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    三種結(jié)核潛伏感染試驗(yàn)在HIV感染人群中的應(yīng)用評(píng)價(jià)

    2023-07-04 04:54:40周崇興梁大斌黃彥崔哲哲覃慧芳黃莉雯區(qū)進(jìn)葉婧
    中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生 2023年16期
    關(guān)鍵詞:結(jié)核

    周崇興 梁大斌 黃彥 崔哲哲 覃慧芳 黃莉雯 區(qū)進(jìn) 葉婧

    [摘要]?目的?評(píng)價(jià)AIMTB和T-SPOT檢測(cè)方法在人類免疫缺陷病毒(human?immunodeficiency?virus,HIV)感染人群中結(jié)核潛伏感染的診斷效能。方法?收集2022年9~10月在廣西壯族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心門診就診的HIV感染者的血樣標(biāo)本,使用雷德AIMTB、迪奧T-SPOT和凱杰QFT三種方法進(jìn)行檢測(cè),以QFT作為參照對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行診斷效能評(píng)價(jià)。結(jié)果?AIMTB方法檢出陽性率為54.6%,敏感度、特異性分別為84.72%、76.19%;T-SPOT方法檢出陽性率為57.6%,敏感度和特異性分別為88.89%、73.02%。AIMTB方法和T-SPOT方法與QFT方法比較結(jié)果具有一致性(P<0.001)。結(jié)論?AIMTB方法和T-SPOT方法均具有較高的陽性檢出率,與QFT方法的一致性較好,可加大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證及推廣。

    [關(guān)鍵詞]?結(jié)核;γ干擾素釋放試驗(yàn);結(jié)核潛伏感染

    [中圖分類號(hào)]?R446.5??????[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2023.16.006

    Evaluation?of?three?latent?tuberculosis?infection?tests?in?HIV-infected?population

    ZHOU?Chongxing,?LIANG?Dabin,?HUANG?Yan,?CUI?Zhezhe,?QIN?Huifang,?HUANG?Liwen,?Ou?Jin,?YE?Jing

    Guangxi?Zhuang?Autonomous?Region?Center?for?Disease?Control?and?Prevention,?Guangxi?Key?Laboratory?of?Major?Infectious?Disease?Prevention?and?Control?and?Biosafety?Emergency?Response,?Nanning?530028,?Guangxi,?China

    [Abstract]?Objective?To?evaluate?the?effectiveness?of?AIMTB?and?T-SPOT?tests?in?the?diagnosis?of?latent?tuberculosis?infection?in?human?immunodeficiency?virus?(HIV)?infected?population.?Methods?Collect?blood?samples?from?HIV-infected?patients?in?the?outpatient?department?of?Guangxi?Zhuang?Autonomous?Region?Center?for?Disease?Control?and?Prevention?from?September?to?October?2022.?The?blood?samples?were?tested?by?three?methods:?AIMTB,?T-SPOT?and?QFT?test.?The?test?results?were?evaluated?by?diagnostic?tests?with?QFT?as?a?reference.?Results?The?positive?rate?of?AIMTB?was?54.6%,?the?sensitivity?and?specificity?were?84.72%?and?76.19%,?respectively.?The?positive?rate?of?T-SPOT?was?57.6%,?the?sensitivity?and?specificity?were?88.89%?and?73.02%,?respectively.?AIMTB?and?T-SPOT?were?consistent?with?QFT?test?(P<0.001).?Conclusion?AIMTB?and?T-SPOT?have?high?positive?detection?rates,?and?they?are?consistent?with?QFT?test,?which?can?be?further?verified?and?popularized?by?increasing?the?samples.

    [Key?words]?Tuberculosis;?Interferon-γ?release?assay;?Latent?tuberculosis?infection

    結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的呼吸道傳染性疾病,是一種主要致死性傳染病,可對(duì)人體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。據(jù)2019年世界衛(wèi)生組織估算,全球約有17億人感染結(jié)核分枝桿菌,這些感染者以隱性感染為主[1]。中國(guó)是全球結(jié)核病負(fù)擔(dān)最重的國(guó)家之一[2]。結(jié)核潛伏感染者可長(zhǎng)期沒有臨床癥狀,但5%~10%的感染者有發(fā)展為活動(dòng)性肺結(jié)核的風(fēng)險(xiǎn),如果同時(shí)伴有人類免疫缺陷病毒(human?immunodeficiency?virus,HIV)感染,這種風(fēng)險(xiǎn)還會(huì)增加[3-4]。因而,篩查結(jié)核潛伏感染者并進(jìn)行積極有效的干預(yù)或治療,能從源頭上找出結(jié)核病潛在的傳染源并阻止傳播,極大地促進(jìn)結(jié)核病防控,保護(hù)人類健康。目前尚無金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)核潛伏感染進(jìn)行診斷,傳統(tǒng)方法主要使用結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn),該方法受到既往感染或卡介苗等影響,實(shí)際應(yīng)用中有一定的局限性。本研究使用γ干擾素釋放試驗(yàn),選取雷德AIMTB、迪奧T-SPOT和凱杰QFT三種檢測(cè)試劑盒,對(duì)139份納入人群的血樣標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),探討雷德AIMTB和迪奧T-SPOT檢測(cè)方法在結(jié)核潛伏感染中的診斷效能。

