益氣調(diào)髓方通過骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD56+來源的外泌體調(diào)控軟骨細(xì)胞活性的機(jī)制研究

張揚(yáng)，繆毛毛，化昊天，成鋒，童培建

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）是一類具有多向分化、多因子分泌及免疫調(diào)節(jié)等特點(diǎn)的多功能干細(xì)胞[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，BM-MSCs 是一些細(xì)胞標(biāo)志物的異質(zhì)細(xì)胞群，不同的BM-MSCs 亞型細(xì)胞異質(zhì)性程度不同、分化能力也不同[3]。最新研究表明，CD56+BM-MSCs可進(jìn)行有效軟骨細(xì)胞分化[4-5]。此外，BM-MSCs 被證實(shí)可通過分泌外泌體修復(fù)受損軟骨組織[6-7]。

益氣調(diào)髓方（下文簡稱“YQTS”）由黃芪、杜仲、丹參、當(dāng)歸、菟絲子等藥物組成，具有益氣活血、補(bǔ)益肝腎、理氣止痛的功效[8]，臨床應(yīng)用已有二十余年，療效確切。臨床研究發(fā)現(xiàn)，YQTS可治療膝骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松等疾病，并有效促進(jìn)骨髓水腫吸收、修復(fù)軟骨組織，但其具體機(jī)制尚不明確。本研究探究YQTS是否通過CD56+BM-MSCs來源的外泌體調(diào)控軟骨細(xì)胞活性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

12只6～8周的雌性健康SD大鼠，體重（200±10）g，SPF級，飼養(yǎng)條件為室溫22℃、恒濕、自由飲水。動物使用許可證號為SYXK（浙）20190010，動物實(shí)驗(yàn)在浙江省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動物中心完成。

1.2 材料與試劑

YQTS由黃芪20 g、丹參20 g、杜仲15 g、當(dāng)歸20 g、菟絲子10 g、延胡索10 g組成，方中藥材均購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司，將上述藥材按照1∶10料液比水煎煮提?。逯? 次、每次1 h），過濾后合并提取液，濃縮至1 g/ml 備用。DMEM 培養(yǎng)基（ELGBIO，EH80243）、0.25%的胰蛋白酶（ELGBIO，EH80042）、0.2%Ⅱ型膠原酶（Gibco，17101-015）、CD56 小鼠單克隆抗體（Cell Signaling Technology，3576S）、抗CollagenⅡ抗體（Abcam，ab188570）、抗Aggrecan抗體（Abcam，ab3778）、GAPDH單克隆抗體（Cell Signaling Technology，5174S）、抗兔IgG HRP連接抗體（Cell Signaling Technology，7074S）、間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒（iCell Bioscience，iCell-MSCYD-003）、CCK-8試劑盒（Solarbio，CA1210）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Yeasen，11119ES60）、熒光定量PCR試劑盒（Yeasen，10102ES08）、BCA 試劑盒（Thermo Scientific，23227）、PVDF 膜、BSA 試劑、外泌體提取試劑盒（Rengen Biosciences，EXORG10B-1）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動物分組及給藥：SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)分為YQTS 給藥組6 只，采用濃縮后的YQTS 藥液灌胃1.62 ml/kg，每日3 次；空白給藥組6 只，采用與YQTS同等劑量的生理鹽水灌胃，每日3 次。兩組灌胃2 周后，均給予過量的戊巴比妥鈉處死，其中兩組各3只用于提取BM-MSCs進(jìn)行流式細(xì)胞檢測以及免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)，兩組各3只用于CD56+BM-MSCs外泌體的提取及后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 BM-MSCs提?。簝山MSD大鼠處死后，分別取脛骨和股骨，剔除表面肌肉和筋膜組織后用PBS 沖洗。將骨頭從兩端剪斷，用注射器吸取適量培養(yǎng)液沖洗骨髓腔，多次沖洗致骨髓腔發(fā)白，沖洗液800 rpm/min離心4 min。重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液加入預(yù)先裝有淋巴細(xì)胞分離液的離心管中，保持細(xì)胞懸液在淋巴細(xì)胞分離液上層。1600 rpm/min離心15 min，離心后吸取中間白色渾濁的骨髓基質(zhì)層，800 rpm/min 離心4 min。用含10%FBS的DMEM-F12培養(yǎng)基重懸，接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h，觀察貼壁情況后換液、培養(yǎng)、傳代，備用于后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)及軟骨細(xì)胞特異性染色：SD大鼠處死后，無菌切取關(guān)節(jié)軟骨組織放入培養(yǎng)皿中，PBS 反復(fù)漂洗，將軟骨剪成大小約1 mm3的小碎塊移至離心管中。加入0.02%Ⅱ型膠原酶、DMEM-F12 培養(yǎng)基及雙抗，傾斜放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱過夜；吹打均勻后經(jīng)150 目篩網(wǎng)過濾收集細(xì)胞，1000 rpm/min 離心8 min，吸去上清，加入10%胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。7 d 后開始換液、傳代，備用于后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

