ACE、ApoE基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性研究

郭雯雯 張航 許健

[摘要]?目的?探討血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin?converting?enzyme，ACE）、載脂蛋白E（apolipoprotein?E，ApoE）基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性。方法?選取2019年1月至2022年2月浙江省中醫(yī)院收治的180例高血壓患者作為研究對象，根據(jù)其是否患有冠心?。╟oronary?heart?disease，CHD）分為對照組（n=85）和CHD組（n=95），同時根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果將CHD組分為單支病變組（n=25）及多支病變組（n=70），統(tǒng)計并比較單支病變組與多支病變組ACE基因型、ApoE基因型與等位基因頻率的分布，不同冠狀動脈病變程度組別ACE基因多態(tài)性、ApoE基因多態(tài)性分布情況。結(jié)果?多支病變組ACE?DD基因型頻率和ACE?D等位基因的頻率均顯著高于單支病變組（P<0.05）；多支病變組ACEⅡ和ACE?ID基因型頻率均顯著低于ACE?DD基因型（P<0.05）；多支病變組ACE?D等位基因頻率顯著高于ACEⅠ等位基因（P<0.05）。多支病變組ApoE4等位基因頻率顯著高于單支病變組（P<0.05）；兩組的ApoE2/E2、ApoE2/E3、ApoE2/E4、ApoE3/E4及ApoE4/E4基因型頻率均顯著低于同組ApoE3/E3基因型（P<0.05）；兩組的ApoE2、ApoE4等位基因頻率均顯著低于同組ApoE3等位基因（P<0.05）。多支病變組ACE?DD基因型頻率和ACE?D等位基因的頻率均顯著高于單支病變組（P<0.05）；多支病變組ACEⅡ和ACE?ID基因型頻率均顯著低于ACE?DD基因型（P<0.05）；多支病變組ACE?D等位基因頻率顯著高于ACEⅠ等位基因（P<0.05）。3組不同冠狀動脈病變程度組的ApoE2/E2、ApoE2/E3、ApoE2/E4、ApoE3/E4、ApoE4/E4的基因型頻率均顯著低于ApoE3/E3基因型（P<0.05）。結(jié)論?ACE、ApoE基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈病變范圍及病變程度密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]?高血壓；冠心?。谎芫o張素轉(zhuǎn)換酶；載脂蛋白E；基因多態(tài)性；相關(guān)性

[中圖分類號]?R544??????[文獻標識碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2023.11.008

Correlation?between?ACE?and?ApoE?gene?polymorphisms?and?coronary?artery?stenosis?in?patients?with?hypertension

GUO?Wenwen，?ZHANG?Hang，?XU?Jian

College?of?Medical?Technology?and?Information?Engineering，?Zhejiang?Chinese?Medicine?University，?Hangzhou?310053，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?investigate?the?correlation?between?angiotensin-converting?enzyme?（ACE）?and?apolipoprotein?E?（ApoE）?gene?polymorphisms?and?the?degree?of?coronary?stenosis?in?patients?with?hypertension.?Methods?A?total?of?180?hypertensive?patients?admitted?to?Zhejiang?Provincial?Hospital?of?Traditional?Chinese?Medicine?from?January?2019?to?February?2022?were?selected?and?divided?into?the?control?group?（n=85）?and?the?CHD?group?（n=95）?according?to?whether?they?had?coronary?heart?disease?（CHD）.?The?distribution?of?ACE?genotype，?ApoE?genotype?and?allele?frequency?in?coronary?single-vessel?group?（n=25）?and?multi-vessel?disease?group?（n=70），?distribution?of?ACE?gene?polymorphisms?and?ApoE?gene?polymorphisms?in?groups?with?different?degrees?of?coronary?artery?disease?were?counted?and?compared.?Results?The?frequency?of?ACE?DD?genotype?and?ACE?D?allele?in?the?multi-vessel?group?were?significantly?higher?than?those?in?the?single-?vessel?group?（P<0.05）.?The?frequency?of?ACEⅡ?and?ACE?ID?genotypes?in?the?multi-vessel?group?was?significantly?lower?than?that?of?ACE?DD?genotype?（P<0.05）.?The?frequency?of?ACE?D?allele?was?significantly?higher?than?that?of?ACEⅠallele?（P<0.05）?in?the?multi-vessel?group.?The?frequency?of?ApoE4?allele?in?the?multi-vessel?group?was?significantly?higher?than?that?in?the?single-vessel?group?（P<0.05）.?The?frequencies?of?ApoE2/E2，?ApoE2/E3，?ApoE2/E4，?ApoE3/E4?and?ApoE4/E4?genotypes?in?the?two?groups?were?significantly?lower?than?those?in?the?same?group?（P<0.05）.?The?frequencies?of?ApoE2?and?ApoE4?alleles?in?both?groups?were?significantly?lower?than?those?in?the?same?group?（P<0.05）.?The?frequency?of?ACE?DD?genotype?and?ACE?D?allele?in?the?multi-vessel?group?were?significantly?higher?than?those?in?the?single-vessel?group?（P<0.05）.?The?frequency?of?ACEⅡ?and?ACE?ID?genotypes?in?the?multi-vessel?group?was?significantly?lower?than?that?of?ACE?DD?genotype?（P<0.05）.?The?frequency?of?ACE?D?allele?was?significantly?higher?than?that?of?ACEⅠallele?（P<0.05）?in?the?multi-vessel?group.?The?genotype?frequencies?of?ApoE2/E2，?ApoE2/E3，?ApoE2/E4，?ApoE3/E4?and?ApoE4/E4?in?the?three?groups?with?different?coronary?artery?vessel?degrees?were?significantly?lower?than?those?of?ApoE3/E3?genotype?（P<0.05）.?Conclusion?ACE?and?ApoE?gene?polymorphisms?are?closely?related?to?the?extent?and?severity?of?coronary?artery?vessel?in?patients?with?hypertension.

