miR-517在子癇前期患者胎盤外泌體中的表達(dá)及其對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲與T細(xì)胞增殖的影響*

羅 書(shū),李書(shū)明,黃 勇,關(guān)紅瓊

1.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院產(chǎn)科,海南?？?570311;2.海南醫(yī)學(xué)院第二臨床醫(yī)學(xué)院,海南?？?570311;3.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科,海南?？?570311

子癇前期(PE)是妊娠期特有的并發(fā)癥,影響全世界約2%～8%的妊娠女性,是全球孕產(chǎn)婦和圍生期胎兒發(fā)病和死亡的重要原因之一。然而,PE的確切病因和具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚,這導(dǎo)致盡早對(duì)其進(jìn)行診斷和干預(yù)治療仍有困難[1]。近年來(lái),有研究發(fā)現(xiàn),胎盤特異性生物標(biāo)志物19號(hào)染色體微小RNA(C19MC)簇在PE患者的胎盤組織與血漿標(biāo)本中異常表達(dá)[2]。miR-517屬于C19MC簇成員,有研究報(bào)道表明,miR-517在PE患者血漿和血漿外泌體中的表達(dá)均明顯降低,并提示miR-517可能是一種新的胎盤特異性標(biāo)志物,且在妊娠早期,檢測(cè)上述標(biāo)本中miR-517水平具有早期預(yù)測(cè)PE發(fā)生的潛在價(jià)值[3-4]。外泌體是一種直徑在30～150 nm的胞外囊泡,可由包括滋養(yǎng)層細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞分泌,并通過(guò)與靶細(xì)胞膜融合后,釋放多種信號(hào)分子(如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、RNA、DNA、miRNAs等)介導(dǎo)細(xì)胞間通訊[5]。既往有研究表明,外泌體可通過(guò)miRNAs介導(dǎo)免疫調(diào)控與滋養(yǎng)層細(xì)胞的功能而參與妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生與發(fā)展[6],但在PE中,血漿外泌體中miR-517異常表達(dá)的具體作用尚不清楚。因此,本研究通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),旨在進(jìn)一步驗(yàn)證miR-517在胎盤外泌體中的表達(dá)及其相關(guān)作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年5月至2021年5月于海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院確診為PE的患者50例(PE組)和同期于海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院就診的年齡、孕周相近,且無(wú)高血壓、蛋白尿等妊娠相關(guān)并發(fā)癥的50例健康孕產(chǎn)婦作為NP組,兩組孕產(chǎn)婦一般臨床資料如表1所示。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)孕產(chǎn)婦年齡在20～35周歲,妊娠孕周在20～42周;(2)PE患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)按照《婦產(chǎn)科學(xué)》(第9版)[7]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行;(3)兩組孕產(chǎn)婦均經(jīng)陰道分娩,且均為自然單胎妊娠,未合并慢性高血壓、糖尿病、腎臟疾病、傳染病或其他妊娠合并癥。使用含EDTA的抗凝管抽取兩組孕產(chǎn)婦空腹肘靜脈血約7 mL,保存于-80 ℃冰箱用于提取外泌體。同時(shí),在分娩后立即在胎盤中央?yún)^(qū)去除黏膜后,取適量絨毛組織置于RNAlater儲(chǔ)存液中,保存于-80 ℃冰箱用于后續(xù)胎盤RNA的提取。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),所有研究對(duì)象均簽署書(shū)面知情同意書(shū)。

