仔豬產腸毒素大腸桿菌疫苗的研究進展

呂林芬，龐勝美，李保良，梁雨萱，段強德

（1.揚州大學 獸醫(yī)學院，江蘇 揚州 225009；2.揚州大學 江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心/教育部農業(yè)與農產品安全國際合作聯(lián)合實驗室，江蘇 揚州 225009；3.揚州大學 江蘇省動物重要疫病和重要人獸共患病防控技術國際合作聯(lián)合實驗室，江蘇 揚州 225009）

仔豬腹瀉是全球范圍內影響仔豬生產最為常見的胃腸道疾病，包括新生仔豬腹瀉和斷奶仔豬腹瀉（Post‐weaning diarrhea，PWD）。仔豬腹瀉在臨床主要表現(xiàn)為水樣腹瀉、體質量減輕、生長遲緩和急性死亡。由于高的感染率和較高的死亡率，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失。多種因素可以引起仔豬腹瀉，其中病原微生物感染是最主要的因素。病原微生物包括病毒性病原和細菌性病原。病毒性病原主要包括傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）和輪狀病毒（Rotavirus，RV）；而細菌性病原菌中最主要的是產腸毒素大腸桿菌（EnterotoxigenicEscherichia coli，ETEC）[1‐2]。菌毛黏附素和腸毒素是ETEC 感染引起仔豬腹瀉的2 類主要毒力因子。菌毛黏附素包括F4（F4ab、F4ac 和F4ad 3 個血清型）、F5、F6、F18（F18ab 和F18ac 2 個血清型）和F41，其中以F4ac 最為常見。腸毒素包括熱敏腸毒素（LT）和熱穩(wěn)定腸毒素（STa 和STb）[3]。對ETEC 致病機制的研究表明，ETEC 感染致病過程中，菌毛黏附素首先與仔豬小腸上皮細胞上特異性的菌毛受體結合，然后黏附、定植后的菌株通過釋放腸毒素引起機體水、電解質紊亂，最終引起仔豬腹瀉[1]。

當前，預防ETEC 感染所致仔豬腹瀉的主要措施包括在飼料中添加抗生素[4]、喂服特異性菌毛抗體[5]、膳食調節(jié)[6]、在飼料中添加益生菌或益生元[7]、通過遺傳育種方法選育抗ETEC 豬群[8]等。在飼料中添加抗生素很長一段時間是防治ETEC 感染引起仔豬腹瀉的主要措施，但是伴隨抗生素的不適當使用和濫用，耐藥性問題日益突出，嚴重威脅環(huán)境和公共衛(wèi)生安全[4]。口服特異性菌毛抗體雖然對仔豬腹瀉具有較好的療效，但是抗體提供的保護只限于飼喂期間，而且大量的飼喂會增加養(yǎng)殖成本[5]。膳食調節(jié)和在飼料中添加益生菌或益生元可以競爭性地抑制ETEC 和其他病原菌的生長，在維護仔豬腸道菌群平衡的同時，還能有效提高飼料利用率和機體的免疫力，但是在臨床上的確切效果還有待進一步驗證[6‐7]。豬群由于遺傳背景的不同會表現(xiàn)出對ETEC 的易感性或者抗性。因此，利用遺傳育種的方法選育抗ETEC 的品系是預防仔豬ETEC 感染的一種重要策略。但是如何精準鑒定易感性和抗性遺傳分子標識、抗性性能能否在種豬群中長期穩(wěn)定地遺傳、育種周期太長等問題決定了該策略在當前仍然有一定的局限性[8]。綜上所述，疫苗將是目前預防ETEC 感染所致仔豬腹瀉最經濟、有效和實用的措施之一。但是，由于ETEC 血清型眾多、表達毒力因子的異質性、腸毒素野毒本身的細胞毒性、STa 和STb 腸毒素的弱免疫原性等問題，高效、廣譜ETEC 疫苗的研發(fā)也面臨居多挑戰(zhàn)。因此，對當前各種豬用ETEC 疫苗的優(yōu)缺點、ETEC 疫苗研發(fā)面臨的主要問題以及高效廣譜ETEC 疫苗的研究策略進行綜述，旨在為研發(fā)防制ETEC 感染引起的仔豬腹瀉的高效、新型疫苗提供新思路。