BM-MSCs 加入成軟骨誘導(dǎo)分化試劑后，棄去培養(yǎng)基，直接滴加甲苯胺藍(lán)染色3～5 min。棄掉染色液，PBS沖洗2次，顯微鏡拍照，并統(tǒng)計(jì)軟骨細(xì)胞數(shù)量。

1.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測BM-MSCs 的CD56 表達(dá)及細(xì)胞分選：BM-MSCs 經(jīng)胰酶消化離心，重懸后細(xì)胞濃度為1×107/ml；兩組每管各取100 μl 的細(xì)胞，使細(xì)胞數(shù)達(dá)到每管1×106；一抗孵育，空白給藥組不加抗體，YQTS給藥組加入CD56抗體充分混勻，4℃孵育30 min；用細(xì)胞清洗液洗滌2 次，離心棄上清后重懸細(xì)胞；二抗孵育，YQTS 給藥組加入熒光標(biāo)記的二抗，4℃避光孵育30 min，清洗細(xì)胞；上機(jī)檢測，分析CD56+/-細(xì)胞群占總細(xì)胞的比例。

BM-MSCs胰酶消化后細(xì)胞懸浮液，1200 rpm/min離心5 min，棄上清。用含4%FBS 的PBS 重懸；加入CD56 單克隆抗體孵育，4℃避光孵育30 min，1200 rpm/min 離心5 min，棄上清，4%FBS 的PBS 重懸。按照流式分選儀的操作步驟收集分選后的CD56+BM-MSCs 細(xì)胞，清洗細(xì)胞后接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中正常培養(yǎng)。

1.3.5 免疫熒光檢測CD56表達(dá)：兩組細(xì)胞分別鋪細(xì)胞爬片，每個(gè)爬片1.5×105個(gè)細(xì)胞，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。細(xì)胞貼壁后，取出爬片，甲醇固定，PBS清洗，用免疫組織化學(xué)筆畫圈，用羊血清封閉液封閉。一抗加于細(xì)胞爬片，4℃避光孵育過夜，PBS清洗。二抗4℃避光孵育過夜，棄去二抗，PBS清洗，DAPI避光孵育，PBS清洗。熒光顯微鏡下拍照。

1.3.6 外泌體的提取與電鏡鑒定：收集CD56+BM-MSCs細(xì)胞上清液，4℃，300×g，離心10 min 后小心吸取上清，上清加入超濾管離心管，3500×g 離心30 min，吸取濃縮液，用外泌體提取試劑盒提取后，0.22 μm 過濾器過濾，BCA 試劑盒測外泌體濃度后備用。透射電鏡觀察并鑒定外泌體。

1.3.7 細(xì)胞共培養(yǎng)：分別進(jìn)行下述三種共培養(yǎng)。

CD56+BM-MSCs 與BM-MSCs 共培養(yǎng)：采用Transwell小室，上室接種空白給藥組的CD56+BM-MSCs或YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs，下室接種未經(jīng)處理的空白組BM-MSCs，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待其貼壁后，將0.4 μm 孔徑Transwell 小室加入6 孔板孔中，培養(yǎng)穩(wěn)定后，在下室中加入軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化試劑，分化完成后進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色及后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

CD56+BM-MSCs 外泌體與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)：原代軟骨細(xì)胞穩(wěn)定培養(yǎng)后，分別加入20 μg 的YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs 外泌體及空白給藥組的CD56+BM-MSCs外泌體進(jìn)行共培養(yǎng)。

