• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    補(bǔ)骨脂素治療骨關(guān)節(jié)炎網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

    2023-08-29 13:06:12王蔚陸陳建新梁丁龍馬彥旭
    世界中醫(yī)藥 2023年15期
    關(guān)鍵詞:補(bǔ)骨脂素骨細(xì)胞滑膜

    王蔚陸 陳建新 朱 姜 梁丁龍 馬彥旭

    (1 北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)廈門醫(yī)院,廈門,361009; 3 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)學(xué)院,北京,100010)

    骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種不由衰老引起,多受關(guān)節(jié)軟骨生化改變與生物力學(xué)應(yīng)力影響的退行性關(guān)節(jié)疾病。中醫(yī)有“骨痹、膝痹、膝眼風(fēng)”的相關(guān)記載?!肮潜浴弊钤缭从凇饵S帝內(nèi)經(jīng)·素問(wèn)·長(zhǎng)刺節(jié)論篇》[1],現(xiàn)代中醫(yī)對(duì)其病因病機(jī)有了更全面的認(rèn)識(shí),認(rèn)為素體年邁、骨節(jié)虧虛、筋骨失養(yǎng),外加風(fēng)寒濕邪侵襲,終致氣血不通,脈絡(luò)痹阻[2]。補(bǔ)骨脂又名破故紙、胡韭子[3]。薔薇目,豆科植物成熟果實(shí),出自《雷公炮炙論》。補(bǔ)骨脂素是補(bǔ)骨脂的主要成分,屬于香豆素類化合物,能有效調(diào)控細(xì)胞因子,尤其是白細(xì)胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)通路所介導(dǎo)的滑膜-軟骨交互作用。由于PSO在紫外線燈的照射下可產(chǎn)生光毒反應(yīng),有光致敏史的患者、兒童及孕婦應(yīng)慎用。本文結(jié)合李梢教授提出的藥理學(xué)的研究方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4-5],以受體或靶點(diǎn)為藥物活性的治療關(guān)鍵,探討化合物作用受體機(jī)制及特性表達(dá)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 細(xì)胞 人原代OA滑膜成纖維細(xì)胞(貨號(hào):JY-J884,培養(yǎng)體系:1×原代細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基500 mL,4 ℃避光保存;100×原代細(xì)胞培養(yǎng)添加劑5 mL,-20 ℃避光保存;終濃度10%胎牛血清50 mL,-20 ℃避光保存;100×青霉素-鏈霉素雙抗混合液(Penicillin-streptomycin Solution,P/S)5 mL,-20 ℃避光保存),人原代OA軟骨細(xì)胞(貨號(hào):JY-J905,培養(yǎng)體系:1×原代細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基500 mL,4 ℃避光保存;100×原代細(xì)胞培養(yǎng)添加劑5 mL,-20 ℃避光保存;終濃度10%胎牛血清50 mL,-20 ℃避光保存;100×P/S 5 mL,-20 ℃避光保存),以上細(xì)胞購(gòu)自上海瑾原生物科技有限公司,25 mL培養(yǎng)瓶放置在孵育箱中,細(xì)胞培養(yǎng)基于碳酸氫鹽的緩沖體系,設(shè)置5% CO2氣體環(huán)境,維持pH=7.2,溫度37 ℃。

    1.1.2 藥物 藥物:補(bǔ)骨脂素(成都瑞芬思德丹生物科技有限公司,批號(hào):RFS-B06502005013)。

    1.1.3 試劑與儀器 TransZol Up Plus RNA Kit(TRANS,批號(hào):ER501-01-V2);TransScript? Uni All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(TRANS,批號(hào):AU341-02-V2);實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒(康為世紀(jì),批號(hào):CW0659)。凝膠電泳儀(Tanon,型號(hào):EPS600);凝膠成像儀(Peiqing Science and Technology,型號(hào):JS-2012);熒光定量PCR儀(ROCGENE,型號(hào):Archimed-X4);Transwell小室(北京索萊寶生物科技,批號(hào):Corning 3422)。

    1.2 方法

    1.2.1 模型制備 當(dāng)原代培養(yǎng)細(xì)胞達(dá)到85%以上融合時(shí)進(jìn)行消化傳代,將傳至第3代的滑膜細(xì)胞(1×104個(gè)/mL)和軟骨細(xì)胞(8×104個(gè)/mL),分別種于Transwell小室的上室和下室,制備滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系,共培養(yǎng)4 d。

    1.2.2 分組與干預(yù)方法 將軟骨細(xì)胞-滑膜細(xì)胞體系隨機(jī)分為補(bǔ)骨脂素低濃度組(1 μmol/L)、補(bǔ)骨脂素中濃度組(8 μmol/L)、補(bǔ)骨脂素高濃度組(50 μmol/L)以及空白對(duì)照組(0 μmol/L),共4組,干預(yù)48 h,每組留取Transwell小室下室軟骨細(xì)胞的3個(gè)樣本進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。

    1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 依據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果,選取IL-17、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和核因子κB作為藥物干預(yù)細(xì)胞共培養(yǎng)體系的觀測(cè)對(duì)象,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察不同濃度補(bǔ)骨脂素對(duì)模型細(xì)胞中網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵分子mRNA水平表達(dá)量的影響。

