壇紫菜絲狀體不同誘變方法的比較研究

秦 欣 陳娟娟 杜 響 許萬濤 駱其君

（寧波大學海洋學院，浙江 寧波 315211）

在傳統(tǒng)的紫菜養(yǎng)殖過程中，伴隨著品種退化、產量質量下降、多發(fā)病害等問題。紫菜的優(yōu)良品種對其產業(yè)的發(fā)展起著重要作用，而培育新品種的基礎是種質資源［1］。因此，加強紫菜優(yōu)質種質資源的培育對壇紫菜產業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。其中，輻射誘變能誘導新種質和新材料、增加突變頻率、縮短育種周期、豐富突變類型，是品種改良的重要途徑［2-3］。

目前，關于作物的輻射敏感性［4-5］、輻射生物學效應［6-7］和分子細胞生物學變異已有相關研究報道。輻射誘變育種已廣泛應用于種質的創(chuàng)新。如陳競天等［8］利用60Co-γ 射線輻射甜葉菊，獲得了綜合性狀優(yōu)良的耐鹽突變體材料。各類誘變育種技術已廣泛應用于紫菜中，成為提高育種效率、獲得優(yōu)良紫菜種質的主要手段。趙爽等［9］用紫外線（ultraviolet，UV）誘導圓紫菜（Pyropiasuborbiculata）野生型葉狀體，分離到了可穩(wěn)定遺傳的色素突變體。張倩等［10］研究發(fā)現(xiàn)紫外線對皺紫菜（Pyropiacrispata）葉狀體具有良好的誘變效果，成功分離出了四個皺紫菜的色素突變品系。Ding 等［11］利用60Co-γ 射線誘變條斑紫菜（Pyropiayezoensis），篩選出了耐高溫、光合色素含量高、孢子產量高的突變株ST-2。雙因子誘變可以擴大突變的類型、增加突變譜，誘變處理的順序發(fā)生改變，獲得的基因類型也隨之改變，因此雙因子誘變往往更有利于篩選出有利突變藻株［12］，雙因子誘變方式在微藻和農作物中廣泛使用［13］，如謝鳳行等［14］采用甲基磺酸乙酯（ethyl methane sulfonate，EMS）-紫外復合誘變技術選育出了蛋白含量高且生長較快的小球藻（Chlorella sorokiniana）突變株H10，但目前壇紫菜的誘變方式主要聚焦于單因子誘變選育出具有良好生產性能的突變株、利用環(huán)境條件（如高溫）篩選出具有抗逆性的突變株，關于壇紫菜自由絲狀體有高突變率的誘變方法組合鮮見報道。

壇紫菜（Neoporphyrahaitanensis）浙東1 號為群體選育的品種（國家水產新品種證書編號：GS-01-013-2014），具有殼孢子放散量高、葉片厚、產量高的優(yōu)勢［15］。本試驗通過對壇紫菜浙東1號的自由絲狀體進行3種單因子和2種雙因子誘變處理，比較不同誘變方式的效果，以期篩選出合適有效的誘變方法，為壇紫菜遺傳育種提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

壇紫菜浙東1號（ZD-1）自由絲狀體來源于浙江省海洋生物技術重點實驗室，藻體顏色正常，形態(tài)良好。甲基磺酸乙酯（EMS）、五水合硫代硫酸鈉，購自中國上海國藥化工有限公司。

1.2 儀器與設備

Eclipse Ti 倒置熒光顯微鏡，尼康儀器（上海）有限公司；手持攪拌料理棒，飛利浦家電（中國）投資有限公司；GXZ 型智能光照培養(yǎng)箱，寧波江南儀器廠；WATER-PAM 葉綠素熒光儀，德國Walz 公司；TUV PL-L36 W/4P 紫外線殺菌燈，上海賴氏電子科技有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 絲狀體的誘變

1.3.1.160Co-γ 射線單因子誘變 于浙江輻照中心（浙江省農業(yè)科學院作物與核技術利用研究所）進行60Co-γ 射線輻射處理，輻射后的絲狀體參照文獻［16］的方法培養(yǎng)。用手持攪拌料理棒將絲狀體打碎，并用60 目篩絹過濾，得到長度為100～300 μm 的藻絲，在黑暗條件下恢復1 d，對材料進行前處理。用0、50、125、400、1 000、1 600 Gy劑量的60Co-γ射線進行誘變，誘變時間為30 min，處理后的藻絲使用滅菌海水清洗3次，再轉入滅菌海水培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件為溫度25 ℃，光照強度18 μmol·m-2·s-1，光周期為光照∶黑暗=12 h∶12 h，培養(yǎng)時間為2個月，每個試驗組設置5個重復。

