馬齒莧復(fù)合控糖片輔助降血糖功能

張海悅，閆小娟，徐鶴，武旭明

1. 長春工業(yè)大學(xué)（長春 130000）；2. 吉林省富生特醫(yī)食品有限公司（長春 130607）

2021年全球糖尿病報(bào)告，全球糖尿病患者已達(dá)到5.37億人，中國糖尿病報(bào)告患者人數(shù)達(dá)1.41億人，是全世界糖尿病患者數(shù)量最多的國家。大量降血糖藥物在臨床應(yīng)用，但不良反應(yīng)大、使用不便，療效不穩(wěn)定，尚未發(fā)現(xiàn)有效的治療藥物。胰島素只能緩解患者血糖升高，無法治愈。天然抗糖尿病藥物以其不良反應(yīng)小和不產(chǎn)生耐藥性而受到關(guān)注，特別在發(fā)展中國家得到廣泛利用[1]。

糖尿病治療仍是世界性難題。常用的控制血糖方法除了藥物控制，輔助降血糖類保健食品控制也成為人們常用的方法之一，而藥物長期使用會(huì)出現(xiàn)耐藥性，且服用劑量大或長時(shí)間服用副作用更為明顯（如噻唑二烷酮對(duì)胰島素抵抗的肥胖患者可降低和改善糖耐量，但會(huì)導(dǎo)致水腫和低血糖；拜糖平主要降低餐后高血糖和緩解高胰島素血癥，但會(huì)引起患者的胃腸道反應(yīng)）[2-3]。

馬齒莧是馬齒莧科植物馬齒莧（Portulaca oleraceaL.）的干燥地上部分，分布在全世界溫帶和熱帶地區(qū)，在我國各地均產(chǎn)，全草供藥用，有清熱利濕、解毒消腫、消炎、止渴、利尿作用，種子明目?，F(xiàn)代藥理研究表明，馬齒莧具有很好的降血糖作用，馬齒莧多糖可作用于胰島細(xì)胞和促進(jìn)胰島素的分泌以調(diào)控血糖的高低[4-6]。

試驗(yàn)用馬齒莧、苦瓜、黃芪和蒼術(shù)進(jìn)行配伍并配合微量具有降糖作用的吡啶甲酸鉻，同時(shí)結(jié)合填充劑、黏合劑、崩解劑制備一種便于攜帶的馬齒莧復(fù)合控糖片，探討該控糖片對(duì)胰島損傷高血糖大鼠模型的輔助降血糖功能，從而為馬齒莧復(fù)合控糖片的推廣應(yīng)用提供臨床依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SQP QUINTIX6101-1CN電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；NV2201ZH電子天平[奧豪斯國際貿(mào)易（上海）有限公司]；Scout系列/STX2201ZH電子天平[奧豪斯國際貿(mào)易（上海）有限公司]；雅斯血糖測試儀和配套血糖試紙（青島厚美德生物科技股份有限公司）；四氧嘧啶（sigma-aldrich）；葡萄糖（天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

1.2 供試樣品

由自制的馬齒莧復(fù)合控糖片，樣品性狀為片劑，規(guī)格0.2 g/片。人口服推薦用量為3次/d，1次2片，即1.2 g/人/d，成人體重按60 kg計(jì)算，折合小鼠劑量為0.02 g/（kg·bw·d）。

1.3 試驗(yàn)條件

1.3.1 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性昆明小鼠180只[動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)110324210106489574，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（京）2019-0010，斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司]，動(dòng)物適應(yīng)1 d。

1.3.2 試驗(yàn)環(huán)境

試驗(yàn)動(dòng)物房為屏障系統(tǒng)[使用許可證號(hào)SYXKC（陜）2021-009，溫度20~26 ℃，相對(duì)濕度40%~70%]。

1.3.3 維持飼料

動(dòng)物維持飼料[生產(chǎn)許可證號(hào)為蘇飼證（2019）01008，飼料合格證號(hào)120211020048，江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司]。