    1.3 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

    1.3.1 補(bǔ)骨脂素靶點(diǎn)獲取 通過(guò)SymMap2.0(http://www.symmap.org/)平臺(tái)檢索化合物靶點(diǎn)[6],中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP,https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php)以及文獻(xiàn)補(bǔ)充化合物靶點(diǎn)信息,利用Uniprot(https://www.uniprot.org/)規(guī)范靶點(diǎn)名稱。

    1.3.2 OA的基因獲取 分別向GeneCards(http://www.genecards.org/)、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM,https://omim.org/)、Drugbank(https://go.drugbank.com/)等數(shù)據(jù)庫(kù)輸入Osteoarthritis,獲得疾病基因,參考《網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)評(píng)價(jià)方法指南》可靠性、規(guī)范性和合理性的定義,以相關(guān)性大小為依據(jù)篩選關(guān)鍵基因[4]。

    1.3.3 補(bǔ)骨脂素治療疾病核心靶點(diǎn)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)、生物富集分析和通路分析 將PSO與OA靶點(diǎn)取交集,得到化合物治療疾病的位點(diǎn)。將關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入String(https://string-db.org/)數(shù)據(jù)庫(kù),獲取蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-protein Interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò),使用Cytoscape繪制模型,節(jié)點(diǎn)表示蛋白,線表示相互關(guān)系。節(jié)點(diǎn)越大,顏色越深越重要。線越粗,顏色越深,聯(lián)系越緊密。

    使用Metascape(http://metascape.org/)平臺(tái),導(dǎo)入16個(gè)靶點(diǎn),設(shè)置種屬為人類,進(jìn)行基因本體(Gene Ontology,GO)富集分析,包含生物過(guò)程(Biological Process,BP)、細(xì)胞組分(Cell Component,CC)及分子功能(Molecular Function,MF),根據(jù)富集系數(shù)(Enrichment)大小進(jìn)行排序,保留排名靠前的結(jié)果;使用Cytoscape插件ClueGO進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,Kappa系數(shù)選中等,繪制yFiles Tree Layout圖。

    1.3.4 病癥結(jié)合研究補(bǔ)骨脂素治療作用 首先下載補(bǔ)骨脂素化合物(Ingredients)相關(guān)的草藥(Herb)、疾病(Disease)、中醫(yī)證候(Traditional Chinese Medicine Syndrome,TCM Syndrome)、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)癥狀(Modern Medicine Symptom,MM Symptom)和綜合征(Syndrome)板塊;其中Disease內(nèi)容較多,使用“炎、痛、骨、關(guān)節(jié)、脊、椎”為關(guān)鍵詞篩選OA相關(guān)疾病。

    然后下載OA疾病相關(guān)的TCM Syndrome、MM Symptom和Syndrome板塊。

    最后將PSO和OA二者對(duì)應(yīng)的TCM Syndrome、MM Symptom和Syndrome板塊條目取交集,建構(gòu)PSO和OA之間的聯(lián)系。確定核心Syndrome和TCM Syndrome后,下載其對(duì)應(yīng)的草藥Herb,用Cytoscape軟件繪制化合物-草藥-癥狀體征圖(Ingredients-herb-syndrome/TCM Syndrome)。黃色圓形節(jié)點(diǎn)表示PSO,粉色菱形節(jié)點(diǎn)表示OA患者的Syndrome,橘黃菱形節(jié)點(diǎn)表示OA患者TCM Syndrome,中草藥用藍(lán)方形節(jié)點(diǎn)表示,其中深藍(lán)方形節(jié)點(diǎn)代表核心中藥。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism5.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),采用單因素方差分析進(jìn)行組間差異比較,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 補(bǔ)骨脂素治療OA的靶點(diǎn)選取 藥物方面,涉及26個(gè)PSO靶點(diǎn),結(jié)合TCMSP及文獻(xiàn)報(bào)道補(bǔ)充靶點(diǎn),共計(jì)27個(gè)。疾病方面,獲得靶點(diǎn)741個(gè),最后將27個(gè)PSO靶點(diǎn)與741個(gè)OA靶點(diǎn)取交集,得到16個(gè)PSO精準(zhǔn)治療OA的靶點(diǎn)。

    2.2 共有靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)建構(gòu) PSO治療OA靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)共涉及15個(gè)節(jié)點(diǎn),46條邊,獨(dú)立節(jié)點(diǎn)EFEMP1未納入網(wǎng)絡(luò),剩余15個(gè)節(jié)點(diǎn)按節(jié)點(diǎn)間聯(lián)系次數(shù)由高到低排序,依次為TNF、FOS、ESR1、MMP9、TGFB1和NFKB1,其中TNF和NFKB1與炎癥相關(guān),且關(guān)系緊密。見圖1。

    圖1 補(bǔ)骨脂素治療骨關(guān)節(jié)炎PPI網(wǎng)絡(luò)

