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    肟菌酯在斑馬魚(yú)中的生物富集效應(yīng)研究

    2023-03-14 08:51:00王盧燕張昌朋王祥云何紅梅趙學(xué)平蔣金花
    關(guān)鍵詞:斑馬魚(yú)水生魚(yú)肉

    王盧燕, 張昌朋, 王祥云, 何紅梅,趙學(xué)平, 蔣金花

    (省部共建農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全危害因子與風(fēng)險(xiǎn)防控國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與營(yíng)養(yǎng)研究所,杭州 310021)

    肟菌酯 (trifloxystrobin) 屬于甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑,該類(lèi)殺菌劑通過(guò)阻止細(xì)胞色素bc1 Qo 位點(diǎn)的電子傳遞,抑制線(xiàn)粒體的呼吸作用而起到抑菌效果[1]。肟菌酯具有高效、廣譜等特性,對(duì)子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌和卵菌等多個(gè)綱的真菌有效,主要用于水稻、小麥、玉米、棉花、花生、油菜、甜菜等多種作物上,可有效防治白粉病、霜霉病、銹病及稻瘟病等多種病害[1]。

    肟菌酯在田間施用后可以通過(guò)滲透、徑流、遷移等多種途徑進(jìn)入水環(huán)境,并通過(guò)水體進(jìn)入水生生物體內(nèi),進(jìn)而影響水生生物的生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖[2-4]。肟菌酯對(duì)不同水生生物具有高毒或劇毒,對(duì)熱帶爪蟾、稀有鮈鯽、草魚(yú)、斑馬魚(yú)、虹鱒魚(yú)、大型溞等的LC50值為0.001~0.530 mg/L[5-10]。研究發(fā)現(xiàn),甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑對(duì)魚(yú)類(lèi)具有一定的生物富集效應(yīng),斑馬魚(yú)在0.005 和0.05 mg/L的啶氧菌酯溶液中暴露8 d 后,啶氧菌酯在魚(yú)體內(nèi)的濃度可達(dá)到0.48~5.27 mg/kg,生物富集系數(shù)(BCF) 為80.00~99.42,在斑馬魚(yú)中具有中等富集效應(yīng)[11]。肟菌酯在虹鱒魚(yú)中的生物富集系數(shù)為431[12],并且低濃度暴露在魚(yú)體內(nèi)也具有較強(qiáng)的累積效應(yīng),稀有鮈鯽胚胎在1.0 μg/L 的肟菌酯溶液中暴露144 h 后,仔魚(yú)體內(nèi)肟菌酯的平均含量可達(dá)到89.56 pg[6]。另有研究發(fā)現(xiàn),肟菌酯在美國(guó)13 個(gè)州的29 條河流中的最高檢出質(zhì)量濃度為0.029 μg/L,在不同國(guó)家作物施藥后附近水體中的檢出濃度為0.41~0.73 μg/L[13-15]。因此,建立魚(yú)體中低濃度肟菌酯殘留的檢測(cè)方法,并研究其生物富集效應(yīng),對(duì)闡明肟菌酯殘留對(duì)水生生物的生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。