[Key?words]?Hypertension;?Coronary?heart?disease;?Angiotensin?converting?enzyme;?Apolipoprotein?E;?Gene?polymorphism;?Relevance

高血壓是臨床常見的心血管內(nèi)科疾病，近年來發(fā)病率不斷上升，可通過改變生活方式及藥物治療等方式進行控制，但無法治愈[1-2]。冠心?。╟oronary?heart?disease，CHD）是動脈粥樣硬化斑塊積累和冠狀動脈循環(huán)功能改變的動態(tài)過程，高血壓是導致CHD的重要因素，若機體長期處于高血壓狀態(tài)下，血管壁承受的壓力較大，可導致血流量及血流速度增大，進而使血小板異常激活，引發(fā)冠狀動脈粥樣硬化，導致冠狀動脈狹窄甚至閉塞[3]。研究顯示，血管緊張素Ⅱ與CHD發(fā)病具有密切聯(lián)系[4]，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin?converting?enzyme，ACE）作為血管緊張素生成的重要酶，ACE基因多態(tài)性與CHD的發(fā)生及進展具有相關(guān)性。載脂蛋白參與機體脂質(zhì)運輸、代謝等過程，當載脂蛋白基因發(fā)生變化時，脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)功能隨之發(fā)生變化，若體內(nèi)血脂異?？烧T導血管內(nèi)皮細胞死亡引發(fā)炎癥反應(yīng)并出現(xiàn)大動脈內(nèi)脂質(zhì)、纖維成分和鈣化積聚[5]，進一步導致動脈粥樣硬化。但目前關(guān)于ACE、載脂蛋白E（apolipoprotein?E，ApoE）基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性仍需進一步探究?；诖?，本研究對ACE、ApoE基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性進行探討。

1??資料與方法

1.1??一般資料

選取2019年1月至2022年2月浙江省中醫(yī)院收治的180例高血壓患者作為研究對象，根據(jù)是否患有CHD將患者分為對照組（n=85）和CHD組（n=95）。納入標準：①符合《中國高血壓防治指南（2018年修訂版）》[6]中關(guān)于高血壓的相關(guān)診斷標準；②CHD組診斷依據(jù)臨床癥狀（心絞痛等）、冠心病危險因素和輔助檢查符合《2019歐洲心臟病學會慢性冠脈綜合征的診斷和管理指南》[7]中關(guān)于CHD的相關(guān)診斷標準者，如有必要可行冠狀動脈造影檢查，若發(fā)現(xiàn)心外膜下冠狀動脈直徑狹窄>50%，且患者有典型心絞痛癥狀或無創(chuàng)性檢查顯示患者有心肌缺血證據(jù)，可診斷為冠心?。虎勰挲g25～75歲；④無惡性腫瘤疾??；⑤無精神系統(tǒng)疾病。排除標準：①妊娠期或哺乳期婦女；②伴有自身免疫系統(tǒng)疾病或血液系統(tǒng)疾?。虎奂韧酗B內(nèi)出血史、心源性腦卒中史；④同時參與其他研究。剔除標準：①依從性差；②未按研究設(shè)計完成試驗。脫落標準：研究期間有意外事件，不宜接續(xù)接受試驗。本研究經(jīng)浙江省中醫(yī)院醫(yī)學研究倫理委員會審核批準（倫理審批號：2022ZB072）。