表1 兩組孕產(chǎn)婦一般臨床資料比較

1.2儀器與試劑 人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo(HTR-8)與人T細(xì)胞系Jurkat T細(xì)胞均購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù),RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)、青霉素與鏈霉素混合液購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司,miR-517 mimic與陰性對(duì)照序列(miR-NC)購(gòu)自廣州銳博生物技術(shù)有限公司,轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000購(gòu)自美國(guó)Thermo公司,RIPA細(xì)胞裂解液、BCA蛋白定量試劑盒、CCK-8試劑盒、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗小鼠IgG購(gòu)自江蘇碧云天生物技術(shù)有限公司,TRIzol試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司,RNAlater儲(chǔ)存液、外泌體RNA提取試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)試劑盒SYBRTMGreen Master Mix購(gòu)自美國(guó)Qiagen公司,基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)BD公司,miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自廣州易錦生物技術(shù)有限公司,小鼠抗CD63、腫瘤易感基因101(TSG101)、胎盤堿性磷酸酶(PLAP)、清蛋白抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司,PKH67熒光染料試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,共聚焦顯微鏡(C2+型)購(gòu)自日本Nikon公司,酶標(biāo)儀(ReadMax 1000F型)購(gòu)自上海閃譜生物科技有限公司,Nanosight LM10納米示蹤分析儀器(NS300型)購(gòu)自英國(guó)Malvern公司,超薄切片(JEM-1011型)購(gòu)自日本JEOL公司。

1.3方法

1.3.1細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 采用含10%FBS和100 U/mL青霉素與100 μg/mL鏈霉素混合的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)HTR-8與Jurkat T細(xì)胞,并置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中。每2 d更換一次培養(yǎng)基,4～5 d傳代一次細(xì)胞。取傳至3代以后的HTR-8或Jurkat T細(xì)胞,調(diào)整密度后,按2.5×105/mL接種至6孔板中,待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至60%～80%時(shí),按照轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000使用說(shuō)明書(shū)方法將終濃度為25 nmol/L的miR-517 mimic與miR-NC轉(zhuǎn)染入細(xì)胞中,24 h后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。

1.3.2外泌體的分離 取兩組孕產(chǎn)婦的抗凝肘靜脈血,800×g離心10 min,取上層血漿,加入等量的PBS溶液進(jìn)行稀釋后,4 ℃下3 000×g離心30 min,取上層組織清液,參考文獻(xiàn)[8]方法分離血漿中的胎盤外泌體,將上述組織清液經(jīng)0.22 μm的濾網(wǎng)過(guò)濾后,加入8%聚乙二醇(PEG)6000在4 ℃下孵育過(guò)夜,10 000×g離心20 min后,取底層沉淀物重懸于0.25 nmol/L的蔗糖溶液中,采用蔗糖密度梯度進(jìn)一步離心純化,逐層取出各個(gè)梯度溶液后,加入8%PEG 6000再次于4 ℃下孵育過(guò)夜,10 000×g離心1 h,沉淀物即為所需的胎盤外泌體,200 μL PBS稀釋后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3透射電子顯微鏡(TEM)觀察外泌體形態(tài) 采用TEM觀察外泌體形態(tài),簡(jiǎn)述如下:取5～10 μL新鮮分離的外泌體懸液進(jìn)行超速離心后,4 ℃下在2%多聚甲醛和2.5%戊二醛的固定液中固定1 h,梯度乙醇脫水,隨后浸泡在環(huán)氧樹(shù)脂中過(guò)夜。包埋樣品后,60 ℃下聚合24 h,鉛鈾染色,超薄切片后進(jìn)行TEM觀察。所有切片在80 kV加速電壓下觀察、拍照。

1.3.4納米示蹤技術(shù)(NTA)分析 NTA從光散射和布朗運(yùn)動(dòng)兩個(gè)方面檢測(cè)外泌體的大小分布和濃度。使用PBS溶液將外泌體樣品稀釋至(1～9)×108/mL,采用Nanosight LM10儀器進(jìn)行檢測(cè)。跟蹤每個(gè)樣品30 s,攝像機(jī)設(shè)置為16,其中增益設(shè)置為6.0,閾值設(shè)置為11。記錄外泌體的運(yùn)動(dòng)軌跡。以稀釋后樣品的濃度和粒度分布圖為輸出,計(jì)算外泌體粒徑大小分布與濃度。