    2.3 共有靶點(diǎn)生物富集與通路分析 PSO治療OA靶點(diǎn)生物過(guò)程顯示細(xì)胞生物過(guò)程于骨和軟骨的分化發(fā)育(Osteoblast Differentiation and Development)有關(guān),細(xì)胞成分主要作用于介導(dǎo)免疫炎癥發(fā)生發(fā)展的髓系白細(xì)胞(Myeloid Leukocyte),通過(guò)調(diào)控類固醇激素合成(Steroid Biosynthetic)的分子功能發(fā)揮抗炎作用。見圖2。Cytoscape插件ClueGO富集出6個(gè)通路,主要包括破骨細(xì)胞分化通路(軟骨下骨組織的異常改變),IL-17通路,TNF信號(hào)通路以及催乳素通路。見圖3。

    圖2 補(bǔ)骨脂素治療OA靶點(diǎn)生物過(guò)程、細(xì)胞成分與分子功能結(jié)果圖

    圖3 補(bǔ)骨脂素治療OA靶點(diǎn)的通路富集分析

    2.4 病癥結(jié)合分析 SymMap共有21種含PSO的藥物。見表1。14條PSO相關(guān)的骨傷科疾病。見表2。PSO對(duì)應(yīng)101條TCM symptom,20條MM symptom,常見詞匯Sputum和Pain,7條syndrome。OA(按部位分為髖、膝、脊柱)對(duì)應(yīng)174條TCM symptom,18條MM symptom,常見詞匯Pain,46條syndrome。二者取交集后得到6條TCM Syndrome和1條syndrome。見表3。

    表1 常見含有補(bǔ)骨脂素化合物的中草藥

    表2 補(bǔ)骨脂素有關(guān)的骨傷科疾病

    表3 補(bǔ)骨脂素對(duì)癥治療綜合征和中醫(yī)證候

    化合物-草藥-癥狀體征圖包含71個(gè)節(jié)點(diǎn),78條邊。結(jié)果顯示“風(fēng)”“寒”挾“濕”雜合而為痹(骨關(guān)節(jié)炎),其中核心藥物有骨碎補(bǔ)、蛇床子、獨(dú)活和補(bǔ)骨脂。見圖4。

    圖4 補(bǔ)骨脂素治療OA化合物-草藥-癥狀體征圖

    2.5 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與空白對(duì)照組比較,補(bǔ)骨脂素低濃度組IL-17和核因子κB的擴(kuò)增倍數(shù)有所升高(均P<0.01);補(bǔ)骨脂素中濃度組IL-17和TNF-α有所下降(均P<0.01);補(bǔ)骨脂素高濃度組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖5。

    圖5 補(bǔ)骨脂素干預(yù)共培養(yǎng)體系mRNA擴(kuò)增倍數(shù)(n=3)

    3 討論

    3.1 病癥與中草藥化合物 補(bǔ)骨脂素又叫補(bǔ)骨脂內(nèi)酯、制斑素,屬呋喃香豆素類,近年研究顯示其在骨傷科疾病方面有潛在應(yīng)用價(jià)值。病癥結(jié)合領(lǐng)域,中醫(yī)認(rèn)為補(bǔ)骨脂素主治的OA屬于風(fēng)寒挾濕的痹癥。首先,針對(duì)疼痛走注不定為特征的行痹,中醫(yī)認(rèn)為與“風(fēng)”有關(guān)。風(fēng)為百病之長(zhǎng),寒濕等常依附風(fēng)侵犯人體,其中以風(fēng)寒、風(fēng)濕最為常見。內(nèi)因?yàn)樾l(wèi)陽(yáng)不固,腠理空虛。而以肢體骨節(jié)疼痛酸困、痛處不移的著痹,中醫(yī)多認(rèn)為與“濕”有關(guān)。外濕內(nèi)濕,同氣相求,常相互引動(dòng),病位主要在肢體、經(jīng)絡(luò)、關(guān)節(jié)。病久不愈,內(nèi)侵筋骨血脈,復(fù)感于邪,累及心腎。針對(duì)疼痛較甚,痛有定處,筋骨攣痛的寒痹,中醫(yī)認(rèn)為寒則凝塞,不通則痛,主張溫經(jīng)散寒,由于風(fēng)寒濕痹與炎癥疼痛密切相關(guān),現(xiàn)代理論研究提出了津液不歸正化,痰濕內(nèi)蘊(yùn)的學(xué)說(shuō),借助西醫(yī)免疫炎癥的具體機(jī)制,闡述中醫(yī)痰濕致病的理論,使“無(wú)形之痰”更為直觀,中醫(yī)治法強(qiáng)調(diào)溫化以去除水濕痰飲。證候?qū)W研究更是印證了二者的緊密聯(lián)系,理法方藥環(huán)環(huán)相扣,渾然天成。另外中醫(yī)藥有著鮮明的辨證論治色彩,東西方文化在證候改觀和病因祛除的認(rèn)知上存在差異,從祛除致病因素的角度,做好鑒別診斷至關(guān)重要,而從緩解癥狀角度出發(fā),不同疾病有時(shí)可以存在相似的表征,所以中醫(yī)又有異病同治的原則[7]。