    1??資料與方法

    1.1??研究對(duì)象

    選取2022年9~10月在廣西壯族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心門診就診的HIV感染者為研究對(duì)象,在獲得其知情同意后,問詢既往是否做過結(jié)核菌素皮試,既往皮試陽性者納入本研究,既往沒做過皮試或皮試陰性者給予排除,最終共納入139名研究對(duì)象。本研究經(jīng)廣西倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)開展(倫理審批號(hào):GXIRB2019-0017)。

    1.2??方法

    對(duì)139名符合納入標(biāo)準(zhǔn)的研究對(duì)象使用含肝素鋰抗凝劑采樣管采集靜脈血標(biāo)本12ml。

    1.2.1??主要儀器和試劑??酶標(biāo)儀(賽默飛);二氧化碳培養(yǎng)箱(賽默飛);AIMTB試劑盒(雷德);T-SPOT試劑盒(迪奧);QFT試劑盒(凱杰),試劑均在有效期內(nèi)使用。

    1.2.2??AIMTB檢測(cè)??標(biāo)本采集混勻后分別取0.6ml抗凝血分裝至三根細(xì)胞刺激培養(yǎng)管(N、T、P),37℃培養(yǎng)管直立孵育18~22h,1000g離心5min,收集血漿,加入至AIMTB酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)微孔板,按照試劑說明書進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作和結(jié)果判讀。

    1.2.3??T-SPOT檢測(cè)??標(biāo)本按以下步驟分離外周血單個(gè)核細(xì)胞:將等體積RPMI-1640培養(yǎng)液與血標(biāo)本混勻,緩慢移入含有4ml分離液的離心管,1000g離心22min,取云霧層細(xì)胞富集液至含6ml培養(yǎng)液離心管,600g離心7min,棄上清,10ml培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,350g離心7min,棄上清,加入500μl的培養(yǎng)基,混勻細(xì)胞后進(jìn)行計(jì)數(shù),將每個(gè)標(biāo)本的淋巴細(xì)胞稀釋至2.5×106個(gè)/ml。每個(gè)標(biāo)本設(shè)4個(gè)檢測(cè)孔,分別加入50μl陰性對(duì)照、抗原A、抗原B、陽性對(duì)照和100μl稀釋后的細(xì)胞液,CO2培養(yǎng)箱(37℃,5%?CO2)培養(yǎng)16~20h,培養(yǎng)后按試劑說明書進(jìn)行染色和結(jié)果判讀。

    1.2.4??QFT檢測(cè)??標(biāo)本采集混勻后分別取1ml抗凝血分裝至三根細(xì)胞刺激培養(yǎng)管(N、T、M),37℃孵育16~24h,3000g離心15min,收集血漿,加入到QFT-GIT酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)微孔板,按照試劑說明書進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作和結(jié)果判讀。

    1.3??統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS?23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分率)[n(%)]表示,使用Kappa檢驗(yàn)進(jìn)行不同試劑間的一致性比較,對(duì)三種試劑的敏感度、特異性、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值進(jìn)行評(píng)估,陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2??結(jié)果

    2.1??三種結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法的檢測(cè)陽性率

    139份標(biāo)本,AIMTB方法檢出陽性率為54.6%(76/139),不確定2例;T-SPOT方法檢出陽性率為57.6%(80/139),不確定3例;QFT方法檢測(cè)陽性率為51.8%(72/139),不確定4例。AIMTB和T-SPOT兩種方法檢出陽性率均高于QFT方法(c2=56.11,102.03,P<0.001),見表1。

    2.2??一致性檢驗(yàn)

    本研究以QFT方法作為標(biāo)準(zhǔn),AIMTB方法和T-SPOT方法與QFT方法比較結(jié)果具有一致性(P<0.001),見表1。

    2.3??敏感度和特異性檢驗(yàn)

    AIMTB方法的敏感度和特異性分別為84.72%、76.19%,陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為80.26%、78.69%,約登指數(shù)為0.61;T-SPOT方法的敏感度和特異性分別為88.89%、73.02%,陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為80.00%、82.14%,約登指數(shù)為0.62。