1.3.5外泌體的標(biāo)記與攝取 參考PKH67熒光染料試劑盒標(biāo)記外泌體,并采用BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行外泌體定量。取稀釋后的外泌體懸液與PHK67試劑輕輕混勻后,4 ℃下100 000×g離心2 h,取底層沉淀,PBS溶液洗滌2次后,取約100 μg標(biāo)記的外泌體溶液加入提前接種于24孔板中的HTR-8細(xì)胞中,在37 ℃、5%CO2孵箱中孵育24 h,用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察HTR-8細(xì)胞攝取外泌體的情況。

1.3.6細(xì)胞的處理與分組 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HTR-8或Jurkat T細(xì)胞,按實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶⒓?xì)胞分為5組:正常培養(yǎng)的對(duì)照組,轉(zhuǎn)染miR-517 mimic序列的miR-517 mimic組,轉(zhuǎn)染miR-NC序列的miR-NC組,分別與5.0 μg/mL NP-外泌體或PE-外泌體進(jìn)行共同培養(yǎng)的NP-外泌體組或PE-外泌體組。上述各組HTR-8或Jurkat T細(xì)胞置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育48 h,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。

1.3.7CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖 將HTR-8或Jurkat T細(xì)胞按5×103/孔的密度接種至96孔板中,按步驟1.3.1將miR-517 mimic與miR-NC轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中,并按步驟1.3.6的分組進(jìn)行處理后置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),按照CCK-8試劑盒操作方法分別在培養(yǎng)的0、24、48 h后,在酶標(biāo)儀490 nm處檢測(cè)各組細(xì)胞吸光度值(A值)。所有時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞活力以各孔與空白對(duì)照校正后的A值表示,并以0 h的細(xì)胞活力進(jìn)行歸一化處理。

1.3.8Transwell檢測(cè)細(xì)胞的侵襲 在24孔板中采用孔徑為8 μm的Transwell小室檢測(cè)各組HTR-8細(xì)胞的侵襲能力。簡(jiǎn)述如下:在預(yù)先包被BD基質(zhì)膠的小室中加入200 μL含1%FBS和1×106個(gè)細(xì)胞的RPMI-1640細(xì)胞懸液,下室為800 μL含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基,37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育48 h后,取出小室,經(jīng)4 ℃預(yù)冷5%戊二醛固定和0.1%結(jié)晶紫染色后,PBS溶液充分洗滌細(xì)胞2次,顯微鏡下觀察穿出的細(xì)胞數(shù)。

1.3.9qPCR檢測(cè)細(xì)胞與外泌體中miR-517的表達(dá) TRIzol法提取胎盤組織或細(xì)胞中的總RNA,外泌體中總RNA利用外泌體RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行提取。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒All-in-OneTM將總RNA反向轉(zhuǎn)錄為cDNA,然后用SYBRTMGreen Master Mix進(jìn)行qPCR檢測(cè),引物序列如下:miR-517上游:5′-GCCACATCGTGCACCCTTTT-3′,miR-517下游:5′-GTCGTACCAGTGCAGGGTCC-3′,U6上游:5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,U6下游:5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′,以U6為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt方法分析miR-517表達(dá)。

1.3.10蛋白質(zhì)印記法(Western blot)檢測(cè)外泌體標(biāo)志性蛋白CD63、TSG101和胎盤特異性蛋白PLAP的表達(dá) 采用蛋白酶抑制劑和RIPA裂解液在冰上提取外泌體中的總蛋白,4 ℃下,12 000 r/min離心4 min,收集上清液,BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度。取約20 μg蛋白樣品在10%聚丙烯酰胺凝膠電泳上進(jìn)行層析后,濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上,采用5%脫脂奶粉在室溫下封閉抗體1 h后,加入一抗CD63(1∶500)、TSG101(1∶1 000)、PLAP(1∶500)、血清清蛋白(1∶2 000),4 ℃下孵育過(guò)夜,隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(1∶5 000),室溫下孵育2 h后,滴加增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑在凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行顯色、成像,采用Image-Pro Plus 6.0軟件用于蛋白灰度分析。

