芍藥紅斑病病原菌鑒定、生物學(xué)特性及有效藥劑篩選

李培謙 馮寶珍 ，* 趙燕飛 王 琳

（1運(yùn)城學(xué)院生命科學(xué)系，山西 運(yùn)城 044000；2運(yùn)城學(xué)院理科實(shí)驗中心，山西 運(yùn)城 044000；3太原海關(guān)技術(shù)中心，山西 太原 030000）

芍藥（PaeonialactifloraPall.）是中國的傳統(tǒng)名花，品種多、花色豐富、花型多變，被譽(yù)為“五月花神”，具有很高的觀賞價值［1］。芍藥適應(yīng)性強(qiáng)，能露地越冬，各地園林普遍栽培。近年來，因其花期稍長，花色豐富，已成為深受大眾喜愛的切花材料，在國內(nèi)外都有廣闊的市場［2］。另外，芍藥肉質(zhì)根是常用的中藥材［3-4］。近年來，隨著芍藥種植面積的擴(kuò)大和種植品種的增多，病害發(fā)生逐年增多，危害越來越重。芍藥紅斑病，又稱黑斑病、褐斑病，是一種嚴(yán)重危害芍藥葉片、枝干的真菌病害。植株發(fā)病后，葉片及枝干上出現(xiàn)不規(guī)則紅褐色病斑，導(dǎo)致植株光合能力下降，嚴(yán)重影響芍藥長勢及觀賞價值［5-6］。

目前已有很多關(guān)于芍藥病害病原調(diào)查的研究，病害的防治大多采用篩選抗性品種、加強(qiáng)管理等農(nóng)業(yè)措施［7-9］。不同病原物可能引起相似的癥狀，某種植物病害在不同生態(tài)條件、不同地域也可能存在病原菌的差異。關(guān)于芍藥紅斑病病原方面的研究，前人報道的病原包括枝孢屬（Cladosporiumpaeoniae）［7］、二岐枝孢（Dichocladosporiumchlorocephalum）［5］、鏈格孢（Alternaria alternata）［9］等侵染，以及鏈格孢（A.alternata）和細(xì)極鏈格孢（A.tenuissima）復(fù)合侵染［10］，可見不同地域不同生態(tài)條件下，芍藥紅斑病病原菌差異較大。

明確當(dāng)?shù)丶t斑病病原菌并篩選殺菌效果良好的藥劑，對于芍藥紅斑病的科學(xué)防治具有重要意義。因此，本研究以山西省運(yùn)城市舜帝公園發(fā)病芍藥為研究對象，從病株上分離純化病原物，根據(jù)病原菌的形態(tài)學(xué)特征，并利用病原菌多基因，即核糖體基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（rDNA-internal transcribed spacer，rDNA-ITS）、真核延伸因子（translation elongation factors 1α，TEF-1α）以及RNA 聚合酶II 第二大亞基（the second largest RNA polymerase subunit，RPB2）基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定病原菌分類地位，明確病原菌適宜培養(yǎng)基、最適碳源、氮源等生長條件，同時對7 種常用殺菌劑進(jìn)行毒力測定，篩選該病害防治的有效藥劑，以期為運(yùn)城市芍藥紅斑病的有效防控提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 發(fā)病樣品采集

2020年5月至2022年的8月在運(yùn)城市舜帝公園芍藥種植園里選取疑似芍藥紅斑病的植株。記錄其發(fā)病癥狀、發(fā)病部位，拍照后采集發(fā)病樣品，用無菌自封袋封裝并帶回實(shí)驗室，置于4 ℃冰箱中保存待用。

1.2 分離純化病原菌

利用組織分離法分離病原菌［11］。將采集的芍藥發(fā)病組織用清水沖洗并晾干，在病健交界處剪取病變組織，發(fā)病葉片和發(fā)病莖段約5 mm×5 mm 大小，先用75%酒精消毒1 min，再用0.1%的升汞消毒2 min，無菌水沖洗3 遍，置于濾紙上吸干表面水分，接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)5～7 d，待病樣組織周圍長出菌落后，采用單孢分離法對病原菌進(jìn)行純化［12］，至菌落形體一致。純化后，切取帶有培養(yǎng)基的菌絲條，裝入含有少許無菌水的2 mL凍存管，于4 ℃冰箱保存。

