非小細(xì)胞肺癌組織中KISS-1 和CBX8 的表達(dá)及相關(guān)性研究

馬西淼，盧 偉，符芳永

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，肺癌的發(fā)生和基因突變具有很大的相關(guān)性，癌基因的過度表達(dá)或抑癌基因的失活， 可以作為腫瘤治療的突破口，從而實(shí)現(xiàn)個體化治療，延長生存期。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因親吻素1（KISS-1）是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，有研究發(fā)現(xiàn)，其低表達(dá)與某些腫瘤的進(jìn)展及不良預(yù)后相關(guān)［1-2］。色素框同源蛋白8（CBX8）在乳腺癌、胃癌、肝癌中高表達(dá)［3-4］?；诖?，本研究探究KISS-1、CBX8 在NSCLC 組織中的表達(dá)及二者間的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象 選取?？谑腥嗣襻t(yī)院（中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院） 胸部外科2018 ～2020 年間行肺部手術(shù)切除的存檔病理標(biāo)本蠟塊108 例， 其中NSCLC 組織84 例，良性肺組織24 例，所有蠟塊標(biāo)本均來自不同病例，經(jīng)甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋處理。NSCLC 病例中，男性58 例，女性26 例；年齡41～76 歲，平均（62.8 ± 10.6）歲；吸煙指數(shù)≥400 的36例，﹤400 的48 例；鱗癌52 例，腺癌32 例；病理分化程度高、中分化病例66 例，低分化18 例；所有病例均行淋巴結(jié)清掃術(shù)，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34 例； 按照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）2020年非小細(xì)胞肺癌TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ~ Ⅱ期病例38例，Ⅲ期病例46 例。所有病例術(shù)前均未行放療、化療、靶向、免疫治療等治療。

1.2 方法 KISS-1 抗體購自陜西愛維拉公司，CBX8 購自美國SAB 公司， 其他試劑均由?？谑腥嗣襻t(yī)院病理科提供。免疫組織化學(xué)S-P 法檢測標(biāo)本中KISS-1 和CBX8 的表達(dá)情況，并通過重復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證。購買抗體公司提供的陽性片為陽性對照，PBS 代替一抗為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 由病理科兩名具有中級以上職稱醫(yī)師根據(jù)雙盲原則及半定量分析法判定。KISS-1 蛋白染色結(jié)果評判：在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒即為陽性，并根據(jù)染色強(qiáng)度（0 分為無染色；1 分為淡黃色；2 分為棕黃色；3 分為棕褐色） 和陽性細(xì)胞百分率 （0 分為＜5%；1 分為5% ～25%；2 分為26% ～50%；3 分為51% ～74%；4 分為≥75%） 計算分?jǐn)?shù)，兩者的乘積為免疫組織化學(xué)染色的總得分， 得分0～3 分的判定為陰性，4 ～12 分判定為陽性［2］。CBX8評判標(biāo)準(zhǔn)：在細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)均勻一致的棕黃色顆粒即為陽性。鏡下隨機(jī)選取4 個×200 倍視野，每個視野計數(shù)100 個腫瘤細(xì)胞，計算400 個腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率計算分?jǐn)?shù)。兩者積分相乘即CBX8 的表達(dá)水平：0 ～4 為陰性（低表達(dá)），5 ～12 為陽性（高表達(dá)）［3］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用（%）表示，率的比較用四格表資料的χ2檢驗(yàn)； 相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman 等級分析，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 KISS-1、CBX8 在NSCLC 組織及良性肺組織中的表達(dá)情況 84 例NSCLC 組織中KISS-1 的陽性表 達(dá) 率 為44.05%（37/84），24 例 良 性 肺 組 織 中KISS-1 的陽性表達(dá)率為100%（24/24），兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=23.78，P ＜0.01）。84 例NSCLC 組織中CBX8 的陽性表達(dá)率為61.90%（52/84），24 例良性肺組織中CBX8 的陽性表達(dá)率為16.67%（4/24），兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.65，P ＜0.05）。

