食品安全監(jiān)督抽檢和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測檢驗(yàn)法分析白酒中八種甜味劑

文 張遠(yuǎn)琴 李忠軍 陳旭 .攀西釩鈦檢驗(yàn)檢測院 2.四川省輕工業(yè)研究設(shè)計(jì)院有限公司

采用食品安全監(jiān)督抽檢和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測規(guī)定七個(gè)國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，測定了白酒中八種甜味劑，其線性范圍、穩(wěn)定性、回收率均滿足實(shí)驗(yàn)要求。但通過多批次檢測數(shù)據(jù)分析，現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法和限量依據(jù)，在限制白酒生產(chǎn)經(jīng)營單位濫用甜味劑行為方面存在缺失，建議現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂或出臺補(bǔ)充檢驗(yàn)依據(jù)。

白酒是世界上最古老的蒸餾酒之一，以單糧或多糧為原料，經(jīng)糖化發(fā)酵-蒸餾后得到基酒，再經(jīng)勾調(diào)貯存而成，因?yàn)闊o色所以稱為白酒。其工藝獨(dú)特，品種繁多，從古至今均為消費(fèi)者心中不可或缺的特殊飲品。西南地區(qū)是白酒主要出產(chǎn)地，為當(dāng)?shù)貏?chuàng)造出較高的經(jīng)濟(jì)效益，但各加工企業(yè)生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)備、工藝條件良莠不齊，尤其散裝白酒小作坊、小經(jīng)營店普遍存在設(shè)備不完善、配方不穩(wěn)定、檢驗(yàn)條件缺失等問題，導(dǎo)致生產(chǎn)加工的白酒品質(zhì)口感良莠不齊，可能有焦苦味、辣味等，從業(yè)者則會(huì)使用甜味劑改善白酒口味，掩蓋酒中雜味。如存在食用酒精勾兌生產(chǎn)的情況，以添加甜味劑來改善口感及味道的可能性就大。

為進(jìn)一步強(qiáng)化散裝白酒監(jiān)管，提升散裝白酒質(zhì)量安全，2021年，當(dāng)?shù)厥袌霰O(jiān)督管理局針對本地散裝白酒經(jīng)營制售單位開展監(jiān)督抽檢和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測，主要對白酒中糖精鈉、甜蜜素、三氯蔗糖、安賽蜜、阿斯巴甜、紐甜、甜菊糖苷、瑞鮑迪苷A等八種甜味劑進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)。本文對這八種甜味劑的檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)過程、檢出結(jié)果、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)、判定依據(jù)等情況進(jìn)行分析討論，以期為散裝白酒中甜味劑檢測方法、判定依據(jù)及監(jiān)管需求提供參考和數(shù)據(jù)技術(shù)支撐。

1.材料與方法

1.1 檢測標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)采用的檢測標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)方法見表1。

表1 八種甜味劑檢測標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)方法

1.2 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀：配紫外檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器；液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配ESI離子源；氮?dú)獯蹈蓛x；分析天平（精度0.001g）；恒溫水浴鍋；PUREL AB Flex超純水儀（英國埃爾格）；0.22μm水系微孔濾膜、0.22μm有機(jī)系微孔濾膜和0.45μm有機(jī)系微孔濾膜（均為天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司提供）。

1.3 試劑材料

實(shí)驗(yàn)所用試劑：甲醇；乙酸銨；乙腈；辛烷磺酸鈉；磷酸；三乙胺；乙醇；甲酸；甲酸銨。以上試劑均為色譜純。實(shí)驗(yàn)所需標(biāo)準(zhǔn)品見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)所需標(biāo)準(zhǔn)品

1.4 色譜條件

1.4.1 糖精鈉：C18柱（5μm，250×4.6mm），柱溫為30℃，流動(dòng)相為甲醇+乙酸銨溶液（6+94），流速為1.0mL/min，波長230nm，檢測器：二極管陣列。

1.4.2 甜蜜素：C18柱(3μm，150x4.6mm)，柱溫為30℃，流動(dòng)相為甲醇+10mmol/L乙酸銨=85+15，流速為0.6mL/min，離子源：ESI，掃描模式：負(fù)離子掃描，定量離子對：178.0/79.9。梯度洗脫條件見表3。

