抗磷脂酶A2受體抗體在膜性腎病中的診斷價(jià)值和療效評(píng)估*

萬(wàn)智敏,王人柯,黎村艷△

1.湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院/湖南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖南長(zhǎng)沙 410005;2．湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系,湖南長(zhǎng)沙 410006

膜性腎病是腎病綜合征常見(jiàn)病理類型之一,膜性腎病中以特發(fā)性膜性腎病(IMN)為主,約占75%。繼發(fā)于傳染病、實(shí)體器官腫瘤、自身免疫性疾病和某些藥物等引起的膜性腎病稱之為繼發(fā)性膜性腎病,約占膜性腎病的20%～25%[1]。目前臨床對(duì)膜性腎病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為腎組織穿刺活檢,但腎組織穿刺活檢具有血腫、感染及取材不達(dá)標(biāo)等風(fēng)險(xiǎn),臨床應(yīng)用多受限,臨床腎功能常用指標(biāo)存在特異性弱、靈敏度低等缺點(diǎn),對(duì)膜性腎病的診斷價(jià)值低。自JR-BECK等[2]檢測(cè)出抗磷脂酶A2受體(PLA2R)抗體并證實(shí)其與IMN有很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性以來(lái),抗PLA2R抗體在IMN中的研究越來(lái)越多[2-3]。本研究擬通過(guò)檢測(cè)抗PLA2R抗體在不同類型的膜性腎病中的表達(dá)水平,以及與其他腎功能指標(biāo)相結(jié)合來(lái)探究抗PLA2R抗體對(duì)膜性腎病的診斷價(jià)值,有助于臨床對(duì)膜性腎病的診斷、監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究通過(guò)湖南省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。本研究屬于回顧性研究免除患者知情同意書。選取2020-2021年湖南省人民醫(yī)院收治的IMN患者40例作為A組,繼發(fā)性膜性腎病患者10例作為B組,其他腎病患者20例作為C組,體檢健康者20例作為D組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)A組、B組及C組患者符合臨床相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)及診斷結(jié)果[4];(2)A組患者無(wú)其他可繼發(fā)膜性腎病的疾病,如腫瘤、感染、自身免疫性疾病、藥物暴露等;(3)D組采用體檢健康者腎功能檢測(cè)指標(biāo);排除標(biāo)準(zhǔn):(1)臨床診斷不明確者;(2)無(wú)診斷結(jié)果卻已出院者;(3)合并腎臟疾病以外的嚴(yán)重全身系統(tǒng)性疾病者。資料分布:A組男21例、女19例,年齡27～79歲,平均(50.29±6.05)歲;B組男7例、女3例,年齡33～70歲,平均(53.25±9.77)歲,其中細(xì)菌感染相關(guān)性膜性腎病5例,乙型肝炎相關(guān)性膜性腎病3例,狼瘡相關(guān)性膜性腎病1例,腫瘤相關(guān)膜性腎病1例;C組男12例、女8例,年齡16～74歲,平均(49.93±10.62)歲,其中糖尿病性腎病1例,腎囊腫1例,免疫球蛋白(Ig)A腎病3例,腎結(jié)石1例,微小病變型腎病4例,高血壓腎病3例,慢性腎功能不全1例,肥胖相關(guān)性腎病1例,痛風(fēng)性腎病1例,梗阻性腎病1例,紫癜性腎病2例,狼瘡性腎病1例;D組男6例、女14例,年齡25～77歲,平均(42.60±8.12)歲。4組年齡、性別比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2儀器與試劑 全自動(dòng)熒光免疫分析儀(Sprinter XL+Europattern)購(gòu)自歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司,LABOSPECT008AS全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自日本日立公司,抗PLA2R抗體IgG檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))購(gòu)自歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司,清蛋白(ALB)和肌酐(CREA)試劑均購(gòu)自上海科華生物工程股份有限公司,24 h尿蛋白試劑購(gòu)自湖南永和陽(yáng)光生物科技股份有限公司。

