• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    杏鮑菇液體發(fā)酵沛縣黃皮牛蒡?qū)Χ嗵呛坑绊懙难芯?/h1>
    2023-06-21 06:06:38董玉瑋朱曹凱顧鑫玥馮星星胡傳銀秦琰琪
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2023年9期
    關(guān)鍵詞:裝液牛蒡發(fā)酵液

    董玉瑋,朱曹凱,顧鑫玥,李 超,馮星星,胡傳銀,秦琰琪

    (1. 徐州工程學(xué)院食品與生物工程學(xué)院,江蘇徐州 221018;2. 徐州天馬敬安食品有限公司,江蘇徐州 221747;3. 沛縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,江蘇 徐州 221600)

    牛蒡是菊科兩年生植物,也被人們稱為蒡翁菜,主要種植于北歐和中國(guó)浙江、河北以北、江蘇江北及東北等地區(qū)[1]。牛蒡中含有蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、纖維素、糖類,以及各種氨基酸和維生素,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[2]。同時(shí),牛蒡根還具有較好的藥用功能,能降血脂、降血壓、清理腸道、增強(qiáng)人體調(diào)節(jié)免疫能力[3-4]。

    杏鮑菇(Pleurotus abalone) 又名刺芹側(cè)耳,屬無隔擔(dān)子菌亞綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬。杏鮑菇因其口感和鮑魚類似,且有著杏仁的香味而得名[5]。杏鮑菇多分布于歐洲、非洲的北部和亞洲的部分地區(qū)。杏鮑菇營(yíng)養(yǎng)組分豐富,含有人體所需的微量元素,其營(yíng)養(yǎng)成分主要有糖類、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)元素等,能有效調(diào)節(jié)機(jī)體代謝水平,改善機(jī)體性能[6]。其中,杏鮑菇多糖作為杏鮑菇的主要提取物之一,可以有效提高機(jī)體免疫力,促進(jìn)機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)均衡吸收,對(duì)病菌、腫瘤等有較強(qiáng)地抑制作用[7-8]。

    液體發(fā)酵技術(shù)作為現(xiàn)代生物技術(shù)的重要組分之一,是利用微生物生長(zhǎng)速度快、生長(zhǎng)所需條件簡(jiǎn)單等特點(diǎn),使微生物在合適的條件下大量生產(chǎn)、繁殖、代謝,生產(chǎn)出人們所需求的菌株或代謝中產(chǎn)物的過程[9]。其中,食用菌液體發(fā)酵與固體發(fā)酵相比,產(chǎn)量較高、成本更低、發(fā)酵周期短,具有更高的經(jīng)濟(jì)效益[10]。

    牛蒡根中含有大量纖維素,同時(shí)含有蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素,少量的綠原酸、多糖。微生物,尤其是一些藥食真菌,比如營(yíng)養(yǎng)、保健價(jià)值較高的杏鮑菇、靈芝、毛木耳、茶樹菇等,具有分解、利用纖維素的能力,牛蒡中含有的蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)等也可作為菌種生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)成分,有助于充分利用牛蒡、食用菌等資源。該研究采用牛蒡根作為培養(yǎng)基,以杏鮑菇液體發(fā)酵牛蒡根,提取并檢測(cè)發(fā)酵液中的多糖,探討影響多糖含量的因素,為牛蒡、藥食真菌精深加工提供了技術(shù)支撐,具有較好的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料、試劑和儀器

    1.1.1 試驗(yàn)材料和試劑

    沛縣黃皮牛蒡,徐州天馬敬安食品有限公司提供;杏鮑菇菌種,實(shí)驗(yàn)室保存的高活性杏鮑菇菌種。

    葡萄糖、硫酸亞鐵、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、瓊脂、濃硫酸、95%乙醇等試劑,南京晚晴化玻儀器有限公司提供。