表3 甜蜜素梯度洗脫條件

1.4.3 紐甜：C18柱（5μm，250×4.6mm），柱溫為30℃，流動(dòng)相為乙腈+離子對緩沖液（稱取2.00g辛烷磺酸鈉加水溶解，加入1.0mL磷酸后加水定容至1000mL）（40+60），流速為1mL/min，波長218nm，檢測器：二極管陣列。

1.4.4 阿斯巴甜：C18柱（5μm，250×4.6mm），柱溫為30℃，流動(dòng)相為甲醇+水（45+55），流速為1mL/min，波長200nm，檢測器：二極管陣列。

1.4.5 三氯蔗糖：C18柱（5μm，250×4.6mm），柱溫為35℃，流動(dòng)相為甲醇+水（45+55），流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量20μL，檢測器：蒸發(fā)光。

1.4.6 安賽蜜：C18柱（5μm，150×3.0mm），柱溫為30℃，流動(dòng)相為0.1%甲酸+5mmol/L乙酸銨（1+9），流速為1.0mL/min，波長214nm，檢測器：二極管陣列。

1.4.7 甜菊糖苷和瑞鮑迪苷A：C18柱（5μm，250×4.6mm），柱溫為30℃，流動(dòng)相為磷酸溶液（0.02mol/L）+甲醇+乙腈（67+3+30），流速為1.0mL/min，波長210nm，檢測器：二極管陣列。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制（見表4）

1.5.1 糖精鈉：將1000mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液按照表4的濃度用純水逐級于100mL容量瓶中稀釋，并定容至刻度。

1.5.2 甜蜜素：精確吸取10μL甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100mL容量瓶內(nèi)，用水定容配制成1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液，分別于進(jìn)樣瓶內(nèi)加入1000μL、995μL、990μL、975μL、950μL、900μL和800μL水溶液，并分別于進(jìn)樣瓶內(nèi)加入0μL、5μL、10μL、2μL、50μL、100μL、200μL標(biāo)準(zhǔn)中間液，最終配制成表4中標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.5.3 紐甜：將1000mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液按照表4中濃度用純水逐級稀釋于100mL容量瓶中，并定容至刻度。

1.5.4 阿斯巴甜：將1000mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液按照表4中濃度用純水逐級稀釋于100mL容量瓶中，并定容至刻度。

1.5.5 三氯蔗糖：精確稱取三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品0.10025g于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，制成濃度為1000mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再按照表4中濃度用純水逐級稀釋于100mL容量瓶中，并定容至刻度。

1.5.6 安賽蜜：將1000mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液按照表4中濃度用純水逐級稀釋于100mL容量瓶中，并定容至刻度。

1.5.7 甜菊糖苷和瑞鮑迪苷A：分別準(zhǔn)確稱取甜菊糖苷、瑞鮑迪苷A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.022mg、1.021mg，用甲醇定容于10mL容量瓶中配制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)混合儲(chǔ)備液，再按照表4中濃度用甲醇逐級稀釋于100mL容量瓶中，并定容至刻度。

表4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度

1.6 樣品的制備

首先采用沸水浴對酒樣進(jìn)行濃縮，通常濃縮10倍，再按照1.6.1-1.6.7步驟對濃縮樣品制備后進(jìn)樣。當(dāng)濃縮樣品中檢出目標(biāo)物時(shí)，則用原酒樣或稀釋后酒樣再次檢測。

1.6.1 糖精鈉：準(zhǔn)確稱取約2g（精確到0.001g）試樣于50mL具塞離心管中，加水約25mL，渦旋混勻，于50℃水浴超聲20min，冷卻至室溫后于8000r/min 離心5min，將水相轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，于殘?jiān)屑铀?0mL，渦旋混勻后超聲5min，于8000r/min離心5min，將水相轉(zhuǎn)移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0.22μm濾膜，待液相色譜測定。

1.6.2 甜蜜素：稱取酒樣10.0g，置于50mL燒杯中，于60℃水浴上加熱30 min，殘?jiān)哭D(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容并搖勻，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后備用。