1.3 分離菌株的致病性測定

根據(jù)柯赫氏法則，采集大富貴芍藥健康幼嫩莖葉，采用離體接種法進(jìn)行致病性測定［13-14］。首先配制新鮮病原菌孢子懸浮液，調(diào)節(jié)濃度至1×106個·mL-1備用。先用無菌水沖洗再用75%酒精對芍藥健康幼嫩莖葉表面消毒，在葉片或莖稈組織上用無菌注射器制造微創(chuàng)傷口，然后將20 μL 孢子懸液滴在傷口處，以無菌水為空白對照。然后將接種組織置于鋪有濕潤濾紙的無菌培養(yǎng)皿中，25 ℃恒溫培養(yǎng)，每隔24 h 觀察記錄組織發(fā)病情況，待發(fā)病后重新分離病原菌并檢驗形態(tài)特征是否與接種病原一致。

1.4 分離菌株的形態(tài)學(xué)鑒定

從純化后的菌落邊緣挑取少許病原菌菌絲，接種在PDA 平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)5～7 d，每天觀察菌落生長快慢、大小、顏色等特征。待菌絲產(chǎn)孢后，挑取少量菌絲制作裝片，在顯微鏡下觀察分生孢子和分孢梗形態(tài)特征，對孢子形狀、顏色、縱橫隔膜等形態(tài)特征進(jìn)行記錄，測量孢子大小，參考文獻(xiàn)［15-16］的方法確定病原菌種類。

1.5 分離菌株的分子生物學(xué)鑒定

將分離菌株菌絲塊接種于液體馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液（potato dextrose broth，PDB），25 ℃、150 r·min-1條件下震蕩培養(yǎng)5 d 后收集菌絲，根據(jù)基因組DNA 提取試劑盒說明書（北京天根生化科技有限公司）提取基因組DNA。分子鑒定所用引物（表1）由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。根據(jù)文獻(xiàn)［17］所述的方法擴(kuò)增目的基因片段并測序，將獲得的ITS、TEF-1α和RPB2基因序列在NCBI 數(shù)據(jù)庫（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cg）進(jìn)行BLAST比對分析，并上傳至GenBank 數(shù)據(jù)庫（https：//submit.ncbi.nlm.nih.gov/about/genbank）。下載GenBank 中鏈格孢屬參考菌株的相應(yīng)序列，并使用BioEdit 7.0.9.0 軟件［18］將各菌株的3 個基因序列進(jìn)行整合。經(jīng)過軟件CLUSTALX 1.83 進(jìn)行多重序列比對［19］，利用MEGA-X采用鄰接法（neighborjoining methods，NJ）對整合序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹，設(shè)置1 000 次循環(huán)檢驗［20］，選擇囊狀匍柄霉（Stemphylium vesicarium）作為外群，根據(jù)分離菌株與已知菌株的親緣關(guān)系確定其分類地位［17，21］。

表1 分子鑒定所用引物Table 1 Primers for molecular identification

1.6 生物學(xué)特性測定

1.6.1 不同培養(yǎng)基對病原菌菌落生長影響 參照文獻(xiàn)［22-23］中對病原菌生物學(xué)特性的研究方法，將制備好的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA、馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（potato sucrose agar，PSA）、馬鈴薯胡蘿卜瓊脂培養(yǎng)基（potato and carrot agar，PCA）、燕麥培養(yǎng)基（oatmeal agar，OA）、查氏培養(yǎng)基（Czapek’s）、淀粉瓊脂培養(yǎng)基（starch agar，SA）、葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（glucose peptone agar，GPA）、麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基（maltose agar，MA）、酵母浸膏瓊脂培養(yǎng)基（yeast extract agar，YEA）融化后倒在9 cm 培養(yǎng)皿中制成平板。在已活化的病原菌平板邊緣用打孔器打取5 mm菌餅，每平板中央接種一個菌餅，3 個重復(fù)，25 ℃培養(yǎng)7 d后，觀察病原菌在不同培養(yǎng)基上菌落形態(tài)并用十字交叉法測量菌落直徑。

1.6.2 不同碳源、氮源對病原菌菌落生長影響 以查氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基和對照［9］，查氏培養(yǎng)基中的蔗糖分別以等質(zhì)量的可溶性淀粉、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖代替。以硝酸鉀、硝酸銨、硝酸鈣、氯化銨、蛋白胨、牛肉浸膏等質(zhì)量替換查氏培養(yǎng)基中的NaNO3配制成不同氮源培養(yǎng)基。鋪制平板并接種病原菌，按照1.6.1 中的方法分析不同碳源、氮源對菌絲生長的影響。