1 ETEC滅活菌苗

當前，滅活菌苗仍然是臨床上用來預防仔豬ETEC 感染引起腹瀉的主要疫苗。國內商品化的滅活苗是由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所研制的F4、F5 和F6+ETEC 三價全菌滅活苗。該菌苗是將分別表達F4、F5和F6菌毛黏附素的ETEC 菌株接種適宜各菌毛黏附素高效表達的培養(yǎng)基培養(yǎng)，再將培養(yǎng)物用甲醛滅活，加氫氧化鋁膠作為佐劑制備而成。妊娠母豬在分娩前40 d和15 d分別免疫1次，每次2～5 mL。新生仔豬可以通過吮吸免疫母豬的初乳而獲得被動免疫，從而預防ETEC 引起的新生仔豬腹瀉。由美國Elanco 動物保健有限公司所研制的ETEC 四價滅活苗除包含F(xiàn)4、F5、F6 三種血清型的ETEC 菌株外，還增加了F41 血清型的ETEC 菌株，能同時預防這4 種不同血清型的ETEC 菌株感染引起的新生仔豬腹瀉。碩騰公司研發(fā)的仔豬C 型產氣莢膜梭菌病、大腸桿菌?。‵4、F5、F6 和F41+ETEC）二聯(lián)滅活疫苗（利特佳），可以同時預防大腸桿菌引起的新生仔豬腹瀉和C型產氣莢膜梭菌引起的仔豬紅痢。

此外，也有一些研究表明，利用在當?shù)馗篂a仔豬流行的ETEC 血清型制備的單價或多價自家滅活苗免疫當?shù)刎i場同樣也具有良好的免疫保護效果[9‐10]。張鵬[9]從安徽6個地區(qū)17家規(guī)?；B(yǎng)豬場分離并鑒定篩選出優(yōu)勢血清型ETEC 菌株，選用優(yōu)勢血清型的強毒株和弱毒株分別制備單價滅活疫苗或強毒-弱毒株二價滅活苗，研究結果表明，無論是單價還是二價滅活苗，在小鼠模型中均表現(xiàn)出良好的免疫保護效果。楊德鴻等[10]將從蘇北地區(qū)21 家規(guī)?；B(yǎng)豬場中分離鑒定得到的優(yōu)勢血清型ETEC菌株制備成單價或二價自家滅活苗，研究結果表明，制備的單價滅活苗對感染同種血清型的ETEC小鼠具有100%的免疫保護作用，而二價滅活苗對2種血清型ETEC 菌株均具有很高的保護率，并且對其他血清型ETEC 菌株感染也具有部分保護效果。ETEC 自家滅活疫苗對當?shù)亓餍醒逍偷腅TEC 菌株感染具有較好的免疫保護效果，但是對不同血清型或者其他地區(qū)流行的血清型ETEC 菌株的保護效果較差。目前，還沒有商品化的滅活苗用來預防斷奶仔豬腹瀉，這主要是由于免疫F18ac+ETEC 滅活苗對F18ac+ETEC感染沒有良好的保護效果。

ETEC 滅活苗使用的優(yōu)點在于制備程序簡便，疫苗安全性高，免疫原性和穩(wěn)定性高，儲存以及運輸方便。但是滅活苗也存在諸多缺點，如疫苗中存在多種與所需免疫保護無關的抗原成分和佐劑，有效抗原含量少，免疫保護效果較一般，不良反應較明顯；接種劑量大，免疫保護期較短，并且需要多次重復接種。此外，全菌滅活苗主要誘發(fā)體液免疫，不能產生細胞免疫或黏膜免疫應答。

