腫瘤組織Nectin-4、RRBP1、RvD1表達與食管癌病理特征相關(guān)性及其臨床意義

魯碩君 田國防 李春青

河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院 453000

食管癌(Esophageal cancer，EC)發(fā)病率占據(jù)我國全部惡性腫瘤的第6位，其主要特點為惡性程度高、預(yù)后差，術(shù)后患者5年生存率為25%～40%，EC早期缺乏特異性體征，部分患者確診時已處于中晚期，手術(shù)、放化療等可減輕腫瘤負(fù)荷，但復(fù)發(fā)率高，因而從分子層面尋找EC發(fā)生發(fā)展相關(guān)基因/蛋白對早期診斷、監(jiān)測疾病進展具有重要意義[1]。連接蛋白4(Nectin-4)是一種免疫球蛋白分子，可維持細胞間黏附力，改善細胞骨架肌蛋白，促進板狀/絲狀偽足生成，進而促進腫瘤細胞侵襲，研究表明Nectin-4在EC組織中呈高表達，且與腫瘤分期、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[2]。核糖體結(jié)合蛋白1(RRBP1)屬于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白，可參與蛋白轉(zhuǎn)運、分泌過程，已知RRBP1在EC中表達量增高，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后不良有關(guān)[3]。消退素D1(RvD1)具有抗炎、抗氧化作用，可抑制軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)分泌，進而抑制肝細胞癌細胞生長、轉(zhuǎn)移[4]。Nectin-4、RRBP1、RvD1表達變化與食管癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)性仍需進一步探討，本研究觀察了EC組織中Nectin-4、RRBP1、RvD1表達量，分析其與臨床病理特征的相關(guān)性，為臨床治療EC提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年4月—2022年5月本院收治的94例EC患者為研究組，選取同期47例食管良性病變患者(食管炎13例、食管潰瘍20例、Barrett食管14例)作為病變組。研究組：男56例、女38例，年齡46～68(56.19±2.41)歲，體質(zhì)量指數(shù)20～25(23.24±0.56)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有38例、無56例；腫瘤類型：浸潤型34例、潰瘍型28例、髓質(zhì)型22例、蕈傘型10例；腫瘤發(fā)生位置：食管上段22例、中段53例、下段19例；分化程度[5]：低分化15例、中分化40例、高分化39例；TNM分期[6]：Ⅰ期31例、Ⅱ期36例、Ⅲ期27例。病變組：男27例、女20例，年齡48～70(57.02±2.55)歲，體質(zhì)量指數(shù)20～26(23.10±0.51)。各組一般資料比較無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及其家屬知情且簽署知情同意書。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理學(xué)診斷確診為EC；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者；合并嚴(yán)重感染者；重要臟器病變者。

1.3 方法

1.3.1 采集組織樣本：手術(shù)時切除EC組織、癌旁組織(病灶>5cm處)，病變組患者經(jīng)組織病理學(xué)檢查時切除部分組織。

1.3.2 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測組織樣本中Nectin-4、RRBP1、RvD1 mRNA表達量：采用Trizol試劑(美國Invitrogen公司)提取組織總RNA，吸取2μl RNA檢測RNA濃度，主要觀察RNA的A260/A280比值，比值處于1.6～1.8之間RNA純度較高。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京天根生化)合成cDNA，qRT-PCR反應(yīng)體系(北京天根生化)：cDNA 2μl，Real-Time Master Mix 10μl，正反向引物各1μl，RNase-Free ddH2O補足體系至20μl；反應(yīng)條件：95℃ 2min，95℃ 15s，60℃ 1min，72℃ 30s(循環(huán)40次)。以2-ΔΔCt法計算基因相對表達量。上海生工生物工程公司設(shè)計引物，Nectin-4正向引物5’-CAAAATCTGTGGCACATTGG-3’，反向引物5’-GCTGACATGGCAGACGTAGA-3’；RRBP1正向引物5’-TGAATCCTCCAAAGACCACA-3’，反向引物5’-CTTTCCCTCTCGCGTCTCT-3’；RvD1正向引物5’-CACGCATATACCCGC-3’，反向引物5’-AAGGCGGTCTTAGCCTC-3’；GAPDH正向引物5’-AACGGATTTGGTCGTATTG-3’，反向引物5’-GGAAGATGGTGATGGGATT-3’。

1.4 觀察指標(biāo) (1)分析組織樣本、不同病理特征患者中Nectin-4、RRBP1、RvD1表達量，分析其與病理特征相關(guān)性。(2)分析各指標(biāo)對EC診斷價值，及其對EC發(fā)生的危險度。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中Nectin-4、RRBP1、RvD1 mRNA表達量 EC組織、病變組織中Nectin-4、RRBP1 mRNA表達量高于癌旁組織，且EC組織高于病變組織，RvD1 mRNA表達量低于癌旁組織，且EC組織低于病變組織(P<0.05)，見表1。

表1 不同組織中Nectin-4、RRBP1、RvD1 mRNA表達量

2.2 不同病理特征EC患者中Nectin-4、RRBP1、RvD1 mRNA表達量比較 伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Nectin-4、RRBP1 mRNA表達量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，RvD1 mRNA表達量低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者；低分化患者Nectin-4、RRBP1 mRNA表達量>中分化>高分化，低分化患者RvD1 mRNA表達量<中分化<高分化；Ⅰ期患者Nectin-4、RRBP1 mRNA表達量<Ⅱ期<Ⅲ期，Ⅰ期患者RvD1 mRNA表達量>Ⅱ期>Ⅲ期(P<0.05)，見表2。