1.6.3 溫度條件對病原菌菌落生長的影響 按照1.6.1 的方法打取菌餅并接種在PDA 平板上，溫度處理分別設(shè)置為5、10、15、20、25、30、35、40 ℃，每個處理3 個重復(fù)。連續(xù)培養(yǎng)7 d 后，用十字交叉法測量菌落直徑［24］。

1.6.4 不同pH 值對病原菌菌落生長的影響 用1 mol·L-1的HCL 和NaOH 分別將PDA 培養(yǎng)基調(diào)節(jié)其pH值至4、5、6、7、8、9、10、11，鋪制平板，接種病原菌，每處理重復(fù)3皿，25 ℃連續(xù)培養(yǎng)7 d后按照1.6.1的方法測量菌落直徑分析不同pH值對菌落生長的影響［22］。

1.7 不同濃度殺菌劑對病原菌的室內(nèi)毒力測定

1.7.1 含藥平板的制備 選擇7 種目前常用于防治鏈格孢病害的化學(xué)藥劑，將供試藥劑按照表2 濃度稀釋備用。無菌條件下，分別取0.5 mL 各濃度的農(nóng)藥加入49.5 mL 冷卻至60 ℃左右的PDA 培養(yǎng)基中，最終稀釋倍數(shù)如表2所示，混勻后倒入4個培養(yǎng)皿制成含藥平板，以不加農(nóng)藥的PDA平板作為對照［22］。

表2 供試藥劑及其稀釋倍數(shù)Table 2 Different fungicides and their dilution multiple

1.7.2 不同藥劑對病原菌菌絲生長的毒力測定 用直徑為5 mm 的打孔器從活化的病原菌平板邊緣打取菌餅，將其貼在各含藥PDA 平板中央，各供試藥劑及濃度見表2，以加無菌水為空白對照，每處理4次重復(fù)。25 ℃恒溫培養(yǎng)，待7 d后，對照組菌落基本長滿平板，按照1.6.1的方法測量不同藥劑濃度平板上的菌落直徑，參考前人的方法計算各藥劑處理對菌絲生長抑制率和獨(dú)立回歸方程、抑制中濃度（EC50）和相關(guān)系數(shù)［18，25］。

1.8 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，并利用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀

2020—2022 年，連續(xù)兩年在運(yùn)城市舜帝公園和運(yùn)城學(xué)院芍藥種植園調(diào)查發(fā)現(xiàn)，每年6—8 月，芍藥紅斑病發(fā)生嚴(yán)重，危害葉片、莖稈，發(fā)病率達(dá)50%以上。發(fā)病初期，葉片、莖稈上出現(xiàn)黃綠色小點(diǎn)，隨后逐漸擴(kuò)大至圓形或不規(guī)則形病斑，可連片生長，病斑一般發(fā)生在葉脈兩側(cè)或葉片邊緣，病斑中心呈黃褐色透明狀（圖1-a），后期病斑中間成焦枯狀，嚴(yán)重時整個葉片焦枯死亡。受害莖稈初期出現(xiàn)紫紅色的（長）圓形小點(diǎn)，隨后病斑逐漸擴(kuò)展，直至相連成片，病斑長軸擴(kuò)展至1～3 cm，略有凹陷（圖1-b），最后整株凋萎。

圖1 芍藥紅斑病的癥狀Fig.1 Symptoms of peony red spot disease

2.2 病原菌分離及致病性測定

從發(fā)病組織病健交界處隨機(jī)分離病原，經(jīng)形態(tài)初篩主要分離到兩種疑似病原菌，分別選取代表性菌株SY-1、SY-6 制備孢子懸浮液對芍藥健康葉片和莖稈進(jìn)行室內(nèi)接種試驗。結(jié)果表明，2 d后葉片接種處開始出現(xiàn)直徑約3 mm 黑色圓形病斑，5 d后，病斑直徑擴(kuò)展至8～10 mm，病斑中央出現(xiàn)壞死狀；莖稈病斑處呈暗褐色，略有凹陷，周圍有暗紫色擴(kuò)展暈圈，而接種無菌水對照組葉片和莖稈上未見病斑出現(xiàn)。兩病原菌接種后的葉片、莖稈發(fā)病癥狀與田間發(fā)病癥狀相同（圖1-c～e）。從發(fā)病組織上重新分離得到與接種病原菌一致的病原物，因此，確定病原物SY-1和SY-6均為芍藥紅斑病的致病菌。