2 ETEC口服活疫苗

ETEC 的口服活疫苗主要是從自然界篩選到的自然弱毒或無毒菌株。目前，市售的活疫苗只有美國Elanco 公 司 研 制 的Coliprotec?F4 單 價 和Coliprotec?F4/F18 二價活疫苗。大于18 日齡仔豬，斷奶后1 d 通過飲水口服單個劑量的Coliprotec?F4活疫苗（1×108cfu），在免疫后3、7、21 d 進行攻毒保護試驗，結果顯示，免疫后3 d 的保護效果即達到53%，免疫后7、21 d 的保護效果分別為89% 和100%?？梢?，單劑量的Coliprotec?F4 活疫苗即對F4+ETEC 感染引起的斷奶仔豬腹瀉具有良好的免疫保護效果[11]。NADEAU 等[12]研究表明，大于18 日齡的斷奶仔豬通過飲水口服免疫Coliprote?F4/F18雙價活疫苗[1.6×108cfu（F4），2.8×108cfu（F18）]，在免疫后7、21 d，對F4+和F18+血清型的ETEC 菌株感染的斷奶仔豬均具有良好的保護效果。此后，GOODMAN[13]等的臨床應用效果調查表明，以上2種疫苗在臨床上對斷奶仔豬腹瀉的保護效果不佳。這可能主要是由于引起斷奶仔豬腹瀉的病因較多，以及飼喂和管理方式等因素對疫苗的使用效果影響也很大。目前，國內商品化的活疫苗僅有中牧實業(yè)股份有限公司生產的仔豬大腸桿菌腹瀉K88（F4）-LTB 雙價基因工程疫苗。該疫苗重組菌株能夠同時表達F4 菌毛和LT 腸毒素的B 亞單位，臨床上主要應用于預防F4+ETEC 感染引起的新生仔豬腹瀉。免疫程序：在母豬預產期前15～25 d，將每頭份疫苗（5×1010cfu）與2 g 小蘇打一起拌入精飼料中，空腹飼喂母豬后再常規(guī)喂食；或者于母豬預產期前10～20 d 進行肌肉注射免疫（每頭100 億cfu 活菌，注射劑量為1 mL）。疫情嚴重的豬場，則需在產前7～10 d再加強免疫1次，方法同上。

目前，除了以上3種商品化的疫苗外，也有多種活疫苗處于研發(fā)階段。HUR 等[14]利用減毒傷寒沙門氏菌同時表達F4ab、F4ac、F5、F6 和F41 菌毛，研究表明，妊娠母豬在生產前10 d 口服該重組菌株對斷奶前（<21 d）仔豬的ETEC 感染具有良好的免疫保護效果。與傳統(tǒng)的肌肉注射疫苗相比，減毒傷寒沙門氏菌重組ETEC 活疫苗在1 周齡和3 周齡的仔豬中能夠誘導更高水平的菌毛黏附素IgG 抗體。但是研究沒有評估該候選疫苗是否對21 d 以后斷奶仔豬的ETEC 感染同樣具有良好的免疫保護效果。除免疫母豬外，研究表明，仔豬免疫表達菌毛黏附素和/或腸毒素的重組菌株對仔豬ETEC 感染也有比較好的保護效果。RUAN 等[15]研究表明，將表達FaeG-FedF-LTA2:B融合蛋白的重組菌株連續(xù)2 d 以7.5×109cfu/頭的劑量免疫仔豬，能夠在仔豬體內同時誘導抗FaeG、FedF 和LT 腸毒素的高水平抗體產生，并且可以有效保護表達K88菌毛和LT腸毒素的ETEC 感染引起的仔豬腹瀉。但是該疫苗候選株是否對表達F18 菌毛的ETEC 感染引起的仔豬腹瀉具有同樣的保護效果還需進一步的研究。LIU 等[16]研究表明，當小鼠以1.0×109cfu 的劑量口服免疫表達LT192-STa13 和LT192-STb 的重組大腸桿菌ER-A和ER-B 時，在小鼠體內能夠同時誘導產生高水平的抗LT、STa、STb和F41的抗體，并且誘導的抗體能夠有效阻斷小鼠感染表達相應毒素的ETEC 菌株。但是這2株疫苗候選株對仔豬是否具有免疫保護效果，以及免疫保護效果如何還需要進一步的驗證。

與注射用疫苗需要大劑量、多次免疫不同，ETEC 口服活疫苗往往只需要一次免疫即可誘發(fā)全面、穩(wěn)定、持久的黏膜免疫應答，達到較好的免疫保護效果。更重要的是，口服疫苗可以刺激母豬腸相關淋巴組織（GALT）產生分泌型IgA（sIgA）抗體，該抗體可以通過母豬初乳轉移給仔豬[17]?？诜庖咭部梢杂行П苊庾⑸涿庖呓o仔豬造成的應激反應。但是口服活疫苗熱穩(wěn)定性相對較差，運輸、保存條件要求較高（要求在低溫、冷暗條件下運輸和儲存；通常制成凍干苗以利于保存），并且存在毒力返強的風險和不易制備成聯(lián)苗。此外，活疫苗容易受到母源抗體干擾，免疫接種時間選擇范圍相對較窄。

