超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測畜禽肉和鮮蛋中磺胺類藥物殘留研究

向 俊，唐萬里，胡玲俐，陳同強，荊輝華

（湖南省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，湖南長沙 410111）

磺胺類藥物因其效果好、毒性低、價格便宜，在獸醫(yī)臨床與畜牧業(yè)中得到大量應(yīng)用。此類藥物的半衰期較長，人類經(jīng)各種渠道攝入后均會在體內(nèi)逐漸蓄積，威脅人類健康。我國要求此類藥物在禽肉中的允許標(biāo)準(zhǔn)為100 μg·kg-1，鮮蛋中不得檢出[1]。本文采用高靈敏度、高通量的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方式，對禽肉及鮮蛋中殘存的磺胺類藥物進行更準(zhǔn)確的研究分析。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料與試劑

10 種磺胺類標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99%；乙腈，色譜純；正己烷，色譜純；乙酸乙酯，分析純；正丙醇，分析純。

1.1.2 儀器設(shè)備

液相系統(tǒng)：SHIMADZU Nexera X2；質(zhì)譜系統(tǒng)：AB SCIEX QTRAP?4500。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

逐一取以上標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，將其放到100 mL容量瓶內(nèi)，選擇乙腈進行溶解，然后定容到相應(yīng)刻度，搖勻，制備出100 μg·mL-1的儲備液，將其放置在冰箱存儲，溫度設(shè)為4 。用乙腈來稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液，使其成為實驗所需的濃度，待用。

1.2.2 液相條件

色譜柱：Hypersil GOLD（100mm×2.1 mm，3 μm）；流動相：A 為0.1%甲酸，5 mmol·L-1乙酸銨水溶液，B 為甲醇溶液；柱溫：35 ；樣品溫度：15 ；進樣量：5 μL。洗脫梯度為0 ～2.0 min，5% B；2.0 ～4.0 min，5% B 15% B；4.0 ～5.0 min，15% B；5.0 ～8.0 min，15% B 40% B；8.0 ～10.0 min，40% B 95% B；10.0 ～16.0 min，95% B；16.0 ～16.5 min，95% B 5% B；16.5 ～20.0 min，5% B。

1.2.3 質(zhì)譜條件

系統(tǒng)：AB SCIEX QTRAP?4500；離子源：ESI+；采集方式：MRM；離子化電壓：5.5 kV；離子源溫度：450 °C；噴霧氣40 psi；輔助加熱氣40 psi；氣簾氣25 psi。

1.2.4 樣品處理

取2 g 樣品，將其放到玻璃研缽內(nèi)，然后取約6 g（需精確到0.01 g）C18填料加到試驗樣品中，通過玻璃杵小心研磨，讓填料與樣品能均勻混合。取50 mL具塞螺旋蓋聚四氟乙烯離心管用于裝上述混合物，然后按100 ∶3 的比例制成乙腈-水溶液，取25 mL此溶液加入上述離心管內(nèi)，采用渦旋振蕩60 s，再將離心管置于家用微波爐內(nèi)，在光波模式下進行微波照射30 s，用3 000 r·min-1進行離心300 s，再把乙腈層轉(zhuǎn)移至100 mL 的棕色分液漏斗內(nèi)。對于離心后的沉淀，重新添加乙腈25 mL，再搖勻，在微波輔助下提取30 s，按3 000 r·min-1進行離心處理300 s，再將乙腈提取液進行合并，等待凈化。取25 mL 乙腈飽和正己烷溶液加入提取液內(nèi)，振蕩處理300 s，再把底層的乙腈溶液轉(zhuǎn)移至150 mL 棕色雞心瓶內(nèi)，并添加正丙醇10 mL，借助旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45 的水浴內(nèi)進行減壓蒸發(fā)處理，直到快干，通過氮氣流將其吹干[2]。取1 mL 提前制備的1 ∶1 乙腈-水溶液，將其加入后運用超聲溶解殘渣30 s，把溶解液轉(zhuǎn)移到10 mL 棕色離心管內(nèi)，加入乙腈飽和的正己烷0.5 mL，渦旋處理120 s，按3 000 r·min-1進行離心300 s，去除正己烷溶液，將底層乙腈-水溶液用0.22 μm 微孔濾膜過濾后待用，供超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜條件

將磺胺藥物都逐一制作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為100 μg·L-1，無需通過色譜柱，直接選擇質(zhì)譜進樣，選擇ESI+離子化模式，開展母離子與子離子掃描，對二級碎片離子數(shù)據(jù)進行優(yōu)化，得到定性離子以及定量離子最合理的質(zhì)譜條件（表1）[3-4]。

表1 10 種磺胺類藥物質(zhì)譜參數(shù)

2.1.2 液相條件

本次研究中就甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸，5 mmol·L-1乙酸銨水對各化合物的色譜峰及離子化的影響進行了分析比較。結(jié)果顯示，磺胺類藥物結(jié)構(gòu)中包括氨基，表現(xiàn)為弱堿特性，在ESI+離子化條件下磺胺類化合物在堿性或中性的流動相體系中形成的色譜峰形不好，但將相關(guān)比例的甲酸添加到流動相中可大幅提升離子化效率，特別是添加少量的乙酸銨可兼顧到不同極性磺胺類藥物的離子化速度[5]。因此，確定流動相為甲醇-0.1%甲酸，5 mmol·L-1乙酸銨水，磺胺類藥物的峰形理想，也較高。

2.2 線性范圍及方法的檢出限

對1.2.1項下磺胺類標(biāo)準(zhǔn)溶液逐一精準(zhǔn)量取少量，再將空白禽肉與空白鮮蛋基質(zhì)作為溶劑，空白禽肉選擇雞肉為代表，稀釋制備成系列濃度為10.0 ng·mL-1、20.0 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1、100.0 ng·mL-1、200.0 ng·mL-1和500.0 ng·mL-1的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)以上色譜條件進行研究，橫縱坐標(biāo)分別是濃度與峰面積，開展線性回歸，得各磺胺類藥物線性回歸方程，結(jié)果見表2，這些藥物在10.0 ～500.0 ng·mL-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。根據(jù)信噪比S/N=10 得出這些藥物的定量限為50 μg·kg-1。

表2 10 種磺胺類藥物的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及定量限

2.3 回收率及精密度

稱取空白畜禽肉（以雞肉為代表）和鮮蛋樣品各5.0 g，添加3 種不同濃度（20 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1)的10 種磺胺類藥物，每個濃度6 份，按1.2.4 項下進行前處理，進樣分析，得出這些藥物回收率以及精密度，結(jié)果見表3。10 種磺胺類藥物在畜禽肉和鮮蛋中的回收率分別為80.1%～96.4%和79.6% ～98.7%，RSD 分 別 為3.3% ～9.2% 和2.4%～9.0%，表明本方法回收率和精密度良好，可滿足試樣的分析要求。

表3 10 種磺胺類藥物在畜禽肉和鮮蛋中的回收率及精密度（單位：%）

3 結(jié)論

綜上，運用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測畜禽肉和鮮蛋中殘存多磺胺類藥物的方法，精密度好、準(zhǔn)確度高，回收率好，可對畜禽肉和鮮蛋中的磺胺類藥物殘留進行定性和定量分析，滿足對大批量多磺胺類藥物殘留檢測的需求。