2.3 病原菌鑒定

2.3.1 形態(tài)學(xué)特征 從發(fā)病芍藥組織上分離到病原真菌12 株，經(jīng)純化和單孢培養(yǎng)，得到兩種疑似病原菌，選取代表菌株SY-1、SY-6，于PDA平板上25 ℃培養(yǎng)培養(yǎng)1～2 d，菌絲呈白色絨毛狀，氣生菌絲發(fā)達(dá)致密，3 d后，SY-6菌落轉(zhuǎn)為灰色至灰黑色、墨綠色，背面黑褐色，菌落隆起呈不規(guī)則圓形（圖2-a）；SY-1菌落初期白色，3 d后轉(zhuǎn)為灰色、灰綠色，菌絲較短，菌落輻射狀生長，無明顯隆起，邊緣顏色略淺，菌落背面灰黑色（圖2-b）。顯微鏡下，SY-1分生孢子倒棒狀、狹長卵形或長橢圓形，淺褐色，約（6.5～7.8）μm×（28.5～35.6）μm，具縱橫隔膜，有細(xì)長柱狀喙或假喙（圖2-d）。SY-6 分生孢子梗暗色直立，分枝或不分枝、長短不一，分生孢子深褐色，有深色縱橫隔膜，分隔處大多具有縊縮現(xiàn)象，呈橢圓形、卵圓形、倒梨形，孢子大小為（6.3～9.6）μm×（9.5～21.6）μm，短喙為淺褐色柱狀或錐狀（圖2-c）。綜合菌落特征和分生孢子形態(tài)，參照《真菌鑒定手冊》［15］及《中國真菌志》［26］初步鑒定SY-6 為鏈格孢（Alternaria alternata），SY-1為細(xì)極鏈格孢（A.tenuissima）。

圖2 芍藥紅病病原菌SY-1和SY-6的菌落形態(tài)及分生孢子特征Fig.2 Colony morphology and conidial characteristics of the pathogen causing red spot disease on peony

2.3.2 多基因序列聯(lián)合分析 以病原菌SY-1 和SY-6 的基因組DNA 為模板，分別用引物對ITS1/ITS4、EF1-728/EF1-986R、RPB2-5F2/RPB2-7cR 進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測序。菌株SY-1的ITS、TEF-1α、RPB2的序列長度分別為573、280、980 bp，測序結(jié)果提交至GenBank（ITS 為OP962320，TEF-1α為OP980552，RPB2為OP980553）；SY-6的ITS、TEF-1α、RPB2的序列長度分別為572、282、978 bp，測序結(jié)果提交至GenBank（ITS為OP962321，TEF-1α為OP980554，RPB2為OP980555）；基于rDNA ITS、TEF-1α和RPB2基因聯(lián)合序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示（圖3），菌株SY-1、SY-6 分別與A.tenuissimaCBS 918.96、A.alternataCBS 130263 聚為一支。結(jié)合病原菌的形態(tài)特征、致病性測定和多基因序列聯(lián)合分析，芍藥紅斑病為鏈格孢菌（A.alternata）和細(xì)極鏈格孢菌（A.tenuissima）復(fù)合侵染引起。

圖3 基于rDNA-ITS、TEF-1α和RPB2 基因序列系統(tǒng)發(fā)育分析Fig.3 Phylogenetic analysis based on multiple sequences of rDNA-ITS，TEF-1α and RPB2

2.4 病原菌的生物學(xué)特性

2.4.1 不同培養(yǎng)基對病原菌生長的影響 病原菌SY-1 和SY-6 在供試培養(yǎng)基上均能生長，其菌落直徑在不同培養(yǎng)基上存在顯著差異（P<0.05）。兩種供試菌株在PDA 和PSA 培養(yǎng)基上菌株生長旺盛，菌落直徑最大，其次是OA、GPA 和MA 培養(yǎng)基，而在PCA、SA、Czapek′s 以及YEA 培養(yǎng)基上生長緩慢，菌落直徑明顯小于其他培養(yǎng)基上的菌落直徑（圖4）。

圖4 不同培養(yǎng)基對病原菌菌株SY-1、SY-6菌絲生長的影響Fig.4 Effects of different media on mycelial growth of strains SY-1 and SY-6