1.3.1.2 UV單因子誘變 將絲狀體放入開蓋的培養(yǎng)皿中，置于36 W 紫外燈垂直距離為35 cm 處，照射30、60、180、360 min，以不做UV 處理的絲狀體作為對照，誘變后的藻絲處理與培養(yǎng)同1.3.1.1。

1.3.1.3 EMS 單因子誘變 前期通過預試驗，確定2 h 為EMS 誘變效果較好的處理時間。將藻絲用0.1、0.2、0.4 mol·L-1的EMS 在4 ℃黑暗條件下浸泡2 h，以黑暗條件下浸泡在自然海水中的絲狀體作為對照，誘變后的藻絲處理與培養(yǎng)同1.3.1.1。

1.3.1.460Co-γ-UV 雙因子誘變 將60Co-γ 射線輻射組絲狀體預培養(yǎng)2 個月，對材料進行前處理后進行UV誘變，UV誘變方法同1.3.1.2。

1.3.1.560Co-γ-EMS 雙因子誘變 將60Co-γ 射線輻射組絲狀體預培養(yǎng)2 個月，對材料進行前處理后進行EMS誘變，EMS誘變方法同1.3.1.3。

1.3.2 形態(tài)觀察 取經過誘變處理的絲狀體，用0.1%埃文斯藍染色液避光染色15 min，進行漂洗，置于倒置熒光顯微鏡下觀察。將出現(xiàn)色澤變異和具有生長優(yōu)勢（長度大于500 μm）的藻絲確定為突變藻絲。

1.3.3 致死率和突變率的計算 以致死率達到50%（半致死率）作為誘變絲狀體的適宜條件［17-18］，致死率和突變率的計算公式如下：

絲狀體致死率=已染色自由絲狀體數目/被鏡檢的自由絲狀體總數×100%；

突變率=突變藻絲數量/（非突變型藻絲存活數量+突變型藻絲存活數量）×100%。

1.3.4 葉綠素熒光參數的測定 取誘變處理組的絲狀體，用吸水紙吸取多余水分后置于培養(yǎng)皿中，用葉綠素熒光儀測定光系統(tǒng)Ⅱ（photosystem Ⅱ，PSⅡ）的最大光化學量子產量（maximal photochemical quantum yield of PSⅡ，F(xiàn)v/Fm），測定方法參考文獻［19］。

1.4 數據處理

采用Excel 2007 進行數據處理，用SPSS 20.0 軟件進行相關性分析，Origin 2018軟件繪圖，顯著水平為P<0.05。

2 結果與分析

2.1 60Co-γ射線單因子誘變

2.1.160Co-γ射線對形態(tài)的影響 與未輻射組（圖1-a）相比，50 Gy（圖1-b）、125 Gy（圖1-c）、400 Gy（圖1-d）、1 000 Gy（圖1-e）輻射組營養(yǎng)藻絲的色素片彌散，分枝頂端的細胞體積開始變大，呈紡錘形或其他不規(guī)則形狀，色素體由片狀變?yōu)閺浬睿^而呈顆粒狀。說明50、125、400、1 000 Gy 的輻射劑量促進了這些藻絲的發(fā)育和成熟，1 600 Gy（圖1-f）輻射組可見較成熟的孢子囊枝，說明1 600 Gy 的輻射劑量促進了營養(yǎng)藻絲轉向孢子囊枝的生長。由此可見，60Co-γ 射線輻射處理可以促進自由絲狀體的生長發(fā)育。

圖1 自由絲狀體輻射誘變后的形態(tài)Fig.1 Morphology after free-living conchocelis radiation mutagenesis

2.1.260Co-γ射線對致死率和突變率的影響 由圖2可知，ZD-1 在不同劑量的60Co-γ 射線輻射下，都出現(xiàn)了突變的藻絲，在最低劑量50 Gy處理下，ZD-1的致死率為17.2%，突變率為0.002%，隨著輻射劑量的增加，壇紫菜自由絲狀體ZD-1 的突變率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，致死率呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，在1 000 Gy 時，突變率到達峰值，為0.024%，致死率為49.3%，接近半致死率。綜合致死率和突變率的結果，初步判定采用1 000 Gy 劑量60Co-γ 射線進行誘變處理是最有利于篩選出突變體的輻射劑量。