    水生生物基準(zhǔn) (aquatic life benchmarks,ALB)是指水環(huán)境中的污染物對(duì)水生生物及其使用不產(chǎn)生短期和長(zhǎng)期不良或有害效應(yīng)的最大允許濃度,是建立污染物水環(huán)境質(zhì)量管理、評(píng)價(jià)、預(yù)測(cè)和污染控制體系的科學(xué)依據(jù)[16]。美國(guó)環(huán)境保護(hù)署 (EPA)在農(nóng)藥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估過(guò)程中,會(huì)基于農(nóng)藥對(duì)水生生物的急性毒性或慢性毒性等數(shù)據(jù),確定農(nóng)藥對(duì)水生生物的ALB,進(jìn)而制定農(nóng)藥的環(huán)境水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行相應(yīng)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[16]。目前美國(guó)EPA 在評(píng)估農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)時(shí),主要基于虹鱒魚(yú)、鰷魚(yú)、藍(lán)鰓魚(yú)的LC50值確定其急性ALB。EPA 發(fā)布的肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的急性ALB 值為0.007 15 mg/L[16],而我國(guó)在評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)時(shí),大多采用斑馬魚(yú)的急性毒性數(shù)值 (LC50值) 進(jìn)行評(píng)估[17]。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn),肟菌酯對(duì)虹鱒魚(yú)、藍(lán)鰓魚(yú)和鰷魚(yú)的LC50值分別為0.015、0.054 和0.078 mg/L[12],對(duì)斑馬魚(yú)成魚(yú)的96 h-LC50值為51.05~120 μg/L[18-19],可見(jiàn)肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的毒性較高,并且對(duì)不同種類(lèi)魚(yú)類(lèi)的毒性之間具有一定差異。因此,進(jìn)一步研究不同濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)中的生物富集性差異,對(duì)于全面評(píng)價(jià)肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn),以及建立符合我國(guó)水生生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法體系具有一定的指導(dǎo)意義。

    PRiME HLB 是一種通過(guò)吸附和去除樣品中干擾物以減少基質(zhì)干擾效應(yīng)的前處理凈化方法,在動(dòng)物源樣本的藥物殘留檢測(cè)中已得到很好的應(yīng)用[20-21]。本研究采用PRiME HLB 固相萃取結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀 (UPLC-MS/MS) ,建立了一種水體和魚(yú)肉中低濃度肟菌酯殘留的快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)方法,并在此基礎(chǔ)上,開(kāi)展了基于ALB 和LC50值的低濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的生物富集效應(yīng)研究,以期為水環(huán)境中肟菌酯污染的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供科學(xué)的技術(shù)方法和依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    ABSciex 超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀 (Exion LCAD-Triple QuadTM5500,美國(guó)ABSciex 公司);ACQUITY UPLCTMBEH C18色譜柱 (2.1 mm × 100 mm × 1.7 μm,美國(guó)Waters 公司);SPS 402F 型電子天平 [0.01 g,梅特勒-托利多 (常州) 測(cè)量技術(shù)有限公司];BSA224S 電子天平 (0.0001 g,德國(guó)賽多利斯集團(tuán));TD5A-WS 型臺(tái)式大容量低速離心機(jī) (金南儀器制造有限公司);Eppendorf Centrifuge 5430R 高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)艾本德股份公司) 等。

    97%肟菌酯 (trifloxystrobin) 原藥 (江蘇耘農(nóng)化工有限公司);99.3% 肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品 (德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司);乙腈、甲酸為色譜純,無(wú)水硫酸鈉、無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉為分析純;屈臣氏純凈水 (廣州屈臣氏食品飲料有限公司);2 mL Cleanert MAS-Q 凈化管 (PSA 50 mg + C1850 mg +PC 50 mg + MgSO4150 mg) 及Cleanert S C18-SPE 小柱 (500 mg/6 mL) (天津博納艾杰爾科技有限公司);Oasis PRiME HLB 小柱 (60 mg/3 mL,美國(guó)Waters 公司)。

    1.2 試驗(yàn)材料

    斑馬魚(yú)Danio rerio種魚(yú),購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所國(guó)家斑馬魚(yú)資源中心,AB 型品系。本研究采用6 月齡成魚(yú),為種魚(yú)繁殖所得。試驗(yàn)用水為曝氣除氯24 h 以上并經(jīng)活性炭過(guò)濾的自來(lái)水。

    1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

    準(zhǔn)確稱(chēng)取肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.0121 g,用乙腈定容至10.0 mL,配成1.20 × 103mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;用乙腈進(jìn)一步稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,得到質(zhì)量濃度為10.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液;采用空白基質(zhì)溶液逐級(jí)稀釋標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,制得質(zhì)量濃度為0.0001、0.0005、0.001、0.005、0.01 及0.05 mg/L 的系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

