地衣芽孢桿菌B38 對產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌性能研究

■ 楊夢瀚 苗華彪，2 宋婧楠 趙香帥 陳紫嫻 吳 倩，2 黃遵錫，2*

（1.云南師范大學生命科學學院，云南昆明 650500；2.生物能源持續(xù)開發(fā)利用教育部工程研究中心，云南昆明 650500）

產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringers，CP）是一種革蘭氏陽性厭氧菌，在自然界中廣泛存在，包括土壤、水源、糞便以及健康的人和動物的胃腸道，但同時也是人和動物腸道中的主要致病菌之一[1]。已知CP可以產(chǎn)生約20種毒素，根據(jù)其產(chǎn)生的4種主要毒素α毒素（CPA）、β毒素（CPB）、ε毒素（ETX）和T 毒素（ITX）可以將CP 分為A～E 五種類型[2]。當宿主自身抵抗力下降或是外界環(huán)境條件惡劣，都會使CP大量增殖，產(chǎn)生大量毒素，對宿主造成嚴重危害，甚至死亡[3-4]。CP也是目前已知繁殖速度最快的微生物之一，在液體硫乙醇酸鹽（FTG）培養(yǎng)基中43 ℃條件下培養(yǎng)，增殖一代僅需8～12 min[5]，這種快速增殖的特性導(dǎo)致畜禽從感染到死亡的過程非常迅速且難以發(fā)現(xiàn)。近幾年來，由CP 導(dǎo)致的疾病嚴重危害著全球畜禽業(yè)的發(fā)展，造成了嚴重的經(jīng)濟損失[6]。隨著歐盟以及我國禁止在飼料中添加抗生素，CP 導(dǎo)致的畜禽疾病已呈上升趨勢，因此尋找抗生素替代品，預(yù)防CP 導(dǎo)致的危害，已迫在眉睫。

益生菌是動物腸道中的有益菌，可以通過幫助動物腸道進行消化、增強免疫系統(tǒng)功能以及促進腸道菌群的平衡來維持腸道的健康[7]。同時，益生菌的特點是安全、無污染、不會產(chǎn)生抗藥性，已成為抗生素的理想替代品。地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis，BL）作為一種通過GRAS（Generally Recognized as Safe）認證的細菌，因其安全性和優(yōu)良的耐受性受到廣泛關(guān)注，且已有多種試驗研究表明，在飼料和飲水中添加BL 可以顯著提高肉雞的生長性能，并能夠降低肉雞感染CP 導(dǎo)致的死亡率[8-10]。BL 可以產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)[11-14]，對多種食源性以及腐敗細菌有抑菌活性。雖然CP 的體外抑制作用研究已有不少，但是有關(guān)BL代謝產(chǎn)物對CP 體外抑制的研究卻較少。生物能源持續(xù)開發(fā)利用教育部工程研究中心通過對48 株芽孢桿菌的篩選，得到了一株對CP 具有優(yōu)良抗菌性質(zhì)的芽孢桿菌，該芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌，其代謝產(chǎn)物具有優(yōu)良耐受性質(zhì)，為新型替抗產(chǎn)品的開發(fā)研究提供了基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料和儀器

1.1.1 菌株

CP：分離自脹氣死亡的懷孕母豬胃部。

益生菌：48 株芽孢桿菌，編號B1～B48，均為本實驗室前期保存，不同芽孢桿菌的種類如下所示：

枯草芽孢桿菌B1、B2、B3、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B14、B15、B16、B17、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B26、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、B35。

地衣芽孢桿菌B25、B27、B36、B37、B38、B39、B40、B41、B42、B43。

納豆芽孢桿菌B44、B45、B46、B47、B48。

解淀粉芽孢桿菌B4、B13、B18。

指示菌：見表1所示。

表1 不同指示菌的來源及其培養(yǎng)條件

1.1.2 培養(yǎng)基

LB 液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母膏5 g，氯化鈉10 g，雙蒸水1 000 mL，121 ℃高壓滅菌30 min。

TG 液體培養(yǎng)基：胰酪蛋白胨15 g，酵母浸粉5 g，L-胱氨酸0.5 g，巰基乙酸鈉0.5 g，氯化鈉2.5 g，葡萄糖5.5 g，雙蒸水1 000 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。