1.3.4 動(dòng)物墊料

試驗(yàn)動(dòng)物玉米芯墊料（德州谷美農(nóng)業(yè)科技有限公司）。

1.4 劑量選擇與受試物給予方式

將雄性小鼠共分兩大組，第1組為正常動(dòng)物降糖試驗(yàn)，高劑量組[0.6 g/（kg·bw），相當(dāng)于人體推薦用量的30倍]、1個(gè)空白對(duì)照組（純水），每組15只動(dòng)物；第2組為胰島損傷高血糖模型降糖試驗(yàn)，設(shè)0.6，0.4和0.2 g/（kg·bw）共3個(gè)劑量組，分別相當(dāng)于人體推薦用量的30，20和10倍。另設(shè)1個(gè)模型對(duì)照組（純水），每組15只動(dòng)物。樣品配制：分別稱取0.6，0.4和0.2 g樣品加純水至20 mL混合均勻，分別配成濃度30%，20%和10%的混懸液，備用。灌胃體積均按20 mL/（kg·bw）每日經(jīng)口灌胃1次，連續(xù)灌胃30 d后進(jìn)行各指標(biāo)測定。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 正常動(dòng)物降糖試驗(yàn)

適應(yīng)性飼養(yǎng)1 d后，選30只體重在24~28 g健康小鼠，按禁食4 h的血糖水平分組，隨機(jī)分1個(gè)高劑量組和1個(gè)空白對(duì)照組，每組15只動(dòng)物，分籠喂養(yǎng)?？瞻讓?duì)照組給予純水，劑量組給予高劑量濃度受試樣品[0.6 g/（kg·bw）]，灌胃體積按20 mL/（kg·bw）每日經(jīng)口灌胃1次，連續(xù)30 d，測空腹血糖（禁食4 h），比較2組動(dòng)物血糖值。

1.5.2 高血糖模型降糖試驗(yàn)

適應(yīng)性飼養(yǎng)1 d后，選150只體重在24~28 g健康小鼠，隨機(jī)取15只動(dòng)物禁食4 h，測空腹血糖，作為該批動(dòng)物基礎(chǔ)血糖值。動(dòng)物禁食24 h（自由飲水）后，尾靜脈注射四氧嘧啶[50 mg/（kg·bw）]現(xiàn)配現(xiàn)用，尾靜脈注射，1次造模。5 d后禁食4 h，測血糖。選取60只高血糖模型成功小鼠（血糖值在11.1~23.5 mmol/L），按禁食4 h的血糖水平分組，隨機(jī)分高、中、低3個(gè)劑量組，1個(gè)模型對(duì)照組。試驗(yàn)前后禁食條件一致，禁食的同時(shí)更換墊料，每組15只動(dòng)物，分籠喂養(yǎng)。各劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予等容量溶劑，灌胃體積按20 mL/（kg·bw）每日經(jīng)口灌胃1次，連續(xù)灌胃30 d。測空腹血糖值（禁食4 h），比較各組動(dòng)物血糖值及血糖下降率，血糖下降率按式（1）計(jì)算。

1.5.3 胰島損傷高血糖模型糖耐量試驗(yàn)

以高血糖模型動(dòng)物降糖試驗(yàn)組動(dòng)物試驗(yàn)后的空腹血糖為給葡萄糖前（即0 h）血糖值，各劑量組給予1次相應(yīng)濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同容量溶劑，20 min后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.0 g/（kg·bw），測定給葡萄糖后各組0.5和2.0 h的血糖值。觀察模型對(duì)照組與受試樣品組給予葡萄糖后各時(shí)點(diǎn)（0，0.5和2.0 h）血糖值及血糖曲線下面積的變化，血糖曲線下面積按式（2）計(jì)算。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜F0.05，各組均數(shù)間差異無顯著性；F值＞F0.05，P＜0.05，用多個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)小鼠體重的影響

馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)正常小鼠體重的影響見表1。結(jié)果表明，正常組和高劑量組小的鼠各期體重和增重與空白對(duì)照組比較，差異均無顯著性。

表1 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)正常小鼠體重的影響（±SD）

表1 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)正常小鼠體重的影響（±SD）

組別 劑量/(g·kg-1·bw-1) 動(dòng)物數(shù)/只 體重/g初始重 中期重 末期重 增重高劑量組 0.6 15 25.4±0.6 36.5±1.1 42.7±1.2 17.3±1.4空白對(duì)照組 0.0 15 25.7±0.7 35.8±1.3 42.4±1.4 16.8±1.0

馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠體重的影響見表2。結(jié)果表明，高血糖模型各劑量組小鼠各期體重和增重與模型對(duì)照組比較，差異均無顯著。說明馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)于高血糖模型小鼠體重?zé)o影響。

表2 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠體重的影響（±SD）

表2 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠體重的影響（±SD）

組別 劑量/(g·kg-1·bw-1) 動(dòng)物數(shù)/只 體重/g初始重 中期重 末期重 增重高劑量組 0.6 15 28.9±1.4 37.4±2.4 41.2±2.2 12.3±1.9中劑量組 0.4 15 29.1±1.7 37.6±2.1 41.0±1.4 12.0±1.2低劑量組 0.2 15 29.3±1.4 37.2±1.7 40.5±1.9 11.2±1.1模型對(duì)照組 0.0 15 28.9±1.4 36.8±1.8 40.3±2.0 11.4±1.7

2.2 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)正常小鼠空腹血糖的影響

馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)正常小鼠空腹血糖的影響見表3。結(jié)果表明，正常組高劑量組小鼠空腹血糖值與空白對(duì)照組比較，差異無顯著性（P＞0.05）。馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)空腹血糖值無影響。

表3 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)正常小鼠空腹血糖的影響（±SD）

表3 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)正常小鼠空腹血糖的影響（±SD）

組別 劑量/(g·kg-1·bw-1) 動(dòng)物數(shù)/只空腹血糖值/(mmol·L-1) 試驗(yàn)前 P值 試驗(yàn)后 P值高劑量組 0.6 15 7.1±0.7 1.000 7.1±0.8 0.679空白對(duì)照組0.0 15 7.1±0.8 7.1±0.9

2.3 造模前小鼠基礎(chǔ)血糖值及體重

由表4可見，從健康小鼠150只隨機(jī)取15只動(dòng)物禁食4 h測得血糖均值為7.1 mmol/L。

表4 小鼠基礎(chǔ)血糖值及體重（±SD）

表4 小鼠基礎(chǔ)血糖值及體重（±SD）

組別 動(dòng)物數(shù)/只 體重/g 空腹血糖值/(mmol·L-1) 隨機(jī) 15 25.5±0.7 7.1±0.9

2.4 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠空腹血糖的影響

由表5可見，給予受試樣品后，高血糖模型小鼠各劑量組與模型對(duì)照組比較，各劑量組空腹血糖值降低且低于模型對(duì)照組，但差異均無顯著性（P＞0.05），各劑量組血糖下降率升高，且高劑量組差異有顯著性（P＜0.05）。

由表5可見，給予受試樣品后，高血糖模型小鼠各劑量組與模型對(duì)照組比較，各劑量組空腹血糖值降低且低于模型對(duì)照組，但差異均無顯著性（P＞0.05），各劑量組血糖下降率升高，且高劑量組差異有顯著性（P＜0.05）。

表5 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠空腹血糖的影響（±SD）

表5 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠空腹血糖的影響（±SD）

組別 劑量/(g·kg-1·bw-1) 動(dòng)物數(shù)/只 試驗(yàn)前 試驗(yàn)后空腹血糖值/(mmol·L-1) P值 空腹血糖值/(mmol·L-1) P值 血糖下降率/% P值高劑量組 0.6 15 16.8±4.2 1.000 11.9±2.6 0.514 27.6±7.1* 0.011中劑量組 0.4 15 16.9±4.3 0.998 12.6±2.5 0.932 23.9±7.2 0.356低劑量組 0.2 15 16.6±4.2 1.000 12.9±3.4 0.993 22.1±6.5 0.813模型對(duì)照組 0 15 16.7±4.2 13.1±3.2 20.3±6.5

2.5 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠糖耐量的影響

由表6可見，給予葡萄糖前，各劑量組在0 h血糖值均低于模型對(duì)照組，與模型對(duì)照組比較，但差異均無顯著性（P＞0.05）。各組給予葡萄糖后，各劑量組在0.5和2 h的血糖值及血糖曲線下面積均低于模型對(duì)照組，與模型對(duì)照組比較，其中高劑量組2 h血糖值，差異有顯著性（P＜0.05）