2.2 KISS-1、CBX8 的表達(dá)與腫瘤的生物學(xué)特征之間的關(guān)系 KISS-1 的表達(dá)與患者的性別、 抽煙指數(shù)、腫瘤類型以及癌組織分化程度之間無相關(guān)性（P＞0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（χ2=5.06，P ＜0.05）、腫瘤臨床分期（χ2=7.65，P ＜0.05）有明顯相關(guān)性。CBX8 的表達(dá)與患者性別、抽煙指數(shù)、腫瘤類型以及癌組織分化程度之間無相關(guān)性（P ＞0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（χ2=8.58，P ＜0.05）、 腫瘤臨床分期 （χ2=5.20，P ＜0.05）有明顯相關(guān)性，見表1。

表1 KISS-1、CBX8 的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)特征之間的關(guān)系

2.3 KISS-1 和CBX8 表達(dá)的相關(guān)性 NSCLC 中KISS-1 和CBX8 的表達(dá)均為陽性有15 例， 均為陰性有10 例。兩者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.341，P ＜0.05，表2）。

表2 NSCLC 中C-myc 和Artemin 表達(dá)的相關(guān)性（例）

3 討論

KISS-1 是在人黑色素細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)的一種抑瘤基因，其是一種單纖絲蛋白，能抑制腫瘤細(xì)胞的趨化性及侵襲性，從而限制腫瘤細(xì)胞的遷移，腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后與KISS-1 的表達(dá)下調(diào)密切相關(guān)［5-7］。研究發(fā)現(xiàn)，該基因抑制腫瘤的可能機(jī)制是：通過Gq蛋白耦聯(lián)途徑，通過MAPK 途徑抑制細(xì)胞的移形能力，下調(diào)MMP-9 活性抑制細(xì)胞的移形能力，與SH-3 介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)［8］。

色素框同源蛋白8（CBX8）是PcG 蛋白家族的重要組成部分，與細(xì)胞的分化、修復(fù)繼續(xù)衰老的關(guān)系非常密切［9-10］。CBX8 是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子，通過基因位點(diǎn)INK4A/ARF 途徑抑制細(xì)胞的增殖， 在許多腫瘤組織中呈高表達(dá)［11-12］。

本研究發(fā)現(xiàn)KISS-1 在NSCLC 組織中的表達(dá)明顯低于良性肺組織， 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、 分期早的NSCLC 組織中KISS-1 的表達(dá)明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期晚的NSCLC 組織。表明KISS-1 蛋白的低表達(dá)發(fā)生在癌變早期階段， 其低水平表達(dá)促進(jìn)NSCLC 的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移，發(fā)揮類似癌基因樣作用， 提示可將KISS-1 蛋白的表達(dá)情況作為NSCLC的臨床分期指標(biāo)，并用于判斷預(yù)后。CBX8 在NSCLC組織中的表達(dá)明顯高于良性肺組織， 分化程度好、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期早的NSCLC 組織中CBX8 的表達(dá)明顯高于分化程度差、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期晚的NSCLC 組織， 提示CBX8 有應(yīng)用于NSCLC 的臨床診斷、病情進(jìn)展和療效監(jiān)測的潛在價值。統(tǒng)計學(xué)表明，二者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，但二者間表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性的機(jī)制仍不明， 國內(nèi)外也缺乏相關(guān)的報道，推測可能與癌基因的通道機(jī)制有關(guān)，這可以作為下一步本實(shí)驗(yàn)深入研究的方向。

許多研究發(fā)現(xiàn)KISS-1 和CBX8 在人類多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，但其詳細(xì)的作用機(jī)制及其調(diào)控尚未完全明了。深入研究KISS-1 和CBX8 對惡性腫瘤的生物學(xué)作用，明確其在腫瘤中的作用及分子機(jī)制，可能對腫瘤的治療與預(yù)后判斷有著潛在價值。目前，KISS-1、CBX8 與腫瘤的研究仍處于初級階段，其在腫瘤中的作用及機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。