強化梭菌增殖（RCM）固體培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉粉1 g，酵母粉3 g，葡萄糖5 g，可溶性淀粉1 g，氯化鈉5 g，乙酸鈉3 g，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5 g，瓊脂15 g，121 ℃高壓滅菌20 min。

MRS固體培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉浸粉5 g，酵母浸粉4 g，葡萄糖20 g，乙酸鈉5 g，磷酸氫二鉀2 g，檸檬酸三銨2 g，硫酸鎂0.2 g，硫酸錳0.05 g，吐溫-80 1 mL，瓊脂15 g，雙蒸水1 000 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。

1.1.3 試驗試劑

胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K、過氧化氫酶購自上海源葉生物科技有限公司；硫酸銨：（純度≥99%）購自廣東光華科技股份有限公司。

1.1.4 儀器設(shè)備

分析天平和pH 儀（美國梅特勒托利多）；高速冷凍離心機（德國艾本德）；厭氧工作站DG250（英國Don Whitley Scientific）；菌落分析系統(tǒng)ProtoCol 3（英國Synbiosis）；冷凍干燥機（丹麥Labogene）；水浴鍋（德國哈克）；恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學儀器有限公司）；超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；高壓蒸汽滅菌鍋（天正集團有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 B38的篩選過程

參考賈麗艷[15]的篩選流程，并根據(jù)實際操作環(huán)境優(yōu)化。

初次篩選采用單層牛津杯法，以CP 為指示菌，測定48 株芽孢桿菌發(fā)酵上清液對其抑菌活性。將甘油保種的48 株芽孢桿菌以0.1%接種量接種至5 mL LB試管中，37 ℃、180 r/min 培養(yǎng)24 h，而后13 000 r/min離心5 min，收集上清液，放于-20 ℃?zhèn)溆?。將甘油保種的CP 以1%接種量接種至5 mL TG 試管中，置于厭氧培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)12 h。而后13 000 r/min 收集菌體，用無菌生理鹽水將OD600調(diào)整為0.6，取200 μL 涂布于RCM 培養(yǎng)基，將牛津杯垂直放置于培養(yǎng)基表面，在杯中加入100 μL 離心后的發(fā)酵上清液，置于厭氧培養(yǎng)箱中（厭氧條件為80% N2+10% H2+10% CO2），37 ℃培養(yǎng)12 h，并用菌落分析系統(tǒng)ProtoCol 3 測量抑菌圈直徑（下文測量抑菌圈直徑均采用該儀器），用抑菌圈直徑表示抑菌活性。

復(fù)篩采用打孔法，以CP 為指示菌，對初次篩選抑菌圈直徑大于15 mm 的芽孢桿菌進行第二次篩選。預(yù)先將無菌牛津杯放置于無菌培養(yǎng)皿中，孔徑為7.8 mm，而后將滅菌后的RCM 培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約25 mL，冷卻后保存在4 ℃?zhèn)溆?。將培養(yǎng)12 h的CP 離心收集沉淀，調(diào)整菌液濃度為0.5 麥氏比濁度（約1.5×108CFU/mL），取200 μL 涂布于預(yù)先準備好的平板中，而后加入100 μL 芽孢桿菌上清液，每個芽孢桿菌的抑菌試驗均重復(fù)3 次，每次試驗3 個孔，37 ℃培養(yǎng)12 h，測量抑菌圈直徑大小。

1.2.2 抑菌性能最佳菌株最小抑菌效價的測定

為測試上述篩選試驗中抑菌效果最好的菌株的最小抑菌效價，采用二倍稀釋法，用無菌純化水將B38發(fā)酵上清液進行2倍稀釋，以未稀釋原液為對照，分別進行抑菌試驗。B38 發(fā)酵上清液的最小抑菌效價參考細菌素的活性單位（AU），定義為出現(xiàn)明顯抑菌圈的最高稀釋倍數(shù)的倒數(shù)，單位用AU/mL表示。

1.2.3 B38抑菌物質(zhì)生成曲線

將過夜培養(yǎng)的B38 以1%接種量接種至200 mL LB 液體培養(yǎng)基，每隔2 h 取樣一次，13 000 r/min 離心5 min 收集上清液，取100 μL 上清液，以CP 為指示菌進行抑菌試驗，置于厭氧培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)12 h，測量其抑菌圈直徑，以抑菌圈的直徑大小表示抑菌物質(zhì)生成的量。

