽性。

雖然可通過現(xiàn)有的一些醫(yī)療手段驗證其假陽性的問題, 但還是會導(dǎo)致部分人的身心問題、家庭矛盾與社會壓力, 特別是孕婦這種特殊人群, 妊娠期間激素的巨大變化引起性情的改變外加假陽性的傳染性病毒感染問題可能會引發(fā)更強的心身負(fù)擔(dān)、家庭與社會問題。故需進一步研究為什么TP47 重組基因片段可引起孕婦TP 抗體假陽性以及建議試劑產(chǎn)家生產(chǎn)單獨包被TP47重組基因片段抗原的試劑盒［13］, 對于懷疑CLIA 檢測TP 可能假陽性的孕婦患者進一步除檢測TPPA 驗證外,再檢測單獨包被TP47 重組基因片段抗原的抗體, 可進一步確定引起假陽性的原因所在, 向患者解釋引起的問題關(guān)鍵［14］, 避免與緩解引起孕婦的各種壓力問題。本研究的主要目的是研究TP47 重組基因片段抗原易引起部分孕婦TP 抗體體外檢測假陽性的原因, 更改試劑的非特異性問題［13,15］, 避免一些不必要的因素引起孕婦的各種壓力。

查閱一些資料與文獻發(fā)現(xiàn), 現(xiàn)階段不論是進口的還是國產(chǎn)的CLIA 均存在非特異性干擾, 然而熒光顯微鏡法、ELISA 與TPPA 存在敏感性、自動化與檢測隨時性等問題, 故而目前大部分二、三級醫(yī)院采用自動化化學(xué)發(fā)光分析儀檢測感染性病毒的抗原抗體［16］。在現(xiàn)有未改進多重組基因片段抗原試劑盒特異性以及產(chǎn)生出單獨包被TP47 重組基因片段抗原試劑盒前, 不可避免的情況下首先需要進行多方向的驗證TP 抗體假陽性的問題。另外特別需要醫(yī)務(wù)人員的解釋與關(guān)懷,消除孕婦這種特殊人群的心身負(fù)擔(dān), 積極引導(dǎo)孕婦理解檢測方法的非特異性問題, 共建和諧的醫(yī)患環(huán)境, 提高對患者的人文關(guān)懷。