百合遠緣雜交胚拯救技術(shù)

吳 然 李振勤 薛少紅 齊春霞 姚則羊 邊光亞

（1 石家莊市農(nóng)林科學(xué)研究院 河北 石家莊 050021； 2 石家莊市百合研究技術(shù)創(chuàng)新中心 河北 石家莊050021； 3 石家莊市花卉研究技術(shù)創(chuàng)新中心 河北 石家莊 050021）

百合(Lilium spp.)是百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)植物，兼具藥、食、賞多種功能，是具有重要經(jīng)濟價值的球根花卉[1]。百合作為球根花卉的重要代表，其市場價值與需求與日俱增。百合育種至今大約有100 年的歷史，培育出了數(shù)千個百合新品種。雖然近幾十年來育種方法不斷改進，但全球百合育種仍以常規(guī)雜交為主[2]。綜合不同雜種系間的優(yōu)良性狀是百合育種中的一個重要目標，因此遠緣雜交是百合育種的主要手段。但是，百合遠緣雜交往往表現(xiàn)出不親合現(xiàn)象，克服種間雜交障礙一直是百合雜交育種研究的熱點。

胚拯救技術(shù)可以有效避免雜種胚的敗育，并加快其成苗，從而提高育種效率。因此，筆者通過多年試驗，總結(jié)百合遠緣雜交胚拯救技術(shù)，以期降低胚敗育率，為百合育種工作者提供技術(shù)參考。

1 材料選擇

將雜交授粉后30～40 d 剪取的膨大的子房作為外植體，做好標簽分類后，放入冰箱4 ℃冷藏保存。

2 組培準備

2.1 工具準備。將純水、濾紙、接種刀、接種鑷及培養(yǎng)皿等接種工具121 ℃高壓滅菌40 min。然后將解剖鏡及接種工具放入超凈工作臺，紫外線滅菌30 min。

2.2 培養(yǎng)基的制備。以MS 為基本培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121 ℃高壓滅菌20 min。根據(jù)組培各階段要求培養(yǎng)基需附加不同生長調(diào)節(jié)劑、瓊脂和糖：啟動培養(yǎng)基(1/2MS+6-BA0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+瓊脂0.6 % + 糖30 g/L)，增殖培養(yǎng)基(MS + 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+瓊脂0.6%+糖60 g/L)，生根培養(yǎng)基(1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+ 瓊脂0.6%+糖60 g/L)。

3 胚拯救過程

3.1 外植體消毒。用毛筆蘸取洗潔精或洗衣粉仔細刷洗需要接種的子房，洗凈后放在流水下沖洗2～3 h。隨后，將材料移入無菌瓶，用75%酒精消毒1 min 后，再用無菌水沖洗3 次，每次浸泡1 min；倒入0.1%HgCl2，消毒10 min，期間需晃動無菌瓶，保證HgCl2充分接觸材料，無菌水沖洗3 次，每次用無菌水浸泡1 min，以便充分洗去殘留的HgCl2。

3.2 接種

3.2.1 子房切片培養(yǎng)。將消毒好的子房用無菌濾紙吸干水分，切取子房最為膨大的部分，每個切片厚度2 mm 左右，一般可切3～5 片，將切片接入啟動培養(yǎng)基，溫度24 ℃～26 ℃，光照12 h/d，光照強度2 000～3 000 lx，培養(yǎng)14 d。期間觀察污染情況，及時將長菌材料移出培養(yǎng)室處理。培養(yǎng)40 d 后，將膨大的胚珠轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基。

3.2.2 胚珠培養(yǎng)。將消毒好的子房用無菌濾紙吸干水分，沿子房凹縫切開子房，然后剝?nèi)∨咧?，將胚珠接入配制好的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件同子房切片培養(yǎng)。

3.2.3 胚培養(yǎng)。將消毒好的子房用無菌濾紙吸干水分，沿子房凹縫切開子房，選取有胚種子，在解剖鏡下剝?nèi)》N胚，接入配制好的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件同子房切片培養(yǎng)。

3.3 增殖培養(yǎng)。將子房培養(yǎng)(以膨大胚珠轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基的時間計算)、胚珠培養(yǎng)和胚培養(yǎng)約60 d 的雜種苗，去除根部和葉片，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，在24 ℃～26 ℃條件下暗培養(yǎng)約40 d，可誘導(dǎo)出大小不等的百合小鱗莖。

3.4 生根培養(yǎng)。將分化出的小鱗莖轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，每瓶接種5～6 株，置于培養(yǎng)室，24 ℃～26 ℃條件下暗培養(yǎng)，一般40～50 d 鱗莖直徑可達0.5～1 cm，煉苗后即可大田移栽。