關(guān)于氣相色譜-外標(biāo)法測定濃香型白酒中己酸乙酯含量的研究

云忠祥　譚亮　冀恬　李玉林　皮立

己酸乙酯是濃香型白酒的主體香，其含量影響著濃香型白酒的品質(zhì)。GB/T10345-2022《白酒分析方法》建議采用內(nèi)標(biāo)法進行己酸乙酯含量的測定，而氣相色譜外標(biāo)法具有簡單、快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定等優(yōu)點，比較適合于大批量白酒中己酸乙酯的測定。為此，本研究利用氣相色譜外標(biāo)法測定濃香型白酒中己酸乙酯含量，并通過外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法對己酸乙酯作出分析比較，結(jié)果表明內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法無顯著性差異，而且使用外標(biāo)法檢測己酸乙酯可以簡化操作步驟，提升檢測效率，符合現(xiàn)代檢測技術(shù)的要求，值得推廣，并建議在國家標(biāo)準(zhǔn)中增加外標(biāo)法測定白酒中己酸乙酯的方法。

一、試劑與儀器

1.試劑。己酸乙酯（色譜純，純度≥99.9%；CSA號：123-66-0；批號：E808752-100mL），上海麥克林生化科技有限公司；乙酸正戊酯（色譜純，純度≥99.7%；CSA號：628-63-7；批號：R109075-100mL），上海麥克林生化科技有限公司；乙醇（色譜純，純度≥99.9%；CSA號：64-17-5；批號：20221013306），山東禹王新材料科技有限公司。

2.儀器。AgilentGC-7890B氣相色譜，配有7683自動進樣器、氫火焰離子化檢測器FID，美國安捷倫公司；梅特勒-托利多MS205DU精密電子天平，瑞士MettlerToledo公司；QL-861渦旋振蕩器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；高純氮氣（純度≥99.999%）、高純氫氣（純度≥99.999%）、GA-2000A低噪音空氣泵，北京中興匯利科技發(fā)展有限公司。

二、試驗與方法

1.溶液配制。（1）己酸乙酯儲備液25000mg/L，準(zhǔn)確稱取2.50g己酸乙酯至100mL容量瓶中，用乙醇溶液（50%）定容至刻度，混勻備用。（2）乙酸正戊酯儲備液20000mg/L，準(zhǔn)確稱取2.00g乙酸正戊酯至100mL容量瓶中，用乙醇溶液（50%）定容至刻度，混勻備用。（3）分別吸取己酸乙酯0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.6mL、3.2mL于5個10mL容量瓶中，用乙醇溶液（50%）定容，充分混勻，配制成250mg/L、500mg/L、1000mg/L、2000mg/L、4000mg/L、8000mg/L的系列工作液，混勻備用。內(nèi)標(biāo)法己酸乙酯系列標(biāo)準(zhǔn)工作液需要在定容后加入0.1mL乙酸正戊酯內(nèi)標(biāo)溶液，混勻備用。

2.氣相色譜條件。進樣口溫度：250℃；檢測器溫度：250℃；進樣量：1μL；分流比：1：37；載氣：氮氣；柱流速：1mL/min；色譜柱程序升溫：35℃（保持4min），以5℃/min升溫至60℃（保持4min），以10℃/min升溫至150℃（保持2min），再以15℃/min升溫至210℃（保持6min）；色譜柱：LZP-930白酒分析專用柱（柱長60m×內(nèi)徑0.53mm×膜厚0.25mm）。

3.樣品測定。吸取酒樣于10mL容量瓶中，內(nèi)標(biāo)法需要在樣品中加入0.1mL乙酸正戊酯內(nèi)標(biāo)溶液，混勻測定。外標(biāo)法按上述色譜條件將標(biāo)液測定，以保留時間定性己酸乙酯，以濃度為縱坐標(biāo)、己酸乙酯的峰面積為橫坐標(biāo)作一曲線。內(nèi)標(biāo)法己酸乙酯系列標(biāo)準(zhǔn)工作液需要在定容后加入0.1mL乙酸正戊酯內(nèi)標(biāo)溶液，以濃度為縱坐標(biāo)、己酸乙酯的峰面積與乙酸正戊酯的峰面積之比為橫坐標(biāo)作一曲線。白酒樣品直接進行6次樣品平行分析。

三、結(jié)果與分析

1.己酸乙酯的色譜分析圖。外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法測定白酒中己酸乙酯的色譜圖詳見圖1。在采用內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法時，己酸乙酯的保留時間均為16.401min，乙酸正戊酯的出峰時間為13.656min，其特征峰明顯，兩者互不干擾，分離度好。

根據(jù)檢測結(jié)果做線性回歸分析，并得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，以信噪比為3（S/N=3）計算檢出限，線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限詳見表1。結(jié)果表明，己酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線具有很好的線性關(guān)系，其檢出限遠低于該目標(biāo)物在所檢測白酒中的含量，能夠滿足濃香型白酒中己酸乙酯的檢測要求。

2.內(nèi)標(biāo)法分析結(jié)果。選取六種不同濃度的濃香型白酒，每個樣品平行取6次平行樣進行測定，內(nèi)標(biāo)法分析結(jié)果詳見表2。

3.外標(biāo)法分析結(jié)果。選取6種不同濃度的濃香型白酒，每個樣品平行取6次平行樣進行測定，外標(biāo)法分析結(jié)果詳見表3。從兩種測定方法對6種不同濃度的白酒的檢測結(jié)果來看，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）范圍均小于1%，符合日常檢測要求，說明兩種檢測方法的準(zhǔn)確度差別不大。

4.精密度和回收率試驗。方法的精密度以測定待測組分含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來評價。將6種濃香型白酒進行6次樣品平行分析，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果表明，己酸乙酯相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.3%-0.78%，說明外標(biāo)法具有良好的精密度。

方法的準(zhǔn)確度是通過待測組分在不同濃度下的回收率來評價。選取白酒樣品2#和5#，以白酒平行6次樣品分析的結(jié)果平均值作為本底值，添加與樣品含量相當(dāng)?shù)乃綕舛?，對加?biāo)樣品進行平行6次測定，分析結(jié)果詳見表4。由表4可知，回收率為98%-103%，符合GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》的要求，說明本方法的測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

5.內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法的結(jié)果比較。選取不同濃香型白酒樣品，分別按外標(biāo)法與內(nèi)標(biāo)法進行比對實驗，結(jié)果見表5。根據(jù)表6的數(shù)據(jù)進行兩種方法成對數(shù)值之間的t分布檢驗，看其在95%的置信度水平中是否存在顯著性差異。

兩方法絕對差值的平均值dˉ=（0.0035+ 0.002+0.001+0.001+（-0.001）+0.002+（-0.002））/6=0.00075；0.0015；t==1.23。查t分布表可知：當(dāng)自由度n=6、置信度為0.95時，t（6，0.95）=1.94，實際t值小于t（6，0.95），故兩種方法之間無顯著性的差異。因此，采用外標(biāo)法測定濃香型白酒中的己酸乙酯也能取得很好的分析結(jié)果。

基金項目：青海省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項目“青海牦牛肉風(fēng)味組學(xué)及其相關(guān)基因挖掘”（2020-ZJ-753）。

作者簡介：云忠祥（1990-），男，回族，青海大通人，助理工程師，碩士研究生，研究方向為檢驗檢測技術(shù)。

通信作者：皮立（1972-），男，漢族，江西樟樹人，副研究員，博士，研究方向為食品分析技術(shù)。