    3??討論

    肺結(jié)核是慢性傳染病,由結(jié)核分枝桿菌感染所致,是致死率位居第二的傳染病,也是HIV感染者和抗生素耐藥相關(guān)死亡的主要原因。據(jù)估算,2021年全球新發(fā)結(jié)核病患者1060萬例,HIV感染者占6.7%[5]。我國(guó)是肺結(jié)核負(fù)擔(dān)較高的國(guó)家之一,結(jié)核病防控面臨巨大的壓力和挑戰(zhàn),特別是結(jié)核潛伏感染人群,基數(shù)大且沒有臨床癥狀,5%~10%可發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病患者,如果伴有HIV感染,這個(gè)數(shù)據(jù)還會(huì)增加。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是發(fā)現(xiàn)結(jié)核病患者的主要技術(shù)手段,目前常用于結(jié)核病診斷的檢測(cè)技術(shù)主要有涂片鏡檢、痰培養(yǎng)及分子生物學(xué)等。涂片鏡檢受樣本質(zhì)量、涂片技術(shù)及閱片經(jīng)驗(yàn)的影響,檢出率相對(duì)較低,易發(fā)生漏診,導(dǎo)致患者未得到及時(shí)治療;痰培養(yǎng)同樣受樣本質(zhì)量的影響,只能診斷活動(dòng)性肺結(jié)核且耗時(shí)長(zhǎng),影響結(jié)核病早期診斷,延誤治療;分子生物學(xué)作為結(jié)核分枝桿菌快速試驗(yàn),極大縮短檢測(cè)時(shí)間,可輔助臨床診斷,但需獲得帶菌標(biāo)本,無法檢測(cè)結(jié)核潛伏感染者,同時(shí)需要配套的設(shè)備和試劑價(jià)格昂貴。基于常用檢測(cè)技術(shù)存在的不足,尋找新的結(jié)核病診斷方法及早期快速準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)結(jié)核病患者對(duì)結(jié)核病防控意義重大[6]。γ干擾素釋放試驗(yàn)的原理是人體感染結(jié)核分枝桿菌后,致敏T淋巴細(xì)胞存在于體內(nèi),當(dāng)機(jī)體再次接觸結(jié)核分枝桿菌相應(yīng)抗原時(shí),體內(nèi)致敏T淋巴細(xì)胞迅速活化為效應(yīng)T淋巴細(xì)胞,釋放出高水平的γ干擾素,γ干擾素的釋放程度可作為一項(xiàng)評(píng)估受試對(duì)象是否受到結(jié)核分枝桿菌感染的指標(biāo)[7]。盡管γ干擾素釋放試驗(yàn)也有很多不足,如陽性結(jié)果需要結(jié)合流行病學(xué)資料、影像學(xué)資料和其他醫(yī)療及診斷結(jié)果共同評(píng)估,才能得出正確的診斷結(jié)果;不能區(qū)分是近期獲得的感染還是既往感染的延續(xù);不能區(qū)分潛伏性感染還是活動(dòng)性結(jié)核,但并不妨礙該方法作為結(jié)核潛伏感染的體外診斷技術(shù)逐步推廣,其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì)能更好地輔助結(jié)核病防控,深受各國(guó)青睞。QFT檢測(cè)于2001年在美國(guó)獲得許可,開始作為結(jié)核病感染的體外輔助診斷技術(shù),是全球最早用于輔助診斷結(jié)核分枝桿菌感染的γ干擾素釋放試驗(yàn),也是目前世界衛(wèi)生組織推薦用于結(jié)核潛伏感染的診斷方法[8]。艾滋病群體由于免疫力低下,在接受抗病毒治療后結(jié)核潛伏感染往往被低估;但在中國(guó)西安開展的HIV陽性人群QFT檢測(cè)研究中發(fā)現(xiàn),其陽性率高于傳統(tǒng)檢測(cè)方法,γ干擾素釋放試驗(yàn)更適合在免疫力低下的合并HIV感染人群中開展結(jié)核分枝桿菌潛伏感染檢測(cè)[9]。

