19 例新型冠狀病毒Omicron變異株感染兒童的核酸檢測結(jié)果分析

李雯 祁正紅 王華平 滕淑 貝澤鋒 趙仕勇 劉壽榮

作者單位：310014 杭州市兒童醫(yī)院感染科（李雯、祁正紅、王華平、滕淑、趙仕勇）；杭州市西溪醫(yī)院兒科（貝澤鋒、劉壽榮）

新型冠狀病毒（簡稱新冠病毒）Omicron 變異株作為WHO 認(rèn)定的第5 種關(guān)切變異株，自2021 年11 月在南非首次檢出以來，很快便成為全球主要流行株[1]。兒童感染新冠病毒Omicron 以輕型和普通型為主，但是該變異株具有傳播力強(qiáng)、傳播速度快、免疫逃逸顯著等特點(diǎn)[2-4]，對兒童健康的影響不容小覷?；純后w內(nèi)的病毒載量與其傳染性密切相關(guān)。循環(huán)閾值（cycle threshold，Ct）是指每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)，與體內(nèi)的病毒載量呈負(fù)相關(guān)，是一個半定量的指標(biāo)。本研究分析新冠病毒Omicron 變異株感染患兒上呼吸道和糞便標(biāo)本中新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間及Ct 值情況，并比較上述指標(biāo)在不同性別、年齡及臨床分型中的差異，了解該型病毒在兒童中傳播的特點(diǎn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 收集2022 年1 月28 日至3 月3 日杭州市西溪醫(yī)院隔離病區(qū)收治的19 例新冠病毒Omicron 變異株感染患兒的臨床資料。診斷符合國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版修訂版）》[5]。19 例患兒中，男7 例（36.8%），女12 例（63.2%）；年齡6 月齡～16 歲，中位年齡2 歲1 月齡；根據(jù)年齡可分為≤3 歲組10 例，＞3 歲組9 例；婚宴聚集性發(fā)病2 例，母嬰館聚集性發(fā)病10例，家庭聚集性發(fā)病6 例，小區(qū)聚集性發(fā)病1 例。所有患兒在上呼吸道標(biāo)本結(jié)果呈陽性的當(dāng)時及時間前后均有癥狀。所有患兒均有咳嗽表現(xiàn)，發(fā)熱12 例，流涕6 例，鼻塞和腹瀉各4 例，乏力和頭痛各2例，腹痛1例。按照診斷標(biāo)準(zhǔn)可分為輕型13 例（68.4%），普通型6 例（31.6%）。其中1 例合并珠蛋白生成障礙性貧血，1 例合并葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥，1例合并先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥。本研究經(jīng)杭州市兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過，在相關(guān)信息收集和使用過程中充分保護(hù)患兒的隱私。

1.2 標(biāo)本采集及檢測方法 住院期間每隔1～5 d 采集患兒上呼吸道標(biāo)本（即鼻咽拭子、咽拭子標(biāo)本）直至連續(xù)2 次新冠病毒核酸檢測結(jié)果呈陰性，采集糞便標(biāo)本至1 次結(jié)果呈陰性。采用實(shí)時逆轉(zhuǎn)錄RCR 技術(shù)（realtime reverse-transcription polymerase chain reaction，rRTPCR），選取新冠病毒可讀框1ab（open reading frame 1ab，ORF1ab）基因和核殼蛋白（nucleocapsid protein，N）基因作為擴(kuò)增靶區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物及熒光探針用于檢測上呼吸道及糞便標(biāo)本中的新冠病毒RNA。試劑盒購自武漢明德生物科技股份有限公司。操作流程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。以Ct值進(jìn)行結(jié)果判定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性別、年齡、臨床分型患兒新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較 共采集382 份標(biāo)本，包括170 份鼻咽拭子、163 份咽拭子及49 份糞便標(biāo)本。患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間分別為（16.37±6.42）、（15.37±7.66）和（7.94±4.33）d。不同性別患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1?！? 歲組患兒鼻咽拭子、咽拭子標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間均長于＞3 歲組患兒（均P＜0.05），而兩組患兒糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。不同臨床分型患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表3。