    1.1.2 試驗(yàn)儀器

    HBT-DV24-566B 型蒸汽滅菌鍋,華東強(qiáng)劍工業(yè)裝備公司產(chǎn)品;FGY-856YU 型冰箱徐州美的電器產(chǎn)品;DC14962 型電子天平,南通南方六島貿(mào)易有限責(zé)任公司產(chǎn)品;LL.R98.402-H-II 型恒溫培養(yǎng)箱,上海富強(qiáng)儀器制造公司產(chǎn)品;GH-XC-5P 型潔凈紫外工作臺(tái),無錫純潔設(shè)備有限責(zé)任公司產(chǎn)品;F48692型可見分光光度計(jì),江蘇山岳科技有限公司產(chǎn)品。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 培養(yǎng)基配方

    PDA 培養(yǎng)基:20%馬鈴薯,2%葡萄糖,0.3%KH2PO4,0.3%酵母膏,0.15%MgSO4,2%瓊脂。

    牛蒡液體培養(yǎng)基:1%~5%去皮牛蒡塊,大小0.1~0.2 cm3,1%酵母膏,按比例加水配制,高壓滅菌后備用。

    1.2.2 菌種的活化與液體培養(yǎng)

    使用PDA 培養(yǎng)基活化杏鮑菇菌種,于27 ℃下恒溫培養(yǎng)6 d。

    液體培養(yǎng):將活化后的杏鮑菇菌株接種到配置好的牛蒡液體培養(yǎng)基中,置于28 ℃條件下,以轉(zhuǎn)速120 r/min 培養(yǎng)5~7 d。

    1.2.3 單因素試驗(yàn)

    為研究牛蒡液體培養(yǎng)基對(duì)發(fā)酵杏鮑菇菌株的影響,該試驗(yàn)設(shè)計(jì)3 個(gè)單因素,分別為牛蒡含量、溫度、裝液量,主要考查各因素對(duì)杏鮑菇多糖的產(chǎn)量的影響,試驗(yàn)做3 次,取平均值。

    (1) 牛蒡含量。分別向裝有100 mL 牛蒡液體培養(yǎng)基的三角瓶中加入1%,2%,3%,4%,5%的牛蒡,高壓滅菌20 min 后,無菌接種,在28 ℃搖床中以轉(zhuǎn)速120 r/min 培養(yǎng)5~7 d。

    (2) 溫度。5 個(gè)裝有100 mL 牛蒡液體培養(yǎng)基的三角瓶中,均含有質(zhì)量體積比3%的牛蒡,高壓滅菌20 min 后,無菌接種,分別放入溫度為24,26,28,30,32 ℃的搖床中,以轉(zhuǎn)速120 r/min 培養(yǎng)5~7 d。

    (3) 裝液量。向5 個(gè)三角瓶中分別加入60,80,100,120,140 mL 的質(zhì)量體積比3%的牛蒡液體培養(yǎng)基,高壓滅菌20 min 后,無菌接種,在溫度為28 ℃的搖床中,以轉(zhuǎn)速120 r/min 培養(yǎng)5~7 d。

    1.2.4 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    在單因素試驗(yàn)后,取最優(yōu)結(jié)果及附近的一共3 組數(shù)據(jù),使用Design Expert 8.05b 軟件,設(shè)計(jì)方案,并按照軟件給出的方案進(jìn)行試驗(yàn),得出結(jié)果。

    試驗(yàn)的因素與水平設(shè)計(jì)見表1。

    表1 試驗(yàn)的因素與水平設(shè)計(jì)

    1.2.5 多糖的提取及測(cè)定[11-12]

    (1) 粗多糖的提取方法。將發(fā)酵完成的培養(yǎng)基離心取上清,置于50 ℃的烘箱中濃縮至原體積的1/5,向其中加入5 倍體積的95%乙醇溶液,置于4 ℃冰箱中過夜,次日離心取沉淀,烘干后所得即為杏鮑菇粗多糖。

    (2) 粗多糖的純化。將杏鮑菇多糖的粗提物用10 mL 純水溶解,并向其中加入多糖溶液體積1/4~1/3 的Sevag 試劑(氯仿- 正丁醇4∶1 的混合液),將其倒入分液漏斗中,上下振蕩15~20 min 后,靜置分層,倒出下層廢液,將上清液以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心15 min,取上清液,重復(fù)上述操作,直至沒有蛋白質(zhì)析出,將上清液收集備用。