    雷德AIMTB是近幾年上市的用于γ干擾素釋放試驗(yàn)的國(guó)產(chǎn)試劑,該試劑選擇在卡介苗和大多數(shù)非結(jié)核普遍缺失的早期分泌抗原6(early?secretory?anti-gen-6,ESAT-6)和培養(yǎng)濾液蛋白10(culture?filtrate?protein?10,CFP-10),通過基因工程技術(shù)修飾后表達(dá)成為刺激抗原,與新鮮采集的抗凝全血混合孵育后,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)特異性釋放的γ干擾素水平,進(jìn)而判定檢測(cè)結(jié)果。本研究顯示AIMTB方法檢測(cè)的陽性率為54.6%,略高于QFT的51.8%。AIMTB采用三聯(lián)管和標(biāo)簽設(shè)計(jì),能夠適應(yīng)大批量樣本檢測(cè)需求,QFT的刺激管需多管標(biāo)記,抗原混勻步驟相對(duì)煩瑣,兩者都使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行后期操作和結(jié)果判讀;AIMTB操作步驟相對(duì)QFT更簡(jiǎn)化,所需樣本量更少,具有一定的優(yōu)勢(shì)。T-SPOT試劑使用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)檢測(cè)經(jīng)結(jié)核特異性抗原ESAT-6、CFP-10肽段庫刺激后外周血單個(gè)核細(xì)胞的γ干擾素釋放,經(jīng)一系列反應(yīng)后斑點(diǎn)顯示判讀結(jié)果。研究發(fā)現(xiàn)T-SPOT是最敏感的檢測(cè)結(jié)核抗原特異性T淋巴細(xì)胞的技術(shù)之一[10]。本研究結(jié)果顯示T-SPOT方法檢出陽性率為57.6%,高于QFT的51.8%。T-SPOT方法檢測(cè)結(jié)果受患者的性別、年齡和免疫狀況等因素影響較小,現(xiàn)廣泛應(yīng)用于臨床預(yù)防性治療的輔助診斷[11-12]。Talati等[13]研究顯示,在HIV感染群體中,CD4細(xì)胞數(shù)的多少與QFT陽性率相關(guān),但與T-SPOT的陽性率無關(guān),這也很好地解釋本研究T-SPOT的陽性率高于QFT的原因。相對(duì)于QFT方法使用三種蛋白(ESAT-6、CFP-10、TB7.7)的混合多肽刺激肝素化全血中的致敏T淋巴細(xì)胞,T-SPOT方法在成本和抗干擾因素方面有一定的優(yōu)勢(shì),但其通過分離液收集淋巴細(xì)胞,且需將淋巴細(xì)胞稀釋至相應(yīng)濃度再進(jìn)行檢測(cè)、人工計(jì)數(shù)和分析,操作方法更為煩瑣,結(jié)果誤差相對(duì)較大。

    以QFT試驗(yàn)作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分析兩種檢測(cè)方法的一致性,AIMTB檢測(cè)方法的Kappa值為0.583,具有中等一致性,T-SPOT檢測(cè)方法的Kappa值為0.625,一致性較高。本研究中T-SPOT方法的敏感度為88.89%,特異性為73.02%,與De?Keyser等[14]研究結(jié)果基本相符。AIMTB的敏感度略低于T-SPOT,特異性略高于T-SPOT。AIMTB方法和T-SPOT方法的陽性預(yù)測(cè)值均能達(dá)到80%,陰性預(yù)測(cè)值均高于78%,兩種方法的診斷價(jià)值較高;兩種方法的約登指數(shù)分別為0.61和0.62,說明兩種方法的檢測(cè)效果較好,真實(shí)性可靠。

    本研究的三種γ干擾素釋放試驗(yàn)均可用于結(jié)核潛伏感染的檢測(cè),主要用于輔助診斷結(jié)核病感染,可較好地區(qū)分非結(jié)核分枝桿菌和結(jié)核分枝桿菌感染,敏感度和特異性均較高,結(jié)果可重復(fù)性強(qiáng),但不能鑒別是否為活動(dòng)性肺結(jié)核[15]。其他分枝桿菌感染(堪薩斯分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、海分枝桿菌等)也可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果陽性,這也給檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性和準(zhǔn)確性帶來挑戰(zhàn)。以世界衛(wèi)生組織推薦的QFT方法作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),AIMTB和T-SPOT方法均有較好的一致性和符合率,但由于“金標(biāo)準(zhǔn)”的缺乏,兩種方法的敏感度和特異性評(píng)價(jià)可能存在偏差[16]。本研究納入的研究對(duì)象為HIV感染者,此類人群免疫力相對(duì)低下,感染結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)增加,這也是檢測(cè)結(jié)果陽性率較高的原因之一。在國(guó)外開展的一項(xiàng)健康人群監(jiān)測(cè)中,γ干擾素釋放試驗(yàn)的陽性率為23%,遠(yuǎn)低于本研究結(jié)果[17]。在HIV感染人群中開展γ干擾素釋放試驗(yàn),能夠盡早發(fā)現(xiàn)雙重感染者,從而盡早開展預(yù)防性用藥或治療,提高患者的生活質(zhì)量,減少結(jié)核病傳播風(fēng)險(xiǎn),降低結(jié)核病病死率。

    [參考文獻(xiàn)][1] World?Health?Organization.?Global?tuberculosis?report?2019[R/OL].?(2019-10-15)[2023-05-24].?https://www.?who.int/publications/i/item/9789241565714.

    [11] 盧青純,?唐小燕,?熊恬園,?等.?T-SPOT.?TB試驗(yàn)在活動(dòng)性結(jié)核診斷中的價(jià)值及其影響因素分析[J].?中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志,?2014,?14(5):?522–526.

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