1.2.4 B38對不同指示菌的抑菌情況

指示菌的種類及培養(yǎng)條件見表1。指示菌培養(yǎng)結(jié)束后離心收集菌體，用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，稀釋至0.5 麥氏比濁度，采用打孔法測定B38 對不同指示菌的抑菌活性。

1.2.5 B38代謝產(chǎn)物的蛋白酶和過氧化氫酶耐受情況

在1 mL 發(fā)酵上清液中加入預(yù)先配制好的胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K 和過氧化氫酶溶液，使其終濃度都為5 mg/mL，其中胃蛋白酶組上清液預(yù)先使用5 mol/L 的HCl 調(diào)pH 至2，其余試驗組pH 均不作處理（pH=8.5），以未加酶組為對照，置于37 ℃水浴3 h，探究蛋白酶和過氧化氫酶對B38代謝產(chǎn)物的影響。

1.2.6 B38代謝產(chǎn)物的溫度耐受情況

吸取B38 發(fā)酵上清液1 mL 于EP 管中，分別在40、50、60、70、80、90、100 ℃耐受30 min，121 ℃高壓耐受30 min，以37 ℃耐受30 min 為對照，而后冷卻至室溫。處理后，分別吸取100 μL 進行抑菌試驗，探究溫度對B38代謝產(chǎn)物的影響。

1.2.7 B38代謝產(chǎn)物的pH耐受情況

用5 mol/L 的HCl 和5 mol/L 的NaOH 將其上清液pH 分別調(diào)至2～12，置于37 ℃水浴處理3 h，而后冷卻至室溫，將pH 調(diào)節(jié)至原液（pH=8.5），以未作處理耐受3 h為對照，探究pH對B38代謝產(chǎn)物的影響。

1.2.8 B38代謝產(chǎn)物中抑菌物質(zhì)的粗提取

采用硫酸銨分級沉淀的方法提取上清液中的抑菌物質(zhì)[16]。將預(yù)先準備好的發(fā)酵上清液按每份100 mL的量添加至燒杯中，將稱量好的硫酸銨緩慢加入燒杯，使其終濃度分別為30%、40%、50%、60%、70%、80%，并用玻璃棒不斷攪拌，使其充分溶解，整個過程保持在4 ℃。然后將燒杯轉(zhuǎn)移至4 ℃，靜置24 h，待沉淀以后，4 ℃、6 000 r/min 離心30 min，將沉淀用1 mL無菌雙蒸水溶解，同時取離心后的上清液，分別進行抑菌試驗，確定最佳的沉淀濃度。

1.2.9 最小抑菌濃度的測定

按照1.2.7 中的方法，采用最佳沉淀濃度獲得抗菌粗提取物，而后進行冷凍干燥，待干燥后，將樣品放于-20 ℃保存。采用二倍稀釋法，配制200、100、50、25、12.5、6.25、3.125 mg/mL的抗菌粗品溶液，取100 μL，以CP 為指示菌進行抑菌試驗，觀察抑菌效果，確定樣品的最小抑菌濃度。

1.2.10 軟件及統(tǒng)計學分析

抑菌圈直徑的測量使用的軟件是ProtoCOL 3，數(shù)據(jù)庫版本為1.0.59；數(shù)據(jù)分析使用的軟件是GraphPad Prism，版本為8.0.2。

2 結(jié)果與分析

2.1 B38的篩選過程

2.1.1 對CP具有抑制作用的芽孢桿菌的初次篩選

采用單層牛津杯法，對48 株芽孢桿菌發(fā)酵上清液進行篩選，共得到了22 株對CP 具有抑制效果的芽孢桿菌，這些菌株對CP 的抑制效果見圖1。由圖1 可知，不同芽孢桿菌之間抑菌效果存在較大差異，因此在復(fù)篩試驗中，以抑菌圈直徑>15 mm 為敏感區(qū)劃分，選取13株抑菌圈直徑>15 mm的芽孢桿菌進行試驗。