3 ETEC基因工程苗

3.1 基于菌毛黏附素的工程亞單位疫苗

菌毛黏附素介導ETEC 菌株與仔豬腸道上皮細胞的黏附和定植是ETEC 感染的第一步，也是必不可少的一步。鑒于菌毛黏附素在ETEC 致病過程中的重要作用，很多基因工程疫苗是以菌毛黏附素亞單位作為抗原。母豬或者仔豬免疫該類疫苗后，仔豬自身可以主動誘導產生或者通過母乳被動獲得針對菌毛黏附素的特異性抗體，抗體可以有效阻斷表達相應菌毛黏附素的ETEC 菌株與仔豬小腸上皮細胞的黏附，從而預防仔豬ETEC感染[18]。

表達F4 菌毛的ETEC 是引起新生仔豬腹瀉的最主要病原菌。多項研究表明，母豬產前注射接種表達F4 菌毛主要亞單位的疫苗，或飼喂表達FaeG亞單位的轉基因植物或益生菌，對新生仔豬的F4+ETEC 感 染 均 具 有 較 好 的 免 疫 保 護 效 果[19‐22]。YAHONG 等[19]報道，母豬在產前6 周和2 周分別免疫純化的FaeG重組蛋白，在母豬血清和初乳中有高水平的IgG 和IgA 抗體，能有效保護新生仔豬的K88ac+ETEC 感染。另有研究表明，斷奶仔豬通過口服免疫F4菌毛亞單位疫苗，在仔豬體內能夠誘導針對F4+菌毛的特異性抗體，能有效預防仔豬F4+ETEC 感染引起的PWD[23]。因病原體污染的風險顯著降低，利用轉基因植物生產的菌毛亞單位疫苗比用傳統(tǒng)的工程菌、酵母和哺乳動物細胞生產的菌毛亞單位疫苗更安全[22]。另外，利用轉基因植物生產亞單位疫苗成本更低，而且通過口服能有效誘導仔豬的黏膜免疫反應[24]。由于適口性好，苜蓿常用來飼喂豬，也常用作轉基因植物的受體。利用轉基因植物表達菌毛黏附素亞單位，對表達相應菌毛黏附素的ETEC 感染具有較好的保護效果[25]。前人研究表明，斷奶仔豬飼喂表達F4菌毛黏附素主要亞單位的轉基因苜蓿能有效預防F4+ETEC 感染引起的斷奶仔豬腹瀉[20‐21]。利用轉基因植物表達菌毛黏附素亞單位安全性高、成本低，但是如何提高目標蛋白的表達量，如何抵抗胃酸對蛋白質的消化作用是當前面臨的挑戰(zhàn)，這也是目前還沒有商品化轉基因植物疫苗的原因。

多表位融合抗原（Multiepitope fusion antigen，MEFA）技術是一種基于電腦生物學和結構生物學相結合的新型疫苗構建技術和平臺，是將來源于不同種屬的菌株或者不同血清型菌株中和（阻斷）抗原表位，利用電腦生物學和結構生物學技術整合至一個抗原中，并最大限度地模擬抗原表位本身的免疫原性，從而有利于構建具有廣泛保護力的新型多聯(lián)或多價疫苗[26]。DUAN等[27]利用MEFA技術，分別以F4 菌毛主要亞單位FaeG 和F18 黏附亞單位FedF作為骨架，構建了FaeG-Fim41a-FanC-FasA 和FedF-FasA-Fim41a-FanC 2 種多表位融合抗原蛋白，將多表位融合抗原蛋白混合后通過皮下注射免疫小鼠能誘導產生同時針對F4、F5、F6、F18 和F41菌毛的特異性抗體，并且獲得的抗體在體外能有效阻斷表達相應菌毛黏附素的ETEC 菌株對仔豬小腸上皮細胞IPEC-1 和IPEC-J2 的黏附。再進一步將2種蛋白質融合構建成FaeG-FedF-FanC-FasAFim41a 多表位融合抗原蛋白，該五價候選疫苗抗原可以在小鼠體內同時誘導針對F4、F5、F6、F18 和F41 這5 種靶向菌毛的特異性抗菌毛中和抗體，并且免疫小鼠血清樣品可以有效抑制表達這5種菌毛的ETEC 菌株對仔豬小腸上皮細胞的黏附[28]。因此，上述構建的3 個靶向ETEC 菌毛黏附素的多表位融合抗原蛋白具有作為預防ETEC 感染引起PWD的高效、廣譜菌毛黏附素疫苗的潛力。

