外周血染色體多態(tài)性對(duì)IVF-ET 助孕治療臨床結(jié)局的影響

于慧君 常艷艷 楊娟 呂興鈺★

體外受精-胚胎移植技術(shù)（in vitro fertilizationembryo transfer，IVF-ET）作為輔助生殖技術(shù)（assisted reproductive technology，ART）的一種，是治療不孕癥的有效手段，越來越多的不孕患者采用IVF-ET 手段開展助孕治療，并取得一定獲益［1］。染色體多態(tài)性是指正常個(gè)體顯帶核型中的微小變異，在個(gè)體中恒定，是含有高度重復(fù)DNA 結(jié)構(gòu)的異染色質(zhì)，一般不具明顯表型及病理學(xué)意義，并具可遺傳特點(diǎn)［2］。以往研究認(rèn)為，染色體多態(tài)性不會(huì)引起表型效應(yīng)，無特殊功能［3］。但近年來陸續(xù)有研究顯示染色體多態(tài)性可能影響減數(shù)分裂時(shí)染色體的配對(duì)聯(lián)會(huì)，最終影響配子形成而引發(fā)流產(chǎn)、死胎、不孕不育等臨床效應(yīng)［4］。但也有研究指出，染色體多態(tài)性對(duì)IVF-ET 結(jié)局并無明顯影響［5］。本研究將探討染色體多態(tài)性對(duì)IVF-ET 結(jié)局的影響，為臨床明確染色體多態(tài)性與IVF-ET 結(jié)局的關(guān)系提供試驗(yàn)依據(jù)，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分析2017 年9 月至2022 年9 月四川錦欣西囡婦女兒童醫(yī)院生殖中心接受IVF-ET 助孕治療的17 452 個(gè)IVF-ET 新鮮胚胎移植周期。納入標(biāo)準(zhǔn)：①女方年齡≤38 周歲；②為首次接受輔助生殖助孕治療；③接受過染色體多態(tài)性檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有輔助生殖助孕治療史；②合并多囊卵巢、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮腺肌病。按納入排除標(biāo)準(zhǔn)最終入組2 765 個(gè)IVF-ET 新鮮胚胎移植周期，依據(jù)染色體多態(tài)性檢查結(jié)果分組，將夫妻一方或雙方有染色體多態(tài)性的周期納入染色體多態(tài)性組，其余夫妻雙方染色體均正常的周期納入對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1 外周血染色體核型分析

所有研究對(duì)象均常規(guī)采集外周血淋巴細(xì)胞，72 h 短期培養(yǎng)后進(jìn)行秋水仙素、低滲液處理；將收集的細(xì)胞進(jìn)行G 顯帶處理，顯帶分辨率550～850 條帶，參照人類細(xì)胞學(xué)國際命名體制［6］進(jìn)行染色體核型分析，記錄染色體核型變異類型。

1.2.2 IVF-ET

促排卵治療方案均為促性腺激素釋放激素拮抗劑（gonadotropin-releasing hormone-antagonist，GnRH-ant）方案，月經(jīng)第2～3 d 依據(jù)患者陰道B 超及孕酮、雌二醇等激素水平予以促性腺激素（gonadotropins，Gn）啟動(dòng)劑量啟動(dòng)促排卵，Gn 包括尿源性人絕經(jīng)期促性腺激素（human menopausal gonadotropin，hMG）或重組人促卵泡激素（recombinant human follicle-stimulating hormone，rFSH），Gn應(yīng)用后4～5 d 依據(jù)卵泡發(fā)育及激素水平調(diào)整Gn 劑量及復(fù)診頻率；當(dāng)有1 個(gè)卵泡直徑≥12 mm 或血清雌二醇≥500 pmol/L 時(shí)，按0.25 mg/d 劑量添加醋酸西曲瑞克，當(dāng)有3 個(gè)卵泡直徑≥18 mm 時(shí)注射GnRH-a（0.1～0.2）mg+人絨毛膜促性腺激素（humanchorionic gonadotropin，hCG）2 000～4 000 U 扳機(jī)，34～36 h 后取卵；上游法處理精子，將獲取的卵細(xì)胞在體外培養(yǎng)3～4 h 后，按10 000 精子/卵細(xì)胞比例加入精子，若（a+b）級(jí)精子總數(shù)≤5×106則行卵胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）治療；獲取卵細(xì)胞IVF 后70～72 h 觀察胚胎形態(tài)，應(yīng)用Gardner 6 級(jí)評(píng)分法［7］評(píng)價(jià)胚胎質(zhì)量，挑選優(yōu)質(zhì)胚胎或部分非優(yōu)質(zhì)胚胎及中等級(jí)別以上的囊胚用于移植，第3 天或第5 天選擇1～2 枚細(xì)胞胚或胚囊移植，移植后14 d 檢測(cè)血hCG，若血清hCG 水平＜10 U/L 則停止所有激素，若hCG 水平＞25 U/L 則判定為生化妊娠，10～25 U/L 則隨訪觀察，依據(jù)HCG 值變化進(jìn)一步處理；移植4～6 周超聲檢查若可見判定則為臨床妊娠。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 一般資料