    3.2 疾病與基因 本節(jié)我們重點(diǎn)介紹上游的IL-17通路相關(guān)基因。

    首先,IL-17屬于一種重要的炎癥介質(zhì)[8],參與多種炎癥反應(yīng)及自身免疫性疾病的病理過(guò)程,下游介導(dǎo)核因子κB等通路,與炎癥關(guān)系明確。其次,IL-17可誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、軟骨和骨細(xì)胞分泌TNF-α等因子,TNF可能與受體結(jié)合,由巨噬細(xì)胞分泌,通過(guò)去磷酸化損害關(guān)節(jié)炎患者的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T Cells,Treg Cells)能力。上述因子導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎的驟然發(fā)作,通過(guò)IL-17維持Th17細(xì)胞(Helper T Cell 17,Th17 Cell)的數(shù)量,形成正反饋,維持慢性炎癥狀態(tài),刺激多種趨化因子(Chemokines)產(chǎn)生,其中包括CXCL家族和CC家族,CXCL 1、CXCL2、CXCL8和CCL20、CCL2與CCL7。

    以上因子將淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞與粒細(xì)胞招募到滑膜加重其炎癥,骨與軟骨大量損傷會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)難逆性變形,IL-17通過(guò)誘導(dǎo)可降解胞外基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)參與此過(guò)程。破骨細(xì)胞通過(guò)碳酸酐酶酸化,幫助骨基質(zhì)溶解成為水、鈣離子和其他物質(zhì)。質(zhì)子泵以高濃度梯度泵送氫離子,特化的液泡ATP酶能夠釋放多種水解酶,比如MMP和組織蛋白酶,以消解基質(zhì),尤其是軟骨下骨基質(zhì)的有機(jī)成分。其中MMP9由破骨細(xì)胞表達(dá),與骨微環(huán)境有關(guān),是破骨細(xì)胞遷移所必需的一種強(qiáng)大明膠酶。破骨細(xì)胞分化受到其護(hù)骨因子(Osteoprotegerin,OPG)抑制,它由成骨細(xì)胞產(chǎn)生并與核因子κB受體活化因子配體(Receptor Activator for NF-κB Ligand,RANKL)結(jié)合,阻止與RANK的作用。基于以上機(jī)制,IL-17既可增強(qiáng)炎癥,又能刺激破骨細(xì)胞分化導(dǎo)致骨與軟骨的異常改變,如破骨細(xì)胞數(shù)量減少、骨硬化及其吸收減少[30]。

    此外IL-17與TNF-α等協(xié)同放大其炎癥效應(yīng),其中與TNF-α配合形成正反饋環(huán)路,加重局部反應(yīng),關(guān)節(jié)炎患者血清和關(guān)節(jié)液中IL-17顯著升高,IL-17是炎癥反應(yīng)和免疫偏移的重要調(diào)節(jié)因子,可促進(jìn)TNF-α等炎癥介質(zhì)的分泌,破壞軟骨穩(wěn)態(tài),促進(jìn)滑膜浸潤(rùn),與關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度成正比[10]。IL-17不僅反映全身炎癥狀態(tài),同時(shí)調(diào)控關(guān)節(jié)內(nèi)局部炎性微環(huán)境。二者間的交互傳遞極有可能刺激下游靶向核因子κB通路,而作為促分裂原活化的蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase,MAPKs)信號(hào)級(jí)聯(lián),其過(guò)度激活可加劇關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)及功能障礙與軟骨下骨重塑異常[12]。最后IL-17可通過(guò)環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)誘導(dǎo)前列腺素?cái)U(kuò)血管作用,促進(jìn)炎癥細(xì)胞進(jìn)入病變部位,吞噬免疫復(fù)合物,釋放溶酶體,包括膠原酶和中性蛋白酶,破壞膠原彈力纖維,使滑膜表面及關(guān)節(jié)軟骨損傷[9]。IL-17還可以誘導(dǎo)RANKL表達(dá),促使破骨細(xì)胞分化,RANKL是TNF家族成員,基因敲除小鼠可表現(xiàn)出骨硬化以及破骨細(xì)胞缺失的表型,RANKL通過(guò)RANK激活核因子κB,近年開發(fā)的RANKL抑制劑(地舒單抗)在預(yù)防骨質(zhì)疏松,抑制關(guān)節(jié)炎性病變上也顯示出了良好前景[11]。

    另外部分基因從不同角度干預(yù)病程,乙酰膽堿酯酶(Acetylcholine Esterase,ACE)通過(guò)快速水解釋放到突觸間隙中的乙酰膽堿終止神經(jīng)肌肉接頭處的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),從而調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)[13]。單胺氧化酶A(Monoamine Oxidase A,MAOA)優(yōu)先氧化生物胺,其代謝(合成、儲(chǔ)存、釋放和滅活)異常是導(dǎo)致疼痛的主要原因。超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)可使組織免受活性氧中間體毒害,OA中氧化應(yīng)激可致滑膜炎癥和局部關(guān)節(jié)內(nèi)病變[14]。