    取一段截流分子量為6 000~8 000 的半透膜袋,置于沸水鍋中煮5 min,用純水將半透膜沖開,封住半透膜一側(cè),將收集的上清液倒入其中,將另一端也封好,將處理好的透析袋懸掛于裝有蒸餾水的燒杯中,打開磁力攪拌器,每2 h 換一次水,透析1~2 d,最終得到的樣品即為杏鮑菇的精多糖溶液,烘干可得多糖樣品。

    (3) 多糖含量的測(cè)定。苯酚硫酸法測(cè)多糖:向多糖樣品中加入100 mL 純水溶解,取2 mL 加于試管中,另取一空試管加入2 mL 蒸餾水,向其中加入1 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的苯酚溶液和5 mL 濃硫酸,搖勻后靜置5 min,置于100 ℃的水浴鍋中水浴15 min,冷卻至室溫,并于波長(zhǎng)490 nm 處測(cè)量樣品吸光度,并根據(jù)回歸方程計(jì)算多糖含量。

    1.2.6 高效液相色譜法檢測(cè)多糖中單糖組分

    稱取適量的凍干多糖樣品,加入濃度為2 mol/L的三氯乙酸(TFA) 溶液0.5 mL,置于120 ℃下水解120 min,用氮吹儀吹干。

    向試管中加入5 μL 單糖標(biāo)準(zhǔn)品,混勻。加入濃度為2 mol/L 的三氯乙酸(TFA) 溶液0.5 mL,與樣品同時(shí)在120 ℃條件下水解120 min,再用空氣泵吹干。向處理后的單糖樣品中加入溶于無水甲醇的0.5 mol/L的1- 苯基-3- 甲基-5- 吡唑啉酮(PMP) 試劑和0.3 mol/L 的氫氧化鈉溶液各0.5 mL,混勻,置于70 ℃中水浴30 min。冷卻至室溫,加入0.3 mol/L HCl 溶液0.5 mL,混勻。加入氯仿0.5 mL,充分振蕩萃取,置于5 000 r/min 的離心機(jī)中離心5 min去除氯仿層,共萃取3 次。水層(不低于0.4 mL)用0.22 μm 濾膜過濾后,待上機(jī)。

    儀器條件:色譜柱:SHISEIDO C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動(dòng)相為0.1 mol/L pH 值6.8 磷酸鹽緩沖液(PB),乙腈為82∶18(V/V),流速為1.0 mL/min,柱溫為25 ℃,進(jìn)樣量10 μL,波長(zhǎng)為245 nm。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    所有的數(shù)據(jù)都用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S) 來表示,Origin 9.0 軟件繪圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗(yàn)

    2.1.1 不同牛蒡含量對(duì)杏鮑菇多糖質(zhì)量濃度的影響

    牛蒡含量對(duì)發(fā)酵液中多糖質(zhì)量濃度的影響見圖1。

    圖1 牛蒡含量對(duì)發(fā)酵液中多糖質(zhì)量濃度的影響

    由圖1 可知,當(dāng)牛蒡含量為1%~5%時(shí),發(fā)酵液多糖含量會(huì)隨著牛蒡含量的變化而變化,多糖質(zhì)量濃度先逐漸升高,在牛蒡含量為3%時(shí),達(dá)到最大值,為2.38 mg/mL,隨著牛蒡含量的再度升高,多糖質(zhì)量濃度則呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

    2.1.2 裝液量的確定

    裝液量對(duì)發(fā)酵液中多糖質(zhì)量濃度的影響見圖2。由圖2 可知,當(dāng)裝液量體積為60~140 mL 時(shí),發(fā)酵液多糖質(zhì)量濃度會(huì)隨著裝液量的變化而變化,多糖含量先逐漸升高,在裝液量為100 mL 時(shí),達(dá)到最大值,為2.41 mg/mL ,隨著裝液量的再度升高,多糖質(zhì)量濃度則呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