    1.4 儀器條件

    色譜條件:色譜柱為ACQUITY UPLCTM BEH C18柱 (2.1 mm × 100 mm × 1.7 μm),柱溫40 °C;進(jìn)樣量1 μL;流動(dòng)相A 為0.1% 甲酸水溶液,B 為色譜純乙腈,VA:VB= 20 : 80,流速0.3 mL/min;進(jìn)樣時(shí)間為4.0 min。

    質(zhì)譜條件:ESI+離子源;多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM)模式;毛細(xì)管電壓5.5 kV;氣簾氣壓力241.5 kPa;噴撞氣壓力48.3 kPa;噴霧氣壓力345 kPa;輔助加熱氣壓力345 kPa;離子源溫度550 °C;輸入電壓10 V;碰撞室輸出電壓16 V;其余質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)見(jiàn)表1。在此條件下,肟菌酯保留時(shí)間為2.46 min。

    1.5 樣品前處理

    水樣前處理:取5.0 mL 樣品,加入2.00 g 氯化鈉和10.0 mL 乙腈,渦旋1 min,靜置分層。取上層清液過(guò)0.22 μm 濾膜,待UPLC-MS/MS 測(cè)定。

    魚(yú)肉樣品前處理:稱(chēng)取1.00 g (精確至0.01 g)魚(yú)肉樣品置于50 mL 離心管中,加入1.0 mL 0.1%的甲酸水溶液和10.0 mL 乙腈,渦旋15 min;加入1.00 g 無(wú)水硫酸鈉和1.00 g 無(wú)水硫酸鎂,渦旋15 min;在4000 r/min 下離心5 min。準(zhǔn)確移取離心管中的上清液2.0 mL 直接過(guò)PRiME HLB 固相萃取柱,經(jīng)0.22 μm 濾膜過(guò)濾,待UPLC-MS/MS測(cè)定。

    1.6 生物富集試驗(yàn)

    為進(jìn)一步明確利用EPA 魚(yú)類(lèi)ALB 和斑馬魚(yú)急性毒性相關(guān)數(shù)值評(píng)估肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)的差異,開(kāi)展了基于ALB 和斑馬魚(yú)的LC50值濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的生物富集效應(yīng)研究。參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則 第七部分:生物富集試驗(yàn)》[22],采用半靜態(tài)法,分別測(cè)定了肟菌酯在魚(yú)類(lèi)急性毒性ALB (7.15 × 10-3mg/L)、1/10 ALB 以及對(duì)斑馬魚(yú)的1/10 LC50值和1/100 LC50值暴露下在斑馬魚(yú)成魚(yú)中的生物富集效應(yīng)。因肟菌酯對(duì)斑馬魚(yú)成魚(yú)的96 h-LC50值為51.05~120 μg/L[18-19],故其LC50值選取51.0 和120 μg/L兩個(gè)濃度同時(shí)進(jìn)行研究。因此,共設(shè)置7.15 ×10-4和7.15 × 10-3mg/L、5.10 × 10-4和5.10 × 10-3mg/L、1.20 × 10-3和1.20 × 10-2mg/L 6 個(gè)質(zhì)量濃度處理組,同時(shí)設(shè)置曝氣自來(lái)水為空白對(duì)照。根據(jù)設(shè)定的濃度,分別配制5 L 試驗(yàn)藥液,每缸放入15 條斑馬魚(yú),每處理設(shè)3 次重復(fù)。試驗(yàn)過(guò)程每24 h 更換全部試驗(yàn)藥液,于暴露后0、24、48、96、144 及192 h 分別從各處理中取水樣與魚(yú)樣,測(cè)定水樣與魚(yú)樣中的肟菌酯含量。

    按(1)式計(jì)算肟菌酯的生物富集系數(shù) (BCF) 。

    式中:Cfs為魚(yú)體內(nèi)的肟菌酯含量 (mg/kg);Cws為水體中的肟菌酯含量 (mg/L)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 提取溶劑的優(yōu)化