    最后我們嘗試解釋男女性別分布差異原因,高雌激素水平所致疾病的女性,及肥胖、藥物等因素所致男性雌化的患者,OA臨床癥狀更嚴(yán)重。通過(guò)對(duì)OA患者臨床特點(diǎn)及中醫(yī)證型分布流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),無(wú)論何種中醫(yī)證型,一般女性多于男性,提示雌激素在OA病理進(jìn)程中發(fā)揮作用[15-16,29]。不同性別患者在疼痛、滑膜炎癥、骨贅形成、軟骨退變以及軟骨下骨硬化方面存在差異。澳大利亞一項(xiàng)研究顯示女性患者軟骨損失率更高,差異在40歲時(shí)顯現(xiàn),并隨年齡增長(zhǎng)越發(fā)明顯[17]。動(dòng)物研究表明雌性大鼠比雄性滑膜炎癥、軟骨破壞和軟骨下骨質(zhì)退化表現(xiàn)更嚴(yán)重,對(duì)刺激更敏感,滑膜周圍巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)更廣泛,這是女性疼痛程度更高的原因[18-19]。與男性O(shè)A軟骨細(xì)胞相比,女性O(shè)A細(xì)胞雌激素受體表達(dá)較高,相關(guān)白細(xì)胞介素mRNA水平更高[20]。研究顯示PSO與雌激素受體結(jié)合,具有植物類雌激素樣作用,發(fā)揮抗炎作用,該效應(yīng)可被雌激素受體抑制劑逆轉(zhuǎn)[21-22]。但是考慮疾病在性別分布上的差異,參考類固醇激素代謝及負(fù)反饋調(diào)節(jié),我們提出了PSO可能存在類雌激素樣的作用,而非雌激素本身的假設(shè),同時(shí)我們猜想PSO的類雌激素樣作用,與雌激素本身存在明顯不同,它可與雌激素競(jìng)爭(zhēng)受體,同時(shí)加速了雌激素向糖皮質(zhì)激素方向轉(zhuǎn)化,發(fā)揮抗炎作用。實(shí)驗(yàn)研究也顯示中等濃度補(bǔ)骨脂素的確有效降低OA患者軟骨-滑膜細(xì)胞共培養(yǎng)體系IL-17和TNF-α的水平。

    3.3 疾病與通路 骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的綜合作用在維持OA患者軟骨下骨量方面發(fā)揮重要作用。從骨軟骨交界處形成“骨-軟骨-鈣化軟骨”的三明治結(jié)構(gòu)可以發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)硬化、纖維化與疏松并存,提示骨代謝異常,雙向軟骨病理性鈣化始于軟骨表面纖維化區(qū)域,有研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素可以增加骨密度,用于治療骨質(zhì)疏松和OA軟骨下骨組織流失,同時(shí)抑制軟骨病理性鈣化,以維持正常骨組織生理結(jié)構(gòu),體現(xiàn)了藥物干預(yù)后機(jī)體的自我調(diào)節(jié)能力增強(qiáng)。通路富集還顯示催乳素途徑和利什曼病較顯著,二者分別對(duì)應(yīng)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和原蟲性關(guān)節(jié)炎;脾腎陽(yáng)虛的潰瘍性結(jié)腸炎患者,常出現(xiàn)五更泄瀉,四神丸是治療本病的經(jīng)典方劑,但是與OA關(guān)系不緊密,并非研究重點(diǎn)。本節(jié)著重將其和IL-17炎癥通路關(guān)聯(lián)進(jìn)行分析。

    再吸收的骨表面可發(fā)現(xiàn)破骨細(xì)胞,它是一種大的多核細(xì)胞,可有幾十個(gè)細(xì)胞核,特點(diǎn)為粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)稀疏,高爾基體廣泛,主要表達(dá)破骨細(xì)胞蛋白[23]。骨骼中的破骨細(xì)胞位于骨表面凹坑的豪息潑氏陷窩(Howship Lacuna)。破骨細(xì)胞胞質(zhì)具有均勻泡沫樣外觀,這利于液泡填充酸性磷酸酶溶酶體。骨吸收活躍部位,破骨細(xì)胞形成廣泛折疊或起皺的專有邊界,通過(guò)增加細(xì)胞膜表面積來(lái)分泌和吸收區(qū)室內(nèi)容物,促進(jìn)骨的去除。另外分泌酸和膠原酶,在分子水平上消解吸收水合蛋白與礦物質(zhì),破骨細(xì)胞影響骨基質(zhì)再吸收、無(wú)機(jī)成分溶解及骨基質(zhì)有機(jī)成分消化,能夠?qū)潆x子泵入亞破骨細(xì)胞室制造酸性微環(huán)境,增加礦物質(zhì)溶解度,致使礦物質(zhì)釋放入破骨細(xì)胞胞質(zhì),最終轉(zhuǎn)運(yùn)至鄰近毛細(xì)血管。礦物質(zhì)去除后,膠原酶和明膠酶被分泌到亞破骨細(xì)胞隔室中,消化、降解、脫鈣基質(zhì)膠原蛋白與有機(jī)成分,其產(chǎn)物在褶皺邊緣被破骨細(xì)胞吞噬。具有吞噬特性可以認(rèn)定其屬于單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的一部分,激素與細(xì)胞因子可調(diào)控其活性。