圖2 60Co-γ射線誘變對壇紫菜ZD-1致死率及突變率的影響Fig.2 Effect of 60Co-γ ray mutagenesis on the lethality and mutation rate of N. haitanensis ZD-1

2.1.360Co-γ 射線對Fv/Fm的影響 由圖3可知，隨著輻射劑量的增加，ZD-1 的Fv/Fm呈現(xiàn)先上升后逐漸下降的趨勢。與未輻射組相比，當輻射劑量達到50 Gy時，ZD-1 的Fv/Fm極顯著升高（P<0.01），當輻射劑量達到1 000 Gy 時，F(xiàn)v/Fm顯著降低（P<0.05），當輻射劑量達到1 600 Gy 時，該值下降至最低，為0.13 左右。由此可見，1 600 Gy 的60Co-γ 射線輻射劑量削弱了壇紫菜自由絲狀體的最大光化學量子產量，綜合致死率的指標，判定60Co-γ射線的適宜誘變劑量為1 000 Gy。

圖3 60Co-γ射線誘變對壇紫菜ZD-1 Fv/Fm的影響Fig.3 Effect of 60Co-γ ray mutagenesis on Fv/Fm of N. haitanensis ZD-1

2.2 UV單因子誘變

2.2.1 UV 對致死率和突變率的影響 如圖4 所示，隨著UV照射時間的延長，ZD-1的致死率緩慢增加，突變率持續(xù)上升后下降。在30 min時，ZD-1的致死率為18.7%，突變率為0.008%；在180 min時，致死率和突變率分別增加至51.7%、0.025%，突變率達到峰值，致死率接近50%；在360 min時，突變率下降至0.012%，致死率持續(xù)上升至70.0%。綜合上述結果，初步判定紫外照射時間180 min是最有利于篩選出突變體的處理時間。

圖4 UV誘變對壇紫菜ZD-1致死率及突變率的影響Fig.4 Effect of UV mutagenesis on the lethality and mutation rate of N.haitanensis ZD-1

2.2.2 UV 對Fv/Fm的影響 如圖5 所示，隨著紫外照射時間的延長，未輻射組ZD-1 的Fv/Fm持續(xù)下降，與對照組相比，紫外照射30 min 時，ZD-1 的Fv/Fm顯著降低至0.377，照射時間延長至60 min 時，ZD-1 的Fv/Fm極顯著降低至0.288。照射時間達到360 min時，ZD-1的Fv/Fm降低至最小值0.218，由此可見，長時間的紫外照射減弱了ZD-1的光合作用。綜合致死率指標，判定適宜的UV誘變時長為180 min。

圖5 UV及60Co-γ射線-UV雙因子誘變對壇紫菜ZD-1 Fv/Fm的影響Fig.5 Effect of UV and 60Co-γ-ray and UV two-factor mutagenesis on Fv/Fm of N. haitanensis ZD-1

2.3 EMS單因子誘變

2.3.1 EMS 對致死率和突變率的影響 如圖6 所示，在不同濃度EMS 處理2 h 的誘變條件下，ZD-1 都出現(xiàn)了突變的藻絲，在最低濃度0.1 mol·L-1的處理下，ZD-1 的致死率為4.9%，突變率為0.005%，隨著濃度的增加，ZD-1的突變率先上升后下降，致死率呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，在0.4 mol·L-1誘變處理下，致死率達到峰值，為99.2%，接近全部死亡，因此該濃度不適合作為誘變條件。在0.2 mol·L-1誘變處理下，致死率為46.8%，接近半致死率，突變率由0.1 mol·L-1條件下的0.005%增加至0.032%，初步判定采用0.2 mol·L-1EMS進行誘變是篩選出突變體的有利條件。

圖6 EMS誘變對壇紫菜ZD-1致死率及突變率的影響Fig.6 Effect of EMS mutagenesis on the lethality andmutation rate of N.haitanensis ZD-1

2.3.2 EMS 對Fv/Fm的影響 由圖7 可知，隨著EMS濃度的增加，未輻射組ZD-1 的Fv/Fm逐漸下降。當EMS 的濃度為0.1 mol·L-1時，ZD-1 的Fv/Fm降低至0.380，與對照組相比具有極顯著差異，當EMS 的濃度增加至0.2 mol·L-1時，ZD-1 的Fv/Fm僅為0.004。由此可見，0.2 和0.4 mol·L-1的處理濃度對ZD-1 造成了劇烈的損傷，此濃度不適宜作為誘變篩選的條件。綜合致死率指標，最終判定使用EMS 濃度為0.1 mol·L-1、處理時間為2 h是篩選出突變體的有利條件。