表6 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠糖耐量的影響（±SD）

表6 馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)高血糖模型小鼠糖耐量的影響（±SD）

組別 劑量/(g·kg-1·bw-1) 動(dòng)物/只 給糖后血糖值/(mmol·L-1) 血糖曲線下面積 P值0 h P值 0.5 h P值 2 h P值高劑量組 0.6 15 11.9±2.6 0.514 18.4±3.6 0.154 14.5±2.8 0.033 32.2±6.0 0.075中劑量組 0.4 15 12.6±2.5 0.932 19.1±3.6 0.408 15.4±3.0 0.238 33.9±5.7 0.326低劑量組 0.2 15 12.9±3.4 0.993 19.8±3.7 0.734 16.5±3.0 0.888 35.4±6.3 0.791模型對(duì)照組 0 15 13.1±3.2 20.9±3.5 17.1±2.4 37.0±5.2

結(jié)果顯示高血糖模型動(dòng)物的空腹血糖指標(biāo)和糖耐量2項(xiàng)指標(biāo)均為陽性，且對(duì)正常小鼠空腹血糖無影響。依據(jù)國食藥監(jiān)?；痆2012]107號(hào)“輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法”，可判定“馬齒莧復(fù)合控糖片”輔助降血糖功能動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果為陽性。

馬齒莧復(fù)合控糖片以馬齒莧多糖為君，苦瓜為臣，佐以黃芪蒼術(shù)，君臣佐使，并配合微量具有降糖作用的吡啶甲酸鉻制成，其降血糖作用可能是由于其各種成分的協(xié)同作用：馬齒莧具有抗糖尿病的作用，提高四氧嘧啶小白鼠的糖耐量，保護(hù)肝臟，抑制糖尿病小鼠的前脂肪細(xì)胞的分化，提高糖尿病小鼠血清胰島素水平，增加HDL-C值：調(diào)節(jié)血脂代謝，抑制α-葡萄糖苷醇和提高糖尿病小鼠的高密度脂蛋白水平[7-10]；苦瓜也是一種“藥食同源”食品原料，素有“藥用蔬菜”之稱，在中醫(yī)看來，苦瓜可以清熱解毒，有滋養(yǎng)強(qiáng)壯之效，歸心、脾、肺經(jīng)，研究表明，苦瓜的水提物或者醇提物都具有輔助降血糖功效，苦瓜的全果都是具有利用價(jià)值的[11-14]；黃芪為豆科植物膜莢黃芪或蒙古黃芪的干燥根，具補(bǔ)氣固表、利尿、強(qiáng)心、降壓、抗菌、托毒作用[15-16]；蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)或北蒼術(shù)的干燥根莖，味辛、苦，性溫，歸脾、胃、肝經(jīng)[17]。黃芩搭配蒼術(shù)，在王麗丹等關(guān)于“芪術(shù)顆?！钡难芯恐斜砻?，針對(duì)糖尿病腎病具備與眾不同而關(guān)鍵的功效[18]。黃芪的功效不獨(dú)補(bǔ)氣血之一端，其既能牽正，且能調(diào)達(dá)血?dú)?，補(bǔ)而兼通，性不壅膩[19]。此外，添加吡啶甲酸鉻，鉻是葡萄糖耐量因子的一個(gè)重要組成部分，糖尿病患者必不可少的微量營養(yǎng)素，能改進(jìn)能量平衡和胰島素功能，增強(qiáng)胰島素活性，改善人體糖代謝[20]。

3 結(jié)論

建立四氧嘧啶誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型。結(jié)果顯示高血糖模型動(dòng)物的空腹血糖指標(biāo)和糖耐量2項(xiàng)指標(biāo)均為陽性，且對(duì)正常小鼠空腹血糖無影響。依據(jù)國食藥監(jiān)?；痆2012]107號(hào)“輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法”，可判定“馬齒莧復(fù)合控糖片”輔助降血糖功能動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果為陽性。雖然馬齒莧復(fù)合控糖片對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型表現(xiàn)出積極的降血糖作用，但是畢竟人體與大鼠體內(nèi)環(huán)境不盡相同，后續(xù)可通過增加人體臨床試驗(yàn)，從而為馬齒莧復(fù)合控糖片的推廣應(yīng)用提供依據(jù)。