    IL-17屬于前炎癥介質(zhì),調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和免疫偏倚,含6個(gè)家族成員與5種受體[24]。IL-17來(lái)源于活化的肥大細(xì)胞和Th17細(xì)胞,通過(guò)血管浸潤(rùn)關(guān)節(jié)滑膜。軟骨細(xì)胞及成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞表面均存在IL-17受體[25]。研究表明OA進(jìn)程中T細(xì)胞直接對(duì)軟骨和成纖維細(xì)胞膜抗原產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)。關(guān)節(jié)炎患者的血清和滑液中IL-17水平較對(duì)照組顯著升高,其能夠抑制軟骨細(xì)胞合成蛋白多糖,促進(jìn)MMPs產(chǎn)生,與影像學(xué)呈現(xiàn)正相關(guān),不僅如此,部分人群中基因IL-17多態(tài)性與關(guān)節(jié)炎發(fā)展的易感性相關(guān)[26-27]。作為前體,IL-17可通過(guò)核因子κB通路引發(fā)炎癥反應(yīng),IL-17通過(guò)與細(xì)胞表面的IL-17受體特異性結(jié)合,激活激酶引起磷酸化[28]。與空白對(duì)照組比較,中等濃度補(bǔ)骨脂素可以使OA患者軟骨-滑膜細(xì)胞共培養(yǎng)體系中的IL-17、TNF-α顯著下降,對(duì)于抑制OA癥進(jìn)展具有重要意義,另外核因子κB無(wú)顯著變化,仍需擴(kuò)大樣本做進(jìn)一步驗(yàn)證。

    總之,上述細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析符合中等劑量補(bǔ)骨脂素治療OA的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果,為進(jìn)一步研究提供了有力依據(jù)。