    圖2 裝液量對(duì)發(fā)酵液中多糖質(zhì)量濃度的影響

    2.1.3 溫度的確定

    溫度對(duì)發(fā)酵液中多糖質(zhì)量濃度的影響見圖3。

    圖3 溫度對(duì)發(fā)酵液中多糖質(zhì)量濃度的影響

    由圖3 可知,當(dāng)溫度為24~32 ℃時(shí),發(fā)酵液多糖質(zhì)量濃度隨溫度的變化而變化,多糖質(zhì)量濃度先逐漸升高,在溫度為28 ℃時(shí),達(dá)到最大值,為2.39 mg/mL,隨著溫度的再度升高,多糖質(zhì)量濃度則呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

    2.2 Box-behnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    Box-behnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及通過具體試驗(yàn)得到的多糖含量的預(yù)測(cè)值與實(shí)際值。

    設(shè)計(jì)方案和結(jié)果見表2。

    表2 設(shè)計(jì)方案和結(jié)果

    2.3 回歸方程的建立和方差分析

    對(duì)上表中的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析,可得三因素裝液量(X1)、溫度(X2)、牛蒡含量(X3) 的回歸方程:

    試驗(yàn)結(jié)果的方差分析見表3,杏鮑菇多糖質(zhì)量濃度預(yù)測(cè)模型的可靠性分析見表4。

    表3 試驗(yàn)結(jié)果的方差分析

    表4 杏鮑菇多糖質(zhì)量濃度預(yù)測(cè)模型的可靠性分析

    由表3、表4 可知,該模型的p 值<0.01,所以該模型具有極顯著影響;此外,該模型的失擬向p值>0.05,不具備顯著影響。X1和X3的p 值<0.01,反映出X3和X1對(duì)多糖質(zhì)量濃度的變化有著極顯著影響,而X2的p 值<0.05,說明溫度水平變化對(duì)多糖質(zhì)量濃度有著顯著影響;最后,X2X3的p 值>0.05,表明溫度和牛蒡含量交互作用對(duì)多糖質(zhì)量濃度影響不顯著,X1X3的p 值<0.01,表明裝液量和牛蒡含量的交互作用對(duì)多糖質(zhì)量濃度的影響極顯著,而X1X2的p 值>0.05,說明裝液量和溫度進(jìn)行交互作用對(duì)多糖質(zhì)量濃度無顯著影響。模型決定系數(shù)R2為0.999 1,經(jīng)校正后的決定系數(shù)R2Adj為0.998 0,由此可得知該模型的擬合程度較好,具有可靠性。

    2.4 因素間的交互作用分析

    使裝液量、溫度、牛蒡含量3 個(gè)影響因素中的一個(gè)保持不變,在此基礎(chǔ)上分析其他2 個(gè)因素的交互作用對(duì)多糖質(zhì)量濃度的影響,得到的等高線及響應(yīng)面圖。

    裝液量、溫度和牛蒡含量?jī)蓛芍g交互作用對(duì)多糖含量影響的等高線圖和三維圖見圖4。

    圖4 裝液量、溫度和牛蒡含量?jī)蓛芍g交互作用對(duì)多糖質(zhì)量濃度影響的等高線圖和三維圖

    由圖4 可知,等高線與圓形越接近,說明對(duì)多糖質(zhì)量濃度的影響越小,由此可以得知,這3 個(gè)因素兩兩之間交互作用中,裝液量和牛蒡含量的交互作用對(duì)多糖質(zhì)量濃度影響最大。

    除此以外,3 個(gè)曲線都呈拋物線形,單個(gè)因素影響程度的大小可以通過響應(yīng)面圖中曲線的變化幅度來判斷,曲線越陡,說明這個(gè)因素影響程度越大,由此可以得知3 個(gè)因素的影響程度大小依次為裝液量>牛蒡含量>溫度,因此試驗(yàn)的優(yōu)化方法具有可行性。

    2.5 優(yōu)化后的最佳條件及結(jié)果

    通過對(duì)上面數(shù)據(jù)的分析,可以對(duì)牛蒡杏鮑菇液體發(fā)酵工藝條件進(jìn)行改良,得到最佳提取工藝為牛蒡含量占總裝液量3%,裝液量為100 mL,溫度為28 ℃時(shí),得到的多糖質(zhì)量濃度最大為2.39 mg/mL。