CD56+BM-MSCs 外泌體與BM-MSCs 共培養(yǎng)：BM-MSCs 穩(wěn)定培養(yǎng)后加入軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化試劑后，加入YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs 外泌體20 μg（用PBS 混懸），并以等量的PBS 溶液作為PBS對照組，誘導(dǎo)分化10 d 后進(jìn)行軟骨細(xì)胞特異性染色及后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.8 CCK-8 法檢測細(xì)胞存活率：將細(xì)胞懸液均勻接種在6 孔板中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。經(jīng)過一系列共培養(yǎng)或給藥處理后，按照CCK-8試劑盒說明書，避光加入適量CCK-8試劑，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5 h，于450 nm處測定吸光度。細(xì)胞存活率%=（YQTS 給藥組吸光度/空白給藥組吸光度）×100%。

1.3.9 qRT-PCR 檢測mRNA 表達(dá)：使用Trizol 提取細(xì)胞總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。熒光定量PCR 反應(yīng)體系：2x SYBR（由杭州博日科技提供）10 μl，上下引物1 μl，cDNA（由上海生工生物提供）2 μl，ddH2O 6 μl。擴(kuò)增程序：94℃ 2 min；94℃10 s；60 ℃ 30 s共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。TypeⅡCollagen上引物為5'-CAGAGTGGAAGAGCGGAGAC-3'，下 引物 為5'-GCCGTTCATGGTCTCTCCAA-3'；Aggrecan上引物 為5'-AATCCAGAACCTTCGCTCCAA-3'，下引物為5'-GGGCTCGGTCAAAGTCCAGT-3'。

1.3.10 western blot 檢測蛋白表達(dá)：使用全蛋白提取試劑盒和BCA試劑盒提取并測定細(xì)胞蛋白質(zhì)濃度，100℃變性5 min。使用10%聚丙烯酰胺凝膠，上樣20 μg、120 V、2 h。電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)移至PVDF 膜，5%BSA 室溫下封閉1 h。一抗Ⅱ型膠原（1∶1000），Aggrecan（1∶1000），4℃孵育過夜。次日進(jìn)行PBST/TBST 洗滌，加入二抗（1∶2000），室溫孵育1 h。PBST/TBST 洗滌，化學(xué)發(fā)光底物試劑檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果導(dǎo)入Image Lab軟件，對蛋白灰度值進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 YQTS增加CD56+ BM-MSCs數(shù)量

兩組給藥后SD大鼠的BM-MSCs并進(jìn)行培養(yǎng)、標(biāo)記及流式檢測，結(jié)果顯示與空白給藥組比較，YQTS給藥組BM-MSCs的CD56表達(dá)明顯增加（P=0.001，圖1）。免疫熒光結(jié)果表明，與空白給藥組比較，YQTS給藥組BM-MSCs 中CD56 的熒光強(qiáng)度有明顯增強(qiáng)。上述結(jié)果均表明YQTS 促進(jìn)CD56+BM-MSCs 的比例增加（圖1）。

圖1 YQTS對CD56+ BM-MSCs的影響

2.2 YQTS 處理的CD56+ BM-MSCs 對BM-MSCs 軟骨分化的影響

Transwell 小室上室接種空白給藥組及YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs（接種約4000個(gè)細(xì)胞），下室接種BM-MSCs（接種約2×105個(gè)細(xì)胞），并在下室中加入誘導(dǎo)分化試劑，誘導(dǎo)軟骨分化（圖2A）。分化完成后進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，染色結(jié)果表明，與誘導(dǎo)劑作用下比較，空白給藥組CD56+BM-MSCs 與YQTS 給藥組CD56+BM-MSCs 軟骨分化效果較好（P=0.002，P＜0.001，圖2B、C），且與空白給藥組的CD56+BM-MSCs比較，YQTS給藥組的CD56+BM-MSCs能有效提高下室BM-MSCs的成軟骨分化能力（P=0.009，圖2B、C）。qRT-PCR結(jié)果表明，與誘導(dǎo)劑作用下比較，空白給藥組和YQTS 給藥組處理的CD56+BM-MSCsⅡ型膠原的mRNA表達(dá)上升（P＜0.001，P＜0.001，圖2D）、Aggrecan的mRNA表達(dá)上升（P=0.001，P＜0.001，圖2D），且YQTS給藥組較空白給藥組CD56+BM-MSCs，Ⅱ型膠原的mRNA 表達(dá)上升（P=0.002，圖2D）、Aggrecan的mRNA表達(dá)上升（P=0.001，圖2D）。Western blot結(jié)果表明，與誘導(dǎo)劑作用下比較，空白給藥組和YQTS 給藥組CD56+BM-MSCs能促進(jìn)軟骨細(xì)胞分化過程中的Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)（P=0.030，P＜0.001，圖2E、F）、Aggrecan 蛋白表達(dá)（P=0.001，P＜0.001，圖2E、F），且YQTS給藥組較空白給藥組能進(jìn)一步提高Ⅱ型膠原蛋白和Aggrecan蛋白表達(dá)（P=0.002，P=0.009，圖2E、F）。