    利益沖突聲明:本研究不涉及利益沖突。

    猜你喜歡
    補(bǔ)骨脂素骨細(xì)胞滑膜
    機(jī)械應(yīng)力下骨細(xì)胞行為變化的研究進(jìn)展
    基于滑膜控制的船舶永磁同步推進(jìn)電機(jī)直接轉(zhuǎn)矩控制研究
    調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞功能的相關(guān)信號(hào)分子的研究進(jìn)展
    高層建筑施工中的滑膜施工技術(shù)要點(diǎn)探討
    骨細(xì)胞在正畸牙移動(dòng)骨重塑中作用的研究進(jìn)展
    滑膜肉瘤的研究進(jìn)展
    HPLC法測(cè)定補(bǔ)腎益腦片中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量
    原發(fā)性肺滑膜肉瘤診斷與治療——附一例報(bào)告及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)
    HPLC法測(cè)定補(bǔ)骨脂藥材中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素
    中成藥(2012年8期)2012-09-06 14:28:58
    HPLC 法測(cè)定骨質(zhì)增生散中補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的含量
    亚洲精品久久午夜乱码| 男女国产视频网站| 亚洲,欧美精品.| 日韩欧美精品免费久久| 中文字幕色久视频| 午夜日本视频在线| 国产xxxxx性猛交| 国产精品免费视频内射| 丰满乱子伦码专区| 欧美日韩视频精品一区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 黄色 视频免费看| 99久久99久久久精品蜜桃| 少妇人妻 视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 青春草视频在线免费观看| 亚洲熟女毛片儿| 天堂8中文在线网| 精品国产一区二区久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 色婷婷久久久亚洲欧美| 青春草亚洲视频在线观看| av.在线天堂| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产成人免费无遮挡视频| 中国三级夫妇交换| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 91精品三级在线观看| videos熟女内射| 一二三四在线观看免费中文在| 精品一区二区三区av网在线观看 | 黄网站色视频无遮挡免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 99热网站在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 日韩电影二区| 高清不卡的av网站| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产免费福利视频在线观看| 宅男免费午夜| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 成年人午夜在线观看视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲美女视频黄频| 久久久亚洲精品成人影院| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲免费av在线视频| 亚洲精品视频女| 亚洲成色77777| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 我要看黄色一级片免费的| 国产免费福利视频在线观看| 18禁国产床啪视频网站| h视频一区二区三区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久韩国三级中文字幕| 一级片'在线观看视频| 欧美日韩视频精品一区| 制服丝袜香蕉在线| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 激情视频va一区二区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 成人漫画全彩无遮挡| 日日撸夜夜添| 久久性视频一级片| 制服丝袜香蕉在线| 黄色视频不卡| 午夜福利乱码中文字幕| 国产深夜福利视频在线观看| 韩国av在线不卡| 美国免费a级毛片| 黄片播放在线免费| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 午夜福利,免费看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 婷婷成人精品国产| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 九色亚洲精品在线播放| 精品国产国语对白av| 国产精品女同一区二区软件| 在线观看三级黄色| 男人操女人黄网站| 欧美精品一区二区大全| 国产精品一区二区在线观看99| kizo精华| 国产色婷婷99| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 丝袜美足系列| 黄色怎么调成土黄色| 美女扒开内裤让男人捅视频| 99热网站在线观看| 观看av在线不卡| 国产极品天堂在线| 精品免费久久久久久久清纯 | 亚洲精品av麻豆狂野| 中文字幕最新亚洲高清| av又黄又爽大尺度在线免费看| 日韩精品有码人妻一区| 超色免费av| 男女之事视频高清在线观看 | 韩国高清视频一区二区三区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产亚洲最大av| 中文字幕色久视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品一国产av| 久久免费观看电影| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品一区二区在线观看99| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 各种免费的搞黄视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 高清黄色对白视频在线免费看| 黑丝袜美女国产一区| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品国产av在线观看| 国产又爽黄色视频| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久久精品性色| 一本久久精品| 午夜福利视频精品| 天美传媒精品一区二区| 成人影院久久| 免费av中文字幕在线| 精品久久蜜臀av无| 操美女的视频在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 午夜日本视频在线| a级毛片在线看网站| 久久99一区二区三区| 人妻 亚洲 视频| 国产成人系列免费观看| 丁香六月天网| 精品人妻一区二区三区麻豆| 自线自在国产av| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久精品久久久久久久性| 妹子高潮喷水视频| 91成人精品电影| 高清在线视频一区二区三区| 午夜精品国产一区二区电影| 国产亚洲av高清不卡| 午夜激情av网站| 欧美日韩av久久| 国产 精品1| 狂野欧美激情性bbbbbb| 欧美日韩av久久| 欧美日韩av久久| 欧美日韩精品网址| 曰老女人黄片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 9热在线视频观看99| 日本欧美国产在线视频| 日本欧美国产在线视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 超碰成人久久| 我要看黄色一级片免费的| 高清欧美精品videossex| 99久久综合免费| 午夜日韩欧美国产| 日韩欧美精品免费久久| 美国免费a级毛片| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲四区av| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美日韩av久久| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产日韩欧美视频二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 热re99久久精品国产66热6| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 老司机靠b影院| 成年av动漫网址| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 丝袜喷水一区| 精品视频人人做人人爽| 亚洲男人天堂网一区| 深夜精品福利| 啦啦啦 在线观看视频| 久久久久久久久久久免费av| 黑丝袜美女国产一区| 男女之事视频高清在线观看 | 在线观看人妻少妇| 在线观看一区二区三区激情| 天天影视国产精品| 成年动漫av网址| 宅男免费午夜| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| videosex国产| 在线天堂最新版资源| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 日本av免费视频播放| 人人妻人人澡人人看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲国产最新在线播放| av不卡在线播放| 国产黄色视频一区二区在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲精品一区蜜桃| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产不卡av网站在线观看| 看免费成人av毛片| 国产精品av久久久久免费| 人成视频在线观看免费观看| 国产极品天堂在线| 免费在线观看黄色视频的| 国产成人欧美在线观看 | 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美在线黄色| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人精品在线电影| 亚洲七黄色美女视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产精品久久久久成人av| 国产精品免费视频内射| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产野战对白在线观看| av视频免费观看在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 成人亚洲精品一区在线观看| 免费观看av网站的网址| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美激情高清一区二区三区 | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品免费大片| 亚洲精品国产区一区二| 丝袜美腿诱惑在线| 激情五月婷婷亚洲| 嫩草影视91久久| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产精品三级大全| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲 欧美一区二区三区| 婷婷色综合www| 久久精品久久久久久久性| 涩涩av久久男人的天堂| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲成色77777| a级毛片在线看网站| 日韩精品有码人妻一区| 国产男女内射视频| 久久 成人 亚洲| 丝袜脚勾引网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 一级爰片在线观看| 人妻一区二区av| 在线天堂最新版资源| 国产精品无大码| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 成年动漫av网址| 国产一区二区激情短视频 | 在现免费观看毛片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲,欧美,日韩| 国产午夜精品一二区理论片| 男女床上黄色一级片免费看| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产日韩一区二区| 精品福利永久在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜激情久久久久久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久精品国产a三级三级三级| 蜜桃在线观看..