潮州地區(qū)β-地中海貧血致病基因類型的調(diào)研分析

蔡培茂，林 芬，許秀妝，陸衛(wèi)歆

（潮州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 潮州 521021）

地中海貧血是由于珠蛋白基因缺陷，引起珠蛋白鏈合成減少或缺如而導(dǎo)致的一組遺傳性溶血性疾病[1]。地中海貧血根據(jù)基因的不同可分為α- 地中海貧血和β- 地中海貧血。地中海貧血遍布世界各地，高發(fā)于地中海沿岸，給流行區(qū)人們?cè)斐闪司薮蟮墓残l(wèi)生問(wèn)題和社會(huì)負(fù)擔(dān)[2]。全球約有5% 的人口為地中海貧血基因攜帶者，主要分布在地中海沿岸國(guó)家、中東、印度次大陸、非洲東南部和東南亞等熱帶和亞熱帶地區(qū)[3]。我國(guó)長(zhǎng)江以南的廣大地域?yàn)榈刂泻Ｘ氀母甙l(fā)地區(qū)，尤以廣東、廣西、海南三省發(fā)病率最高[4]。據(jù)流行病學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析估算，廣東每年約有11 萬(wàn)新生兒為地中海貧血基因攜帶者，每年出生的重癥地中海貧血兒超過(guò)1000 人[5]。地中海貧血是世界上最常見(jiàn)的溶血性貧血，是發(fā)病率最高、危害性最大的單基因遺傳病之一，現(xiàn)階段尚無(wú)理想的治療方法，病情嚴(yán)重者只能依靠長(zhǎng)期輸血來(lái)緩解臨床貧血癥狀。我國(guó)南方地中海貧血的高發(fā)區(qū)，目前主流的地中海貧血基因突變檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)范圍已能覆蓋中國(guó)南方人群α、β- 地中海貧血基因突變的主要類型[6]。利用基因診斷技術(shù)，對(duì)潮州地區(qū)近幾年地中海貧血致病基因的分布情況進(jìn)行分析，了解主要的致病基因類型，并對(duì)β- 地中海貧血基因的多態(tài)性進(jìn)行研究，為制定符合本地區(qū)實(shí)際情況的地中海貧血防控策略提供參考，同時(shí)為地中海貧血的遺傳診斷和產(chǎn)前篩查提供準(zhǔn)確的理論依據(jù)，從而可降低重癥地中海貧血兒的出生率，提高潮州地區(qū)新生兒的出生質(zhì)量。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

地中海貧血基因檢測(cè)樣本收集自2018 年1 月至2020 年12 月期間在潮州市中心醫(yī)院進(jìn)行地中海貧血篩查的1511 名均簽署了地中海貧血基因檢測(cè)知情同意書的志愿者。所有受試者均抽取空腹外周血2mL，在4℃環(huán)境下送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行地中海貧血基因分析。

1.2 方法

1.2.1 試劑 采用深圳亞能生物科技有限公司生產(chǎn)的地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒進(jìn)行基因檢測(cè)，檢測(cè)中國(guó)人常見(jiàn)的β- 珠蛋白基因17 種突變，分別為IVSII-654M（C ＞T）、-28M（A ＞G）、17M（A ＞T）、41/42M（-TTCT）、27/28M（+C）、71/72M（+A）、IntM（T ＞G）、Cap M （-AAAC）、IVS-I-1M（G ＞T）、β EM（G ＞A）、-29M（A ＞G）、-30M（T ＞C）、-32（C ＞A）、14/15M（+G）、31M（-C）、IVS-I-5M（G ＞C）、43M（G ＞T）。所有實(shí)驗(yàn)流程均嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.2 標(biāo)本制備 采集受試者的EDTA-K2 抗凝血標(biāo)本各100μL，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書提取DNA 樣本。1.2.3 地中海貧血的分子診斷 采用深圳亞能生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒，應(yīng)用跨越式斷裂點(diǎn)PCR（Gap-PCR）技術(shù)和反向點(diǎn)雜交法（Reverse Dot Blot）分別對(duì)提取的DNA 樣本進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并記錄潮州地區(qū)2018 年至2020 年β- 地中海貧血基因型的分布、β- 地中海貧血患者性別的分布以及α、β 復(fù)合型地中海貧血基因型的分布。

2 結(jié)果

2.1 潮州地區(qū)2018 年至2020 年β-地中海貧血基因型的分布

本次通過(guò)基因檢測(cè)調(diào)研的1511 例志愿者中，地中海貧血患者共有647 例，其中2018 年233 例，2019 年224 例，2020 年190 例；β- 地中海貧血患者共有220 例，包括12 種β- 地中海貧血基因型，分 別 為IVS-II-654M（C ＞T）、-28M（A ＞G）、17M（A ＞T）、41/42M（-TTCT）、27/28M（+C）、71/72M（+A）、IVS-I-1M（G ＞T）、β EM（G ＞A）、IntM（T ＞G）、Cap M（-AAAC）、IVS-II-654M（C ＞T）/-28M（A ＞G）、17M（A ＞T）/BEM（G ＞A）。220 例β- 地中海貧血患者中，2018 年89 例（7 種基因型），2019 年70 例（8 種基因型），2020 年61例（8 種基因型）。詳見(jiàn)表1。在12 種β- 地中海貧血基因型中，α α/α α，β/654M 和α α/α α，β/41-42M 基因型最多，這兩類基因型患者分別占β-地中海貧血患者總數(shù)的36.82%（81/220）和30.00%（66/220）。

表1 潮州地區(qū)2018 年至2020 年β-地中海貧血基因型的分布及頻率[例（%）]