圖2 YQTS處理的CD56+ BM-MSCs對BM-MSCs軟骨分化的影響

2.3 YQTS 處理的CD56+ BM-MSCs 的外泌體對BM-MSCs軟骨分化影響

2.3.1 YQTS 處理的CD56+BM-MSCs 外泌體促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖：提取CD56+BM-MSCs 的外泌體進(jìn)行鑒定。根據(jù)電鏡及納米顆粒跟蹤分析儀結(jié)果顯示，外泌體呈現(xiàn)典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)，且顆粒大小在30～150 nm（圖3B）。

96 孔板中每孔接種2000 個(gè)軟骨細(xì)胞，貼壁24 h，各加入20 μg 的YQTS 給藥組和空白給藥組的CD56+BM-MSCs外泌體培養(yǎng)48 h，CCK-8檢測結(jié)果示YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs 外泌體與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)后，軟骨細(xì)胞增殖率高于空白給藥組的CD56+BM-MSCs外泌體（P=0.012，圖3C），表明YQTS處理的CD56+BM-MSCs外泌體促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖。

2.3.2 YQTS 處理的CD56+BM-MSCs 的外泌體促進(jìn)BM-MSCs軟骨分化：接種BM-MSCs（約2 萬個(gè)細(xì)胞）于35 mm 皿，各給藥組均加入誘導(dǎo)分化試劑，分別加入PBS 對照組及YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs外泌體20 μg（PBS混懸），誘導(dǎo)分化約10 d，用軟骨染色試劑盒檢測下室軟骨分化程度，結(jié)果顯示與不加外泌體的PBS 對照組相比，加入YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs外泌體處理的BM-MSC軟骨分化程度更高，分化效果更為明顯（P＜0.001，圖3E、F）。

qRT-PCR 結(jié)果表明，與不加外泌體的PBS 對照組比較，加入YQTS 給藥組的CD56+BM-MSCs 外泌體后，Aggrecan 和Ⅱ型膠原的mRNA 表達(dá)均顯著上升（P=0.002，P=0.002，圖3G），說明YQTS 處理的CD56+BM-MSCs 外泌體對BM-MSC 的Ⅱ型膠原、Aggrecan的mRNA表達(dá)有促進(jìn)作用。

Western blot 結(jié)果顯示，與不加外泌體的PBS 對照組比較，加入YQTS給藥組的CD56+BM-MSCs外泌體后，Aggrecan蛋白水平有所提升（P=0.005，圖3H、I），Ⅱ型膠原蛋白水平顯著升高（P＜0.001，圖3H、I），說明YQTS處理的CD56+BM-MSCs外泌體對BM-MSCs的Ⅱ型膠原和Aggrecan的蛋白表達(dá)有促進(jìn)作用。