1.6.3 紐甜：準(zhǔn)確量取10.0mL試樣于50mL具塞塑料離心管中，加人30mL混合提取液（分別吸取0.8mL甲酸和2.5mL三乙胺于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度），振蕩混勻。超聲15min后，用混合提取液定容至刻度，若溶液混濁，以不低于4000r/min離心10min后，過濾待用。吸取10.0mL的過濾液以1mL/min-2mL/min的流速通過固相萃取柱，待濾液完全流出后，用5mL的混合提取液以1mL/min-2mL/min的流速淋洗萃取柱，棄去全部流出液，用5mL甲醇以1mL/min的流速洗脫，洗脫液在40℃水浴中用氮吹儀濃縮，用混合提取液定容至2.0mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后作為待測液供液相色譜儀分析。

1.6.4 阿斯巴甜：稱取酒樣10.0g，置于50mL燒杯中，于6℃水浴上加熱30min，殘?jiān)哭D(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容并搖勻，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后備用。

1.6.5 三氯蔗糖：稱取混勻后試樣5g（精確到0.001g），置于50mL蒸發(fā)皿中，于沸水浴上蒸干，殘?jiān)?.00mL乙腈水溶液（11+89）溶解，溶液過0.45μm濾膜，濾液為制備的試樣溶液，備用。

1.6.6 安賽蜜：取樣品適量，超聲脫氣20min。稱取2g（精確至0.01g）試樣于100mL容量瓶中，用水稀釋并定容至刻度，過0.45μm有機(jī)濾膜，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。

1.6.7 甜菊糖苷和瑞鮑迪苷A：稱取混合均勻的樣品2g（精硝至0.01g），置于50mL具塞離心管，加人10mL甲醇，加人適量無水硫酸鈉，渦旋振蕩5min，放置2min，60℃超聲提取20min，以4000r/min離心5min，取出上清液，殘留物用10mL甲醇再次提取，清液合并于25mL容量瓶中，用甲醇定容，取出10mL上清液用氮吹儀吹干，用甲醇溶液（甲醇+水為1:1）定容至2mL，經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后備用。

2.結(jié)果

2.1 八種甜味劑色譜圖

阿斯巴甜、安賽蜜、紐甜、三氯蔗糖、糖精鈉、甜蜜素、甜菊糖苷和瑞鮑迪苷A出峰時(shí)間分別為4.970、6.700、9.203、8.702、13.757、8.32、10.190和9.720min，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖如圖1所示。

圖1 八種甜味劑的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和檢出限

按實(shí)驗(yàn)方法分別對阿斯巴甜、安賽蜜、紐甜、三氯蔗糖、糖精鈉、甜蜜素、甜菊糖苷和瑞鮑迪苷A標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定。阿斯巴甜、安賽蜜、紐甜、三氯蔗糖、糖精鈉、甜菊糖苷和瑞鮑迪苷A以目標(biāo)物的保留時(shí)間定性，峰面積定量進(jìn)行線性擬合。甜蜜素通過定量離子對和定性離子對確定目標(biāo)物，再以目標(biāo)物的濃度與響應(yīng)值進(jìn)行線性擬合。各甜味劑線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限結(jié)果如表5所示，其中方法檢出限和方法定量限為檢測標(biāo)準(zhǔn)中明示值。由表5可知，八種甜味劑的線性擬合度較高，相關(guān)系數(shù)均大于99.6%，其線性范圍數(shù)量級跨度大且均低于檢測標(biāo)準(zhǔn)中的方法檢出限和方法定量限，適用于樣品中低濃度的甜味劑含量定量計(jì)算，滿足日常檢驗(yàn)需要。

表5 八種甜味劑標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限結(jié)果

2.3 準(zhǔn)確度和回收率

以市售的兩種散裝白酒為本底，加入對應(yīng)八種甜味劑，對加標(biāo)樣品進(jìn)行3次重復(fù)測定，所得的方法準(zhǔn)確度和回收率結(jié)果如表6所示。

由表6可知，低濃度加標(biāo)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.52-1.84%，回收率范圍為92.4-98.3%，高濃度加標(biāo)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.5074-0.44%，回收率范圍為95.3-99.8%，均符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》GB/T 27404-2008中對檢測方法確認(rèn)的技術(shù)要求，也滿足日常檢驗(yàn)需要。