2.4.2 不同溫度對病原菌生長的影響 5～40 ℃的環(huán)境下病原菌都能生長，但溫度為25～30 ℃時病原菌菌絲生長迅速，菌落生長良好，并且菌株SY-1和SY-6均在28 ℃時菌落直徑最大，然而當(dāng)溫度低于5 ℃時或超過35 ℃時菌落生長非常緩慢，說明菌株SY-1 和SY-6生長適宜溫度為25～30 ℃（圖5）。

圖5 溫度對病原菌菌株 SY-1、SY-6菌絲生長的影響Fig.5 Effects of different temperatures on mycelial growth of the isolates SY-1 and SY-6

2.4.3 不同pH 對病原菌生長的影響 如圖6 所示，病原菌菌株生長具有比較寬泛的pH 范圍，pH 值為4.0～11.0 的環(huán)境下均能生長，但是不同pH 值條件下的菌落生長狀態(tài)之間存在顯著差異（P<0.05）。整體來看，兩種菌株適宜生長的pH 值范圍為7.0～8.0，此時，菌落生長良好，菌落直徑最大。

圖6 不同pH下病原菌菌株 SY-1、SY-6菌落大小差異Fig.6 Effects of different pH on mycelial growth of the isolates SY-1 and SY-6

2.4.4 不同碳源、氮源對病原菌生長的影響 碳源測試結(jié)果顯示，病原菌SY-1和SY-6在以麥芽糖、可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基上菌落生長良好，菌落直徑顯著大于以蔗糖為碳源的對照組；以葡萄糖、果糖為碳源的培養(yǎng)基上菌落大小與對照差異不顯著；而以半乳糖和木糖為碳源的培養(yǎng)基上菌落直徑較小，顯著小于對照組（表3）。氮源測試結(jié)果顯示，病原菌SY-1 和SY-6在以NaNO3、蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基上菌落生長良好；在以NH4NO3、NH4Cl、Ca（NO3）2及牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基上菌落生長不良，菌落直徑顯著小于對照組（表3）。上述結(jié)果表明，菌株SY-1和SY-6傾向利用麥芽糖、可溶性淀粉作為碳源，NaNO3、蛋白胨作為氮源。

表3 不同碳源及氮源對菌株SY-1、SY-6菌絲生長的影響Table 3 Effect of different carbon and nitrogen sources on mycelial growth of the strain SY-1 and SY-6

2.5 病原菌對殺菌劑的敏感性

參照抑制率計算公式，得出各藥劑的抑菌情況。室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，病原菌對測試的7 種殺菌劑均表現(xiàn)不同程度的敏感性。由表4 可知，病原菌SY-1對25%吡唑醚菌酯、50%咯菌腈敏感性較好，其EC50<1.0 mg·L-1；對10%苯醚甲環(huán)唑、80%代森錳鋅、30%戊唑醇敏感性次之，為1.0 mg·L-110 mg·L-1。而菌株SY-6 對10%苯醚甲環(huán)唑、25%吡唑醚菌酯、50%咯菌腈敏感性較好，其EC50<1.0 mg·L-1；對80%代森錳鋅、30%戊唑醇敏感性次之，為1.0 mg·L-110 mg·L-1。室內(nèi)測試結(jié)果表明，25%吡唑醚菌酯和50%咯菌腈對芍藥紅斑病菌SY-1、SY-6 的防治效果最佳。

表4 7 種殺菌劑對菌株SY-1、SY-6的室內(nèi)毒力測定結(jié)果Table 4 Determination of the virulence of seven fungicides to Strain SY-1and SY-6 in laboratory