圖7 EMS及60Co-γ射線-EMS雙因子誘變對壇紫菜ZD-1 Fv/Fm的影響Fig.7 Effect of EMS and 60Co-γ-ray and EMS two-factor mutagenesis on Fv/Fm of N. haitanensis ZD-1

2.4 60Co-γ射線-UV雙因子誘變

2.4.160Co-γ 射線-UV 雙因子誘變對致死率和突變率的影響 將輻射劑量為1 000 Gy 的ZD-1 預培養(yǎng)2 個月，作為雙因子誘變的初始藻絲，下一步進行UV照射，由圖8-a 可知，與單因子UV 誘變相似，60Co-γ 射線-UV 雙因子誘變條件下的ZD-1 突變率隨紫外照射時間的延長先增加后減小，UV輻射180 min時，致死率為52%，接近半致死率，突變率比單因子UV在180 min處理下增加至0.082%，表明與單因子誘變相比，雙因子誘變增加了突變的概率，初步判定UV 輻射180 min為60Co-γ 射線-UV 雙因子誘變中UV 的適宜誘變時長。

圖8 雙因子誘變對壇紫菜ZD-1致死率及突變率的影響Fig.8 Effect of double factor mutagenesis on the lethality and mutation rate of N. haitanensis ZD-1

2.4.260Co-γ 射線-UV 雙因子誘變對Fv/Fm的影響60Co-γ 射線和UV 雙因子誘變中，與單因子UV 誘變相似，隨著UV 輻射時間的延長，ZD-1-1 000 Gy 組Fv/Fm呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢（圖5）。UV 輻射30 min 時，ZD-1-1 000 Gy 組的Fv/Fm顯著高于對照組（P<0.01），為0.351，UV 輻射時間為60 min 時，F(xiàn)v/Fm比對照組高0.016，但無顯著差異，隨著UV 輻射時間的增加，F(xiàn)v/Fm持續(xù)下降，UV 輻射180 min 時，F(xiàn)v/Fm低于對照組但無顯著差異，在360 min 時極顯著低于對照組，為0.198，表明持續(xù)的UV 輻射會削弱植物的光合作用。綜合致死率指標，判定UV 輻射180 min 為60Co-γ 射線-UV 雙因子誘變中UV的適宜誘變時長。

2.5 60Co-γ射線-EMS雙因子誘變

2.5.160Co-γ射線-EMS雙因子誘變對致死率和突變率的影響 對雙因子誘變的初始藻絲進行下一步EMS誘變處理，由圖8-b可知，ZD-1的突變率在0.1 mol·L-1的誘變濃度下最大，為0.06%，較單因子EMS 誘變明顯增加，同時，該濃度下的致死率為52.7%，接近半致死率。在0.2 mol·L-1的誘變濃度下，ZD-1的致死率較單因子EMS 誘變增加至66.9%，突變率較單因子EMS誘變增加至0.048%，表明60Co-γ射線和EMS雙因子誘變對ZD-1造成的損傷高于單因子EMS誘變，誘變的效果優(yōu)于單因子EMS誘變，初步判定0.1和0.2 mol·L-1都可作為60Co-γ 射線-EMS 雙因子誘變中EMS 的適宜誘變濃度。

2.5.260Co-γ 射線-EMS 雙因子誘變對Fv/Fm的影響60Co-γ 射線和EMS 雙因子誘變中，隨著EMS 濃度的增加，ZD-1 的Fv/Fm總體呈現(xiàn)下降的趨勢（圖7）。當EMS的濃度為0.1 mol·L-1時，ZD-1-1 000 Gy組的Fv/Fm下降幅度為21%，高于單因子EMS 誘變。當EMS 的濃度為0.2 mol·L-1時，ZD-1-1 000 Gy 組的Fv/Fm下降幅度為73%，F(xiàn)v/Fm達到最低值，為0.039，極顯著低于對照組（P<0.05），表明0.2 mol·L-1的EMS強烈抑制了ZD-1的光合作用。綜合致死率指標，判定0.1 mol·L-1的EMS為60Co-γ 射線-EMS 雙因子誘變中EMS 的適宜誘變濃度。