    分別采用甲醇、乙酸乙酯和乙腈3 種有機(jī)溶劑作為提取溶劑,在添加水平為1.0 mg/kg 下,按照1.5 節(jié)中魚(yú)肉樣品前處理方法,比較了魚(yú)肉中肟菌酯的提取回收率。其中,提取溶劑為甲醇時(shí),加入無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂可以除去水分;提取溶劑為乙酸乙酯和乙腈時(shí),加入無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂以使之分層。結(jié)果表明:采用甲醇、乙酸乙酯和乙腈提取時(shí)的回收率分別為78.5%、88.9%和83.9%,其中乙酸乙酯的提取回收率最高,但是其提取液中雜質(zhì)較多,甲醇的提取回收率較低。綜合考慮溶劑揮發(fā)性、提取回收率、雜質(zhì)去除效果等因素,最終選擇乙腈作為提取溶劑。

    2.2 凈化方法的選擇

    采用Cleanert MAS-Q 凈化管、C18固相萃取柱及HLB 固相萃取柱分別進(jìn)行試驗(yàn)。魚(yú)肉中肟菌酯添加水平為1.0 mg/kg,每組設(shè)3 個(gè)重復(fù)。結(jié)果表明:PSA 50 mg + C1850 mg + PC 50 mg + MgSO4150 mg 的Cleanert MAS-Q 凈化管凈化后回收率為48.3%,C18固相萃取柱凈化后回收率為42.7%,HLB 小柱凈化后回收率為84.5%;此外,比較HLB 柱活化 (82.9%) 與未活化 (81.4%) 后肟菌酯的回收率發(fā)現(xiàn),活化與否對(duì)結(jié)果沒(méi)有顯著影響。綜合考慮回收率、雜質(zhì)去除效果和操作過(guò)程簡(jiǎn)便性等因素,最終選擇Oasis PRiME HLB 固相萃取柱作為魚(yú)肉中肟菌酯的凈化小柱。

    2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

    將0.0001、0.0005、0.001、0.005、0.01 和0.05 mg/L 的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照1.4 節(jié)儀器條件進(jìn)樣測(cè)定,以濃度-峰面積繪制肟菌酯基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),其回歸方程為y= 96 612 211x+24 728 (R2= 0.9998),表明肟菌酯在0.0001~0.05 mg/L 范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

    2.4 正確度和精密度

    在空白水樣中添加0.0005 和0.05 mg/L 2 個(gè)水平的肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,在空白魚(yú)肉樣品中添加0.01、0.1 和10 mg/kg 3 個(gè)水平的肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,每添加水平設(shè)5 個(gè)重復(fù)。平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD) 結(jié)果見(jiàn)表2。肟菌酯在水樣和魚(yú)肉樣品中的定量限 (LOQ) 分別為0.0005 mg/L和0.01 mg/kg。所建立方法的正確度和精密度均較好,能夠滿(mǎn)足本研究水樣及魚(yú)樣中肟菌酯殘留測(cè)定要求。

    表2 水樣和魚(yú)肉樣品中肟菌酯的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 2 The recovery and RSD of trifloxystrobin in water and fish samples

    2.5 肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的富集效應(yīng)

    從暴露處理開(kāi)始,肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)有一個(gè)快速累積的過(guò)程 (表3)。在較低質(zhì)量濃度水平(5.10 × 10-4、7.15 × 10-4和1.20 × 10-3mg/L) 下暴露24 h,魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別為0.0487、0.0784 和0.130 mg/kg;192 h 后,魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別增長(zhǎng)到0.0609、0.100 和0.153 mg/kg,BCF 值增長(zhǎng)到136、141 和147。在較高質(zhì)量濃度水平 (5.10 × 10-3、7.15 × 10-3和1.20 × 10-2mg/L)下暴露24 h 后,魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別為0.555、0.856 和1.33 mg/kg;192 h 后,魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別增長(zhǎng)到0.720、1.01 和1.72 mg/kg,BCF 值分別達(dá)到156、171 和178??梢?jiàn),高濃度肟菌酯暴露可在斑馬魚(yú)中產(chǎn)生較高的殘留累積,但不同濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)中的富集效應(yīng)差異不大。研究表明,肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)存在中等富集效應(yīng)。