    2.6 多糖中單糖組分的檢測(cè)

    杏鮑菇多糖單糖組分含量結(jié)果見表5。

    表5 杏鮑菇多糖單糖組分含量結(jié)果/mg·kg-1

    結(jié)果表明,發(fā)酵液多糖單糖組分包含甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖。譚霄等人[13]采用高效液相色譜- 蒸發(fā)光散射法分析測(cè)定杏鮑菇多糖的單糖組成,發(fā)現(xiàn)杏鮑菇多糖中含有甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖,與此次測(cè)定相比多了核糖、鼠李糖和巖藻糖。發(fā)酵液多糖單糖組分含量中,葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖含量較高,其中葡萄糖的含量最高。薛令坤等人[14]研究杏鮑菇多糖發(fā)現(xiàn),葡萄糖含量較甘露糖、半乳糖含量高,與該研究結(jié)果基本一致。

    3 結(jié)論

    (1) 通過單因素試驗(yàn),可以得出當(dāng)培養(yǎng)基中牛蒡含量達(dá)3%時(shí),多糖質(zhì)量濃度最高為2.38 mg/mL,裝液量為100 mL 時(shí),多糖質(zhì)量濃度達(dá)到最大值為2.41 mg/mL,培養(yǎng)溫度為28 ℃時(shí),多糖質(zhì)量濃度達(dá)到最大值為2.39 mg/mL。

    (2) 采用響應(yīng)面方法優(yōu)化后,得出最佳方案為牛蒡含量3%,裝液量為100 mL,溫度為28 ℃時(shí),預(yù)測(cè)得到的最大多糖質(zhì)量濃度為2.39 mg/mL。

    (3) 通過對(duì)發(fā)酵液的粗多糖進(jìn)行純化后,用高效液相色譜法測(cè)定其單糖組分,得到發(fā)酵液多糖中主要有葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等多種單糖,其中葡萄糖含量最高。

    猜你喜歡
    裝液牛蒡發(fā)酵液
    牛蒡花開
    飼用枯草芽孢桿菌分離純化及培養(yǎng)條件優(yōu)化*
    廣州化工(2023年17期)2024-01-25 05:15:24
    連翹內(nèi)生真菌的分離鑒定及其發(fā)酵液抑菌活性和HPLC測(cè)定
    桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
    Technology optimization of Medicago sativa leaf protein separation with foam fractionation
    牛蒡子中牛蒡苷測(cè)定方法的優(yōu)化
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:49
    纖維堆囊菌產(chǎn)埃博霉素B的發(fā)酵條件優(yōu)化
    買牛蒡,挑一元硬幣粗的
    中老年健康(2014年6期)2014-05-30 22:10:35
    HPLC與LC-MS/MS測(cè)定蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素的方法比較
    木瓜發(fā)酵液對(duì)小鼠四氯化碳誘發(fā)肝損傷的防護(hù)作用

