液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂蜜中氯霉素的不確定度評定

文 李旭平 杜平 李海亮 陜西省果蔬及加工產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測中心

氯霉素是一種廣譜抗生素，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有一定的抑制作用，被廣泛作為抗生素使用，但是它同時有嚴(yán)重的副作用，有的人對它很敏感，只需攝入少量，就能對骨髓造成傷害，不能產(chǎn)生足夠的紅細(xì)胞、白細(xì)胞或血小板，也就是再生障礙性貧血。我國實驗室對于氯霉素的檢測主要采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，測量氯霉素檢驗結(jié)果的不確定度可以讓實驗室檢測更加準(zhǔn)確。本次不確定度評定參照J(rèn)JF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》和CNAS-GL06《化學(xué)分析中不確定度的評估指南》的測定方法。本次對蜂蜜中氯霉素的不確定度進(jìn)行測量評定，可以為實驗結(jié)果的準(zhǔn)確度提供依據(jù)和參考。

1.材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇（色譜純賽孚瑞）、乙腈（色譜純賽孚瑞）、乙酸乙酯（色譜純賽孚瑞）、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護研究所）

1.2 儀器與設(shè)備

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國賽默飛世爾公司TSQQuantum Access Max）、電子分析天平（梅特勒-托利多ME204/02）

1.3 色譜條件

色譜柱：C18柱，1.7μm ，100mm×2.1mm；流動相：甲醇、水；流速：0.25mL / min；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：35℃。

1.4 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧電離源（ESI-）。碰能量撞：21eV；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；掃描定量離子：321.068>151.645；定性離子對：321.068>256.796；

液相色譜梯度洗脫條件（實驗溫度：20±2℃）

1.5 實驗方法

稱取5g樣品于50mL離心管中，加入5mL水，快速混勻溶解。加入15mL乙酸乙酯，振蕩離心。取上清液12mL于雞心瓶，55℃旋轉(zhuǎn)蒸干。加入5mL水溶解殘渣。將提取液倒入已活化的Qasis HLB柱中，待溶液完全流出后，用10mL水洗過柱，再用5mL乙腈+水（1+7）洗柱棄去。最后用5mL乙酸乙酯洗脫，并收集氮吹干。用乙腈+水（20+80）定容至1mL，上機測定。

2.測量數(shù)學(xué)模型

試樣中氯霉素（以氯霉素計）按下式計算：

式中：X---樣品中氯霉素含量（以氯霉素計），單位為微克/千克（μg/kg）； m---樣品質(zhì)量，單位為克（g）；c---由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中氯霉素的濃度，單位為納克/毫升（ng/mL）；f---稀釋倍數(shù)。V---樣液最后定容體積，單位為毫升（mL）；根據(jù)數(shù)學(xué)模型分析，影響不確定度來源有以下幾個方面：樣品稱量引入的不確定度；樣品定容引入的不確定度；樣品平行測定引入的不確定度；標(biāo)準(zhǔn)系列溶液引入的不確定度；標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度。

3.不確定度評定

4.測量不確定度結(jié)果

相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表

根據(jù)上表計算合成不確定度為

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為U(X)=X*Uml ( X )= 2.215*0.01293= 0.02863

綜上，測量不確定度結(jié)果為： 取置信區(qū)間為95%，k=2，為擴展不確定度U=U(X) k= 0.02863*2 = 0.05726μg/kg；則樣品中氯霉素的含量為2.215 + 0.057μg/kg。

5.結(jié)論和討論

從本次實驗的結(jié)果看，不確定度影響程度依次是標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合＞標(biāo)準(zhǔn)溶液配制＞測量重復(fù)性。通過此次評定，相關(guān)實驗可以從以下幾個方面進(jìn)行改進(jìn)實驗：（1）應(yīng)最大程度讓被測樣品濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍中間位置，線性越高，降低曲線擬合引入的不確定度。（2）不確定度大小與被測樣品濃度呈負(fù)相關(guān)，被測組分含量低時，測得結(jié)果的不確定度會增大。（3）應(yīng)采用合適的標(biāo)準(zhǔn)溶液范圍校正被測組分，配置標(biāo)準(zhǔn)曲線使用的器皿擴展不確定度值越小，測得結(jié)果的不確定度越小。（4）為保證實驗的準(zhǔn)確度，要注重標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性和標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。此外，選擇精度高的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、國家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和計量檢定合格且擴展不確定度小的計量器具開展實驗，也會進(jìn)一步保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確度。