重癥肌無力患者免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子的檢測及臨床意義

韓金玲 陳燕婷 陳恩悅 葉秀娟

重癥肌無力（myasthenia gravis，MG）是一種由神經(jīng)-肌肉接頭處傳遞功能障礙所引起自身免疫疾病，主要癥狀為骨骼肌收縮無力，以波動性肌無力、易疲勞為主要表現(xiàn)，常見的首發(fā)癥狀為上瞼下垂以及雙眼復(fù)視等，面部肌肉及咽喉受累時，可導(dǎo)致語言障礙和吞咽困難等［1］。目前關(guān)于重癥肌無力發(fā)生的始動因素仍未明確，臨床主要認(rèn)為是由于患者的多種特異性免疫系統(tǒng)異常、細(xì)胞因子表達(dá)失衡及淋巴細(xì)胞亞群比例的失調(diào)所引起［2］。白細(xì)胞介素-6（interleukin 6，IL-6）是一種多肽物質(zhì)，具有多種生物活性，其在調(diào)節(jié)免疫球蛋白的合成中發(fā)揮重要作用，其可通過促進(jìn)B 淋巴細(xì)胞分化成漿細(xì)胞產(chǎn)生引起患者發(fā)生重癥肌無力的乙酰膽堿受體抗體（acetylcholine receptor antibodies，AChR-Ab）［3］。同時，重癥肌無力的發(fā)生也和T 細(xì)胞功能密切相關(guān)，T 淋巴細(xì)胞分為輔助性T 細(xì)胞和抑制性T 細(xì)胞亞群，兩個亞群之間相互誘導(dǎo)與相互制約形成的T 細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，影響著重癥肌無力的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸［4］。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均為反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的主要指標(biāo)［5］，CD8+具有抑制B 細(xì)胞生成抗體及降低T 細(xì)胞活性等作用，CD3+、CD4+均參與著T 細(xì)胞抗原識別和信號傳遞過程，CD4+與CD8+則是互相誘導(dǎo)和互相制約的關(guān)系，在免疫應(yīng)答和自身穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用［6］。本研究擬探究重癥肌無力患者免疫學(xué)指標(biāo)（CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+）和血清細(xì)胞因子（IL-6）的檢測及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017 年6 月到2022 年6 月華中科技大學(xué)協(xié)和深圳醫(yī)院收治的92 例重癥肌無力患者作為研究觀察組，另選取同期有進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子檢測的健康體檢者100 名作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國重癥肌無力診斷和治療指南（2015 年版）》［7］中的重癥肌無力診斷標(biāo)準(zhǔn)，首次發(fā)作或穩(wěn)定后復(fù)發(fā)的患者；②年齡大于等于18 歲的患者；③臨床相關(guān)資料及檢測資料完整的患者；④患者及家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有嚴(yán)重代謝疾病或者其他免疫性疾病的患者。②伴有全身血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤及凝血功能障礙等疾病的患者。③近3 個月，有使用免疫制劑進(jìn)行治療的患者；④懷孕或哺乳期的患者。觀察組92 例，男44 例，女48 例，平均年齡（47.9±10.73）歲；對照組100 名，男42 例，女58 例，平均年齡（50.68±12.04）歲。兩組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過華中科技大學(xué)協(xié)和深圳醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批。

1.2 檢測方法

1.2.1 免疫學(xué)指標(biāo)檢測

患者于入院次日空腹?fàn)顟B(tài)下、健康體檢者則在體檢當(dāng)日空腹?fàn)顟B(tài)下采集外周靜脈血3 mL 置于乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝試管中，采用流式細(xì)胞儀及配套試劑盒（型號：FC 500，廠家：美國貝克曼庫爾特公司）檢測樣品的免疫指標(biāo)水平，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測樣本CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平。

1.2.2 血清IL-6 檢測

同樣采集患者入院次日空腹?fàn)顟B(tài)下、健康體檢者則在體檢當(dāng)日空腹?fàn)顟B(tài)下外周靜脈血3 mL置于促凝劑管中，在離心處理（轉(zhuǎn)速3 000 r/min，離心15 min，離心半徑10 cm）后，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測血清IL-6 水平，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 病情評估標(biāo)準(zhǔn)［8］

采用重癥肌無力定量（quantitative myasthenia gravis，QMGs）評分［8］對重癥肌無力患者的病情程度進(jìn)行評估，評分表主要包含復(fù)視、上瞼下垂、面肌、吞咽情況、構(gòu)音情況、頸肌、雙側(cè)臂力、肺活量、雙側(cè)握力和雙側(cè)腿肌一共13 個條目，每個條目得分為0～3分，總分為39分，得分越高則患者的癥狀越嚴(yán)重。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 22.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料采用（±s）表示，行t檢驗；計數(shù)資料采用n（%）表示，行χ2檢驗。采用Pearson 相關(guān)分析分析免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子與QMGS 評分的相關(guān)性。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平比較

觀察組的CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組的IL-6 水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 觀察組和對照組的免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平比較（±s）Table 1 Comparison of immunological indexes and serum cytokine levels between the observation group and the control group（±s）

表1 觀察組和對照組的免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平比較（±s）Table 1 Comparison of immunological indexes and serum cytokine levels between the observation group and the control group（±s）

2.2 不同病情的患者免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平比較

CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平及IL-6水平明顯高于眼肌型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；QMGS 評分明顯高于眼肌型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同病情嚴(yán)重程度的患者免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平、QMGS 評分比較（±s）Table 2 Comparison of immunological indexes，serum cytokine level and QMGS score of patients with different severity of illness（±s）