    精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲国产欧美人成| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产真实乱freesex| 少妇高潮的动态图| 乱人视频在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 久久精品人妻少妇| 亚洲精品影视一区二区三区av| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲国产精品999在线| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 免费看日本二区| 精品日产1卡2卡| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费高清视频大片| 色av中文字幕| 色在线成人网| 一进一出抽搐动态| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 99国产精品一区二区蜜桃av| 人人妻人人看人人澡| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 高清在线国产一区| 欧美日韩黄片免| 午夜亚洲福利在线播放| 少妇的逼水好多| 亚洲精品色激情综合| 久久伊人香网站| 一区福利在线观看| 99久国产av精品| 日韩欧美精品v在线| 99热6这里只有精品| 精品不卡国产一区二区三区| av视频在线观看入口| 特级一级黄色大片| 精品久久久久久久毛片微露脸| 免费在线观看日本一区| 亚洲av美国av| 级片在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲,欧美精品.| 国产高清有码在线观看视频| 9191精品国产免费久久| 久久香蕉国产精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 色吧在线观看| 国产高清videossex| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美色视频一区免费| 动漫黄色视频在线观看| а√天堂www在线а√下载| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲av不卡在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 97超视频在线观看视频| 在线播放国产精品三级| 国产主播在线观看一区二区| 欧美成人免费av一区二区三区| 午夜影院日韩av| 国产成人欧美在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 成年免费大片在线观看| 免费大片18禁| 最新中文字幕久久久久| 天堂影院成人在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | 久9热在线精品视频| 哪里可以看免费的av片| 国产色爽女视频免费观看| 草草在线视频免费看| 狂野欧美激情性xxxx| 日韩成人在线观看一区二区三区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一本一本综合久久| 精品国产亚洲在线| 成人性生交大片免费视频hd| 12—13女人毛片做爰片一| 国产淫片久久久久久久久 | 国产亚洲av嫩草精品影院| 黄色日韩在线| 国产精华一区二区三区| 一级毛片高清免费大全| 波多野结衣高清作品| 国产探花在线观看一区二区| 久久香蕉国产精品| 中文字幕av在线有码专区| 成人特级av手机在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 久久亚洲真实| 久久香蕉精品热| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 日本五十路高清| 人妻久久中文字幕网| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| xxx96com| 午夜福利免费观看在线| 国产伦在线观看视频一区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 中文字幕av成人在线电影| 全区人妻精品视频| 亚洲人成网站高清观看| 又爽又黄无遮挡网站| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 99热这里只有精品一区| 午夜a级毛片| 精品国内亚洲2022精品成人| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人国产综合亚洲| 久久九九热精品免费| 男人舔奶头视频| 亚洲人成网站在线播| 99在线人妻在线中文字幕| 香蕉久久夜色| 久久久久九九精品影院| 成人国产一区最新在线观看| 色av中文字幕| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 成人一区二区视频在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 精品国产亚洲在线| 色视频www国产| 国产精品一及| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 啪啪无遮挡十八禁网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av美国av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产色爽女视频免费观看| 欧美性感艳星| 国产一区二区三区视频了| 99久国产av精品| 国产成人福利小说| 一个人看视频在线观看www免费 | 日韩欧美在线乱码| 日本 欧美在线| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲不卡免费看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 老司机在亚洲福利影院| 一进一出抽搐动态| 91麻豆精品激情在线观看国产| 18+在线观看网站| 日韩高清综合在线| 亚洲乱码一区二区免费版| 成人18禁在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 草草在线视频免费看| 波多野结衣高清作品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久久国产成人免费| 午夜老司机福利剧场| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美日韩国产亚洲二区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲18禁久久av| 在线观看66精品国产| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产亚洲欧美在线一区二区| 黄色成人免费大全| 欧美一级毛片孕妇| 叶爱在线成人免费视频播放| 99久久久亚洲精品蜜臀av| www.