圖1 對CP具有較強抑菌活性的芽孢桿菌菌株

2.1.2 對CP具有抑制作用的芽孢桿菌的復(fù)篩

對于2.1.1 中選取的13 株芽孢桿菌，采用打孔法對CP 進行抑制，最終得到了一株對CP 具有很強抑制作用的芽孢桿菌B38，和其他菌株相比具有顯著差異。復(fù)篩結(jié)果見圖2，B38 對CP 的抑菌圈直徑為（31.14±0.90）mm，該芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌。

圖2 對CP有較強活性的芽孢桿菌菌株的復(fù)篩

由表2 可知，不同稀釋倍數(shù)的發(fā)酵上清液之間存在顯著差異，B38 發(fā)酵上清液具有抑菌效果的最大稀釋倍數(shù)是64 倍，此稀釋倍數(shù)下B38 發(fā)酵上清液對CP的抑菌圈直徑為（10.51±0.97）mm，故B38 對CP 的最小抑菌效價為64 AU/mL。

表2 B38發(fā)酵上清液不同稀釋倍數(shù)的抑菌效果(mm)

2.2 B38發(fā)酵上清液的最小抑菌效價

由表2 可知，B38 發(fā)酵上清液具有抑菌效果的最大稀釋倍數(shù)是64 倍，此稀釋倍數(shù)下，B38 發(fā)酵上清液對CP 的抑菌圈直徑為（10.51±0.97）mm，故B38 對CP的最小抑菌效價為68 AU/mL。

2.3 B38抑菌物質(zhì)生成曲線

由圖3 可知，0～<6 h，B38 發(fā)酵上清液對CP 無抑制效果，無抑菌物質(zhì)生成；6～<12 h，發(fā)酵上清液的抑菌活性呈指數(shù)增長，此時發(fā)酵上清液中的抑菌物質(zhì)增長速率最大；12～<24 h，雖然抑菌活性逐步增加，但是增加不明顯；在當發(fā)酵時間達到24 h 時，抑菌圈的直徑已經(jīng)不再繼續(xù)增大，隨著時間的增長有略微下降的趨勢，與12 h 相比具有顯著差異，表明在24 h 時，B38 的發(fā)酵上清液抑菌活性最大，后續(xù)試驗中對該菌的培養(yǎng)時間均為24 h。

圖3 B38發(fā)酵上清液抑菌物質(zhì)的生成和時間的關(guān)系

2.4 B38對不同指示菌的抑制效果。

由表3可知，B38對其中8株革蘭氏陽性菌均有抑菌效果，但是對4株革蘭氏陰性菌均無抑菌效果。B38對革蘭氏陽性菌的抑菌情況較好，尤其是對兩株CP、金黃色葡萄球菌和厭氧消化鏈球菌，其抑菌圈直徑均達到25 mm以上。對糞腸球菌、屎腸球菌、藤黃微球菌等抑菌效果稍弱。而對革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌、大腸桿菌K88和K99、銅綠假單胞菌）均無抑制效果。

表3 B38對不同指示菌的抑菌效果

2.5 B38代謝產(chǎn)物的蛋白酶和過氧化氫酶耐受情況

由圖4 可知，經(jīng)酸化的胃蛋白酶處理后，抑菌活性保持在93.79%；經(jīng)胰蛋白酶處理后，抑菌活性保持在90.11%；經(jīng)蛋白酶K 處理后，抑菌活性基本保持不變，表明B38 代謝產(chǎn)物具有優(yōu)良的抗蛋白酶能力，尤其是對蛋白酶K，同時也證明了該抑菌物質(zhì)作為飼料添加劑時，經(jīng)過動物的胃和腸道，不會被胃蛋白酶和胰蛋白酶分解，使其能夠在胃和腸道中發(fā)揮功能。而經(jīng)過氧化氫酶處理后，抑菌活性保持在87.78%，表明B38代謝產(chǎn)物中的主要抑菌物質(zhì)并非過氧化氫。

圖4 B38發(fā)酵上清液中的抑菌物質(zhì)對蛋白酶和過氧化氫酶的耐受情況

2.6 B38代謝產(chǎn)物的溫度耐受情況

由圖5 可知，B38 發(fā)酵上清液在37～100 ℃下耐受30 min，其抑菌活性基本保持穩(wěn)定，在121 ℃高壓處理30 min，其抑菌活性仍保持81.91%，表明B38 的代謝產(chǎn)物對溫度具有非常強的耐受能力，可以滿足飼料生產(chǎn)中高溫制粒的要求。