2.2 潮州地區(qū)2018 年至2020 年β-地中海貧血患者性別的分布

在2018 年至2020 年潮州地區(qū)的220 例β- 地中海貧血患者中，2018 年男33 例，女56 例；2019年 男31 例，女39 例；2020 年 男27 例，女34 例。詳見(jiàn)表2。

表2 潮州地區(qū)2018 年至2020 年β-地中海貧血患者性別的分布及頻率[例（%）]

2.3 潮州地區(qū)2018 年至2020 年α、β 復(fù)合型地中海貧血基因型的分布

本次調(diào)研結(jié)果中，2018 年至2020 年潮州地區(qū)的α、β 復(fù)合型地中海貧血患者共有16 例，其中2018年6 例（6 種基因型），2019 年2 例（2 種基因型），2020 年6 例（5 種基因型）。詳見(jiàn)表3。

表3 潮州地區(qū)2018 年至2020 年α、β 復(fù)合型地中海貧血基因型的分布（例）

3 討論

地中海貧血的基因檢測(cè)技術(shù)已逐漸在臨床普及。據(jù)了解，目前全世界地中海貧血的基因型有430 多種，我國(guó)各地區(qū)地中海貧血的常見(jiàn)基因型有25 種，其中α- 地中海貧血、β- 地中海貧血及α、β 復(fù)合型地中海貧血具有基因多態(tài)性[7]。本研究的數(shù)據(jù)也顯示了潮州地區(qū)地中海貧血人群與我國(guó)其他地區(qū)的地中海貧血人群有著一樣的地中海貧血基因突變組合，基因突變位點(diǎn)的頻率具有多態(tài)性。地中海貧血基因突變表現(xiàn)為不同種族擁有自己獨(dú)特的基因突變頻率，具有明顯的地域性或群體特異性。潮州地區(qū)為廣東省三大漢族群落的一部分，我們知道β- 地中海貧血基因的突變可以作為人群遷移的遺傳標(biāo)記，從而揭示人群之間的親緣關(guān)系[8-9]。此次調(diào)查中，2018 年至2020 年在潮州地區(qū)地中海貧血患者中共檢出12 種β- 地中海貧血基因型組合形式，其中組合類型以α α/α α，β/654M 和α α/α α，β/41-42M 兩者的例數(shù)為最多，分別占β- 地中海貧血患者總數(shù)的36.82% 和30.00%，其次是α α/α α，β/17M 和α α/α α，β/-28M，兩者分別占β- 地中海貧血總數(shù)的13.18%和12.27%?？梢钥闯靓?α/α α，β/654M 是潮州地區(qū)β- 地中海貧血的主要基因型。本研究中也出現(xiàn)了幾個(gè)罕見(jiàn)的地中海貧血基因型，分別為α α/α α，β/71-72M（2 例）；α α/α α，β/IVS-I-1M（1 例）；α α/α α，β/EM（4 例）；α α/α α，β/Int M（2 例）；α α/α α，β/Cap M（1 例）；α α/α α，654M/-28M（1 例）；α α/α α，17M/BEM（1 例）。這與以往潮汕地區(qū)的調(diào)查結(jié)果類似[10]。但此次調(diào)研中，首次發(fā)現(xiàn)潮州地區(qū)出現(xiàn)了1 例α α/α α，β/Cap M基因型患者、1 例α α/α α，β/IVS-I-1M 基因型患者和1 例α α/α α，17M/BEM 基因型患者?？梢?jiàn)，地中海貧血基因突變類型與人群分布密切相關(guān)，具有特異性。本次調(diào)查數(shù)據(jù)也顯示了潮州地區(qū)β- 地中海貧血患者的性別分布為男性少于女性（男性占總數(shù)的41.36%），但有逐漸接近的趨勢(shì)（2018 年男性占比37.08%，2019 男性占比44.29%，2020 年男性占比44.26%）。可見(jiàn)，對(duì)β- 地中海貧血基因的多態(tài)性進(jìn)行研究，能為制定符合本地區(qū)實(shí)際情況的地中海貧血防控策略提供參考，同時(shí)也能為地中海貧血的遺傳診斷和產(chǎn)前篩查提供準(zhǔn)確的理論依據(jù)，有利于降低重癥地中海貧血兒的出生率，提高潮汕地區(qū)新生兒的出生質(zhì)量，且能夠?yàn)榈刂泻Ｘ氀闹委熖峁┙梃b[11-12]。由本次調(diào)查數(shù)據(jù)可知，潮州地區(qū)地中海貧血基因型非常豐富。本研究中，α、β 復(fù)合型地中海貧血患者共有16 例，其中2018 年6 例（6 種基因型），2019 年2 例（2 種基因型），2020 年6 例（5 種基因型）。α、β 復(fù)合型地中海貧血患者在所有地中海貧血患者中所占的比例較低，這可能是由于復(fù)合型地中海貧血兒的存活率比單純的β- 地中海貧血兒低，或由于地中海貧血基因突變類型與人群分布存在密切的相關(guān)性。本研究中地中海貧血患者共有647 例，其中β- 地中海貧血患者有220 例，α、β 復(fù)合型地中海貧血患者16 例，α-地中海貧血患者411 例，由此可以看出α-地中海貧血依然是地中海貧血最主要的突變類型。

綜上所述，潮州地區(qū)β- 地中海貧血基因突變類型具有多樣性，對(duì)近年來(lái)潮州地區(qū)地中海貧血患者的致病基因分布情況進(jìn)行分析，可為臨床提供有利數(shù)據(jù)，同時(shí)也充實(shí)了本地區(qū)有關(guān)地中海貧血基因的相關(guān)數(shù)據(jù)。地中海貧血的預(yù)防控制是醫(yī)療系統(tǒng)的重點(diǎn)工作，在優(yōu)生優(yōu)育方面，本研究中的調(diào)查數(shù)據(jù)具有更高的指導(dǎo)意義。