    表3 肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的生物富集性Table 3 The bioconcentration of trifloxystrobin in zebrafish

    3 結(jié)論與討論

    現(xiàn)有研究報(bào)道中,甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑啶氧菌酯在魚(yú)肉中的殘留檢測(cè)采用乙腈提取后直接過(guò)濾膜的樣品前處理方法,肟菌酯在稀有鮈鯽胚胎中的殘留檢測(cè)采用90%乙腈提取、液-液萃取后經(jīng)硅膠萃取柱凈化的前處理方法,嘧菌酯在水產(chǎn)品中的殘留檢測(cè)采用1%乙酸 + 乙腈提取、聚苯乙烯-二乙烯基苯 (PS-DVB) 和PSA 凈化的前處理方法[6,11,23]。由于魚(yú)肉基質(zhì)復(fù)雜,含有大量的蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物,不凈化直接測(cè)定會(huì)產(chǎn)生一定的基質(zhì)效應(yīng)且對(duì)儀器損害大,因此,本研究通過(guò)對(duì)提取溶劑和凈化方法的優(yōu)化,建立了水樣和魚(yú)肉樣品中肟菌酯的HLB固相萃取-UPLCMS/MS 檢測(cè)方法。Oasis PRiME HLB 共聚物具有極強(qiáng)的水浸潤(rùn)性,可省去活化和平衡步驟[24]。相比傳統(tǒng)的固相萃取法,本方法不需要活化平衡萃取柱,節(jié)省了過(guò)柱時(shí)間和溶劑使用量,能很好地吸附魚(yú)肉中大部分脂肪、蛋白質(zhì)等干擾物而不影響回收率,水樣和魚(yú)肉樣品中的定量限 (LOQ) 分別可達(dá)到0.0005 mg/L 和0.01 mg/kg。所建立的方法能夠檢測(cè)水體和魚(yú)肉中低濃度的肟菌酯殘留,可為開(kāi)展環(huán)境中肟菌酯的殘留行為和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究提供參考。

    隨著肟菌酯等甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑的廣泛使用,其在環(huán)境中的殘留以及生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)已受到越來(lái)越多的關(guān)注。生物富集作用是評(píng)價(jià)環(huán)境中殘留農(nóng)藥對(duì)生物體及生態(tài)系統(tǒng)危害的重要指標(biāo)[22]。魚(yú)類(lèi)作為水環(huán)境中的重要生物和人類(lèi)的主要食物,其生態(tài)毒理反應(yīng)和變化可作為水環(huán)境評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。美國(guó)EPA 發(fā)布的魚(yú)類(lèi)毒性基準(zhǔn)中,主要是基于虹鱒魚(yú)、鰷魚(yú)、藍(lán)鰓魚(yú)3 種水生生物最低LC50值的1/2 確定其急性ALB[16]?,F(xiàn)有研究表明,肟菌酯對(duì)于不同魚(yú)類(lèi)以及不同水生生物具有一定的毒性差異[16],而目前進(jìn)行農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí),不僅要參考EPA 等國(guó)外評(píng)估報(bào)告中有關(guān)虹鱒魚(yú)、鰷魚(yú)等魚(yú)類(lèi)的毒性數(shù)據(jù),同時(shí)也要評(píng)估農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)的毒性風(fēng)險(xiǎn),因此,比較不同魚(yú)類(lèi)ALB 值在斑馬魚(yú)中的生物富集性差異,可為探索符合我國(guó)水生生物的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系提供一定的參考依據(jù)。