| 人体艺术视频欧美日本| 一区二区三区精品91| 中文字幕色久视频| 国产高清国产精品国产三级| 午夜91福利影院| 免费看av在线观看网站| 欧美97在线视频| 国产在线免费精品| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲av男天堂| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品嫩草影院av在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产有黄有色有爽视频| 成人黄色视频免费在线看| 美女扒开内裤让男人捅视频| netflix在线观看网站| 性色av一级| 欧美黑人精品巨大| 人体艺术视频欧美日本| av免费观看日本| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲国产最新在线播放| 丝袜在线中文字幕| 久久毛片免费看一区二区三区| 免费观看人在逋| 视频区图区小说| xxx大片免费视频| 在线观看免费高清a一片| 亚洲三区欧美一区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 90打野战视频偷拍视频| 黄片无遮挡物在线观看| 午夜久久久在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲国产精品999| 美女大奶头黄色视频| 桃花免费在线播放| 久久97久久精品| 久久精品久久久久久久性| 午夜福利乱码中文字幕| 男女之事视频高清在线观看 | 国产一区二区激情短视频 | 国产精品国产三级国产专区5o| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美日韩综合久久久久久| av福利片在线| 青青草视频在线视频观看| 一级a爱视频在线免费观看| 免费黄频网站在线观看国产| 国产一区二区三区综合在线观看| 18在线观看网站| 免费av中文字幕在线| 免费日韩欧美在线观看| 日日啪夜夜爽| 成人亚洲精品一区在线观看| av福利片在线| xxxhd国产人妻xxx| 啦啦啦啦在线视频资源| 考比视频在线观看| 中文天堂在线官网| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产在视频线精品| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产精品.久久久| 一区在线观看完整版| 婷婷色综合大香蕉| 午夜免费鲁丝| 超碰97精品在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看 | 制服丝袜香蕉在线| 久久久久视频综合| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美xxⅹ黑人| 最近最新中文字幕免费大全7| 美女福利国产在线| 18禁动态无遮挡网站| 捣出白浆h1v1| 一区在线观看完整版| 我的亚洲天堂| 99热全是精品| 宅男免费午夜| 一区二区三区精品91| 精品第一国产精品| 久久人人爽人人片av| 国产又色又爽无遮挡免| 午夜日本视频在线| 搡老乐熟女国产| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 熟女av电影| 制服诱惑二区| av在线播放精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 岛国毛片在线播放| 看非洲黑人一级黄片| 久久韩国三级中文字幕| 99久久人妻综合| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲国产欧美网| 97在线人人人人妻| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 美女福利国产在线| 伊人久久国产一区二区| 久久国产精品大桥未久av| 日日撸夜夜添| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 成年动漫av网址| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 欧美精品av麻豆av| 久久久久久免费高清国产稀缺| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩精品有码人妻一区| 9191精品国产免费久久| av在线app专区| 男女之事视频高清在线观看 | 免费观看av网站的网址| 亚洲综合色网址| 久热爱精品视频在线9| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产99久久九九免费精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 精品国产露脸久久av麻豆| xxx大片免费视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲男人天堂网一区| 免费在线观看黄色视频的| 高清不卡的av网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产福利在线免费观看视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 免费看av在线观看网站| 女人久久www免费人成看片| 国产成人免费观看mmmm| a级毛片黄视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久精品国产综合久久久| 精品国产一区二区三区四区第35| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产99久久九九免费精品| av在线app专区| 国产精品 国内视频| 国产精品女同一区二区软件| 久久人人97超碰香蕉20202| 成年美女黄网站色视频大全免费| 夫妻午夜视频| 国产成人欧美| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲国产欧美在线一区| 少妇 在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 性少妇av在线| 久久久久精品性色| 国产精品二区激情视频| 性少妇av在线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产在线免费精品| 成人影院久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品 欧美亚洲| 如何舔出高潮| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| √禁漫天堂资源中文www| 国产成人欧美| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲国产精品国产精品| a级毛片在线看网站| 久久 成人 亚洲| 亚洲国产看品久久| 国产 一区精品| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品人妻在线不人妻| 中文字幕人妻熟女乱码| 老司机影院成人| 亚洲在久久综合| 日韩大片免费观看网站| 国产乱来视频区| 天天添夜夜摸| 国产亚洲最大av| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 久久狼人影院| av.在线天堂| 亚洲精品乱久久久久久| 青春草国产在线视频| 亚洲成人av在线免费| 国产一区亚洲一区在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 桃花免费在线播放| 晚上一个人看的免费电影| av在线观看视频网站免费| 少妇人妻精品综合一区二区| 色94色欧美一区二区| 多毛熟女@视频| 老熟女久久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 精品国产国语对白av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 免费不卡黄色视频| 亚洲欧美激情在线| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲国产精品一区三区| 一个人免费看片子| 哪个播放器可以免费观看大片| 五月天丁香电影| www.av在线官网国产| 2018国产大陆天天弄谢| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 男男h啪啪无遮挡| 免费看不卡的av| 国产亚洲最大av| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 久久狼人影院| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产亚洲av高清不卡| 欧美日韩综合久久久久久| 黄片播放在线免费| avwww免费| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 免费av中文字幕在线| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产 一区精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av电影在线进入| 人人澡人人妻人| 午夜免费观看性视频| 操美女的视频在线观看| 黄色 视频免费看| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 五月开心婷婷网| 两个人看的免费小视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 成人黄色视频免费在线看| 97人妻天天添夜夜摸| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日本爱情动作片www.在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 免费人妻精品一区二区三区视频| www日本在线高清视频| 午夜福利免费观看在线| 9色porny在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 国产成人欧美在线观看 | e午夜精品久久久久久久| 国产精品蜜桃在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产片特级美女逼逼视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产毛片在线视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 一级爰片在线观看| 操美女的视频在线观看| 成年av动漫网址| 男人操女人黄网站| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩人妻精品一区2区三区| 老司机亚洲免费影院| 国产高清不卡午夜福利| 91精品国产国语对白视频| 日本黄色日本黄色录像| 9色porny在线观看| 久久久欧美国产精品| 日韩av免费高清视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲伊人久久精品综合| 韩国精品一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久小说| 美女视频免费永久观看网站| 一区二区三区精品91| 一边摸一边做爽爽视频免费| 男的添女的下面高潮视频| 免费日韩欧美在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲精品国产av成人精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲成人手机| 亚洲成色77777| 大片免费播放器 马上看| 女人久久www免费人成看片| 一区二区三区四区激情视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美黄色片欧美黄色片| 中国国产av一级| 亚洲,欧美精品.| 欧美精品av麻豆av| 蜜桃在线观看..| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | av国产精品久久久久影院| 国产探花极品一区二区| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲精品美女久久av网站| 看免费av毛片| 国产一区二区激情短视频 | 久久久久精品人妻al黑| 久久99热这里只频精品6学生| 十八禁网站网址无遮挡| 国产99久久九九免费精品| 国产一区二区三区综合在线观看| 免费观看性生交大片5| 欧美激情极品国产一区二区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 啦啦啦 在线观看视频| 在线观看免费高清a一片| 色94色欧美一区二区| netflix在线观看网站| 大陆偷拍与自拍| 老司机深夜福利视频在线观看 | 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 男人爽女人下面视频在线观看| 交换朋友夫妻互换小说|