2 結(jié) 果

2.1miR-517在健康孕產(chǎn)婦和PE患者胎盤組織中的表達(dá) qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示,與NP組比較,miR-517在PE組胎盤組織中的表達(dá)明顯降低(P<0.05),見(jiàn)圖1。

注:與NP組比較,aP<0.05。

2.2miR-517在胎盤外泌體中的表達(dá) TEM與NTA檢測(cè)結(jié)果顯示,來(lái)源于PE組與NP組的胎盤外泌體具有典型的圓盤狀或新月形的雙層膜結(jié)構(gòu),顆粒直徑在30～150 nm,見(jiàn)圖2A、B。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,CD63、TSG101、PLAP在胎盤外泌體中高表達(dá),而血清清蛋白呈低表達(dá),見(jiàn)圖2C。上述結(jié)果符合胎盤外泌體的基本特征,提示成功分離了來(lái)源于PE組與NP組血漿中的胎盤外泌體。qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示,與NP-外泌體組比較,miR-517在PE-外泌體組中的表達(dá)明顯降低(P<0.05),見(jiàn)圖2D。

注:A為TEM觀察外泌體形態(tài);B為NTA檢測(cè)外泌體大小和密度;C為Western blot檢測(cè)CD63、TSG101、PLAP的表達(dá);D為qPCR檢測(cè)miR-517在胎盤外泌體中的表達(dá);與NP-外泌體組比較,aP<0.05。

2.3各組滋養(yǎng)層細(xì)胞中miR-517表達(dá)比較 PKH67標(biāo)記的胎盤外泌體與HTR-8細(xì)胞共培養(yǎng)后,采用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察,結(jié)果表明,胎盤外泌體可被HTR-8細(xì)胞攝取,見(jiàn)3A;qPCR檢測(cè)各組HTR-8細(xì)胞中miR-517表達(dá)的結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,miR-517 mimic組與NP-外泌體組中miR-517表達(dá)明顯升高(P<0.05),miR-NC組與PE-外泌體組miR-517表達(dá)均無(wú)明顯改變(P>0.05);與NP-外泌體組比較,miR-517 mimic組miR-517表達(dá)明顯升高(P<0.05),PE-外泌體組miR-517表達(dá)明顯降低(P<0.05),見(jiàn)圖3B。

2.4各組滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖能力的檢測(cè) CCK-8法檢測(cè)各組HTR-8細(xì)胞增殖能力的結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,miR-517 mimic組和NP-外泌體組細(xì)胞的增殖能力明顯升高(P<0.05),miR-NC組無(wú)明顯改變(P>0.05),PE-外泌體組明顯降低(P<0.05);與NP-外泌體組比較,miR-517 mimic組細(xì)胞增殖能力明顯升高(P<0.05),而PE-外泌體組明顯降低(P<0.05),見(jiàn)圖4。

注:與對(duì)照組比較,aP<0.05;與NP-外泌體組比較,bP<0.05。

2.5各組滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲能力的檢測(cè) Transwell檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,miR-517 mimic組和NP-外泌體組的侵襲細(xì)胞數(shù)明顯增加(P<0.05),miR-NC組無(wú)明顯改變(P>0.05),PE-外泌體組明顯減少(P<0.05);與NP-外泌體組比較,miR-517 mimic組的侵襲細(xì)胞數(shù)明顯增加(P<0.05),PE-外泌體組卻明顯減少(P<0.05),見(jiàn)圖5。