表1 不同性別患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較（d）

表2 不同年齡患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較（d）

表3 不同臨床分型患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較（d）

2.2 不同性別、年齡、臨床分型患兒新冠病毒核酸的Ct 值比較 19 例患兒診療期間鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本的ORF1ab 基因Ct 值范圍分別為18.69～39.90、21.84～39.83、27.55～39.69，N 基因Ct 值范圍分別為15.83～39.97、20.76～39.88、27.17～39.56。女童鼻咽拭子標(biāo)本的ORF1ab 基因Ct 值低于男童（P＜0.05），不同性別患兒咽拭子、糞便標(biāo)本的ORF1ab 基因和N 基因Ct 值及鼻咽拭子標(biāo)本ORF1ab 基因Ct 值比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表4。≤3 歲組和＞3 歲組患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本的ORF1ab基因和N 基因Ct 值比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表5。不同臨床分型患兒鼻咽拭子和咽拭子標(biāo)本的ORF1ab 基因和N 基因Ct 值比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；而輕型患兒糞便標(biāo)本ORF1ab 基因Ct 值低于普通型患兒（P＜0.05），而不同臨床分型患兒糞便標(biāo)本N 基因比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表6。

表4 不同性別患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸Ct值比較

表5 不同年齡患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸Ct值比較

表6 不同臨床分型患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸Ct值比較

3 討論

本研究顯示患兒鼻咽拭子、咽拭子標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間分別為（16.37±6.42）、（15.37±7.66）d，與Zheng 等[6]的研究結(jié)果類似。但本研究糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間為（7.94±4.33）d，明顯短于其他研究[6-7]。筆者推測可能有以下原因：（1）新冠病毒通過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（angiotensin converting enzyme 2，ACE2）受體感染腸道[8]，而兒童腸道的ACE2 抗體數(shù)量或功能相對不足；（2）隨著病程發(fā)展，部分患兒可能后期會再次出現(xiàn)糞便核酸陽性，但本研究在患兒1 次糞便核酸轉(zhuǎn)陰后未再留取標(biāo)本。本研究顯示≤3 歲組患兒上呼吸道標(biāo)本新冠核酸陽性持續(xù)時間長于＞3 歲組患兒，表明嬰幼兒的呼吸道排毒時間較年長兒更長，傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)更大。

既往研究顯示重癥患者呼吸道、腸道核酸陽性持續(xù)時間均明顯長于輕癥患者[6]，而本研究顯示不同臨床分型患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多項(xiàng)研究顯示病毒載量與患者的病情輕重程度相關(guān)，提示病毒載量可能成為評估預(yù)后的指標(biāo)[6,9]。本研究中不同臨床分型患兒呼吸標(biāo)本道病毒載量無明顯差異，這可能與納入研究的患兒的病情輕重程度差異不大相關(guān)。此外有研究顯示成人中無呼吸道癥狀患者比有呼吸道癥狀患者的Ct 值明顯升高[10]，兒童也有類似的研究結(jié)果[11-12]。本研究患兒以輕型和普通型為主，與文獻(xiàn)報(bào)道[2-3]一致。本研究缺乏重癥及無癥狀患者，因此無法進(jìn)一步了解不同臨床表現(xiàn)患兒新冠病毒病毒載量的差異。Zheng 等[6]研究表明成人患者中，男性比女性的排毒時間明顯更長。而本研究顯示不同性別患兒鼻咽拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與兒童和成人的免疫狀態(tài)存在差異有關(guān)。

本研究患兒并非每日采集標(biāo)本進(jìn)行檢測，且缺乏統(tǒng)一的采樣間隔時間，因此，無法確定患兒的排毒時間峰值。新冠病毒核酸陽性持續(xù)時間不等同于傳染性持續(xù)時間，病毒載量的高低也不等同于傳染性的強(qiáng)弱[13]。若想進(jìn)一步了解患兒病毒傳播的潛力，需行病毒分離培養(yǎng)。

綜上所述，嬰幼兒的呼吸道排毒時間較年長兒更長，女童上呼吸道的病毒載量較男童更高，傳播病毒的潛力更大，應(yīng)加強(qiáng)對以上人群的管理，以減少病毒的傳播風(fēng)險(xiǎn)。