1.2??方法

1.2.1??所有患者ACE基因型與等位基因頻率的分布??抽取所有患者空腹靜脈血后進行抗凝處理，采用脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic?acid，DNA）提取試劑盒（購自湖南宏灝基因生物科技有限公司）將外周血樣本中的DNA進行抽提，提純?nèi)ルs后將DNA加入到聚合酶鏈式反應(yīng)溶液中，取20μl加入芯片反應(yīng)區(qū)，雜交1.5h（42°C），將芯片放入微陣列芯片掃描儀（成都博奧晶芯生物科技有限公司，LuxScan?10K/B）進行檢測，根據(jù)結(jié)果將ACE分為Ⅱ型純合子、ID型雜合子及DD型純合子。同時根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果將CHD組分為單支病變組（n=25）及多支病變組（n=70），統(tǒng)計所有患者ACE基因型與等位基因頻率的分布。

1.2.2??所有患者ApoE基因型與等位基因頻率的分布??抽取所有患者空腹靜脈血3ml進行抗凝處理后，采用DNA提取試劑盒進行DNA提取，并采用ApoE基因檢測試劑盒（購自武漢友芝友醫(yī)療科技有限公司）進行基因型檢測，根據(jù)結(jié)果分為E2/E2、E2/E3、E3/E3、E3/E4、E2/E4、E4/E4，統(tǒng)計所有患者ApoE基因型與等位基因頻率的分布。

1.2.3??不同冠狀動脈病變程度患者ACE基因多態(tài)性的分布??采用冠狀動脈狹窄程度[8]評估冠狀動脈狹窄病變嚴重程度，理論最高分為160分。0分：沒有異常；1分：狹窄直徑≤25%；2分：狹窄直徑26%～50%；4分：狹窄直徑51%～75%；8分：狹窄直徑76%～90%；16分：狹窄直徑91%～99%；32分為完全閉塞。并根據(jù)冠狀動脈分支判定其系數(shù)，其中第一對角支、回旋支中段、右冠脈中段、右冠脈近段×1，前降分中段×1.5，前降支近段、回旋支近段×2.5，左主干病變×5，并根據(jù)最后的積分，分為輕度病變組（0～19分，n=30）；中度病變組（20～40分，n=37）；重度病變組（>40分，n=28），統(tǒng)計ACE基因多態(tài)性與不同冠狀動脈病變程度組別中的頻率。

1.2.4??不同冠狀動脈狹窄程度患者ApoE基因多態(tài)性的分布??統(tǒng)計ApoE基因多態(tài)性與不同冠狀動脈病變程度組別中的頻率。

1.3??統(tǒng)計學方法

采用SPSS?21.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析，計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用例數(shù)（百分比）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2??結(jié)果

2.1??一般資料比較

兩組患者的ACE和ApoE基因型分布的實際值和理論值比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），可用于研究。兩組性別、體質(zhì)量指數(shù)（body?mass?index，BMI）、尿酸水平、是否患有糖尿病、總膽固醇（total?cholesterol，TC）等比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；年齡、高密度脂蛋白膽固醇（high-density?lipoprotein?cholesterol，HDL-C）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2??單支病變組與多支病變組ACE基因型與等位基因頻率分布比較

多支病變組ACE?DD基因型頻率和ACE?D等位基因的頻率均顯著高于單支病變組（P<0.05）；多支病變組ACEⅡ和ACE?ID基因型頻率均顯著低于ACE?DD基因型（P<0.05）；多支病變組ACE?D等位基因頻率顯著高于ACEⅠ等位基因（P<0.05），見表2。

2.3??單支病變組與多支病變組ApoE基因型與等位基因頻率分布比較

多支病變組ApoE4等位基因頻率顯著高于單支病變組（P<0.05）；兩組的ApoE2/E2、ApoE2/E3、ApoE2/E4、ApoE3/E4及ApoE4/E4基因型頻率均顯著低于同組ApoE3/E3基因型（P<0.05）；兩組的ApoE2、ApoE4等位基因頻率均顯著低于同組ApoE3等位基因（P<0.05），見表3。

2.4??不同冠狀動脈病變程度組ACE基因多態(tài)性分布比較

輕度和中度病變組的ACE?DD基因型頻率顯著低于重度病變組（P<0.05），重度病變組ACEⅡ和ACE?ID基因型頻率顯著低于基因型ACE?DD（P<0.05），見表4。