圖3 YQTS處理的CD56+BM-MSCs外泌體對BM-MSCs軟骨分化的影響

3 討論

軟骨是一種由致密細(xì)胞外基質(zhì)組成的高度結(jié)締組織，軟骨細(xì)胞是軟骨組織中的功能細(xì)胞，也是分泌細(xì)胞外基質(zhì)的唯一效應(yīng)細(xì)胞[9-10]。因軟骨及軟骨細(xì)胞的再生能力及自我修復(fù)能力有限，常導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)炎等各類骨科疾病的發(fā)生[11-12]。近年來，BM-MSCs 在關(guān)節(jié)軟骨上的作用受到廣泛而持續(xù)地關(guān)注，但由于BM-MSCs種類的復(fù)雜性、多樣性，使得其維持分化成軟骨表型仍是一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)[13]。研究表明，BM-MSCs是一些細(xì)胞標(biāo)志物的異質(zhì)細(xì)胞群，不同的細(xì)胞亞群具有不同的標(biāo)志物，且分布、分化過程均不同。近年來，單細(xì)胞RNA測序（single-cell RNA sequencing）技術(shù)為探究BM-MSCs的異質(zhì)細(xì)胞亞群提供了新的方法[14-15]。運(yùn)用單細(xì)胞RNA測序技術(shù)在LEPR+/CD45-BM-MSCs中鑒定出不同的細(xì)胞亞型，其中表達(dá)CD56亞型具有軟骨分化潛能，被視為軟骨細(xì)胞前體，且該細(xì)胞亞群主要位于生長板。另有研究表明，CD56+BM-MSCs 在不同異質(zhì)性骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中表達(dá)有差異，且CD56 介導(dǎo)軟骨前體細(xì)胞與軟骨細(xì)胞的細(xì)胞間通訊[16]。因此，推測CD56+BM-MSCs可能是BM-MSCs修復(fù)軟骨損傷過程中主導(dǎo)細(xì)胞遷移和分化的重要細(xì)胞類型。外泌體是目前發(fā)現(xiàn)的介導(dǎo)細(xì)胞間通訊的新機(jī)制，研究表明BM-MSCs 來源的外泌體具有促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖的作用，通過介導(dǎo)BM-MSCs和軟骨細(xì)胞之間的細(xì)胞間通訊，修復(fù)軟骨損傷，減輕膝骨關(guān)節(jié)炎的疼痛[17]。BM-MSCs可通過外泌體中的miR-127-3p抑制軟骨細(xì)胞中的鈣黏附蛋白11，從而阻斷Wnt/β-catenin通路的激活，減輕骨關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞的損傷；BM-MSCs 來源的外泌體miR-136-5p 可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞遷移，抑制體內(nèi)軟骨變性[18-19]。

本研究團(tuán)隊(duì)一直致力于“髓系骨病”的研究，將骨關(guān)節(jié)炎、股骨頭壞死等骨病概括為“髓系骨病”，認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制是由于患者骨枯髓減，腎虛則骨弱髓空，不能束骨而利關(guān)節(jié)也?！八柘倒遣　钡闹畏ǜ驹谟谡{(diào)髓，調(diào)髓治法在細(xì)胞層面的解釋即指調(diào)動BM-MSCs的遷移、分化與歸巢，調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞-破骨細(xì)胞的偶聯(lián)平衡及修復(fù)軟骨組織等，進(jìn)而恢復(fù)并維持骨穩(wěn)態(tài)，達(dá)到“髓足骨健”的效果[20]。已有文獻(xiàn)報(bào)道指出，黃芪、杜仲、菟絲子等均具有促進(jìn)BM-MSCs 成軟骨分化的作用[21]?；凇八柘倒遣　钡睦碚摚R床上采用YQTS 治療股骨頭壞死、膝骨關(guān)節(jié)炎等骨病的療效顯著。

本研究采用YQTS 進(jìn)行大鼠灌胃給藥，給藥后提取大鼠BM-MSCs，通過流式細(xì)胞術(shù)鑒定CD56 標(biāo)記細(xì)胞亞型在BM-MSCs 中的比例顯著增加，且與免疫熒光結(jié)果相同，提示YQTS 給藥后增加CD56+BM-MSCs 的 數(shù)量。采用CD56+BM-MSCs 與BM-MSCs 共培養(yǎng)的細(xì)胞模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)YQTS 給藥后提取的CD56+BM-MSCs 能促進(jìn)BM-MSCs 的軟骨分化，并增加軟骨分化標(biāo)志物Ⅱ型膠原、Aggrecan的表達(dá)。在上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對CD56+BM-MSCs 來源的外泌體進(jìn)行提取，并將其與BM-MSCs共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)CD56+BM-MSCs來源的外泌體能顯著提高BM-MSCs 的軟骨分化效能。上述結(jié)果證實(shí)，YQTS 的調(diào)髓機(jī)制可能是通過促進(jìn)CD56+BM-MSCs 亞型的增殖及CD56+BM-MSCs 來源的外泌體的分泌，進(jìn)而促進(jìn)軟骨分化（圖4）。

圖4 實(shí)驗(yàn)流程圖及益氣調(diào)髓方的作用機(jī)制圖

本研究尚存不足之處：①未對外泌體中具體發(fā)揮作用的mRNA 或miRNA 未做進(jìn)一步研究，有待于后續(xù)研究完善；②中藥復(fù)方中具體哪些效物質(zhì)發(fā)揮作用有待于進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

綜上所述，明確了YQTS 在調(diào)控BM-MSCs 中CD56 標(biāo)記的細(xì)胞亞型中的作用，并初步闡明其通過CD56+BM-MSCs來源的外泌體發(fā)揮改善軟骨細(xì)胞功能的作用。YQTS 的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及體內(nèi)的具體作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

【利益沖突】所有作者均聲明不存在利益沖突