2.6各組Jurkat T細(xì)胞中miR-517的表達(dá)及增殖能力檢測(cè) qPCR檢測(cè)外泌體中miR-517表達(dá)的結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,miR-517 mimic中miR-517表達(dá)表達(dá)明顯升高(P<0.05),miR-NC組無(wú)明顯改變(P>0.05),見(jiàn)圖6A;CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,miR-517 mimic組與NP-外泌體組的Jurkat T細(xì)胞增殖能力明顯降低(P<0.05),miR-NC組無(wú)明顯改變(P>0.05),而PE-外泌體組卻明顯升高(P<0.05);與NP-外泌體組比較,miR-517 mimic組Jurkat T細(xì)胞增殖能力明顯降低(P<0.05),而PE-外泌體組卻明顯升高(P<0.05),見(jiàn)圖6B。

注:A為qPCR檢測(cè)各組Jurkat T細(xì)胞中miR-517表達(dá);B為CCK-8法檢測(cè)各組Jurkat T細(xì)胞的增殖能力;與對(duì)照組比較,aP<0.05;與NP-外泌體組比較,bP<0.05。

3 討 論

PE嚴(yán)重影響母嬰健康,其不僅增加早產(chǎn)和低出生體重兒的風(fēng)險(xiǎn),而且也是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和胎兒死亡的主要原因。同時(shí),PE還使孕產(chǎn)婦和胎兒在遠(yuǎn)期罹患心血管疾病和高血壓的風(fēng)險(xiǎn)明顯升高[1]。miRNA是一類非編碼小RNA分子,可通過(guò)調(diào)控機(jī)體超過(guò)90%的基因表達(dá)而參與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)展。人類胎盤細(xì)胞表現(xiàn)出器官和物種特有的miRNA圖譜,該圖譜在整個(gè)妊娠過(guò)程中不斷變化,對(duì)反映孕產(chǎn)婦和胎兒的健康狀況具有重要意義[3]。C19MC簇是一種獨(dú)特的胎盤特異性生物標(biāo)志物,因其在妊娠期間的血漿外泌體表達(dá)較高而被檢測(cè)到。如C19MC簇中的成員miR-517,在其他組織中表達(dá)極少,但在孕婦血漿(從妊娠早期到足月妊娠)標(biāo)本中的檢出率為100%,提示其表達(dá)變化的檢測(cè)可能具有妊娠相關(guān)疾病的診斷潛力[2,4]。本研究結(jié)果顯示,miR-517在PE患者胎盤組織與胎盤外泌體中的表達(dá)明顯降低,而過(guò)表達(dá)miR-517可促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖與侵襲能力,但可抑制Jurkat T細(xì)胞的增殖。