色视频.com| 欧美一区二区国产精品久久精品| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 男人舔奶头视频| 91久久精品电影网| 动漫黄色视频在线观看| 小说图片视频综合网站| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 波多野结衣巨乳人妻| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲激情在线av| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲无线在线观看| 亚洲成人久久性| 不卡一级毛片| 人妻久久中文字幕网| 国产精品精品国产色婷婷| 日韩免费av在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 嫩草影院入口| 国产成人系列免费观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 看黄色毛片网站| 亚洲国产色片| 国产av不卡久久| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲人成网站高清观看| 久久久久九九精品影院| 国产精品久久久久久精品电影| 日韩精品中文字幕看吧| 成熟少妇高潮喷水视频| а√天堂www在线а√下载| 亚洲美女黄片视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜福利18| 国产精品久久久久久久久免 | 中文字幕高清在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 1000部很黄的大片| 99久久精品一区二区三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产免费一级a男人的天堂| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲国产欧美人成| 久久久久久九九精品二区国产| 免费人成在线观看视频色| 操出白浆在线播放| 久久久精品欧美日韩精品| 村上凉子中文字幕在线| 在线观看舔阴道视频| 首页视频小说图片口味搜索| 日本免费a在线| 午夜福利欧美成人| 手机成人av网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 黄片大片在线免费观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩人妻高清精品专区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 老司机午夜十八禁免费视频| 舔av片在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 午夜日韩欧美国产| 少妇的丰满在线观看| 嫩草影院入口| 国产av不卡久久| 精品人妻1区二区| 国产精品国产高清国产av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日韩有码中文字幕| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 看片在线看免费视频| 婷婷丁香在线五月| 欧美黄色淫秽网站| 免费av观看视频| 日本与韩国留学比较| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 一区二区三区国产精品乱码| 国内精品美女久久久久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲成a人片在线一区二区| 国产熟女xx| 日本三级黄在线观看| 51国产日韩欧美| 日韩av在线大香蕉| www.色视频.com| 午夜福利在线在线| 免费无遮挡裸体视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 日本黄色片子视频| 午夜免费激情av| 校园春色视频在线观看| 国产探花极品一区二区| 男女下面进入的视频免费午夜| 嫩草影院入口| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 日本五十路高清| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 最新在线观看一区二区三区| 内射极品少妇av片p| 一区福利在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 中亚洲国语对白在线视频| 午夜久久久久精精品| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美一区二区亚洲| 久久久国产成人免费| 亚洲一区二区三区不卡视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 男插女下体视频免费在线播放| 淫妇啪啪啪对白视频| ponron亚洲| 91麻豆精品激情在线观看国产| 午夜激情欧美在线| 国产精品99久久久久久久久| 国产一区二区在线观看日韩 | 两人在一起打扑克的视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| www日本黄色视频网| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 天堂影院成人在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品久久电影中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| 99国产综合亚洲精品| 婷婷丁香在线五月| 不卡一级毛片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 午夜福利成人在线免费观看| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲18禁久久av| 欧美日韩一级在线毛片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 91在线观看av| 久久99热这里只有精品18| 午夜激情欧美在线| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 狂野欧美激情性xxxx| 波野结衣二区三区在线 | 青草久久国产| 搡老熟女国产l中国老女人| 宅男免费午夜| 亚洲人成伊人成综合网2020| 又紧又爽又黄一区二区| 天堂√8在线中文| 99热这里只有精品一区| 91字幕亚洲| 色播亚洲综合网| 波多野结衣巨乳人妻| 色噜噜av男人的天堂激情| 精品一区二区三区视频在线 | 听说在线观看完整版免费高清| www.www免费av| bbb黄色大片| 婷婷亚洲欧美| 国产精品三级大全| 黄色丝袜av网址大全| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美性感艳星| 91麻豆av在线| 三级国产精品欧美在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 成年女人永久免费观看视频| 99热这里只有精品一区| 757午夜福利合集在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久久久久九九精品二区国产| 69人妻影院| 国产色爽女视频免费观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| tocl精华| 国产精品99久久99久久久不卡| av在线天堂中文字幕| 99热这里只有是精品50| 美女免费视频网站| 美女 人体艺术 gogo| 一个人看视频在线观看www免费 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 最好的美女福利视频网| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲18禁久久av| 精品久久久久久成人av| 亚洲 国产 在线| 免费看十八禁软件| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产野战对白在线观看| 十八禁人妻一区二区| 9191精品国产免费久久| 亚洲激情在线av| 精品一区二区三区视频在线 | 九九热线精品视视频播放| 欧美中文日本在线观看视频| 日本成人三级电影网站| 国产三级黄色录像| 国产精品亚洲av一区麻豆| 网址你懂的国产日韩在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 啦啦啦韩国在线观看视频| 成人三级黄色视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久伊人香网站| 国产爱豆传媒在线观看| or卡值多少钱| 国产日本99.免费观看| 一个人看视频在线观看www免费 | 最近视频中文字幕2019在线8| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 观看美女的网站| 国产久久久一区二区三区| av天堂中文字幕网| 国产黄a三级三级三级人| 99久久精品国产亚洲精品| 18+在线观看网站| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲av电影不卡..