圖5 B38發(fā)酵上清液中抑菌物質(zhì)的溫度耐受情況

2.7 B38代謝產(chǎn)物的pH耐受情況

由圖6 可知，該菌發(fā)酵上清液在pH 7～9 之間，和對照組（pH=8.5）相比，活性基本保持不變，隨著pH 的降低，抑菌活性也在降低，但是降低的趨勢不明顯，當pH=2 時，剩余抑菌活性為83.17%；但是當pH 上升到10 時，抑菌活性有明顯下降，當pH 為12 時，剩余抑菌活性為71.29%，表明B38的代謝產(chǎn)物對酸性有較強的耐受能力，但是對堿性的耐受較弱。綜上可知，B38發(fā)酵上清液中的抑菌物質(zhì)在pH 為7～9 時抑菌活性最大，在pH=2 時，抑菌活性雖然有所損失，但是仍能保持83.17%的抑菌效果。

圖6 B38發(fā)酵上清液中抑菌物質(zhì)的pH耐受情況

2.8 B38代謝產(chǎn)物中抑菌物質(zhì)的粗提取

由圖7 可知，當硫酸銨濃度為30%時上清液的抑菌活性最大，隨著硫酸銨濃度的升高，上清液的抑菌活性不斷降低，當硫酸銨濃度達到80%時上清液完全失去抑菌活性；同時，當硫酸銨濃度為30%時沉淀無抑菌活性，隨著硫酸銨濃度升高，沉淀的抑菌活性越來越大，當硫酸銨濃度為80%時抑菌活性最大，表明上清液中的抑菌物質(zhì)可以被80%的硫酸銨完全沉淀。

圖7 硫酸銨沉淀提取B38發(fā)酵產(chǎn)生物質(zhì)抑菌活性

2.9 最小抑菌濃度的測定

通過80%硫酸銨沉淀得到抗菌粗品，并測定其MIC，結(jié)果見表4，質(zhì)量濃度為200 mg/mL的抗菌粗品抑菌圈直徑為（24.81±0.75）mm，當質(zhì)量濃度為3.125 mg/mL時，無抑菌圈產(chǎn)生，表明其MIC值為6.25 mg/mL。

表4 硫酸銨沉淀提取的抗菌粗品的最小抑菌濃度（MIC）

3 討論

3.1 CP的體外抑制研究

由CP 導(dǎo)致的雞壞死性腸炎（NE）、斷奶仔豬腹瀉、育肥豬和母豬脹氣死亡問題一直是困擾全世界養(yǎng)殖業(yè)的難題之一。雖然在飼料中添加抗生素可以改善該問題，但是在飼料中過度使用抗生素會導(dǎo)致CP產(chǎn)生耐藥性以及抗生素殘留等問題，因此許多國家已禁止在飼料中添加抗生素[17]。益生菌能夠改善宿主腸道微生物菌群平衡，對宿主產(chǎn)生有益影響，已有多種研究表明益生菌可以在體外對CP 有抑菌效果。李潔萍等[18]在CP的壓力下對5株乳酸桿菌進行篩選，得到了兩株乳酸桿菌S1 和H2，其發(fā)酵菌液對CP 體外抑制效果達16.12 mm 和18.15 mm，但是其發(fā)酵代謝產(chǎn)物的堿耐受能力均較差。王宏浩等[19]對7 株益生菌進行篩選，得到了3 株對CP 有抑制作用的菌株，分別為凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、丁酸梭菌，對這3 株菌的進一步研究表明，62.5 mg/g 的酸化凝結(jié)芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、31.25 mg/g 的酸化丁酸梭菌發(fā)酵液均可完全抑制CP 的生長。Barbosa 等[20]在肉雞腸道中分離出多種芽孢桿菌，其抑菌試驗表明，地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等對CP 具有抑菌效果，但是抑菌效果存在差異，枯草芽孢桿菌的抑菌效果要優(yōu)于BL 和短小芽孢桿菌。全爽等[21]對一株土壤源BL 的研究發(fā)現(xiàn)，該菌發(fā)酵上清液對CP 表現(xiàn)一定的抑菌作用；并且和金黃色葡萄球菌的混合培養(yǎng)表明，該菌可以完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