采集兩組研究對(duì)象年齡、身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）、不孕年限、基礎(chǔ)卵泡雌激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、基礎(chǔ)雌二醇（estradiol，E2）泌乳素（Prolactin，PRL）、促甲狀腺激素（thyroidstimulating hormone，TSH）。

1.3.2 IVF-ET 治療情況

統(tǒng)計(jì)兩組竇狀卵泡數(shù)（antral follicular count，AFC）、降調(diào)日至促排日間隔、Gn 用量、Gn 使用天數(shù)、移植日內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)、移植胚胎數(shù)。

1.3.3 晚期卵泡日P 及hCG 日激素水平

晚卵泡期起始日、hCG 日抽取患者晨間空腹靜脈血，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法（試劑盒購自美國貝克曼庫爾特公司，批內(nèi)及批間變異＜5%）測(cè)定血E2、FSH、P 水平，均嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.3.4 IVF-ET 結(jié)局

統(tǒng)計(jì)單個(gè)原核（one-pronuclear，1PN）受精率、雙原核（two-pronuclear，2PN）受精率、多原核（pronuclear，PN）PN 受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、妊娠率、生化妊娠率、種植率、早期流產(chǎn)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均經(jīng)正態(tài)分布檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布則采用中位數(shù)（四分衛(wèi)間距）［M（P25，P75）］描述，行非參數(shù)檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)用（±s）描述，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用n（%）描述，χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 染色體多態(tài)性分析

2 765 個(gè)周期中，35 個(gè)周期為夫妻一方或雙方有染色體多態(tài)性；其中常染色體次縊痕增加10 例，包括l qh+3 例、9 qh+3 例、16 qh+4 例；染色體臂間倒位12 例，包括inv（9）（p11q13）/inv（9）（p12q13）9 例，inv（5）（p13q15）、inv（13）（p12q13）、inv（11）（p15q23）各1 例；D/G 組變異8 例，包括13pstk+/13pstk-1 例、14pstk+1 例、15pstk+/15ph+/15pss3 例、21pstk+/21ph/21pss 2 例、22pstk+/22pss 1 例；Y 染色體變異5 例，包括Yqh+/Yqh-3 例、inv（Y）/（p11q11）1 例、Yqspat 1 例，上述周期納入染色體多態(tài)性組；其余2 730 個(gè)周期夫妻雙方染色體均正常，納入對(duì)照組。兩組年齡、BMI、不孕年限、基礎(chǔ)FSH、基礎(chǔ)LH、基礎(chǔ)E2、PRL、TSH 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較［（±s），M（P25，P75）］Table 1 Comparison of general data between the two groups［（±s），M（P25，P75）］

表1 兩組一般資料比較［（±s），M（P25，P75）］Table 1 Comparison of general data between the two groups［（±s），M（P25，P75）］

2.2 兩組IVF-ET 治療情況比較

兩組AFC、降調(diào)日至促排日間隔、Gn 用量、Gn使用天數(shù)、移植日內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)、移植胚胎數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 兩組IVF-ET 治療情況比較（±s）Table 2 Comparison of IVF-ET between the two groups（±s）

2.3 兩組晚期卵泡日P 及hCG 日激素水平比較

兩組晚期卵泡日、hCG 日P、hCG 日LH、hCG日E2比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 兩組晚期卵泡日P 及hCG 日激素水平比較［（±s），M（P25，P75）］Table 3 Comparison of late follicle day P and hCG hormone levels between the two groups［（±s），M（P25，P75）］

表3 兩組晚期卵泡日P 及hCG 日激素水平比較［（±s），M（P25，P75）］Table 3 Comparison of late follicle day P and hCG hormone levels between the two groups［（±s），M（P25，P75）］

2.4 兩組IVF-ET 結(jié)局比較

兩組1PN 受精率、2PN 受精率、多PN 受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、妊娠率、生化妊娠率、種植率、早期流產(chǎn)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表4 兩組IVF-ET 結(jié)局比較［（±s），n（%）］Table 4 Comparison of IVF-ET outcomes between the two groups［（±s），n（%）］