表6 本方法的準(zhǔn)確度和回收率結(jié)果

2.4 樣品檢出情況

2021 年開展了白酒抽檢監(jiān)測任務(wù)，針對散裝白酒共抽檢303批次，檢出甜味劑16批次，其中甜蜜素檢出7批次，紐甜檢出5批次，瑞鮑迪苷A檢出2批次，甜菊糖苷、安賽蜜、三氯蔗糖分別檢出1批次。部分酒樣中檢出紐甜、三氯蔗糖、瑞鮑迪苷A和甜菊糖苷色譜圖見如圖2所示。

圖2 部分檢出紐甜、三氯蔗糖、瑞鮑迪苷A和甜菊糖苷色譜圖

3.討論

3.1 檢測中存在的問題

多批次樣品濃縮后檢出甜味劑，且發(fā)現(xiàn)以疊加復(fù)合方式添加，但經(jīng)濃度換算后或未濃縮進(jìn)行檢測其甜味劑含量低微，單獨(dú)品種甜味劑實(shí)測值未達(dá)到方法檢出限，目前依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)不能對其判定為不合格（問題）樣品。建議制定白酒中相關(guān)甜味劑限量值時(shí)以樣品濃縮倍數(shù)（如樣品濃縮十倍后）定值，并且參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》GB 2760-2014中“防腐劑混合使用時(shí)各自用量占其最大使用量的比例之和”的規(guī)定，制定白酒中甜味劑混合檢出時(shí)相關(guān)限量規(guī)定，以對在白酒中復(fù)合疊加使用微量甜味劑的行為加以限制。

3.2 多種甜味劑同時(shí)檢測缺少標(biāo)準(zhǔn)方法

本文中討論的7種白酒中甜味劑檢測方法，均采用《四川省食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則（2021年版）》和食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測推薦檢測方法。監(jiān)督抽檢作為食品安全監(jiān)管執(zhí)法重要技術(shù)支持，必修采取符合法律法規(guī)的檢測方法，目前沒有對白酒中多種甜味劑同時(shí)檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)方法，這也導(dǎo)致一個(gè)酒樣需要重復(fù)多次進(jìn)行前處理上機(jī)檢測，增加實(shí)驗(yàn)人員工作量。

針對白酒中多種甜味劑同時(shí)進(jìn)行檢測的方法屢見報(bào)道，如勇艷華等人采用LC-MS_MS法快速檢測了白酒中10種甜味劑，尹艷艷等人則采用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜檢測白酒中八種人工甜味劑。以上文章均得出對白酒中多種甜味劑同時(shí)檢測，并且結(jié)果準(zhǔn)確可靠。故建議，制定白酒中多種甜味劑同時(shí)檢測的國家檢驗(yàn)方法。

3.3 白酒濫用甜味劑食品安全風(fēng)險(xiǎn)來源

目前檢出的不合格（問題）散裝白酒，其中13批次樣品來源為加工自制，3批次樣品來源為購進(jìn)，可見本地加工自制散裝白酒風(fēng)險(xiǎn)較突出。通過采購方式進(jìn)行白酒銷售的經(jīng)營單位，會(huì)更嚴(yán)格查驗(yàn)供貨商資質(zhì)及產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告，在成本利潤相差不大基礎(chǔ)上，更愿意選擇生產(chǎn)規(guī)范、品質(zhì)有保障的大廠家供貨。而散裝白酒濫用甜味劑食品安全風(fēng)險(xiǎn)主要存在于加工自制白酒的小作坊、小經(jīng)營店等。

結(jié)論

本文中討論的七種檢測方法檢驗(yàn)白酒中八種甜味劑，作為食品安全監(jiān)督抽檢和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測檢驗(yàn)方法，均具有較寬的線性范圍、良好的穩(wěn)定性及回收率，為食品安全監(jiān)管工作提供了有力技術(shù)支撐。目前國家標(biāo)準(zhǔn)對白酒中添加種甜味劑的限量標(biāo)準(zhǔn)和檢測方法存在缺失，建議針對次情況及時(shí)修訂相關(guān)限量依據(jù)，制定補(bǔ)充檢驗(yàn)方法，以期對白酒中濫用甜味劑行為制定更規(guī)范嚴(yán)格的法律依據(jù)。