2.6 壇紫菜突變絲狀體的生長狀況

壇紫菜絲狀體經單因子和雙因子誘變后，繼續(xù)培養(yǎng)，對出現(xiàn)的不同突變特性進行統(tǒng)計，在后續(xù)的培養(yǎng)過程中，有的絲狀體色素突變特性消失，顏色恢復至野生色，有的絲狀體出現(xiàn)新的色素突變特性，有的具有色素突變特性的絲狀體生長停滯，藻絲逐漸變白，最后死亡，突變率有所降低，詳見表1。表明在此培養(yǎng)條件下，有突變特性的藻絲不能達到最佳生長發(fā)育水平，突變表型有所減少。

表1 不同誘變方式處理壇紫菜ZD-1的誘變結果Table 1 Mutagenesis results of N. haitanensis ZD-1 treated with different mutagenesis methods/%

本研究中，60Co-γ 射線、UV、EMS 在其最佳誘變處理條件下達到了最高突變率，分別為0.024%、0.025%、0.032%，表明ZD-1 在單因子EMS 誘變下可以得到較多的突變體。60Co-γ 射線-UV 和60Co-γ 射線-EMS 在其最佳誘變處理條件下達到了最高突變率，分別為0.082%、0.048%，綜合考慮5種誘變方法的突變率，表明ZD-1 在60Co-γ 射線-UV 雙因子誘變下可以得到較多的突變體，提高突變的概率。

2.7 誘變條件與致死率和光合參數的相關性分析

由表2 可知，不同誘變條件與致死率和光合參數之間存在不同程度的相關性。致死率與60Co-γ射線誘變劑量-EMS 濃度呈正相關，與EMS 濃度、UV 照射時間呈顯著正相關，與60Co-γ射線誘變劑量、60Co-γ射線誘變劑量-UV照射時間呈極顯著正相關。光合參數與EMS濃度、UV 照射時間、60Co-γ射線誘變劑量-EMS濃度呈負相關，與60Co-γ 射線誘變劑量-UV 照射時間呈顯著負相關，與60Co-γ射線誘變劑量呈極顯著負相關。

表2 不同誘變條件處理與致死率和光合參數的相關性分析Table 2 Correlation analysis of different mutagenesis conditions with lethality and photosynthetic parameters

60Co-γ 射線誘變劑量-EMS 濃度雙因子誘變與致死率的相關系數為0.987，高于EMS濃度單因子誘變與致死率的相關系數（0.980），60Co-γ射線誘變劑量-EMS濃度雙因子誘變與光合參數的相關系數為0.950，高于EMS 濃度單因子誘變與光合參數的相關系數（0.872）；60Co-γ射線誘變劑量-UV 照射時間雙因子誘變與致死率的相關系數為0.991，高于UV 照射時間單因子誘變與致死率的相關系數（0.949），60Co-γ射線誘變劑量-UV輻射時間雙因子誘變與光合參數的相關系數為0.924，高于UV 單因子誘變與光合參數的相關系數（0.830）。可見，雙因子誘變與光合參數和致死率的相關系數均大于單因子誘變，表明對絲狀體光合作用及存活率影響較大的誘變方式為雙因子誘變，致死率和光合參數可以作為衡量不同誘變效果的參考指標。

3 討論

60Co-γ 射線具有很強的穿透能力，能夠影響細胞體內的各種生理生化反應，改變葉綠體類囊體的基本結構，并調控抗氧化系統(tǒng)，誘導次生代謝物質的累積，從而達到變異效果［20-22］。射線誘變在一定劑量下可以促進生物體的生長發(fā)育，本研究發(fā)現(xiàn)，ZD-1 經不同劑量60Co-γ射線輻射后，出現(xiàn)了不定型細胞和孢子囊枝，說明射線輻射促進絲狀體由營養(yǎng)藻絲向孢子囊枝的轉化，可能是藻絲在不利條件下，傾向于生長繁殖，而非營養(yǎng)生長，這樣的選擇有利于藻絲在逆境環(huán)境下繁殖后代，在生產實踐中可以縮短育苗的時間，具有良好的栽培性狀。這與陳昌生等［23］發(fā)現(xiàn)60Co-γ 射線輻射對壇紫菜自由絲狀體形成的孢子囊枝數量有顯著增加的結果相符。所有誘變處理組絲狀體的致死率均較對照有所上升，推測過高的輻射劑量擾亂了生物體的正常代謝［24-25］。