表2 不同病理特征EC患者中Nectin-4、RRBP1、RvD1 mRNA表達量比較

2.3 Nectin-4、RRBP1、RvD1與病理特征相關(guān)性分析 Nectin-4、RRBP1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期呈正相關(guān)，且與分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；RvD1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期呈負(fù)相關(guān)，且與分化程度呈正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 Nectin-4、RRBP1、RvD1與病理特征相關(guān)性分析

2.4 ROC分析Nectin-4、RRBP1、RvD1對EC的診斷價值 以EC患者癌組織(94例)、癌旁組織(94例)分別作為陽性樣本、陰性樣本，繪制ROC曲線，結(jié)果顯示，聯(lián)合診斷EC的AUC大于單項診斷(P<0.05)，見表4。

表4 ROC分析Nectin-4、RRBP1、RvD1對EC的診斷價值

2.5 Nectin-4、RRBP1、RvD1對EC發(fā)生的危險度分析 以2.4結(jié)果中cut-off值為界，EC患者分為高表達、低表達，結(jié)果顯示Nectin-4、RRBP1高表達患者發(fā)生EC的危險度分別是低表達患者的1.636、1.491倍；RvD1低表達患者發(fā)生EC的危險度是高表達患者的1.751倍(P<0.05)，見表5。

表5 Nectin-4、RRBP1、RvD1對EC發(fā)生的危險度分析

3 討論

EC發(fā)生屬于漸進過程，炎性因子產(chǎn)生、炎性增生直至不典型增生，隨著病情發(fā)展最終形成EC，腫瘤形成過程中幾個階段相互重疊增加區(qū)分難度，因而EC早期診斷、監(jiān)測病情進展成為改善患者預(yù)后的關(guān)鍵[7]。

Nectin-4可介導(dǎo)上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，降低細胞間黏附力，增強細胞活動性，進而促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移，近年來研究顯示，Nectin-4在胃癌等多種惡性腫瘤組織中呈高表達，且與腫瘤TNM分期、分化程度有關(guān)[8]。本研究結(jié)果顯示，EC組織中Nectin-4表達量高于癌旁組、病變組，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期呈負(fù)相關(guān)，且與分化程度呈正相關(guān)，這與上述文獻報道中Nectin-4作用效果相似[8]。Nectin-4可與細胞膜表面受體/黏附分子共同作用，調(diào)節(jié)腫瘤細胞增殖、遷移[9]。這就表明Nectin-4可與其他細胞黏附因子相互作用，調(diào)節(jié)細胞生長、運動，對EC發(fā)生、轉(zhuǎn)移具有一定促進作用。乳腺癌組織中Nectin-4陽性表達且表達量升高，其與腫瘤病理類型密切相關(guān)，且與乳腺癌化療效果有關(guān)，可能作為乳腺癌診療的潛在標(biāo)記物[10]。由此推測，Nectin-4可能作為診斷EC的分子標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，EC組織中Nectin-4表達量>4.07時敏感度、特異度分別為62.77%、72.34%，表明單獨檢測存在假陽性/假陰性，提示多項標(biāo)記物聯(lián)合檢測可能提高診斷價值。

RRBP1是由膜結(jié)合、核糖體結(jié)合、酸性卷曲螺旋末端結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其與未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)信號途徑相關(guān)蛋白相互作用，增強細胞增殖能力，保護腫瘤細胞免受氧化應(yīng)激損傷，研究表明，RRBP1在肺癌等多種惡性腫瘤組織中表達量升高，且與患者預(yù)后不良有關(guān)[11]。本研究結(jié)果顯示，EC組織中RRBP1表達量升高，且隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度降低，TNM分期增加，RRBP1表達量相應(yīng)增加，表明RRBP1表達變化與EC臨床病理特征密切相關(guān)?？赡茉驗镽RBP1可上調(diào)糖調(diào)節(jié)蛋白78表達，減低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，抑制EC細胞凋亡，促進其增殖、轉(zhuǎn)運，進而促進EC病理特征惡性進展。廖代祥等[12]研究表明RRBP1在結(jié)直腸癌中表達水平升高，且與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，RRBP1、EC臨床病理特征的相關(guān)性研究與其相似，進一步分析發(fā)現(xiàn)RRBP1高表達量可增加EC發(fā)生風(fēng)險，提示RRBP1在EC發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用，其可能調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，進而促進EC轉(zhuǎn)移。RvD1可抑制白細胞介素6(IL-6)等炎性因子表達，進而抑制葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的結(jié)腸直腸癌發(fā)生[13]。RvD1還可抑制磷酸化細胞外信號相關(guān)激酶(p-ERK)表達，進而抑制肝癌細胞增殖[14]。

本研究結(jié)果顯示，EC組織、癌前病變組織中RvD1表達量低于癌旁組織，且EC組織低于癌前病變組，RvD1表達量降低與EC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期有關(guān)，RvD1低表達患者發(fā)生EC的危險度是高表達患者的1.751倍。由于EC發(fā)生發(fā)展與腫瘤微環(huán)境有關(guān)，炎性反應(yīng)加劇可破壞腫瘤微環(huán)境穩(wěn)定性，進而促進癌變的發(fā)生，RvD1可抑制炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)多種信號通路表達，其在EC發(fā)生發(fā)展過程中可發(fā)揮抑癌基因作用。同時，本研究結(jié)果還顯示，Nectin-4、RRBP1、RvD1聯(lián)合診斷EC的AUC大于單項診斷，提示Nectin-4、RRBP1、RvD1對EC發(fā)生具有一定診斷價值。

綜上所述，EC組織中Nectin-4、RRBP1表達量升高，RvD1表達量減低，可增加EC發(fā)生風(fēng)險，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期密切相關(guān)，監(jiān)測其表達量可能有助于判斷EC患者病情嚴(yán)重程度，及時采取干預(yù)措施，可為臨床EC的靶向治療提供新方向。