2.5??不同冠狀動脈病變程度組ApoE基因多態(tài)性分布比較

3組的ApoE2/E2、ApoE2/E3、ApoE2/E4、ApoE3/E4、ApoE4/E4的基因型頻率均顯著低于同組ApoE3/E3基因型（P<0.05），見表5。

3??討論

高血壓是臨床常見的慢性疾病，CHD作為其常見并發(fā)癥，近年來的發(fā)病率逐漸增加[9-10]。當患者冠狀動脈狹窄程度>50%時，會導致機體在活動過度的情況下出現(xiàn)胸痛癥狀。ACE參與腎素–血管緊張素–醛固酮系統(tǒng)反應(yīng)過程，該基因具有多態(tài)性，在第16內(nèi)含子中有一個287bp的DNA片段有缺少/插入多態(tài)性，有研究發(fā)現(xiàn)，AEC基因多態(tài)性與CHD的發(fā)生密切相關(guān)[11-12]。ApoE是一種含有豐富精氨酸的堿性蛋白，在機體蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化及代謝過程中具有重要作用，其基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化的過程密切相關(guān)[13]。本研究探討ACE、ApoE基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性，取得了較好的研究成果。

高血壓與CHD合并發(fā)生時，容易因氧化應(yīng)激及遺傳基因突變等因素而導致器官損害，增加預后不良的風險，既往研究認為ACE的D等位基因與CHD的發(fā)生及發(fā)展相關(guān)[14-15]。ACE可將血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化成血管緊張素Ⅱ，血管緊張素Ⅱ?qū)Ω哐獕夯颊吣I上腺皮質(zhì)的醛固酮及血管平滑肌細胞中的G蛋白的分泌具有刺激作用，進一步可導致血壓升高，使冠狀動脈內(nèi)皮細胞的損傷更加嚴重，而ACE?I/D基因多態(tài)性能夠調(diào)節(jié)ACE的分泌及表達，有研究顯示ACE插入缺失多態(tài)性（rs4646994）DD基因型與冠狀動脈疾病之間存在正相關(guān)[16-17]。本研究結(jié)果顯示，輕度和中度病變組的ACE?DD基因型頻率顯著低于重度病變組，重度病變組ACEⅡ和ACE?ID基因型頻率顯著低于基因型ACE?DD，多支病變組ACE?DD基因型頻率和ACE?D等位基因的頻率均顯著高于單支病變組，多支病變組ACEⅡ和ACE?ID基因型頻率均顯著低于ACE?DD基因型，多支病變組ACE?D等位基因頻率顯著高于ACEⅠ等位基因，進一步提示了ACE的DD基因型及D等位基因與高血壓患者管狀動脈病變程度顯著相關(guān)。

此外，本研究結(jié)果顯示，多支病變組ApoE4等位基因頻率顯著高于單支病變組，單支病變組與多支病變組的ApoE2/E2、ApoE2/E3、ApoE2/E4、ApoE3/E4及ApoE4/E4基因型頻率均顯著低于同組ApoE3/E3基因型，兩組的ApoE2、ApoE4等位基因頻率均顯著低于同組ApoE3等位基因，不同冠狀動脈病變程度組的ApoE2/E2、ApoE2/E3、ApoE2/E4、ApoE3/E4、ApoE4/E4的基因型頻率均顯著低于ApoE3/E3基因型，說明ApoE基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈病變程度具有一定關(guān)系。分析其原因可能為，ApoE在高血壓患者脂蛋白及脂質(zhì)的代謝中具有重要作用，具有抗動脈粥樣硬化的作用，ApoE基因多樣性取決于ApoE2、E3、E4這3個常見基因，其中以ApoE3等位基因出現(xiàn)頻率最高，可能有抗動脈粥樣硬化作用。ApoE4等位基因可升高機體內(nèi)總膽固醇濃度，容易導致動脈粥樣硬化。王亞丹等[18]發(fā)現(xiàn)ApoE4等位基因攜帶者冠狀動脈病變程度顯著增加。有Meta分析顯示ApoE4與冠狀動脈疾病風險呈正相關(guān)[19]。還有研究認為ApoE4與相應(yīng)受體結(jié)合活性較強，可引起富含膽固醇脂蛋白長時間蓄積，進一步增加冠狀動脈病變風險[20-21]。

綜上，ACE、ApoE基因多態(tài)性與高血壓患者冠狀動脈病變范圍及病變程度密切相關(guān)。但本研究仍存在一定的不足之處，如樣本量較少可能導致研究結(jié)果存在一定偏倚，臨床可進一步擴大樣本量進行多中心研究，以提高研究結(jié)果的準確度及可靠性。

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