1.3方法

1.3.1血清抗PLA2R抗體檢測(cè)方法 采用抗PLA2R抗體IgG檢測(cè)試劑(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))于歐蒙全自動(dòng)熒光免疫分析儀上進(jìn)行試驗(yàn)。(1)標(biāo)本溫育:向反應(yīng)微孔中分別加入100 μL校準(zhǔn)品、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照或稀釋后的標(biāo)本,室溫(18～25 ℃)溫育30 min;(2)清洗:用稀釋后的450 μL清洗緩沖液清洗反應(yīng)微孔3次;(3)酶結(jié)合物溫育:加100 μL酶結(jié)合物至每一微孔,室溫(18～25 ℃)溫育30 min;(4)清洗:棄去微孔板內(nèi)液體,如上述步驟清洗;(5)底物溫育:加100 μL底物液至每一微孔,室溫(25～30 ℃)避光溫育15 min;(6)終止反應(yīng):滴加100 μL終止液至每一微孔;(7)比色:450 nm比色。

1.3.2腎功能指標(biāo)檢測(cè)方法 采用日立全自動(dòng)生化分析儀對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),采用酶法檢測(cè)CREA水平,采用溴甲酚綠法檢測(cè)血清ALB水平,采用比色法測(cè)定24 h 尿蛋白定量(24 h UP)水平。

1.4觀察指標(biāo) 觀察A、B、C、D 4組患者血清抗體陽(yáng)性率(抗PLA2R抗體水平>20 RU/mL即判定為陽(yáng)性),并比較4組腎功能相關(guān)指標(biāo)ALB(正常范圍在30～50 g/L)、CREA(正常范圍在59～104 μmol/L)、24 h UP(正常值<100 mg)水平。

2 結(jié) 果

2.14組抗PLA2R抗體及腎功能相關(guān)指標(biāo)水平比較 A組抗PLA2R抗體水平高于B、C、D 3組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組CREA、ALB、24 h UP水平與B組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),D組ALB水平高于其他3組,CREA水平低于其他3組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 4組抗PLA2R抗體及腎功能相關(guān)指標(biāo)水平比較[M(P25,P75)或

2.2抗PLA2R抗體的診斷效能 A組抗PLA2R抗體陽(yáng)性患者33例,陽(yáng)性率為82.5%。B組抗PLA2R抗體陽(yáng)性患者2例,陽(yáng)性率為20.0%。A組和B組抗PLA2R抗體陽(yáng)性率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);C組和D組抗PLA2R抗體陽(yáng)性率均為0.0%?？筆LA2R抗體對(duì)IMN診斷靈敏度為82.5%,特異度為99.0%,其AUC為0.882。

2.3多因素Logistic回歸分析結(jié)果 將抗PLA2R抗體、ALB、24 h UP及CREA納入多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示高水平24 h UP和抗PLA2R抗體是IMN發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),見(jiàn)表2。

2.4診斷價(jià)值比較 24 h UP和抗PLA2R抗體聯(lián)合檢測(cè)與抗PLA2R抗體單獨(dú)檢測(cè)IMN患者比較,聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.930,大于抗PLA2R抗體單獨(dú)檢測(cè)的AUC(0.882),見(jiàn)圖1。

圖1 聯(lián)合檢測(cè)與抗PLA2R抗體單獨(dú)檢測(cè)IMN患者的ROC曲線圖

表2 多因素Logistic回歸分析結(jié)果

2.5IMN患者抗PLA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP的相關(guān)性研究 結(jié)果顯示抗PLA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP之間不存在線性相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。

2.6IMN患者免疫抑制劑治療前后抗PLA2R抗體水平變化 從IMN患者中收集到8例使用免疫抑制劑治療2～3個(gè)月后病情緩解的患者,治療前抗PLA2R抗體水平為267.68(190.22,450.87)RU/mL,治療后抗PLA2R抗體水平為128.61(35.66,351.09)RU/mL,治療后與治療前比較,水平明顯降低(Z=-2.197,P<0.05)。