3.2 BL 作為飼料添加劑的研究進展

BL 是一種兼性厭氧菌，因其能夠形成耐熱和耐酸的芽孢，已廣泛作為各種動物飼料的益生菌添加劑[7]。Alexopoulos 等[22]的研究表明，在每噸日糧添加400 g BioPlus 2B（含有枯草芽孢桿菌和BL活性孢子），可有效降低斷奶仔豬的發(fā)病率和病死率，且能提高育肥豬的生長性能，與對照組相比，豬的體重、飼料轉(zhuǎn)化率和胴體質(zhì)量顯著提高。Knap 等[23]的研究表明，和15 g/t的維吉尼亞霉素相比，在日糧中添加1.6×107～8×107CFU/g的BL孢子在飼料轉(zhuǎn)化率提升和體重增加上沒有顯著差異，但能顯著降低肉雞感染CP導(dǎo)致的病死率。Musa等[24]研究表明，與5 mg/kg的恩拉霉素相比，含有2×109CFU/g枯草芽孢桿菌B21或2×109CFU/g的地衣芽孢桿菌B26 的日糧能夠降低由CP 導(dǎo)致的肉雞死亡，且能改善雞的腸道健康和生長性能。除了BL的孢子體外，Hung等[25]證明了4.5 g/kg的BL發(fā)酵產(chǎn)品可降低斷奶仔豬的腹瀉發(fā)生率并調(diào)節(jié)糞便微生物群落。

3.3 BL的抗菌物質(zhì)研究進展

BL能夠產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，研究最多的是地衣素（lichenysin）和表面蛋白（surfactin）。大多數(shù)BL都能產(chǎn)生地衣素[26]。地衣素是BL的次級代謝產(chǎn)物，在有氧和無氧的條件下均能夠產(chǎn)生。地衣素具有兩親性質(zhì)，可以與生物膜上磷脂的極性基團和疏水基團相互作用，增加其流動性，誘導(dǎo)生物膜成孔[27]。這種性質(zhì)使地衣素具有較強的抗菌、抗生物膜性質(zhì)。但是最近的一項研究表明地衣素可能會對細胞產(chǎn)生毒害作用，16.6 μg/mL的地衣素濃度可使Caco-2細胞活性降低一半，16.8 μg/mL可使豬回腸細胞活性降低一半[28]。表面蛋白和地衣素在結(jié)構(gòu)上高度類似，二者的唯一區(qū)別是表面蛋白肽環(huán)的1號位是L-Glu，而地衣素的是L-Gln[29]。表面蛋白能夠抑制多種革蘭氏陽性菌如單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌等，但是對革蘭氏陰性菌很少起作用[30]。除此之外，Horng等[31]的研究首次證明，表面蛋白還能夠抑制豬痢疾短螺旋體和CP，枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的表面蛋白對豬痢疾短螺旋體的抑制效果要好于BL，而BL產(chǎn)生的表面蛋白對CP的抑制效果要好于BL。該研究表明，BL中對CP有抑制效果的物質(zhì)可能是表面蛋白介導(dǎo)的，但是該物質(zhì)是如何對CP進行抑制的仍需探究。至于本研究中得到的B38，其代謝產(chǎn)物中究竟是哪種抗菌物質(zhì)在起作用，還需后續(xù)研究。

4 結(jié)論

本研究獲得了一株對CP 具有良好抑菌活性的菌株B38，對多種革蘭氏陽性菌（如CP、金黃色葡萄球菌、厭氧消化鏈球菌、屎腸球菌、糞腸球菌、藤黃微球菌等）表現(xiàn)出很強的抑菌活性。B38 發(fā)酵上清液的最小抑菌效價為64 AU/mL，對胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K 不敏感，具有良好的耐pH 和耐熱性，可以被80%的硫酸銨完全沉淀，沉淀得到的抗菌粗品MIC 為6.25 mg/mL。B38 代謝產(chǎn)物具有優(yōu)良的耐受性，可以運用于工業(yè)生產(chǎn)，為新型替抗產(chǎn)品的開發(fā)提供基礎(chǔ)。