直腸癌組織中COX-2、TCF-4、Ki67 表達(dá)水平與其根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系分析

阿布都維力·阿布都熱合曼，阿洪江·買爾甫，高維鴿

直腸癌（Rectal cancer，RC）是直腸和肛管組織細(xì)胞基因的病理性改變所引起的消化道惡性腫瘤，臨床上治療以根治性手術(shù)為主，其預(yù)后較好，清灶徹底，但手術(shù)創(chuàng)傷大，部分患者術(shù)后仍存在病情復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，是導(dǎo)致患者死亡的重要原因［1-2］。既往報(bào)道指出，環(huán)氧化酶-2（COX-2）、T 細(xì)胞因子4（TCF-4）和腫瘤增殖抗原（Ki67）在RC 組織中的表達(dá)可能與其不良預(yù)后相關(guān)，但目前尚無(wú)關(guān)于其與RC 根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的報(bào)道［3-5］。故本研究擬通過(guò)測(cè)定RC 患者COX-2、TCF-4 和Ki67 表達(dá)水平， 分析其表達(dá)與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 回顧性選取2014 年1 月～2017 年06 月于新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院行根治術(shù)的193 例RC 患者。其中男97 例，女96 例；年齡43 ～75 歲，平均年齡（52.67 ± 7.62）歲；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移21 例，無(wú)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移172 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2010 年版）》，病理學(xué)檢查確診為RC［6］；（2）患者均行根治性手術(shù)；（3）無(wú)放療、化療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有其他急性或慢性疾??；（2）精神異常致溝通障礙；（3）臨床資料不齊全。

1.2 方法 收集患者的年齡、性別等一般資料，以及腫瘤類型、直徑大小、分化程度、疾病臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓等病歷信息。

1.2.1 免疫組織化學(xué)法 收集患者手術(shù)切除的癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本，置于10%中性甲醛中固定，并經(jīng)石蠟進(jìn)行包埋，后將石蠟組織切片，厚度為4 μm，烘干、脫蠟后分別滴加兔抗人COX-2、TCF-4 和Ki67 單克隆抗體（試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），放置過(guò)夜后用蘇木素染色，中性樹(shù)膠進(jìn)行封片。陽(yáng)性對(duì)照為已知陽(yáng)性切片，陰性對(duì)照為磷酸鹽緩沖液（代替一抗）。

L2000 顯微鏡（廣州粵顯光學(xué)儀器有限責(zé)任公司，粵食藥監(jiān)械準(zhǔn)字2011 第2220301 號(hào)）400 倍下對(duì)標(biāo)本染色結(jié)果進(jìn)行觀察，每張切片隨機(jī)選擇5 個(gè)視野，總評(píng)分=陽(yáng)性細(xì)胞所占視野內(nèi)細(xì)胞百分比×細(xì)胞染色強(qiáng)度，最終結(jié)果取平均值。染色程度根據(jù)細(xì)胞著色強(qiáng)弱進(jìn)行區(qū)分，分別有0 級(jí)（無(wú)色）、1 級(jí)（黃色）、2 級(jí)（棕黃色）、3 級(jí)（棕褐色）［7］。陽(yáng)性細(xì)胞所占實(shí)驗(yàn)內(nèi)細(xì)胞百分比共有4 級(jí)，0 級(jí)（0% ～5%）計(jì)0 分，1 級(jí)（6% ～25%）計(jì)1 分，2 級(jí)（26% ～50%）計(jì)2 分，3 級(jí)（51% ～75%）計(jì)3 分，4 級(jí)（75% ～100%）計(jì)4 分。COX-2、TCF-4 和Ki67 蛋白陽(yáng)性表達(dá)判斷：總評(píng)分≥2 分為陽(yáng)性，0 ～1 分為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，采用logistics 回歸分析RC 患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁正常組織COX-2、TCF-4 和Ki67 的陽(yáng)性表達(dá)比較 RC 患者癌旁正常組織COX-2、TCF-4 和Ki67 的陽(yáng)性表達(dá)率分別為1.05%、7.25%、13.47%， 與癌組織（45.60%、46.11%、52.33%）相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 根治術(shù)后RC 患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的因素分析 行根治術(shù)后5 年內(nèi)， 患者復(fù)發(fā)率為6.75%（13/193）， 轉(zhuǎn)移率為4.15%（8/193），總體發(fā)生率為10.88%（21/193）。COX-2、TCF-4、Ki67在復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移患者中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移患者的陽(yáng)性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）見(jiàn)表2。單因素分析結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)組患者腫瘤分化程度、臨床分期、脈管癌栓、COX-2、TCF-4 和Ki67 與無(wú)復(fù)發(fā)組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；轉(zhuǎn)移組患者腫瘤分化程度、直徑、COX-2、TCF-4 和Ki67 與無(wú)轉(zhuǎn)移組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.05）。以RC 患者術(shù)后有無(wú)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的發(fā)生分組為因變量（復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移組賦值為1，無(wú)復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移組賦值為0），以上述單因素分析中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的計(jì)數(shù)資料為自變量，Logistic多因素分析結(jié)果顯示， 腫瘤低分化、COX-2、TCF-4 和Ki67是RC 患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素 （P ＜0.05，OR ＞1）；腫瘤低分化、腫瘤直徑≥5cm、COX-2、TCF-4 和Ki67 是RC 患者根治術(shù)后轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素 （P ＜0.05，OR ＞1）。見(jiàn)表3、4。