3 討 論

目前大多數(shù)的研究認(rèn)為IMN是由于腎小球臟層的上皮細(xì)胞(足細(xì)胞)中抗原表位的暴露,導(dǎo)致原位免疫復(fù)合物的形成,激活補(bǔ)體,最終在局部形成攻膜復(fù)合物,從而導(dǎo)致腎小球臟層損傷的疾病[5-6]。隨著對(duì)抗PLA2R抗體研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)抗PLA2R抗體在IMN診斷中有著較高的特異度和靈敏度,當(dāng)與腎功能常規(guī)指標(biāo)聯(lián)合運(yùn)用時(shí),則可大大提高膜性腎病的診斷效率[7]。因此抗PLA2R抗體在膜性腎病的檢測(cè)中具有廣闊的應(yīng)用前景。

本研究40例IMN患者中抗PLA2R抗體陽(yáng)性率為82.5%,繼發(fā)性膜性腎病患者中抗PLA2R抗體陽(yáng)性率為20.0%,其他腎病患者及體檢健康者抗PLA2R抗體陽(yáng)性率為0.0%,IMN患者抗PLA2R抗體水平高于其他3組,抗PLA2R抗體對(duì)IMN的診斷具有較高的靈敏度,可見(jiàn)抗PLA2R抗體作為靶抗原在IMN的發(fā)病機(jī)制中起重要的作用,與相關(guān)研究結(jié)論大致相同[8-10];有學(xué)者提出抗PLA2R抗體為IMN特有的一項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物[11],所以對(duì)于抗PLA2R抗體和IMN是否存在特異性關(guān)系還需要更多的臨床研究去證實(shí)。本研究中D組ALB水平高于其他3組,CREA水平低于其他3組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這與有關(guān)報(bào)道中膜性腎病患者血清抗PLA2R抗體滴度與患者腎小球?yàn)V過(guò)率、血清總蛋白和ALB等指標(biāo)均呈負(fù)相關(guān)較一致,提示了膜性腎病中抗PLA2R抗體水平越高,腎功能損傷越嚴(yán)重[12]。

抗PLA2R抗體檢測(cè)IMN的靈敏度為82.5%,特異度為99.0%,AUC為0.882,說(shuō)明抗PLA2R抗體對(duì)IMN的診斷具有較高的診斷效能。24 h UP為腎病病理分期和療效評(píng)估的重要指標(biāo),其與抗PLA2R抗體一樣均會(huì)對(duì)IMN產(chǎn)生明顯的影響,且二者聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.930,大于抗PLA2R抗體單獨(dú)檢測(cè)的AUC(0.882),說(shuō)明抗PLA2R抗體和24 h UP的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于診斷IMN具有重要的臨床價(jià)值,與有關(guān)研究報(bào)道類似[13-14]。

本研究中抗PLA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP之間不存在線性相關(guān)關(guān)系,此結(jié)論與部分研究存在差異[15],結(jié)果不同的原因考慮為不同研究之間抽樣的差別,以及研究對(duì)象之間地域的差別。

從IMN患者中收集到8例使用免疫抑制劑治療2～3個(gè)月后病情緩解的患者,治療后與治療前比較,抗PLA2R抗體水平明顯降低(Z=-2.197,P<0.05),與相關(guān)研究結(jié)論較一致[16]。但本研究雖提示抗PLA2R抗體對(duì)IMN療效監(jiān)測(cè)可能存在一定的價(jià)值,但因研究的對(duì)象數(shù)量較少,抗PLA2R抗體對(duì)IMN療效監(jiān)測(cè)的確切價(jià)值還需進(jìn)一步研究。

綜上所述,抗PLA2R抗體是IMN診斷的一項(xiàng)十分重要的檢測(cè)指標(biāo),抗PLA2R抗體比CREA、ALB、24 h UP等腎功能指標(biāo)在對(duì)IMN的判斷上更具有診斷價(jià)值。在臨床上聯(lián)合應(yīng)用抗PLA2R抗體及24 h UP更有利于IMN的診斷?？筆LA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP之間不存在線性相關(guān)關(guān)系?？筆LA2R抗體對(duì)IMN療效監(jiān)測(cè)的價(jià)值還需進(jìn)一步研究。