既往研究表明,在妊娠早期(妊娠12～14周)的血漿標(biāo)本中miR-517表達(dá)的降低對(duì)PE發(fā)展具有較高的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性[2]。同時(shí),近期一項(xiàng)基于血漿外泌體中C19MC簇定量檢測(cè)的回顧性研究發(fā)現(xiàn),妊娠早期血漿外泌體中miR-517表達(dá)降低同樣具有診斷早期PE的潛力,且其診斷準(zhǔn)確性明顯高于孕婦血漿標(biāo)本[4]。這提示,作為C19MC簇的代表性成員,miR-517可能被胎盤細(xì)胞以外泌體的形式釋放至周圍環(huán)境中進(jìn)而調(diào)控多種靶細(xì)胞的功能,參與影響PE的發(fā)生、發(fā)展。如前所述,盡管PE的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,但主流觀點(diǎn)認(rèn)為:滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲能力受損,導(dǎo)致的子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄不足,胎盤血流減少和胎盤功能受損誘導(dǎo)孕婦的炎癥分子和細(xì)胞因子的大量釋放是最終導(dǎo)致系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)和一系列孕婦臨床病理表現(xiàn)的重要機(jī)制[1]。本研究首先比較miR-517在PE患者與健康孕產(chǎn)婦的胎盤組織與胎盤外泌體中的表達(dá)差異,結(jié)果表明,miR-517在PE患者中的表達(dá)明顯降低,這與上述研究結(jié)果一致,均提示miR-517具有作為PE生物學(xué)標(biāo)志物的應(yīng)用潛力[2-4]。然而,miR-517是否調(diào)控PE發(fā)生中具有重要地位的滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲功能尚不清楚。但在腫瘤領(lǐng)域,如在結(jié)直腸癌中,MA等[9]研究表明,在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯升高的miR-517a可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移與侵襲能力而發(fā)揮促癌基因的功能。而在膠質(zhì)瘤中,中藥活性成分柴胡皂苷D可通過(guò)下調(diào)miR-517a的表達(dá),促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,并抑制細(xì)胞的遷移、侵襲與增殖能力,從而在體內(nèi)發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞與組織生長(zhǎng)的作用[10]。鑒于滋養(yǎng)層細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞均具有活躍的增殖與侵襲能力[11],本研究通過(guò)分離來(lái)源于健康孕產(chǎn)婦與PE患者血漿中的胎盤外泌體,在體外實(shí)驗(yàn)中探究miR-517表達(dá)差異的外泌體對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖與侵襲能力的影響。同時(shí),在滋養(yǎng)層細(xì)胞中進(jìn)行過(guò)表達(dá)miR-517進(jìn)一步直接驗(yàn)證miR-517對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞的影響。研究結(jié)果顯示,與PE患者的胎盤外泌體比較,健康孕產(chǎn)婦的胎盤外泌體可明顯促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖與侵襲能力,且過(guò)表達(dá)滋養(yǎng)層細(xì)胞中的miR-517則具有更為明顯的促進(jìn)作用,這提示胎盤外泌體中的miR-517表達(dá)對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖與侵襲能力具有明顯的促進(jìn)作用。

眾所周知,外泌體可被鄰近或遠(yuǎn)處的受體細(xì)胞識(shí)別并內(nèi)化,從而通過(guò)其內(nèi)攜帶的多種生物活性成分誘導(dǎo)后者的功能發(fā)生一系列改變[5]。由于孕婦免疫系統(tǒng)在妊娠期間需要進(jìn)行特定地適應(yīng),以產(chǎn)生對(duì)同種異體胎兒的免疫耐受性,因此免疫細(xì)胞可能是來(lái)源于胎盤外泌體的重要靶目標(biāo),尤其是具有多種亞型與功能的T細(xì)胞[12]。T細(xì)胞的增殖、活化及其釋放的白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-17和其他炎癥細(xì)胞因子對(duì)妊娠具有潛在的危害,并可能參與PE和其他妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生與進(jìn)展[13]。同時(shí),探究胎盤外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)的miRNAs對(duì)PE的早期診斷和治療及理解免疫調(diào)控機(jī)制具有重要意義。因此,為進(jìn)一步探究胎盤外泌體對(duì)T細(xì)胞功能的影響,本研究選取了Jurkat T細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明與來(lái)源健康孕婦的胎盤外泌體比較,PE患者的外泌體能明顯促進(jìn)Jurkat T細(xì)胞的增殖能力,但過(guò)表達(dá)細(xì)胞中的miR-517卻抑制了Jurkat T細(xì)胞的增殖能力,這提示胎盤外泌體中的miR-517表達(dá)對(duì)T細(xì)胞功能可能發(fā)揮下調(diào)作用。而miR-517對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞與Jurkat T細(xì)胞增殖方面的相反作用也證實(shí)了miRNAs功能的異質(zhì)性和細(xì)胞特異性反應(yīng)的假說(shuō)。

綜上所述,在PE患者胎盤組織與胎盤外泌體中表達(dá)下調(diào)的miR-517可能通過(guò)調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖與侵襲和T細(xì)胞的功能參與疾病發(fā)生與進(jìn)展。本研究進(jìn)一步探討了miR-517在PE中的作用及其可能的作用方式,為miR-517成為PE的早期臨床診斷的生物學(xué)標(biāo)志物提供了新的思路與依據(jù)。