3.2 基于腸毒素的工程亞單位疫苗

除了菌毛黏附素外，腸毒素也是ETEC 感染過程中的重要毒力因子。因此，利用基于腸毒素為候選抗原的類毒素疫苗誘導針對腸毒素的中和抗體也是預防仔豬ETEC 感染的一個重要策略[29]。但是鑒于腸毒素本身強的細胞毒性、不同種類毒素之間缺乏交叉保護以及ST毒素本身免疫原性差等原因，一直以來基于腸毒素為抗原的疫苗研發(fā)困難重重。

腸毒素野毒雖然具有強的毒性，但是將與腸毒素毒性相關的某些關鍵氨基酸殘基位點突變能使其毒性顯著降低或者無毒性，并且保留其免疫原性[30‐31]。此外，將ST 毒素與其他免疫原性強的蛋白質融合表達可以增強ST的免疫原性，這表明研發(fā)基于ETEC 腸毒素的抗毒素疫苗是可行的[32‐33]。由于不同毒素之間的異質性，雖然基于單一類毒素為抗原的抗毒素疫苗對表達相同毒素的ETEC 感染具有良好免疫保護效果，但是對表達異種毒素的ETEC感染無交叉保護作用。鑒于單一ETEC 菌株常能同時產生2 種或者多種類型腸毒素，基于單一類毒素為抗原的抗毒素疫苗的免疫保護效果往往不佳。最近研究發(fā)現(xiàn)，將與細胞毒性相關的A 亞基上的單個或者多個關鍵氨基酸殘基位點突變后，LT腸毒素的毒性顯著減弱但是保留了良好的免疫原性[34‐35]。因此，這些LT類毒素不僅可以直接作為抗原制成類毒素疫苗，還可以作為蛋白質載體來增強ST毒素的免疫原性。ZHANG 等[36]以LTR192G類毒素為載體，將STa 和STb 毒素與其融合表達，研究結果表明，該融合蛋白在小鼠體內能同時誘導抗LT、STa和STb 3種腸毒素的中和性抗體。FENG 等[37]利用同源重組的方法構建了能同時表達LT、STa 和STb 3 種腸毒素的減毒重組大腸桿菌（ER-T），研究結果表明，小鼠口服該重組菌株能誘導3 種毒素的高水平IgG 和sIgA 抗體，抗體在體內能中和STa 和STb 的毒性作用。此外，SEO 等[38]的研究結果也表明，將3 個拷貝的STaN12S多肽融合至LT 雙突變體（dmLT）構建的3xSTaN12S-mnLTR192G/L211A類毒素融合蛋白免疫小鼠和仔豬，在小鼠和仔豬體內均可誘導高滴度的針對STa 和LT 腸毒性的保護性中和抗體，保護仔豬免受產生這2 種腸毒素的ETEC 菌株感染?；诙喾N腸毒素的多價類毒素疫苗由于具有更廣泛的保護力，其免疫保護效果較基于單一腸毒素的類毒素疫苗的免疫保護效果更好。

3.3 基于菌毛黏附素和腸毒素的廣譜工程亞單位疫苗

ETEC 感染引起仔豬腹瀉需要菌毛黏附素和腸毒素的共同作用，缺一不可。因此，一種真正高效、廣譜的ETEC 疫苗應該同時包含有菌毛黏附素和腸毒素這2 類抗原，這樣誘導的抗菌毛黏附素的抗體能有效阻斷ETEC 與仔豬腸道上皮細胞的黏附，而同時誘導的抗腸毒素的抗體能有效中和腸毒素的毒性作用，從而起到雙重保護效果[39]。目前，我國市售的基因工程疫苗有遼寧益康公司研發(fā)的仔豬大腸桿菌病基因工程滅活疫苗（GE-3 株）。該疫苗株能同時表達K88 菌毛、STa 和LT 腸毒素，以5 mL 的劑量，分別在產前30～35 d 和15～20 d 肌肉注射免疫妊娠母豬，對K88ac+ETEC 感染引起的仔豬腹瀉具有良好的保護效果[40]。免疫該疫苗只能對仔豬的K88ac+ETEC 菌株感染具有保護力，對其他血清型的ETEC感染無交叉保護力。