60Co-γ射線輻射會直接或間接地影響植物體內葉綠素含量，從而在不同程度上影響植物的光合作用［26］。Fv/Fm反映了植物的潛在最大光能轉換效率，可衡量植物是否處在健康的生理狀態(tài)。本研究中，ZD-1Fv/Fm在低劑量（50 Gy）輻射下增加，這與許超麗等［27］發(fā)現(xiàn)40 Gy 的低劑量X 射線輻射能夠提高水稻光合作用的結果一致，推測藻體內多種抗氧化物酶系統(tǒng)在抵御逆境下產生的多種活性氧主要用于維持細胞的正常生理功能和光合作用的代謝；而1 600 Gy 輻射下光合速率下降，推測是由于輻射劑量超過了藻體抵御逆境的最大能力。

EMS 作為化學誘變劑，能誘發(fā)更多基因位點的變異，不同植物對EMS的敏感性存在差異［28］。馬穎超［29］通過設置不同EMS 濃度和時間組合的結果顯示，條斑紫菜絲狀體在0.2 mol·L-1濃度下處理1 h 時致死率超過50%，而本研究中壇紫菜絲狀體在0.2 mol·L-1濃度下處理2 h時接近半致死率，表明誘變的效果與誘變材料和誘變條件有關。

UV照射能夠造成染色體的斷裂隨機分布，使生物體出現(xiàn)較多的染色體結構變異［30］。隨著紫外輻射強度的增加，藻體內部會產生多種活性氧，對藻體的光合器官造成損傷，降低光合參數［31］。本研究中，短時間的UV 照射條件下，21 d 后出現(xiàn)了生長較快的藻絲，這與前人利用紫外線聯(lián)合60Co-γ射線選育出產量高的突變株的研究結果一致［32］。推測是由于低強度的UV 輻射能夠促進藻體的固碳作用［33-34］，使得藻體的生長加快，理論上可以選育出生長較快的藻絲，有利于生產實踐。因此，有待對藻絲進行下一步的培養(yǎng)，觀察研究生長優(yōu)勢是否有可遺傳性。

為提高誘變育種的效果，常采用多種誘變方式組合，最典型的是先進行物理誘變，破壞生物膜的完整性，增大其滲透性，增大生物對化學誘變劑的吸收能力后，再進行化學誘變。理論上物理和化學誘變方式相結合能發(fā)揮各自的優(yōu)勢，更快地獲得有益的突變體［35］。本研究發(fā)現(xiàn)，雙因子誘變的Fv/Fm顯著高于單因子誘變，推測60Co-γ 射線輻射在一定程度上增加了ZD-1 的抗輻射能力，在UV 低時長誘變條件下有了一定的耐受力。雙因子誘變的最大突變率高于單因子誘變，表明雙因子誘變的效果優(yōu)于單因子誘變。這與胡建華等［36］的研究結果一致，即：利用二次重離子誘變選育出的枯草芽孢桿菌核黃素產量比一次誘變提高77.7%。本試驗采用3 種單因子和2 種雙因子誘變方法，得出在輻射劑量為1 000 Gy60Co-γ射線和UV照射180 min雙因子誘變方式下的誘變率最大，為0.082%，表明雙因子誘變可以極大豐富突變的概率，創(chuàng)造多種突變特性，有利于種質的培育，是一種高效的誘變方法。

由于突變特性的表型受環(huán)境影響較大，在后續(xù)的培養(yǎng)條件中易消退。為避免上述情況，一方面需要擴大誘變的數量，盡可能獲得更多有突變特性的絲狀體，一方面需要設置不同的培養(yǎng)溫度和光照，初步探究最適生長條件，保留絲狀體的突變特性，進行擴大培養(yǎng)和研究。此外，由于同一生物的不同生長階段對誘變的敏感性不同，因此本研究具有一定的局限性，有必要對絲狀體的不同生長階段進行研究，從而獲得更加全面、高效、多樣的誘變方法。

4 結論

本研究結果表明，輻射劑量為1 000 Gy 的60Co-γ射線和UV 照射180 min 的雙因子誘變方式可得到較多的突變體，突變率為0.082%，致死率為52%，有良好的突變效應。誘變對ZD-1 造成了損傷，F(xiàn)v/Fm下降至0.270。突變具有一定的非定向性，因此突變后的絲狀體具有不穩(wěn)定性，在后續(xù)的培養(yǎng)過程中，突變率有所下降，適應生長的穩(wěn)定的突變特性將會被保留下來。