3 討論

紅斑病是芍藥栽培中常見病害，嚴(yán)重影響了芍藥的植株長勢和觀賞價值［5-6］。因此，準(zhǔn)確鑒定該病害的致病菌進(jìn)而篩選有效防治藥劑對芍藥栽培十分重要。本研究對山西運(yùn)城地區(qū)芍藥紅斑病的癥狀進(jìn)行了描述，對紅斑病病原菌進(jìn)行了分離、致病性測定，通過多基因序列聯(lián)合系統(tǒng)發(fā)育分析，明確了芍藥紅斑病的病原菌為鏈格孢（A.alternata）和細(xì)極鏈格孢（A.tenuissima）。本研究病原菌鑒定結(jié)果與李麗等［10］報道的山東地區(qū)芍藥紅斑病病原鑒定結(jié)果一致。但是植株發(fā)病癥狀略有不同：本研究發(fā)病芍藥葉片病斑中心呈黃褐色透明狀，受害莖稈上病斑后期略有凹陷；而山東發(fā)病芍藥葉片病斑圓形或不規(guī)則形，呈現(xiàn)紅色、紅褐色、栗褐色至黑色，莖受害后，病斑從紫紅色至深紅褐色如燒焦?fàn)?，部分凸起，說明同樣的病原菌在不同環(huán)境下，引起的植物癥狀存在差異。芍藥紅斑病可由多種病原菌侵染引起，研究發(fā)現(xiàn)枝孢霉（Cladosporiumpaeoniae）能夠引起芍藥紅斑?。?，27-28］；鏈格孢（A.alternata）［9］、Dichocladosporium chlorocephalum［3］單一侵染也可引起芍藥葉部紅斑病。可見，同一寄主在不同環(huán)境下也會發(fā)生“同癥不同病”現(xiàn)象。

鏈格孢屬（Alternaria）真菌菌落特征、孢子形態(tài)等具有明顯的特征，屬級特征可通過形態(tài)學(xué)鑒定。但是，病原菌小孢子形態(tài)特征容易受寄主植物、環(huán)境條件影響，種級特征變異較大，種類鑒定需要結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和系統(tǒng)發(fā)育分析［26，29］。近年來，人們借助分子生物技術(shù)，利用甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）基因［30］，ITS、抗原相關(guān)蛋白Alt、TEF1-α3 個基因［31］，ITS、Alt、ATPase、His34 個基因［32］或者ITS、tef1、LSU、SSU、GAPDH、RPB26 個基因［33］等構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹來確定分類地位。例如：利用ITS、EF-1ɑ、β-tubulin3個基因聯(lián)合分析鑒定了珠芽魔芋葉斑病菌為細(xì)極鏈格孢（A.tenuissima）［34］。本研究利用ITS、TEF-1ɑ、RPB23 個基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，通過進(jìn)化分支確定病原菌為鏈格孢（A.alternata）和細(xì)極鏈格孢（A.tenuissima）。

病原菌SY-1 和SY-6 對溫度、pH 值、培養(yǎng)基種類等要求不嚴(yán)格，表明病原菌能適應(yīng)較寬的環(huán)境溫度、廣泛的酸堿環(huán)境和多種碳氮源，具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力，這也是病害能夠在運(yùn)城干旱、炎熱的夏季發(fā)生流行的原因。本研究中病原菌的最佳碳源為麥芽糖、可溶性淀粉，最佳氮源為NaNO3、蛋白胨，而青海櫻桃葉斑病鏈格孢（A.alternata）最適為碳源肌醇和乳糖［22］；芒果鏈格孢葉斑病菌（A.tenuissima）最適氮源為KNO3和L-天冬酰胺［35］。這說明鏈格孢（Alternaria）屬不同菌株的最適生長條件不同，其生物學(xué)特性受寄主植物、地域環(huán)境的影響而存在差異。

本研究所選7 種藥劑對病原菌均有不同程度的抑制作用，病原菌對吡唑醚菌酯、咯菌腈敏感性較好，其EC50低于1.0 mg·L-1，對百菌清、異菌脲敏感性較差，其EC50均大于10 mg·L-1，這一結(jié)果為芍藥紅斑病的防治提供了理論數(shù)據(jù)。而本研究結(jié)果僅是室內(nèi)敏感性測定，田間藥劑防治效果還需綜合考慮對芍藥生長的安全性、對環(huán)境的影響及用藥成本等因素，因此還需要進(jìn)一步開展田間防治效果的相關(guān)研究。

4 結(jié)論

芍藥紅斑病由鏈格孢A.alternata和細(xì)極鏈格孢A.tenuissima復(fù)合侵染引起的。該病原菌最適培養(yǎng)基為PSA、PDA，菌絲生長最適溫度為25～30 ℃，最適pH 值為7～8，病原菌最適碳源為麥芽糖和可溶性淀粉，最適氮源為NaNO3和蛋白胨。室內(nèi)毒力測定發(fā)現(xiàn)25%吡唑醚菌酯和50%咯菌腈對病原菌抑制效果良好，可用于芍藥紅斑病化學(xué)防治。