此外，ZHANG 等[41]以F4 菌毛黏附素主要亞單位FaeG為骨架，將LT腸毒素和STa腸毒素的B細胞抗原表位嵌合至FaeG 中構建了能同時表達F4菌毛黏附素、LT 和STa 腸毒素的重組菌株。提取重組菌株表達的嵌合菌毛免疫兔子能同時誘導抗F4 菌毛黏附素、抗LT 和STa 毒素的抗體。在另外一項研究中，ZHANG 等[17]將腸毒素融合蛋白SLS（STa-LTBSTb）與F4ac 和F5 菌毛抗原混合免疫母豬，發(fā)現(xiàn)這種多價候選疫苗可以在母豬血清和初乳中誘導產生抗菌毛黏附素和腸毒素的多種抗體，并且有效保護仔豬的F4+和F5+ETEC 感染，甚至對F41+ETEC 感染也具有較好的保護效果。此外，LU 等[42]利用MEFA 技術平臺構建了同時包含菌毛黏附素（F4 和F18 菌毛黏附素）和腸毒素（LT、STa、STb、Stx2e）的多表位融合抗原蛋白，將該抗原蛋白免疫小鼠不僅能誘導阻斷表達F4菌毛和F18菌毛的ETEC菌株與仔豬腸道上皮細胞的黏附，還能誘導針對LT、STa、STb 和Stx2e 4 種毒素的中和抗體，表明其具有作為預防ETEC感染引起PWD的候選疫苗的潛質。

與傳統(tǒng)疫苗相比，基因工程疫苗通常只包含病原的某一或者某些抗原成分，無核酸，因而基本無不良反應，安全性更好。此外，其可以同時誘導體液免疫和細胞免疫反應，并且具有容易克隆多個抗原基因研制多價苗等優(yōu)點。但是基因工程苗制備成本較高，免疫原性較弱，通常需要添加佐劑，是否在體內存在基因重組的風險也有待評估。

4 ETEC疫苗研發(fā)面臨的主要挑戰(zhàn)

雖然疫苗是當前預防ETEC 所引起仔豬腹瀉的有效手段，但是當前安全、高效、廣譜的ETEC 疫苗研發(fā)仍然面臨諸多難以克服的挑戰(zhàn)，主要包括：（1）ETEC 表達毒力因子（黏附素和腸毒素）的異質性要求高效的疫苗必須能同時誘導針對黏附素和腸毒素的特異性抗體，并且對表達不同黏附素和腸毒素的ETEC 菌株感染具有廣泛的保護力[43]。（2）由于腸毒素是ETEC 引起仔豬腹瀉的重要毒力因子，因此其必須作為疫苗的重要成分，但是LT、STa和STb野毒均具有強的細胞毒性，不能直接作為安全的疫苗抗原使用[44]。（3）STa和STb腸毒素為短的多肽，免疫原性差，本身直接作為抗原不能誘導機體產生抗STa 和STb 的中和抗體[33]。（4）F18 菌毛作為抗原免疫機體，不能誘導產生針對F18+ETEC 感染的保護性抗體[45]。（5）斷奶仔豬的免疫時間點難以選擇，免疫時間過早易受到母源抗體的干擾，過遲則起不到免疫保護作用[46]。（6）口服型ETEC 疫苗需要克服胃蛋白酶和胃酸的影響，并且保證抗原能夠到達腸上皮細胞處與腸相關淋巴組織中的抗原遞呈細胞相互作用[47]。

5 小結和展望

在當前ETEC 菌株耐藥性越來越嚴重和我國全面“禁抗”的形式下，免疫ETEC疫苗是預防ETEC感染引起的仔豬腹瀉最經濟和可行的手段[48‐50]。鑒于引起仔豬腹瀉的ETEC 菌株血清型眾多，以及病原菌本身表達的毒力因子眾多和毒力因子異質性的問題，廣譜、高效的ETEC 疫苗應該是利用新技術研發(fā)的多價疫苗，而且最好是同時包含黏附素抗原和腸毒素抗原的廣譜多價菌苗。課題組前期的研究表明，基于MEFA 技術平臺構建的多價表位疫苗對不同血清型的ETEC 菌株感染具有良好的免疫保護效果，更重要的是疫苗抗原只包括毒力因子的優(yōu)勢B細胞抗原表位，具有更好的安全性。因此，將來可以利用該技術平臺研發(fā)新型、高效和廣譜的多價ETEC 疫苗。另外，雖然利用分子生物學手段將與毒力相關的關鍵氨基酸位點突變后，LT 腸毒素和STa 腸毒素的毒性大大降低，但在把腸毒素作為疫苗抗原之前應進一步降低其毒性。