表2 直腸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的單因素分析［例（%）］

表3 直腸癌根治術(shù)后患者復(fù)發(fā)的logistic 多因素分析

表4 直腸癌根治術(shù)后患者轉(zhuǎn)移的logistic 多因素分析

2.3 Kaplan-Meier 生存曲線 研究中193 例患者5 年內(nèi)的死亡率為6.22%（12/193），Kaplan-Meier 生存曲線分析結(jié)果顯示，COX-2、TCF-4 和Ki67 陽(yáng)性表達(dá)組的累計(jì)生存率分別為85.70%、88.70%和87.30%，陰性表達(dá)組累計(jì)生存率分別為97.70%、96.20%和96.40%，總體平均生存率為93.80%。

3 討論

RC 根治性手術(shù)是目前治療的主要方法，預(yù)后良好，但其存在的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移仍不可忽視。因此，研究關(guān)于RC 根治術(shù)后患者發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)指標(biāo)具有重要的臨床意義［8-9］。

本研究結(jié)果表明COX-2、TCF-4 和Ki67 在RC 患者的癌組織中有異常表達(dá)現(xiàn)象，且陽(yáng)性表達(dá)率越高，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的可能性越大，提示了RC 癌組織COX-2、TCF-4 和Ki67 的陽(yáng)性表達(dá)與其不良預(yù)后有關(guān)，可能是判斷RC 患者根治性手術(shù)預(yù)后的標(biāo)志物。COX-2 是機(jī)體合成前列腺素（Prostaglandin，PG）的限速酶，在正常組織中幾乎不表達(dá)，但在受到生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮素或腫瘤壞死因子刺激時(shí)能被誘導(dǎo)表達(dá)，催化下游PGE2 的合成，提高細(xì)胞核中信號(hào)傳導(dǎo)通路的蛋白激酶水平，促進(jìn)B 細(xì)胞淋巴瘤表達(dá)，抑制其凋亡［9］。TCF-4 是調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路的關(guān)鍵因素，Wnt 信號(hào)通路能調(diào)控組織細(xì)胞的生長(zhǎng)及周期，使細(xì)胞不斷增殖形成腫瘤［10］。有學(xué)者提出TCF-4 過(guò)度表達(dá)會(huì)導(dǎo)致基因突變，致使彌漫性大B 淋巴瘤［11］。Ki67 是與細(xì)胞增殖相關(guān)的細(xì)胞核抗原蛋白， 存在于增殖細(xì)胞的G1、G2、S 和M 等細(xì)胞周期中， 能清晰地反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)和程度，是目前最常應(yīng)用的細(xì)胞增殖抗原標(biāo)記物之一［12］。本研究結(jié)果與之相符合。本研究對(duì)RC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的因素進(jìn)行l(wèi)ogistic 回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者COX-2、TCF-4 和Ki67均是其復(fù)發(fā)、 轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，Kaplan-Meier 生存曲線分析結(jié)果表明COX-2、TCF-4 和Ki67 3 種因子的陽(yáng)性表達(dá)能影響行RC 根治術(shù)后患者的生存率，降低生存質(zhì)量。肖忠盛等［13］分析COX-2、TCF-4 的表達(dá)與大腸癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系， 結(jié)果表明兩者在癌組織中的高表達(dá)與其發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)聯(lián)。焦俊霞和葉曉霞［14］研究發(fā)現(xiàn)，Ki67 在結(jié)直腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常腸黏膜組織，可作為指標(biāo)對(duì)腫瘤的惡性程度進(jìn)行評(píng)估。以上結(jié)論均支持了本研究的結(jié)果。

綜上所述，COX-2、TCF-4 和Ki67 在RC 患者癌組織中均呈陽(yáng)性表達(dá)，三者均與其根治術(shù)后的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)，可作為臨床預(yù)測(cè)指標(biāo)判斷患者預(yù)后。