    本研究發(fā)現(xiàn),將斑馬魚(yú)暴露于魚(yú)類(lèi)ALB 和斑馬魚(yú)LC50值相關(guān)系列質(zhì)量濃度7.15 × 10-4和7.15 ×10-3mg/L、5.10 × 10-4和5.10 × 10-3mg/L、1.20 ×10-3和1.20 × 10-2mg/L 藥液中24 h 后,肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的殘留量分別為0.0784、0.856、0.0487、0.555、0.130 和1.33 mg/kg。研究表明,不同濃度的肟菌酯均可在斑馬魚(yú)體內(nèi)快速累積,并且在暴露48 h 后基本達(dá)到穩(wěn)定。連續(xù)暴露192 h后,魚(yú)類(lèi)ALB 值相關(guān)濃度7.15 × 10-4和7.15 ×10-3mg/L 肟菌酯在斑馬魚(yú)中的生物富集系數(shù)為117~171,1/100 LC50值濃度 (5.10 × 10-4和1.20 ×10-3mg/L) 肟菌酯的生物富集系數(shù)為113~147,1/10 LC50值濃度 (5.10 × 10-3和1.20 × 10-2mg/L)肟菌酯的生物富集系數(shù)為128~178,具有中等富集效應(yīng)。歐盟食品安全局 (EFSA)的研究表明,肟菌酯在虹鱒魚(yú)中的生物富集系數(shù)為431[12],本研究結(jié)果與之具有一定差異。綜上可見(jiàn),肟菌酯對(duì)不同種類(lèi)魚(yú)類(lèi)的急性毒性和生物富集效應(yīng)都存在一定的差異,因此,在研究肟菌酯殘留污染對(duì)魚(yú)類(lèi)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)時(shí),應(yīng)結(jié)合不同濃度和不同魚(yú)類(lèi)的毒性效應(yīng)及生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行綜合評(píng)估。

    斑馬魚(yú)生物富集試驗(yàn)對(duì)評(píng)價(jià)肟菌酯的環(huán)境行為及其慢性危害具有十分重要的意義。一般情況下,農(nóng)藥的生物富集作用越強(qiáng),對(duì)生物的慢性危害越大?,F(xiàn)有研究表明,在急性ALB 和對(duì)斑馬魚(yú)的LC50值相關(guān)濃度暴露下,肟菌酯在斑馬魚(yú)中具有中等富集效應(yīng),因此,在實(shí)際使用過(guò)程中,應(yīng)關(guān)注低濃度肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的潛在危害及食物鏈的放大風(fēng)險(xiǎn),加強(qiáng)對(duì)水生生態(tài)系統(tǒng)的殘留監(jiān)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。在美國(guó)EPA 發(fā)布的魚(yú)類(lèi)毒性基準(zhǔn)中,慢性ALB 主要基于慢性毒性濃度[無(wú)觀察效應(yīng)濃度(NOEC) 及最低觀察效應(yīng)濃度 (LOEC)]等數(shù)據(jù)[16]。而我國(guó)在評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)時(shí),大多數(shù)都采用斑馬魚(yú)的急性毒性數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估[17],對(duì)部分原藥同時(shí)會(huì)進(jìn)行魚(yú)類(lèi)早期生活階段毒性試驗(yàn)[25]。美國(guó)EPA 發(fā)布的肟菌酯慢性ALB 值為0.0043 mg/L,主要是基于肟菌酯對(duì)虹鱒魚(yú)游動(dòng)影響的NOEC[12,16]。而目前關(guān)于肟菌酯在斑馬魚(yú)中的研究主要集中在胚胎階段的急性毒性效應(yīng),肟菌酯對(duì)斑馬魚(yú)早期發(fā)育階段以及成魚(yú)的慢性毒性仍鮮有研究報(bào)道[18]。因此,為了更全面、系統(tǒng)地評(píng)價(jià)肟菌酯對(duì)環(huán)境的安全性,還需進(jìn)一步研究其對(duì)斑馬魚(yú)早期生活階段和成魚(yú)的慢性毒性效應(yīng),以及開(kāi)展對(duì)其他非靶標(biāo)生物的慢性毒性試驗(yàn)等。

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