表2 不同病情嚴(yán)重程度的患者免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平、QMGS 評分比較（±s）Table 2 Comparison of immunological indexes，serum cytokine level and QMGS score of patients with different severity of illness（±s）

2.3 患者免疫學(xué)指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平與QMGS 評分的相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson 相關(guān)分析顯示，CD3+與患者的QMGS 評分無明顯的相關(guān)關(guān)系，但CD3-CD56+、CD4+/CD8+及IL-6 與患者的QMGS 評分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.290，-0.409，-0.349；P＜0.01）。

3 討論

目前重癥肌無力呈逐年上升趨勢，據(jù)報道表示［9］，其患病率約達(dá)（0.3～2.8）/10 萬人。雖然隨著現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，重癥肌無力的標(biāo)準(zhǔn)治療方案在不斷完善，但目前尚缺乏徹底根治的方法，且有1/3 的患者經(jīng)歷了病情加重的情況［10］，重癥肌無力作為慢性炎癥性自身免疫疾病，其主要由自身抗體介導(dǎo)，發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，免疫失調(diào)對于MG 發(fā)生有著重要影響。在重癥肌無力中大約80%的患者均是由乙酰膽堿受體抗體（AchR）介導(dǎo)，還有一部分由肌肉特異性受體酪氨酸激酶、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4 等抗體介導(dǎo)［11］。在病理條件下，輔助T 細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子，刺激了B 細(xì)胞的增殖和分化，并分泌了補(bǔ)體結(jié)合的抗乙酰膽堿受體，合成了膜攻擊復(fù)合物，從而導(dǎo)致了神經(jīng)肌肉接頭突觸后膜的破壞［12］。因此，探究重癥肌無力患者免疫指標(biāo)和細(xì)胞因子表達(dá)情況，可為臨床治療提供新方向。

本研究結(jié)果表示，觀察組的免疫指標(biāo)（CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+）水平及細(xì)胞因子（IL-6）水平明顯高于健康對照組；同時，全身型的CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平及IL-6 水平明顯高于眼肌型。其機(jī)制可能與以下幾點有關(guān)：第一，IL-6是影響B(tài) 細(xì)胞增殖分化并產(chǎn)生抗體的重要細(xì)胞因子，重癥肌無力患者血清中的IL-6 會促使淋巴B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞，從而產(chǎn)生AchR 導(dǎo)致了重癥肌無力的發(fā)生，當(dāng)患者機(jī)體的IL-6 含量較高時，產(chǎn)生AchR 增多從而也導(dǎo)致患者病情的發(fā)展［13］。第二，T 細(xì)胞表面具有多種標(biāo)志性抗原，其中CD3+是T淋巴細(xì)胞表面的共同抗原，也是T 細(xì)胞的標(biāo)志，CD3+CD4+均有影響抗原識別、信號傳遞并輔助機(jī)體進(jìn)行體液免疫的作用，而CD8+是主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類限制性T 細(xì)胞識別輔助受體，其具有抑制B 細(xì)胞生成抗體及降低T 細(xì)胞活性等作用，從而抑制機(jī)體發(fā)生體液和細(xì)胞免疫，CD4+及CD8+相互誘導(dǎo)、相互制約形成了一個復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)，CD4+/CD8+水平的升高和下降也可反映機(jī)體B 淋巴細(xì)胞抑制作用情況和機(jī)體免疫狀態(tài)，也是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)情況的標(biāo)志物［14-15］。第三，自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞（CD3-CD56+）是異質(zhì)性多功能免疫細(xì)胞，具有獨立生物活性［16］，目前研究認(rèn)為，NK 細(xì)胞是通過增加主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類分子的表達(dá)，促進(jìn)B 細(xì)胞成熟，使機(jī)體產(chǎn)生AchR，從而影響重癥肌無力的發(fā)生和發(fā)展［17-18］。

QMGS 評分是2000 年由美國重癥肌無力協(xié)會提出的客觀測量MG 受累肌群的肌力和耐力情況的標(biāo)準(zhǔn)化量表，可評估患者受累肌群肌無力嚴(yán)重程度，不僅適用于全身型MG 患者，也適用于單純眼肌型，不同分型的重癥肌無力患者的病情評估具有較高敏感性［19-20］。本研究進(jìn)一步采用Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CD3+與患者的QMGS 評分無明顯的相關(guān)關(guān)系，由于CD3+代表著T 淋巴細(xì)胞表面的一類抗原，參與著T 淋巴細(xì)胞中輔助性T細(xì)胞和抑制性T 細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié)，因此與患者QMGS 評分較低。但CD3-CD56+、CD4+/CD8+及IL-6 與患者的QMGS 評分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，可見細(xì)胞因子表達(dá)異常等和重癥肌無力的病情發(fā)展有著重要關(guān)聯(lián)，CD3-CD56+、CD4+/CD8+及IL-6 可為患者的臨床治療及病情評估提供參考。

綜上所述，重癥肌無力患者免疫學(xué)指標(biāo)（CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+）和血清細(xì)胞因子（IL-6）明顯較高，且CD3-CD56+、CD4+/CD8+和IL-6 與患者的病情程度呈正相關(guān)關(guān)系，可為患者臨床治療、病情及預(yù)后的評估提供參考。但由于本研究為單中心研究，且樣本量較小，因此研究具有一定的局限性，結(jié)果可能存在一定的偏倚，未來仍需要進(jìn)行前瞻性的大樣本量的多中心研究進(jìn)行進(jìn)一步的深入探究。