在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 久久香蕉国产精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 女同久久另类99精品国产91| 香蕉av资源在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 看黄色毛片网站| av中文乱码字幕在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲国产欧美网| 亚洲美女黄片视频| 香蕉丝袜av| 99久久综合精品五月天人人| 757午夜福利合集在线观看| ponron亚洲| 深夜精品福利| 性色avwww在线观看| 国产成人a区在线观看| av在线蜜桃| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 窝窝影院91人妻| 国产乱人视频| 亚洲av一区综合| 人妻久久中文字幕网| 免费av不卡在线播放| 亚洲av美国av| 熟女人妻精品中文字幕| 中文资源天堂在线| 一级a爱片免费观看的视频| 91久久精品国产一区二区成人 | 久久久久性生活片| 亚洲无线观看免费| 日本 av在线| a在线观看视频网站| 亚洲在线观看片| 亚洲精品亚洲一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产99白浆流出| 嫩草影院精品99| av黄色大香蕉| 亚洲 国产 在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品久久久久久,| 成人午夜高清在线视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 日本与韩国留学比较| 欧美成人a在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 中文字幕高清在线视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产三级中文精品| 男女之事视频高清在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 精品人妻1区二区| 在线观看午夜福利视频| 人人妻人人看人人澡| 国产精品,欧美在线| 91麻豆av在线| 国产真实伦视频高清在线观看 | 伊人久久精品亚洲午夜| 日本 av在线| 日韩亚洲欧美综合| 成人永久免费在线观看视频| 五月伊人婷婷丁香| 免费观看的影片在线观看| 91在线观看av| 一进一出好大好爽视频| 一级黄片播放器| 又紧又爽又黄一区二区| a级毛片a级免费在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 午夜亚洲福利在线播放| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| av专区在线播放| 最新中文字幕久久久久| 精品一区二区三区视频在线 | 在线免费观看的www视频| 美女 人体艺术 gogo| 黄色日韩在线| 九色成人免费人妻av| 免费看日本二区| 不卡一级毛片| 亚洲国产精品成人综合色| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| avwww免费| 亚洲人成伊人成综合网2020| 熟女电影av网| 麻豆国产97在线/欧美| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 不卡一级毛片| 18禁美女被吸乳视频| 国产成人av激情在线播放| 村上凉子中文字幕在线| 中亚洲国语对白在线视频| 午夜视频国产福利| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 可以在线观看的亚洲视频| 日本熟妇午夜| 国产av不卡久久| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 老熟妇仑乱视频hdxx| 夜夜爽天天搞| 中文字幕av在线有码专区| 国产高清激情床上av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 黄色成人免费大全| 亚洲av电影在线进入| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | av女优亚洲男人天堂| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 51国产日韩欧美| 一区二区三区高清视频在线| av女优亚洲男人天堂| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲最大成人手机在线| 国产午夜福利久久久久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 十八禁网站免费在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美在线一区亚洲| 韩国av一区二区三区四区| 香蕉av资源在线| 色av中文字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| 51国产日韩欧美| 91久久精品电影网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 免费av毛片视频| 亚洲精品456在线播放app | а√天堂www在线а√下载| 国产精品电影一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 在线免费观看不下载黄p国产 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 天堂网av新在线| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 美女高潮的动态| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人无遮挡网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲片人在线观看| 欧美3d第一页| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品1区2区在线观看.| 国产黄色小视频在线观看| a级一级毛片免费在线观看| 日韩欧美三级三区| 国产精品永久免费网站| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲欧美激情综合另类| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 全区人妻精品视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 特级一级黄色大片| 露出奶头的视频| 国产av麻豆久久久久久久| 88av欧美| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 免费看日本二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| av片东京热男人的天堂| 中文字幕av成人在线电影| tocl精华| 国产午夜福利久久久久久| 性色avwww在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 天美传媒精品一区二区| 韩国av一区二区三区四区| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产私拍福利视频在线观看| 国产综合懂色| 变态另类丝袜制服| 麻豆一二三区av精品| 国产精品三级大全| 国产激情欧美一区二区| 国产亚洲欧美在线一区二区| netflix在线观看网站| 亚洲性夜色夜夜综合| 一本综合久久免费| av在线天堂中文字幕| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲av电影在线进入| 中文资源天堂在线| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国模一区二区三区四区视频| av福利片在线观看| 99riav亚洲国产免费| 精品国产超薄肉色丝袜足j| tocl精华| 日本免费一区二区三区高清不卡|