表4 兩組IVF-ET 結(jié)局比較［（±s），n（%）］Table 4 Comparison of IVF-ET outcomes between the two groups［（±s），n（%）］

3 討論

ART 技術(shù)的發(fā)展無疑從技術(shù)層面解決了困擾醫(yī)學(xué)界的不孕不育難題，極大推動(dòng)了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及臨床應(yīng)用研究的進(jìn)度，但ART 同樣存在失敗風(fēng)險(xiǎn)，其中染色體多態(tài)性對(duì)IVF-ET 結(jié)局的影響引起臨床重視。本研究接受IVF-ET 的患者中，染色體多態(tài)性檢出率為1.27%（35/2 765），染色體多態(tài)性主要以常染色體次縊痕增加、臂間倒位、D/G 組變異相對(duì)常見。往期研究報(bào)道［8］，染色體多態(tài)性以異染色質(zhì)變異常見，尤其是含高度重復(fù)DNA 序列的結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)，其集中分布在絲粒、端粒、隨體、次縊痕及Y染色體長臂，常見D/G 組，1、9、16 號(hào)染色體，Y 染色長臂。這與本研究所示的檢出部位相符。

另本研究中兩組一般資料及IVF-ET 治療情況、晚期卵泡日P 及hCG 日激素水平差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其中晚卵泡期P 水平是反映卵子質(zhì)量的敏感指標(biāo)［9］。一般情況下hCG 日P 水平上升多是因超促排卵中多個(gè)卵泡同步發(fā)育、不充分的垂體降調(diào)所致，hCG 日過高的P 水平可導(dǎo)致粒細(xì)胞過早黃素化，子宮內(nèi)膜種植窗提前后使胚胎與子宮內(nèi)膜發(fā)育不同步，不利于胚胎植入及著床［10］。而LH 則是腺垂體分泌的糖蛋白激素，在卵巢甾體激素合成、卵子的減數(shù)分裂成熟中扮演重要角色，自月經(jīng)第3 d 基礎(chǔ)狀態(tài)，降調(diào)開始到超排卵啟動(dòng)至扳機(jī)日，血LH 在反映內(nèi)分泌情況、卵巢反應(yīng)及預(yù)測(cè)最終促排結(jié)局均有重要價(jià)值，hCG 日過高或過低的E2水平均可影響子宮內(nèi)膜同步發(fā)育及子宮內(nèi)膜受容性，降低臨床妊娠率及胚胎種植率［11］。這與陳志恒等［12］的報(bào)道結(jié)論相似，均提示對(duì)于接受IVF-ET 的患者，染色體多態(tài)性并未造成顯著的卵子質(zhì)量、子宮內(nèi)膜同步發(fā)育、子宮內(nèi)膜受容性差異。

本研究還顯示兩組1PN 受精率、2PN 受精率、多PN 受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、妊娠率、生化妊娠率、種植率、早期流產(chǎn)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這也在一定程度上證實(shí)了上述觀點(diǎn)，提示染色體多態(tài)性異常未對(duì)IVF-ET 結(jié)局產(chǎn)生顯著性的影響。早期有研究對(duì)1 414 例研究對(duì)象的細(xì)胞遺傳學(xué)結(jié)果進(jìn)行分析，指出染色體多態(tài)性與流產(chǎn)、死胎、不孕不育存在關(guān)聯(lián)，認(rèn)為染色體多態(tài)性可發(fā)揮一定臨床效應(yīng)，引起生殖異常［13-14］。這與本研究結(jié)論相反。但李玉梅等［15］報(bào)道分析4 977 個(gè)周期夫妻雙方染色體，其中存在染色體多態(tài)性的200 例患者正常受精率、卵裂率、優(yōu)胚率雖低于染色體正常組，但兩組種植率、生化妊娠率、臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率、每移植周期活產(chǎn)率比較差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一項(xiàng)meta 分析［16］也指出，染色體多態(tài)性對(duì)卵裂率、植入率、妊娠率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率無影響，這與本研究結(jié)論相似，但其研究指出染色體多態(tài)性可能降低IVF-ET 受精率及優(yōu)胚胎率。

綜上所述：染色體多態(tài)性對(duì)IVF-ET 結(jié)局并無顯著影響，但考慮不同研究結(jié)論的差異，染色體多態(tài)性對(duì)IVF-ET 的影響仍有極大深入探究空間。